TGF-β1/Smads信号通路在SIRT1抗心肌纤维化中的作用及机制研究

目的 观察沉默信息调节因子1(sirtuin 1,SIRT1)对压力超负荷致大鼠心肌纤维化及血管紧张素Ⅱ(angiotensin, AngⅡ)诱导的大鼠心脏成纤维细胞增殖的影响,并探讨其分子机制。方法 在体实验通过不完全结扎大鼠腹主动脉,使压力负荷增加诱导心肌纤维化,给予SIRT1激活剂后,左室心肌组织行Masson染色,观察心肌间质纤维化并计算胶原容积分数,免疫组化染色检测心肌组织TGF-β1/Smads蛋白表达。提取新生大鼠心脏成纤维细胞,给予AngⅡ或AngⅡ加SIRT1激活剂后,采用MTT法检测细胞增殖,qRT-PCR和Western blot法检测心肌组织及成纤维细胞Ⅰ型、Ⅲ型胶原(collagenⅠ/Ⅲ,Col1α1/3α1)、SIRT1及TGF-β1/Smads mRNA及蛋白的表达。结果 与假手术组相比,压力超负荷模型组大鼠心肌间质出现显著的纤维化,心肌胶原容积分数增加,Col1α1/3α1、TGF-β1/Smads表达明显增多,SIRT1表达减少;给予SIRT1激活剂SRT1720干预后可改善压力超负荷诱导的心肌间质纤维化,下调Col1α1/3α1、TGF-β1/Sm...     

Apocynin改善1型糖尿病小鼠心脏功能的实验研究

目的 探讨NADPH氧化酶选择性抑制剂Apocynin对1型糖尿病小鼠心脏功能的影响及其作用机制.方法 44只8周龄雄性C57小鼠随机分为正常对照组(n=6)、Apocynin对照组(n=6)、1型糖尿病组(n=16)及1型糖尿病Apocynin治疗组(n=16).小鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)建立1型糖尿病动物模型.实验于8周末结束,记录实验小鼠生存率、测量小鼠体质量及左室质量,并计算左室质量指数.运用超声心动图技术与Langendorff灌注系统检测小鼠心脏功能;Real-time RT-PCR技术测定心肌组织α-肌球蛋白重链(α-MHC)、β-肌球蛋白重链(β-MHC)、心房钠尿肽(ANP)以及Ⅰ型(Col Ⅰ)和Ⅲ型(Col Ⅲ)胶原的表达.结果 ①Apocynin能提高糖尿病小鼠生存率,降低糖尿病小鼠左室质量指数(P<0.01);②Apocynin能明显改善糖尿病小鼠心脏功能,增加心脏左室射血分数、左室短轴缩短率和+dp/dt、-dp/dt(P<0.01);③Apocynin能显著降低糖尿病小鼠心肌ANP mRNA表达和β/α-MHC比值(P<0.01);④Apocynin能降低糖尿病小鼠心肌组织Col Ⅰ和Col Ⅲ胶原的表达(P<0.01).结论 Apocynin能显著改善1型糖尿病小鼠的心脏功能,其机制与降低心肌肥大特征性基因ANP表达和β/α-MHC比值以及减少心肌Col Ⅰ、Col Ⅲ胶原表达密切相关.     

三七总皂甙抗病毒性心肌炎慢性期小鼠心肌纤维化作用及其机制的研究

[目的]探讨三七总皂甙(PNS)抗病毒性心肌炎慢性期小鼠心肌纤维化的作用及其可能的机制。[方法]通过反复感染柯萨奇病毒建立病毒性心肌炎慢性期小鼠模型,采用HE和VG染色观察心肌病变和纤维增生情况,采用病理检验方法对心肌胶原容积分数(CVF)和心肌血管周围胶原面积(PVCA)进行检测,并采用免疫组化法及RT-PCR法检测心肌中TGF-β1蛋白及其mR-NA表达水平。[结果]病毒性心肌炎慢性期模型组小鼠心脏出现明显心肌纤维化,与正常组比较,CVF和PVCA均显著增加(P<0.01),模型组心肌中TGF-β1蛋白及其mRNA表达水平均较正常组明显升高,与正常组比较,差异有显著性意义(P<0.01);三七总皂甙治疗组可以减轻心肌病变程度,CVF和PVCA示三七总皂甙各治疗组心脏中胶原比模型组均明显减少,并且三七总皂甙治疗组心肌中TGF-β1蛋白及其mRNA表达水平较模型组下降。[结论]三七总皂甙能下调病毒性心肌炎慢性期TGF-β1的表达,抑制心肌胶原的增生,提示其抗病毒性心肌炎慢性期心肌纤维化的作用可能部分通过抑制PDGF-BB过度表达有关。     

水温改变对斑马鱼脊髓损伤修复的影响

目的 探讨成纤维细胞生长因子21 (FGF21)siRNA对链脲佐菌素(STZ)诱导的1型糖尿病(T1DM)小、鼠心脏功能的影响机制.方法 16只8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机分为正常对照组(n=6),FGF21siRNA对照组(n=10),16只T1DM模型小鼠分为T1DM组(n=6),T1DM+FGF21 siRNA组(n=10).T1DM模型由单次腹腔注射STZ(150 mg/kg)建立.8周后行FGF21siRNA给药.实验到达终点时采用小动物高分辨超声仪测量小鼠心脏功能;光学显微镜下HE染色观察心肌细胞形态,Masson染色观察纤维化程度,利用实时PCR技术检测心肌组织α-肌球蛋白重链(α-MHC),β-肌球蛋白重链(β-MHC),心厉钠尿肽(ANP)、Ⅰ型胶原(ColⅠ)和Ⅲ型胶原(Col Ⅲ)及FGF 21 mRNA的表达含量.结果 与正常对照组小鼠相比,T1DM小鼠的心脏功能减低,心肌细胞肥大,胶原纤维增生,伴随小鼠心肌组织ANP、α-MHC、β-MHC、Col Ⅰ、Col Ⅲ mRNA表达增加,T1DM小鼠经FGF 21siRNA处理后上述表现进一步加重.结论 FGF21siRNA能降低1型糖尿病小鼠的心脏功能,其机制可能与心肌肥大和心肌纤维化有关.     

LncRNA-MEG3在心肌纤维化过程中的表达变化研究

目的 研究LncRNA-MEG3在大鼠心肌纤维化及心肌成纤维细胞(CFs)活化增殖过程中的表达变化.方法 用异丙肾上腺素(ISO)腹部皮下注射SD大鼠构造心肌纤维化动物模型为实验组(ISO组),对照组注射等量的生理盐水;提取乳鼠CFs,采用转化生长因子β1(TGF-β1)作用CFs构建细胞水平纤维化模型为实验组(TGF-β1组),对照组为未经TGF-β1作用正常培养的CFs;HE、Masson染色观察心肌组织胶原变化;用Western blot法检测α-平滑肌肌动蛋白(oα-SMA)、Ⅰ型胶原分子(Collagen Ⅰ)蛋白的表达;qRT-PCR法检测Collagen Ⅰ、α-SMA mRNA和MEG3的表达;CCK-8法检测经TGF-β1作用CFs后的吸光度(OD)值.结果 与对照组比较,ISO组的心肌细胞体积变大、紊乱,组织胶原面积明显增加;ISO组和TGF-β1组中Collagen Ⅰ、α-SMA蛋白和mRNA表达都显著增多,LncRNA-MEG3表达显著减少;CCK-8实验结果提示使用TGF-β1刺激CFs 24、48 h后较对照组的细胞OD值明显增加,即细胞增殖活性增强.结论 Ln-cRNA-MEG3在大鼠心肌纤维化组织及CFs细胞活化增殖中的表达显著降低,提示MEG3在大鼠心肌纤维化及CFs活化增殖中可能发挥了负调控作用,为临床心肌纤维化防治和研究提供新的思路.     

芪苈强心胶囊对心肌梗死大鼠心肌纤维化及TGF-β1／Smad3信号通路的影响

目的探讨芪苈强心胶囊对心肌梗死后大鼠心肌纤维化的影响及其作用机制。方法 SD雄性大鼠结扎冠脉左前降支,建立急性心肌梗死(Acute Myocardial Infarction,AMI)模型,4周后根据心脏超声结果随机分为模型组和芪苈强心组,另设假手术组,分别给予1 g/(kg·d)芪苈强心及等体积蒸馏水灌胃。4周后超声心动图检测大鼠心脏功能,取梗死周围心肌组织采用HE及Masson染色观察心肌病理形态改变,免疫组织化学方法检测心肌α-SMA表达,Western blotting方法检测心肌α-SMA、胶原Ⅰ(collagenⅠ)、转化生长因子-β_1(TGF-β_1)及p-Smad3蛋白表达。结果与假手术组比较,模型组左心室短轴缩短分数(FS)和射血分数(EF)明显降低(P0.05),左心室收缩末期内径(LVIDs)和收缩末期容量(ESV)显著升高(P0.05),心肌纤维化明显(P0.05),α-SMA、collagenⅠ、TGF-β_1和p-Smad3等表达增加(P0.05)。与模型组比较,芪苈强心组EF和FS明显升高(P0.05),LVIDs和ESV明显降低(P0.05),心肌纤维化程度减轻(P0.05),α-SMA、collagenⅠ、TGF-β_1和p-Smad3等表达明显降低(P0.05)。结论芪苈强心胶囊能够降低心肌梗死大鼠心肌纤维化程度,改善心脏功能,其作用机制可能与调控TGF-β_1/Smad3信号通路相关蛋白有关。     

莱菔硫烷抑制转化生长因子β1诱导的大鼠心肌纤维化的机制

目的：探讨莱菔硫烷（sulforaphane,SFN）对转化生长因子β1 (TGF-β1)诱导的大鼠心肌纤维化的影响及其机制。方法：用TGF-β1处理大鼠心肌成纤维细胞构建心肌纤维化模型；用SFN (5、10、20μg/ml)处理TGF-β1诱导的成纤维细胞；采用CCK8、Transwell法检测细胞的活性、迁移，采用Western blot法检测细胞中基质金属蛋白酶9 (MMP-9)、α-平滑肌肌动蛋白（α-smooth muscle actin,α-SMA）、Ⅰ型胶原蛋白（ColⅠ）、ColⅢ、TGF-β1、p-Smad3、p-Smad2、Smad2/3的蛋白表达；采用酶联免疫吸附试验（ELISA）法检测细胞上清液中活性氧（ROS）、丙二醛（MDA）、谷胱甘肽（GSH）、超氧化物歧化酶（SOD）的含量。结果：与对照组比较，TGF-β1组细胞增殖和迁移能力均显著升高（P<0.05），并且MMP-9、α-SMA、ColⅠ、ColⅢ、TGF-β1、Smad2/3的蛋白表达均显著升高（P<0.05）,p-Smad3、p-Smad2的蛋白表达显著降低（P<0.05）,ROS...     

血府逐瘀汤对刀豆蛋白A诱导小鼠肝纤维化的防治作用

目的:探索血府逐瘀汤对刀豆蛋白A(Con A)诱导小鼠肝纤维化的防治作用。方法:将Balb/c雄性小鼠,随机分为正常组、模型组及治疗组。模型组与治疗组按照12.5 mg/kg小鼠体质量予以尾静脉注射Con A,正常组予注射相应剂量生理盐水,1次/周,共10周。治疗组于造模同时予血府逐瘀汤药液10 ml/kg小鼠体质量灌胃,正常组及模型组予以等量饮用水,1次/d。10周后,处死各组小鼠,全自动生化仪检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)和白蛋白(Alb);HE和天狼星红染色观察肝组织炎症和胶原沉积;碱水解法检测肝组织羟脯氨酸(Hyp)含量;RT-PCR法检测肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)及Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型胶原(Col I、Ⅲ、Ⅳ)表达。结果:模型组小鼠ALT和AST活性均较正常组明显升高(P0.05);肝组织HE染色可见肝细胞坏死和大量炎性细胞浸润;天狼猩红染色可见大量胶原沉积和假小叶形成;肝组织α-SMA、TGF-β1及ColⅠ、Ⅲ、ⅣmRNA表达较正常组显著升高(P0.01)。与模型组相比,治疗组ALT、AST水平明显降低(P0.05);肝脏炎症和胶原沉积明显改善;α-SMA、TGF-β1及ColⅠ、Ⅲ、ⅣmRNA表达显著下调(P0.05,P0.01)。结论:血府逐瘀汤可通过减轻肝脏炎症和抑制肝星状细胞(HSC)活化减少胶原合成而改善Con A诱导的小鼠肝纤维化。     

柔木丹颗粒对四氯化碳诱导小鼠肝纤维化的治疗作用

目的探讨柔木丹颗粒对四氯化碳(CCl4)诱导的小鼠肝纤维化的治疗作用。方法将30只成年昆明小鼠随机分为对照组、肝纤维化组和柔木丹组,每组10只。肝纤维化组和柔木丹组小鼠腹腔注射含体积分数20%CCl4的橄榄油混合液5 m L·kg~(-1),对照组小鼠腹腔注射相同体积的橄榄油,每周2次,连续8周;第3周起,柔木丹组小鼠灌胃柔木丹颗粒4 g·kg~(-1),每日1次,共6周;肝纤维化组和对照组小鼠灌胃相同体积的生理盐水。实验前和末次给药后24 h(实验后)分别称各组小鼠的体质量,观察各组小鼠体质量的变化;并于取材时称小鼠肝质量,计算各组小鼠肝体比;取小鼠肝组织,进行苏木精-伊红染色和Masson染色,观察小鼠肝组织病理学变化;免疫组织化学法检测小鼠肝组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的定位及表达;实时聚合酶链反应检测小鼠肝组织中α-SMA、Ⅰ型胶原蛋白A1(COL1A1)、组织金属蛋白酶抑制剂1(TIMP-1)及转化生长因子-β1(TGF-β1) mRNA的表达; Western blot法检测小鼠肝组织中α-SMA、TGF-β1蛋白的表达。结果实验前3组小鼠体质量比较差异无统计学意义(F=2. 312,P> 0. 05)。肝纤维化组和柔木丹组小鼠体质量增加显著小于对照组(P <0. 01),柔木丹组小鼠体质量增加显著大于肝纤维化组(P <0. 01)。肝纤维化组小鼠肝体比显著大于对照组和柔木丹组(P <0. 01),对照组与柔木丹组小鼠肝体比比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。肝纤维化组小鼠肝组织中α-SMA蛋白及mRNA相对表达量显著高于对照组(P <0. 01),柔木丹组小鼠肝组织中α-SMA蛋白及mRNA相对表达量显著低于肝纤维化组(P <0. 01),柔木丹组与对照组小鼠肝组织中α-SMA蛋白及mRNA相对表达量比较差异无统计学意义(P> 0. 05)。肝纤维化组小鼠肝组织中COL1A1和TIMP-1 mRNA相对表达量显著高于对照组(P <0. 01),柔木丹组小鼠肝组织中COL1A1和TIMP-1 mRNA相对表达量显著低于肝纤维化组(P <0. 01),柔木丹组小鼠肝组织中COL1A1和TIMP-1 mRNA相对表达量显著高于对照组(P <0. 01)。肝纤维化组小鼠肝组织中TGF-β1蛋白及mRNA相对表达量显著高于对照组(P <0. 01),柔木丹组小鼠肝组织中TGF-β1蛋白及mRNA相对表达量显著低于肝纤维化组(P <0. 01),柔木丹组小鼠肝组织中TGF-β1蛋白及mRNA相对表达量显著高于对照组(P <0. 01)。结论柔木丹颗粒可通过降低肝组织中α-SMA、COL1A1、TIMP-1及TGF-β1的表达而改善CCl4诱导的小鼠肝纤维化。     

金银花-连翘提取物组合对CCl_4诱导小鼠肝纤维化的改善作用研究

目的:探讨金银花-连翘提取物组合对四氯化碳(CCl_4)诱导的小鼠肝纤维化的改善作用。方法:分别制备金银花和连翘提取物,混合后制得组合物(药材配比1∶2)。取雄性C57小鼠随机分为对照组、CCl_4组、组合低剂量(0.5 g/kg)+CCl_4组、组合高剂量(1.0 g/kg)+CCl_4组、组合高剂量(1.0 g/kg)组,每组5只。除对照组和组合高剂量组外,其他各组小鼠腹腔注射CCl_4诱导肝纤维化,每周2次,共4周。同时,各组灌胃给予相应剂量的组合物,连续4周。末次给药后,取血,收集肝脏组织。试剂盒检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平以及肝脏羟脯氨酸(Hyp)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)含量。HE染色观察肝组织形态学变化,天狼猩红染色和Masson染色观察肝脏胶原沉积。PCR检测肝组织胶原1a1(Col1a1)、胶原3a1(Col3a1)、纤维连接蛋白(FN)、转化生长因子β(TGF-β)及α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的mRNA表达,Western blot检测肝组织α-SMA蛋白表达。结果:(1)与CCl_4组相比,组合高剂量+CCl_4组血清ALT、AST水平显著降低(P0.01),肝组织炎症反应和肝细胞坏死程度明显减轻。(2)与CCl_4组相比,组合高剂量+CCl_4组肝脏Hyp和ColⅣ含量显著降低(P0.05,P0.01),组合低剂量+CCl_4组ColⅣ含量亦显著降低(P0.05),且两组肝组织胶原沉积程度明显减轻。(3)不同剂量的金银花-连翘组合物干预后,可明显下调模型小鼠肝脏Col1a1、Col3a1、FN和TGF-β的mRNA表达(P0.05,P0.01),α-SMA的mRNA和蛋白表达亦明显降低(P0.05,P0.01)。(4)金银花-连翘组合物对正常小鼠肝组织形态及以上指标无明显影响。结论:金银花-连翘提取物组合可能通过抑制肝星状细胞活化,减少胶原沉积,从而改善肝纤维化。     

姜黄素和氯沙坦对血管紧张素Ⅱ诱导的内皮间质细胞转化的作用及机制研究

目的 研究姜黄素和氯沙坦对血管紧张素(Ang)Ⅱ诱导的内皮间质细胞转化(EndMT)的作用及机制.方法 培养人脐静脉内皮细胞(HUVECs)然后分为4组:对照组(不加刺激药物的正常培养组);AngⅡ组(加入刺激浓度为0.1 μmol/L或1μmol/L的AngⅡ);姜黄素+AngⅡ组(先加入12.5 μmol/L的姜黄素预孵1h,再加入1 μmol/L的AngⅡ);氯沙坦+AngⅡ组(先加入10 μmol/L的氯沙坦孵育2h,再加入1μmol/L的AngⅡ);刺激24 h后行划痕试验检测各组细胞迁移能力改变和CCK-8检测细胞活力;刺激5d后,显微镜观察各组细胞形态变化和Western blot检测各组血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子β1(TGF-β1)蛋白表达量.结果 HUVECs经AngⅡ刺激后形态改变,长梭形样细胞明显增多;姜黄素和氯沙坦可维持内皮细胞铺路石样形态.AngⅡ呈浓度依赖性地降低HUVECs存活率(P＜0.01);各组存活率均＞50％(均P＜0.05).相比对照组,AngⅡ促进HUVECs的迁移(P＜0.05);相比AngⅡ组,加入姜黄素和氯沙坦可抑制HUVECs的迁移(均P＜0.05).AngⅡ可诱导EndMT,AngⅡ刺激5d后VE-cadherin表达减弱(P=0.003),而α-SMA和TGF-B1的表达都明显增强(均P＜0.01),姜黄素和氯沙坦使VE-cadherin表达明显增加,而α-SMA和TGF-β1的表达均明显下调.结论 姜黄素和氯沙坦通过下调TGF-β1表达抑制AngⅡ诱导的EndMT.     

TGF-β/ILK信号通路在甲状旁腺激素诱导血管内皮细胞向间质细胞转化中的作用

目的 探讨尿毒症毒素甲状旁腺激素(PTH)诱导血管内皮细胞发生内皮-间充质转化(EndMT)的分子机制.方法 采用全长重组PTH(1×10-8 mol/L)处理人主动脉血管内皮细胞(HAECs),同时利用转化生长因子β(TGF-β)信号通路抑制剂SB431542、Pirfenidone(PFD)和ILK抑制剂Cpd22进行干预.蛋白质印迹法(Western blot)检测HAECs中内皮细胞标志物血管内皮钙黏蛋白(VE-cadherin)、CD31,以及间充质细胞标志物α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白水平.结果 在PTH作用下,血管内皮细胞标志分子VE-cadherin和CD31表达降低(P＜0.05),间充质细胞标志分子α-SMA的表达明显升高(P＜0.05).使用信号通路抑制剂抑制TGF-β和ILK可以部分逆转PTH诱导HAECs细胞发生间质转化,包括逆转PTH降低内皮细胞标志物和增加纤维化细胞标志物的作用.结论 PTH可能通过TGF-β/ILK通路诱导血管内皮细胞发生EndMT.     

蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用

目的:研究蒿鳖养阴软坚方在体外对LX-2细胞的影响,从而探讨蒿鳖养阴软坚方对TGF-β1诱导的肝纤维化的作用。方法:体外培养人肝星状细胞LX-2,实验分为正常对照组、TGF-β1刺激组和蒿鳖养阴软坚方低、中、高浓度给药组。MTT法检测LX-2细胞增殖情况;比色法检测细胞培养液中乳酸脱氢酶（LDH）的活性;酶消化法检测细胞上清羟脯氨酸（Hyp）的含量;Western blot法检测collagen Ι以及α-SMA蛋白表达量。结果:TGF-β1作用于LX-2能够明显促进细胞的增殖,collagen I、α-SMA的表达量显著升高。蒿鳖养阴软坚方能抑制LX-2细胞增殖并且能够降低collagen Ι和α-SMA的表达。结论:蒿鳖养阴软坚方能够显著抑制LX-2增殖,下调collagen Ι和α-SMA的表达,降低Hyp生成,从而发挥抗肝纤维化的作用。     

转化生长因子-β1及结缔组织生长因子在病毒性心肌炎中的表达

目的:探讨转化生长因子-β1(TGF-β1)及结缔组织生长因子(CTGF)在病毒性心肌炎(VM)中的表达。方法:雄性Balb/c小鼠36只随机均分为对照组和模型组。模型组建立VM模型。分别于7、14、28 d每组随机抽取6只小鼠断颈处死。心脏称重后用4%多聚甲醛固定,苏木精-伊红染色,光镜下观察心肌组织形态学改变,半定量计算病理积分。免疫组织化学方法检测心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原的蛋白表达,并应用病理图像分析仪进行图像分析,分别计算Ⅰ型和Ⅲ型胶原的面积。心肌组织CTGF、TGF-β1同样采用免疫组织化学测定,免疫组织化学图像分析经标准灰度校正后测定阳性细胞的吸光度及面积,以两者乘积表示组织中该抗原相对含量。结果:与对照组比较,模型组病理积分、心肌Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白表达、心肌组织中CTGF、TGF-β1的表达均显著增加(P0.01)。心肌Ⅲ型胶原蛋白的表达与CTGF、TGF-β1呈正相关关系(r=0.612,0.533,P0.05)。TGF-β1与CTGF表达也呈正相关关系(r=0.939 P0.05)。结论:TGF-β1及CTGF协同参与了VM心肌纤维化的发生、发展过程。     

TGF-β1/ILK/FSP1信号通路在环孢素诱导肾小管上皮细胞转分化中的作用

目的通过体外特异阻断试验,探讨转化生长因子-β1/整合素连接激酶/成纤维细胞特异蛋白1（TGF-β1/ILK/FSP1）信号通 路在环孢素A致肾小管上皮细胞转分化中的作用。方法构建并鉴定ILK-RNAi慢病毒表达载体ILKshRNA。将NRK52E细 胞培养分为5组,分别为空白对照组;环孢素诱导组：细胞培养液加环孢素A1 mg/L;TGF-β1干预组：阻断剂（SB431542）10 μmol/L 加环孢素A1 mg/L;ILK干预组：阳性转染ILKshRNA后加入环孢素A1 mg/L;阴性对照组：阴性转染ILKshRNA后加入环孢素 A1 mg/L。实时荧光定量PCR检测TGF-β1、ILK和FSP-1 mRNA的表达,Western blot检测TGF-β1、ILK、FSP-1的蛋白表达。免 疫组化检测细胞爬片α-SMA阳性表达细胞数。结果与空白对照组比较,环孢素诱导组细胞TGF-β1、ILK、FSP-1基因及蛋白表 达量均显著增加（P<0.05）;TGF-β1 干预组经SB431542 处理后,TGF-β1、ILK 和FSP1 水平较环孢素诱导组降低（P<0.05）;经 ILKshRNA沉默后,ILK和FSP1水平较环孢素诱导组降低（P<0.05）。α-SMA阳性细胞数经SB431542和ILKshRNA处理后较 环孢素诱导组降低（P<0.05）。结论TGF-β1/ILK/FSP1信号通路激活是环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞转分化的重要机制 之一,ILK参与环孢素A诱导大鼠肾小管上皮细胞间充质转分化过程。     

表没食子儿茶素没食子酸酯对博莱霉素致小鼠肺纤维化的干预作用及其机制探讨

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对博莱霉素（BLM）所致小鼠肺纤维化的干预作用及其相关机制。方法 32只昆明种小鼠随机分为假手术组、模型组、EGCG治疗组和醋酸泼尼松阳性对照组,每组8只。采用气管内注射博莱霉素复制小鼠肺纤维化模型。造模后,治疗组分别灌服相应的受试药物,假手术组和模型组灌服等量的生理盐水。28d后观察肺组织肺系数、羟脯氨酸（HYP）含量、丙二醛（MDA）和谷胱甘肽（GSH）含量的变化;取固定部位肺组织做病理组织学检查;免疫组织化学技术测定肺组织中α平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子-β1（TGF-β1）和I型胶原（ColⅠ）蛋白的表达。结果给药治疗28d后,EGCG能明显降低肺系数（P〈0.01）、肺组织HYP含量（P〈0.01）和MDA含量（P〈0.05）,明显升高肺组织中GSH含量（P〈0.01）;病理组织学检查结果显示,EGCG组肺组织肺泡炎程度和肺组织纤维化程度明显减轻（P〈0.01,P〈0.05）;EGCG能明显抑制肺组织中α-SMA、TGF-β1和ColⅠ蛋白的表达（P〈0.01）。结论 EGCG对博莱霉素所致小鼠肺纤维化具有一定的干预作用,其机制可能与抗氧化作用和降低TGF-β1蛋白的表达进而抑制肺肌成纤维细胞的活化有关。     

β-胡萝卜素对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白和转化生长因子-β_1表达的影响

目的探讨β-胡萝卜素对肝纤维化大鼠肝组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)和转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响。方法将48只大鼠随机分为对照组、肝纤维化模型组和肝纤维化β-胡萝卜素干预组,SABC法免疫组织化学染色显示α-SMA及TGF-β1,HE染色显示肝的显微结构,透射电镜观察肝超微结构。结果肝纤维化模型组、对照组和β-胡萝卜素干预组α-SMA和TGF-β1表达的平均灰度值比较均有显著性差异(P<0.01)。电镜结果显示,对照组肝星形细胞内充满脂滴,其周围无明显胶原纤维沉积;肝纤维化组肝星形细胞内的脂滴较对照组减少;肝纤维化β-胡萝卜素干预组肝星形细胞内脂滴的量介于对照组与肝纤维化组之间。结论β-胡萝卜素抑制α-SMA和TGF-β1的表达,能降低由CC l4诱导的大鼠肝纤维化的程度,其作用途径与抑制肝脏星形细胞中的脂滴丢失有关。     

黄芪甲苷对糖尿病KKAy小鼠肾组织TGF-β1、SMAD2/3及α-SMA表达的影响

目的 观察黄芪甲苷对糖尿病KKAy小鼠肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)、SMAD2/3、q-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,探讨其延缓肾脏纤维化的可能机制.方法 雄性C57BL/6J小鼠10只作为对照组,20只2型糖尿病模型KKAy小鼠予以高脂饮食至14周,随机数字法分为模型组和黄芪甲苷组,每组10只,黄芪甲苷组给予黄芪甲苷40 mg·kg-·d-1,模型组与对照组给予等量生理盐水.实验期间,各组动物自由饮食、饮水.血糖仪测量16、20、24周龄时各组小鼠的血糖水平.24周时处死,观察各组小鼠肾的病理学变化,免疫组织化学法测定TGF-β1、SMAD2/3、α-SMA的表达.结果 (1)血糖:与对照组相比,14周龄的KKAy小鼠血糖明显升高,模型组血糖在16、20、24周时血糖明显升高(P＜0.05),黄芪甲苷组与其相比,血糖下降(P＜0.05).(2)肾组织形态学:对照组肾小球及肾小管结构清晰,未出现肾间质纤维化,模型组肾小球系膜基质增宽,系膜细胞增多,肾小管上皮细胞细胞质空泡样变性,肾间质炎性细胞增多,黄芪甲苷组肾小管上皮细胞细胞质较少,未呈现明显的纤维化.(3)肾组织TGF-β1、SMAD2/3、α-SMA的表达:对照组TGF-β1表达微弱,而模型组TGF-β1显著表达于肾小管上皮细胞细胞质(P＜0.01);与模型组相比,黄芪甲苷组TGF-β1、α-SMA表达明显下调(P＜0.05);对照组肾小管与肾小球细胞核有少量磷酸化的SMAD2/3表达,模型组表达增加(P＜0.01),与模型组相比,黄芪甲苷组表达减少(P＜0.05).结论 黄芪甲苷通过影响TGF-β/SMADS信号通路,下调TGF-β1、α-SMA表达,改善糖尿病小鼠肾脏纤维化.     

格列卫对肺纤维化小鼠的干预机制

目的 探讨格列卫对小鼠肺纤维化的干预机制.方法 120只C57BL/6小鼠随机分为对照组、模型组、地塞米松组和格列卫组,每组30只.采用气管内注射博莱霉素构建肺纤维化小鼠模型,分别于7、14、21 d随机处死10只动物.免疫组化检测各组肺组织转化生长因子β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的蛋白表达,RT-PCR检测肺组织TGF-β1mRNA含量.结果 模型组各时间点TGF-β1和α-SMA的表达均较对照组显著增加,地塞米松和格列卫处理组各时间点TGF-β1和α-SMA的表达均较模型组显著降低,而地塞米松组和格列卫组的表达水平无显著差异.TGF-β1,与α-SMA表达水平呈直线正相关(r=0.251,P<0.05).结论 格列卫对博莱霉素诱导肺纤维化的抑制作用与其抑制TGF-β1和α-SMA的表达有关.