不同产地连翘新鲜果实DNA提取方法和质量评价研究

目的建立连翘新鲜果实中高质量DNA的提取方法,为从分子水平研究和评价连翘药材质量奠定基础。方法采用改良的CTAB法提取连翘的总DNA,应用琼脂糖凝胶电泳法、分光光度法与PCR法对连翘DNA产率和质量进行检测评价。结果 14批连翘药材核酸蛋白仪测定值A260/A280均在1.7~1.9之间,改良CTAB法提取的连翘总DNA浓度较大,干扰较小,较高质量的DNA可进行PCR扩增,1%琼脂糖凝胶电泳之后用紫外成像仪观察结果正常。结论改良CTAB法适合连翘新鲜果实中DNA的提取,方法简单可靠。     

山茱萸叶脱氧核糖核酸(DNA)提取方法的研究

目的：研究山茱萸叶总DNA的提取方法。方法：在传统CTAB取法基础上，设计了几种山茱萸叶总DNA提取方案。结果：采用优化改良的总DNA提取方法，从山茱萸叶片中提取的总DNA杂质少、质量好，RAPD扩增效果良好。结论：该法可作其他含有多糖及多酚杂质的药用植物组织提取DNA的参考方法。     

百合鳞叶总DNA提取方法的改进

目的建立一种适合RAPD分析的百合鳞叶总DNA提取方法。方法在传统CTAB提取方法上,对其进行改良,进一步优化提取方法。结果用改良CTAB法提取的总DNA的OD260/OD280在1.6-2.0之间,电泳条带清晰,其含量和纯度完全满足RAPD分析的要求。结论该方法提取百合鳞叶总DNA简便实用。     

天麻总DNA提取及聚合酶链反应扩增鉴定

目的：改良常用的植物DNA提取的CTAB，SDS法，以有效去除天麻多糖类杂质。方法：用CTAB法提取天麻鲜品不同部位（块茎、花序轴和胚芽）DNA；用生理盐水浸泡天麻干品之后，在应用CTAB，SDS法提取天麻干品的DNA；通过已知序列的天麻抗真菌蛋白基因片段的聚合酶链反应（PCR）扩增和PCR产物测序鉴定天麻DNA及其质量。结果：提取了44份天麻样本DNA，用CTAB法提取天麻鲜品不同部位的DNA，成功地用于PCR扩增，并通过DNA测序进一步鉴定；应用改良的CTAB，SDS法提取天麻干品DNA可用于PCR扩增，但DNA测序未成功。结论：用CTAB法提取的天麻鲜品各个部位DNA均可用于基因分析，而用天麻胚芽提取DNA的效果最理想；改良CTAB法能有效提取天麻干品DNA。提取的DNA可用于基因扩增。     

鼠麴草基因组DNA的提取方法及随机扩增多态性DNA分析

目的以鼠麴草的叶为材料,研究鼠麴草DNA的提取方法及对其进行随机扩增多态性DNA（RAPD）的分析。方法采用略改进的十六烷基三甲基溴化铵（CTAB）法、高盐低pH法、木本法和十二烷基硫酸钠（SDS）法分别提取鼠麴草叶的基因组DNA。通过RAPD分析所提取的DNA,比较所用的提取方法。结果CTAB法得到DNA的A260/A280为1.937,浓度为992.25μg/ml,优于其他3种方法。结论CTAB法是4种方法中最佳的方法。     

药用植物珠子参新鲜块根DNA提取方法研究

目的为获取珠子参高质量、高产量的总DNA,满足SSR-PCR标记实验。方法采用经典CTAB法、改良CTAB法、高盐低PH法和SDS法对珠子参总DNA提取方法进行比较研究,用紫外分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测DNA质量。结果 4种方法中产量最高的为经典CTAB法,产率为149.533ng/g,纯度最高的为改良CTAB法,OD260/OD280为1.796。结论 4种方法提取的DNA质量均满足SSR-PCR标记实验,扩增效果改良CTAB法和SDS法效果最佳。     

天麻DNA的快速提取方法

目的建立天麻基因组DNA快速提取方法.方法CTAB 酚/氯仿法加以改良提取DNA.结果本方法提取的DNA纯度高(A260/A280》1.8),耗时短(2～3h),分子大小约为50kb,适用于随机扩增多态性DNA(RAPD)分析.结论本方法提取DNA纯度高,耗时短,成本低,提取的DNA适宜RAPD分析.     

两种木兰科植物的总DNA提取技术探讨

为了从富含次生代谢物的白玉兰、醉香含笑叶片中提取高质量的总DNA，研究对核质分离的CTAB法进行进一步的改进，降低CTAB含量防止对总DNA的降解；在氯仿，异戊醇抽提前加入NH4Ac溶液冰浴处理，降低DNA的黏性。所得DNA经电泳、紫外吸收、限制性内切酶酶切和PCR扩增检测，结果表明改进后提取的DNA完全满足分子生物学实验的要求，其中以改良CTAB法Ⅰ最佳。     

白木通基因组DNA提取方法研究

以白木通新鲜叶片为材料,采用改良CTAB法提取DNA,并对提取的DNA进行了纯度鉴定和PCR检测。结果表明：改良的CTAB提取法,能够有效去除次生物质对DNA的干扰,提高提取DNA的质量和纯度,适宜白木通叶片DNA的提取。该改良法提取的DNA可用于SRAP分析。     

黄连药材DNA提取及RAPD反应体系的优化

目的探索黄连药材DNA的提取并对其RAPD反应体系进行优化。方法采用目前较为流行的苯酚法、CTAB法、高盐低pH值法,通过电泳、紫外分光光度仪检测及RAPD扩增效果确定黄连药材基因组DNA提取的最佳方法。结果CTAB法为黄连药材基因组DNA提取的最佳方法,建立了适合黄连药材的RAPD反应体系:25μL体系中内含1×PCRbuffer、2mmol/LMg2 、100~150μmol/LdNTP、20ng引物、40ng模板、1UTaq酶。结论CTAB法及黄连药材的RAPD反应体系可以用于黄连药材的RAPD分析。     

连翘对LPS作用的巨噬细胞TLR4蛋白表达的影响

目的观察连翘对LPS诱导巨噬细胞（RAW264．7）16h后TLR4蛋白表达的影响,探讨连翘对抗内毒素作用及其可能机制。方法体外实验共分6组,分别为control组,LPS组,连翘高、中、低剂量组及多黏菌素B组;连翘高、中、低剂量组及多黏菌素B组分别加入连翘水煎液50mg／ml、25mg／ml、12．5mg／ml及多黏菌素B10ug／ml培养0．5h后,再加入10ng／ml LPS,培养16h;Western blot法测各组细胞TLR4蛋白表达变化。结果control组RAW264．7细胞只表达少量TLR4,给予LPS刺激16h,TLR4表达明显升高（P〈0．01）,连翘高、中、低剂量组预处理均可明显降低TLR4的表达（P〈0．01）,并呈剂量依赖关系;连翘高剂量组与多黏菌素B组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论连翘预处理能抑制LPS诱导的巨噬细胞TLR4的表达可能是其抗内毒素作用的重要机制。     

忍冬叶片基因组DNA的提取与分析

目的:获取高质量的忍冬基因组DNA。方法:采用改良CTAB法从忍冬叶片中提取DNA,通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度法、酶切检测其质量,并与常规CTAB法比较。结果:改良CTAB法所得DNA优于常规CTAB法,电泳条带清晰,完整性好,纯度高,能被完全酶切。结论:改良CTAB法适合忍冬基因组DNA的提取。     

忍冬藤与其伪品金银忍冬藤、连翘茎的鉴别研究

目的:对忍冬藤与其伪品金银忍冬藤、连翘茎进行比较和鉴别。方法:按生药学常规方法对忍冬藤、金银忍冬藤及连翘茎在基源、性状、显微方面进行比较和鉴别。结果:忍冬藤、金银忍冬藤及连翘茎在基源、性状及显微特征方面均存在一定差异。结论:性状鉴别和显微鉴别方法简便、可靠,为保证忍冬藤药材质量提供了有效的鉴别方法。     

连翘抑制呼吸道合胞病毒作用的实验研究

目的 探讨连翘在细胞培养中抗呼吸道合胞病毒(RSV)的作用。方法 采用细胞培养技术,以病毒唑为阳性对照药,比较观察连翘水提液对RSV引起的细胞病变(CPE)的抑制作用。结果 连翘半数中毒浓度(TC50)为7．25mg/ml,其抗RSV的半数有效浓度(EC50)为0．15mg/ml,治疗指数(T1)为48．33,且对RSV抑制作用存在明显的量效反应关系;于感染RSV后0、2、4、6、8^加入连翘水提液均有抑制RSV活性作用。结论 连翘在Hela细胞中对呼吸道合胞病毒有抑制作用。     

金银花、连翘对溶珊瑚弧菌及其生物膜活性的影响

目的研究金银花、连翘对溶珊瑚弧菌及其生物膜活性的影响。方法采用纸片扩散法测定抑菌圈,采用结晶紫法检测金银花、连翘对溶珊瑚弧菌生物膜的作用。结果金银花为低敏药物,连翘为不敏药物。生物膜抑制率与质量浓度有剂量依赖的正相关关系,31、62.5、125 mg/mL金银花和连翘供试药液与菌膜对照组的差异有统计学意义（P〈0.05）;生物膜破坏试验发现,31、62.5、125 mg/mL金银花和连翘供试药液与菌膜对照组生物膜活菌百分比的差异有统计学意义（P〈0.05）。结论金银花有良好的抑菌、抑制细菌生物膜形成和破坏细菌生物膜活性;而连翘有良好的破坏溶珊瑚弧菌的生物膜活性和较好的抑制生物膜形成活性。     

连翘不同提取液对金黄色葡萄球菌体外抑制作用研究

目的:了解连翘不同提取液在体外对金黄色葡萄球菌的抑制效果。方法:将连翘洗净、烘干、粉碎成粗粉,分别用水、30%乙醇、50%乙醇、70%乙醇、95%乙醇连续回流提取,提取液浓缩成相当于原药材1 mg/mL的药液,将药液处理后,制成含药滤纸片,采用纸片法,以抑菌环大小为参考指标,观察抑菌效果,确定最佳提取溶剂及提取工艺。结果:连翘用10倍量95%乙醇回流提取3次,每次1 h,所得药液的抑菌效果最佳。结论:优选得到的提取工艺确实可行,便于连翘生产质量的控制。     

连翘化学成分研究

目的：研究连翘Forsythia suspens（aThunb.）Vahl的化学成分,为其药理作用的研究奠定物质基础。方法：采用硅胶柱色谱及制备薄层色谱等方法进行分离纯化,根据理化性质和波谱数据（1H-NMR、13C-NMR等）鉴定化合物的结构。结果：分离得到6个化合物,分别鉴定为：丁二酸（succinic acid,1）、槲皮素（quercetin,2）β-谷甾醇（β-sitosterol,3）、对羟基苯乙酸（p-HydroxyPhenyl acetie acid,4）、连翘酯苷A（Forsythoslde A,5）、连翘苷（phillyrin,6）。结论：对连翘中所含的化学成分得到进一步验证。     

笃斯越桔果实总DNA提取方法的比较研究

目的探讨越桔果汁总DNA的最佳提取方法。方法分别采用SDS法、高盐低pH值法、CTAB法、异硫氰酸胍法提取越桔果汁的基因组DNA,并对其进行核酸含量测定和电泳及RAPD-PCR检测。结果SDS法、高盐低pH值法、CTAB法、异硫氰酸胍法提取越桔果汁的基因组DNA其OD260/OD280分别为1.944、1.738、1.661、1.813,其浓度分别为2.363μg/μl、0.548μg/μl、0.735μg/μl、1.455μg/μl;电泳检测显示异硫氰酸胍法提取DNA条带最清晰,扩增产物最多。结论用异硫氰酸胍法提取越桔果汁总DNA优于其它方法。