天麻ITS序列的聚合酶链反应扩增

目的:为天麻核糖体DNA中的内转录间隔区(internal transcribed spacer ,ITS)序列分析提供可靠、特异的聚合酶链反应(PCR)条件.方法:选择ITS序列通用引物对天麻ITS序列进行PCR扩增,对一系列PCR条件参数进行摸索,同时对PCR产物进行纯化后直接测序.结果:天麻ITS序列PCR扩增产物约为750 bp,不同来源样本存在有一定的差异.经测序后与Genebank中相关序列比对,天麻ITS序列总长度为598 bp,其中ITS1为235 bp,ITS2为209 bp,5.8S为154 bp,G C(%)为52%.结论:扩增天麻ITS序列的PCR反应条件可以得到可靠、特异的结果.     

聚合酶链反应扩增大片段mtDNA

目的 :探讨聚合酶链反应 (PCR)扩增大片段线粒体DNA方法。方法 :快速碱裂解法提取线粒体DNA ,长时程PCR扩增出 5 430bp线粒体DNA。结果 :扩增出 5 430bp线粒体DNA产物特异性强 ,产量高。 结论 :该方法反应条件简便、稳定 ,也可用于其它大片段的扩增 ,有一定的实用价值。     

用聚合酶链反应检测肺癌myc族癌基因扩增

应用聚合酶链反应分析人非小细胞肺癌组织标本中ｍｙｃ族癌基因扩增情况。在３３例中检测出５例有ｍｙｃ癌基因扩增，说明在非小细胞肺癌中ｍｙｃ族癌基因扩增的频率较低。其中１例为腺癌复发患者，提示ｃ－ｍｙｃ扩增可能同癌复发相关。同时还发现另外一条带，可能是ｍｙｃ族的新成员，有待于进一步研究。     

聚合酶链反应对结核杆菌DNA重复序列的检测

本文用聚合酶链反应(PCR)检测结核杆菌(TB)DNA,在TB染色体DNA中的一个片段多次重复出现,将此片段作为靶DNA,用PCR技术进行扩增。引物的DNA核苷酸序列为5’CCT GCG AGC GTA GGC GTC GG3’和5’CTC GTC CAG CGC CGC TTC GG3’在反应中用94℃变性,68℃退火延伸,43个循环可将1fgTBDNA扩增到能通过凝胶电泳检测出其特异性产物,此产物在作为对照的其他细菌中不能检出,加入100ng人基因组DNA对检测效果无影响。本方法为快速、敏感、特异地检测临床标本中的TB打下了基础。     

结核杆菌DNA聚合酶链反应技术的应用

结核杆菌ＤＮＡ聚合酶链反应技术的应用李秀珍莫英曼（贵阳医学院附院肺内科贵阳５５０００４）结核病是长期以来危害人类健康的常见病，以往结核病的实验室检查依赖于涂片和培养，现在由于免疫学和分子生物学在医学领域中的应用，使结核病诊断的准确性有了很大程度的提高...     

应用聚合酶链反应标记高活性DNA探针

聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)或称体外基因倍增技术,是一种在体外选择性地扩增特定DNA序列的新方法。它利用一对位于待扩增DNA序列两侧的取向相对的DNA引物,在DNA聚介酶的介导下,经过多次变性、退火和延伸过程的重复性循环,大量合成靶DNA序列。     

神经营养素-3基因的扩增及序列分析

目的：从人脑基因组DNA获取神经营养素-3（neurotrophic-3,NT-3)基因,并对该项目的基因进行测序。方法：本实验直接从人脑组织中提取人脑基因组DNA,根据人的神经营养素-3基因的cDNA序列,设计一对寡核苷酸引物,采用聚合酶链反应（PCR）,获得人NT-3基因,DNA序列分析NT-3基因。结果：本实验采用PCR方法获得的基因片段长度为377bp,该基因序列为编码神经营养素-3的序列。结论：采用PCR获取NT-3基因序列是正确的,为进一步基因克隆和表达奠定基础。     

贵州天麻野生与栽培品种的简单序列重复标记鉴定

目的:利用简单序列重复(SSR)分子标记鉴定贵州天麻4个居群的野生和栽培品种.方法:合成8对SSR引物用于天麻基因组DNA的PCR扩增.结果:除引物对16外均能很好地区分野生天麻、无性繁殖天麻及有性繁殖天麻,其中有性繁殖天麻均扩增出2条带,为杂合子;野生天麻及无性繁殖天麻只扩增出1条带,为纯合子.结论:天麻的自交及杂交是形成纯合与杂合的原因.SSR分子标记可有效地区分纯合子及杂合子,从而使其能够在分子水平鉴定野生和栽培天麻.     

通过优化PCR反应条件扩增富含GC的DNA片段

在被扩增的ＤＮＡ片段存在特殊结构时，通过改变ＰＣＲ反应成分，并采用不同的退火温度加热启动，得到了满意的特异的ＰＣＲ扩增产物。     

扩增大片段DNA的PCR方法

本实验通过比较两种缓冲体系对ＰＣＲ扩增产物的影响，提出一种适合扩增大片段ＤＮＡ使用的缓冲体系，它与常规使用的缓冲体系的主要区别在于前者不含ＫＣｌ，使用这种缓冲体系扩增的大片段ＤＮＡ特异性强，且重复性好。     

自建两轮PCR法对低载量HBV DNA S区基因的扩增及实验条件优化

目的 探究低载量HBV DNA S区基因扩增的可行性并对实验条件进行优化,为隐匿性HBV感染(OBI)患者HBV DNA S区基因突变检测提供依据.方法 采用传统巢式PCR和自建两轮PCR方法扩增6例低HBV DNA载量(100～200 IU/mL)和22例更低HBV DNA载量(20～99 IU/mL)的血清样本中HBV DNA S区基因,并对引物序列、引物量、PCR产物模板稀释倍数、退火温度、PCR反应循环数、PCR总反应体系等条件进行优化.PCR扩增产物经琼脂糖凝胶电泳后,切割目的条带凝胶进行克隆测序,然后对克隆测序结果进行核酸序列BLAST比对确认.结果 设计3对巢式PCR引物(P1～P3),扩增产物理论上包含整个HBV DNA S区基因.经过PCR扩增条件优化后,6例低HBV DNA载量的血清样本中仅2例经巢式PCR扩增出HBV DNA S区基因特异性靶序列,22例更低HBV DNA载量样本无一例扩增成功.自建两轮PCR法设计了P4～P15共12对引物,扩增产物理论上包含整个HBV DNA S区基因.经过PCR扩增条件优化并筛选出P13为最佳引物后,6例低HBV DNA载量的血清样本全部扩增出HBV DNA S区基因特异性靶序列;15例(15/22,68.18％)更低HBV DNA载量的样本扩增出HBV DNA S区基因特异性靶序列,经PCR产物克隆测序均证实为HBV DNA S区基因,该15例样本中HBV DNA载量最低为20.1 IU/mL.结论 基于引物P13自建的两轮PCR法更适用于低载量HBV DNA S区基因的扩增,扩增效率和特异性均优于传统巢式PCR;扩增产物可进一步应用于OBI者HBV DNA S区基因序列突变分析.     

用DNA扩增法检测人类干血痕的性别

作者报道用DNA扩增技术对人类微量干血痕进行性别鉴定。方法是从干血痕纸片提取DNA,用引物Y1.1、Y1.2和Alu9.1、Alu9.2,通过聚合酶链反应(PCR)对Y特异3.4kb重复序列和人类共有的Alu重复序列进行扩增。选用引物Y1.1、Y1.2,8例男性样本均有扩增产物,8例女性样本则无。选用引物Alu9.1、Alu9.2,男女各4例样本均有扩增产物。     

乌梢蛇赤链蛇Sox基因的PCR扩增研究

目的　研究乌梢蛇赤链蛇Sox基因的PCR扩增结果。方法　采用PCR技术 ,以特异扩增人SRY基因HMG box保守区的一对引物 ,扩增了乌梢蛇和赤链蛇的Sox基因。结果　两种蛇雌雄个体均扩增出了与人SRY基因大小相同的片段 ,为 2 2 0bp左右。 结论　本文为研究蛇类的性别决定机制及Sox基因在系统演化上的保守性提供了分子生物学资料     

PCR直接测序法检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒DNA

目的 探索检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)DNA的有效手段。方法 采用HPV通用引物对宫颈癌标本中的HPVL1区基因序列进行PCR扩增,根据PCR产物序列分析对HPV分型。结果 50例宫颈癌组织HPVDNA检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染最多见。检测出1例HPV58型,其L1区基因序列与德国标准株58型比对,未发现碱基变异。结论 PCR直接测序法是对宫颈癌组织中HPV检测和分型的一种有效方法,并可检测到HPV少见的特殊类型,同时也能提供已知的HPV型别的突变信息。     

云贵两省三地牛带绦虫核糖体rDNA-ITS1序列分析

目的: 采用PCR克隆测序方法,对采自贵州省都匀、从江及云南省大理三地牛带绦虫,与台湾桃园牛带绦虫亚洲亚种标本进行比较,为贵州都匀、从江及云南大理牛带绦虫标本鉴别提供分子生物学证据,并进一步探讨牛带绦虫亚洲亚种分类学地位.方法: 取贵州都匀株、贵州从江株、云南大理株和台湾桃园株成虫节片,抽提DNA,PCR扩增rDNA-ITS1区段,克隆测序;结合GenBank中已知猪带绦虫rDNA-ITS1序列,构建系统发育树.结果: 贵州都匀、云南大理牛带绦虫标本、台湾牛带绦虫亚洲亚种标本的ITS1序列基本一致,同源性达98%～99%;贵州从江牛带绦虫标本ITS1序列与前三者有30个碱基差异,与台湾桃园、贵州都匀和云南大理同源性均为97%.系统发育树显示:贵州都匀和云南大理牛带绦虫标本与台湾牛带绦虫亚洲亚种标本的遗传距离最接近,距贵州从江牛带绦虫标本较远,与猪带绦虫则更远.结论: (1)贵州都匀和云南大理牛带绦虫标本属于牛带绦虫亚洲亚种,贵州从江牛带绦虫标本属于传统牛带绦虫.(2)rDNA-ITS1序列分析可以用于牛带绦虫亚洲亚种与传统带绦虫分类学研究.