补肾方含药血清对软骨细胞增殖的影响

【目的】观察补肾方含药血清对白细胞介素1(IL-1)抑制软骨细胞增殖及诱导软骨细胞产生一氧化氮(NO)作用的影响【方法】新西兰兔4只，每只均灌服1．15kg/L的补肾方2．5mL，连续3d，制备含药血清；取体外培养的兔软骨细胞，分别加入含1、10、20μg/L IL-1的培养液，确定IL-1对软骨细胞增殖的抑制浓度；补骨方组分别加入20μg/L的IL-1和不同浓度的补肾方含药血清．模型组加入20μg/L的IL-1及不同浓度的空白血清，培养3d后用四甲基偶氮唑盐(MTT)法检测软骨细胞的增殖，Griess法检测NO的产生。【结果】选择20μg/L浓度的IL-1抑制软骨细胞的增殖；不同浓度的补肾方含药血清均能拮抗IL-1抑制软骨细胞增殖的作用，抑制IL-1诱导软骨细胞产生NO。【结论】补肾方能直接拮抗或通过NO介导间接拮抗IL-1抑制软骨细胞增殖的作用，这可能是补肾方治疗骨性关节炎(OA)的机制之一。     

痛痹颗粒对兔软骨细胞增殖及其分泌NO影响的实验研究

目的:观察痛痹颗粒含药血清对兔软骨细胞增殖的影响,并初步探讨其作用机制。方法:兔软骨细胞体外培养技术及血清药理学方法。结果:痛痹颗粒含药血清能显著促进软骨细胞增殖,并降低软骨细胞培养上清液中NO的含量。结论:痛痹颗粒含药血清促进软骨细胞增殖、抑制NO的分泌可能是其防治骨性关节炎的机理之一。     

IGF-1对成兔关节软骨细胞体外增殖的影响

目的研究单独应用胰岛素样生长因子1(IGF-1)对成兔的关节软骨细胞体外增殖的促进作用,为成人关节软骨的体外培养扩增的理论提供新思路。方法通过细胞形态学,细胞计数、细胞计量检测成兔关节软骨细胞的存活及增殖。结果成兔关节软骨细胞增殖活跃。结论在IGF-1的单独作用下成兔关节软骨细胞在体外增殖能力明显增强。     

分析马钱子对骨关节炎中软骨细胞凋亡与增殖的影响

目的分析马钱子对骨关节炎中软骨细胞凋亡与增殖的影响情况。方法通过使用硝普钠(SNP)方式制作出兔膝骨关节炎模型,数量为80例。将其分为对照组、低剂量组、中剂量组和高剂量组。对照组不做任何处理,低、中、高剂量组分别使用不同剂量的马钱子处理,观察对软骨细胞凋亡和增殖的相关影响。结果对照组凋亡率最高,随着马钱子剂量的提升,凋亡率显著降低。同时细胞增殖OD值也随着马钱子剂量提升而提升,差异均显著(P0.05)。结论马钱子能够明显降低关节炎软骨细胞的凋亡并提升细胞增殖效率,有较高应用价值。     

肝细胞生长因子对兔关节软骨细胞培养影响的实验研究

目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对兔关节体外培养软骨细胞的作用.方法取10只大耳白兔的关节软骨制成软骨细胞悬液,接种到DMEM培养基中培养,细胞传至第3代后,加入不同浓度的HGF继续培养.通过MTT比色法及流式细胞仪技术检测培养细胞增殖情况.结果 HGF使软骨细胞增殖明显加快(P<0.05),HGF的作用存在剂量效应关系.不同浓度的HGF对关节软骨细胞增殖的促进作用不同,1 ng/ml时对细胞分裂增殖效应有作用,5～10 ng/ml作用效果最明显,加大HGF浓度,并未见促增殖效应加强.结论HGF对关节软骨细胞有明显促增殖作用.     

补肾益气活血方对家兔软骨细胞增殖与凋亡的影响

目的:观察补肾益气活血方含药血清对体外培养的兔关节软骨细胞的增殖凋亡和端粒酶活性的影响.方法:取兔的关节软骨,将软骨细胞分离传代后,分为补肾益气活血方含药血清组和对照组,置入37℃、50 ml/L的CO2培养箱内培养7 d后,采用MTT法检测细胞增殖;TUNEL法检测各组软骨细胞的凋亡;软骨细胞经扩增后用ELISA检测端粒酶活性.结果:①补肾益气活血方高、中、低剂量组细胞增殖均高于对照组(P<0.05).②补肾益气活血方含药血清各组的软骨细胞凋亡率明显低于对照组(P<0.05).③补肾益气活血方含药血清各组的软骨细胞端粒酶活性明显高于对照组.结论:补肾益气活血方可能通过上调软骨细胞端粒酶活性,从而抑制软骨细胞的凋亡.     

静压力对新生SD大鼠髁状突软骨细胞增殖影响的体外实验研究

目的：探讨不同静压力对髁状突软骨细胞增殖的影响。方法：对培养到第三代的新生SD大鼠髁状突软骨细胞加载0、12、24、36kPa的静压力1h后立即收集样本，用流式细胞仪分析各样本各增殖周期DNA含量变化，计算细胞增殖活性指数。结果：12、36kPa静压力能降低髁状突软骨细胞的增殖活性，24kPa静压力能增加髁状突软骨细胞的增殖活性。结论：静压力对髁状突软骨细胞的增殖活性具有双重效应，即压力过大过小均不利于软骨细胞的增殖，适当静压力能促进软骨细胞的增殖。     

中药调节兔膝骨关节软骨代谢作用的研究

目的研究中药对软骨细胞活性及代谢反应的调节规律,探讨中药治疗骨关节炎的作用机理。方法从细胞增殖(MTT法)、细胞DNA合成(3H-TdR掺入率)、蛋白多糖的形成(甲苯胺蓝染色)和Ⅱ型胶原的合成(3H-脯氨酸掺入)观察兔膝骨关节软骨细胞代谢变化。结果鹿茸多肽及维骨力对细胞增殖及蛋白多糖合成有促进作用,益气通络方对细胞增殖及蛋白多糖合成起抑制作用。益气通络组、鹿茸多肽组及维骨力组对软骨细胞的增殖有促进作用,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);鹿茸多肽组及维骨力组对软骨细胞DNA及Ⅱ型胶原的合成有促进作用,与对照组相比有显著性差异(P<0.05);益气通络组对软骨细胞代谢起抑制作用(P<0.05)。结论益气通络方阻断分解代谢细胞因子,防止胶原纤维转型而促进细胞增殖;鹿茸多肽促进软骨细胞合成代谢而促进软骨细胞增殖,维骨力保护软骨细胞而促进软骨细胞增殖。     

趋化素样因子1(CKLF1)对关节软骨细胞增殖及代谢的影响

目的：研究趋化素样因子1(CKLF1)对兔关节软骨细胞增殖及代谢的调节作用。方法：采用体外细胞培养技术及同位素参入法，检测CKLF1真核表达载体转染293T细胞所得条件培养基对软骨细胞DNA、胶原及蛋白多糖合成能力的影响。结果：在含5％(体积分数)胎牛血清(FCS)的DMEM培养条件下，转染后293T细胞表达的CKLFl可抑制兔关节软骨细胞DNA、胶原及蛋白多糖的合成，并可促进诱导性一氧化氮合酶(iNOS)的转录。结论：CKLF1可能通过提高iNOS的表达抑制关节软骨细胞增殖、胶原及蛋白多糖的合成。     

TGF-β1与IGF-Ⅰ对体外培养兔软骨细胞增殖的影响

目的探讨转化生长因子-β 1(TGF-β 1)与胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)联合作用对关节软骨细胞增殖行为的影响.方法采用兔关节软骨细胞体外单层培养方法,将TGF-β 1与IGF-Ⅰ作用于软骨细胞,并用MTT比色分析法对其增殖行为进行分析,探讨多因子对关节软骨细胞增殖行为的影响.结果(1)TGF-β 1组的最佳效应浓度为5 μg/L,IGF-Ⅰ组的最佳效应浓度为50 μg/L.(2)TGF-β 1组(5 μg/L)、IGF-Ⅰ组(50 μg/L)以及两因子联合使用组软骨细胞增殖均较对照组高(P＜0.01),联合使用组促增殖作用最强,优于单一的TGF-β 1最佳效应浓度组和IGF-Ⅰ最佳效应浓度组(P＜0.05).结论TGF-β 1与IGF-Ⅰ联合运用早期促软骨细胞增殖作用优于单一的TGF-β 1或IGF-Ⅰ,在软骨细胞增殖过程中TGF-β 1和IGF-Ⅰ有良好的协同作用.     

马钱子碱新型壳聚糖纳米粒体外肝癌细胞摄取特性的研究

以新型高分子材料N-glycyrrhetinic acid(GA)-polyethylene glycol(PEG)-chitosan(NGPC)为载体材料,采用离子交联法制备载马钱子碱(Brucine)的壳聚糖纳米粒(Brucine/NGPC-NPs)。以HepG2细胞为模型细胞,考察药物作用时间、药物作用浓度、加入外源甘草次酸和细胞内吞抑制剂对细胞摄取的影响,并结合激光共聚焦显微镜成像技术观察纳米粒在细胞内的转运。结果显示,Brucine/NGPC-NPs平均粒径为(197.6±11.2)nm,包封率和载药量分别为(63.48±4.67)%和(5.49±0.38)%。HepG2细胞对马钱子碱溶液剂和Brucine/NGPC-NPs的摄取均具有时间和浓度依赖性,其中对NGPC-NPs的摄取明显强于溶液剂,具有显著的主动转运特征,且摄取量随外源甘草次酸的加入而减少,其摄取途径主要依赖网格蛋白介导的内吞,之后被细胞内化。结果表明,NGPC-NPs可以作为肝细胞靶向的载体,显著提高药物进入肝癌细胞的量,达到减毒增效的目的。     

马钱子碱对大鼠海马神经元钠通道的影响

目的　研究马钱子碱镇痛作用的机制。方法　用全细胞膜片钳技术 ,首先在大鼠海马CA1锥体神经元记录出钠电流 ,然后观察马钱子碱对钠电流的影响。结果　马钱子碱可以浓度依赖的方式可逆地抑制钠电流。结论　马钱子碱对钠电流的阻断是其镇痛机制之一     

Effects of brucine on vascular endothelial growth factor expression and microvessel density in a nude mouse model of bone metastasis due to breast cancer

Objective:To study the effects of brucine on vascular endothelial growth factor（VEGF）expression and microvessel density（MVD）in a nude mouse model of bone metastasis due to breast cancer,and to assess the possible antitumor mechanism of brucine.Methods:A syringe needle was used to directly inject 0.2 mL monoplast suspension（with 2×10⁶ human breast cancer cells contained）into the bony femoral cortex of the right hind leg for modeling.Twenty-five nude mice were randomized into five groups and administered with an intraperitoneal injection of saline or drug for 8 consecutive days:model group（0.2 mL normal saline）,low-dose brucine group(1.73 mg·kg^-1),medium-dose brucine group(3.45 mg·kg^-1),high-dose brucine group(6.90mg·kg^-1,and thalidomide group(200 mg·kg^-1).Diet and activity were recorded,and the tumors were harvested 5 weeks later.The percentage of VEGF-positive cells was determined with hematoxylin and eosin staining and immunohistochemical staining,and MVD expression was determined by optical microscopy.Results: The VEGF expressions in brucine-or thalidomide-treated mice were significantly reduced as compared with mice in the model group（P<0.01）.There were no significant difference between the high-dose brucine group and the thalidomide group（P>0.05）.Significant difference was between the high-and low-dose brucine group （P<0.05）.Further,VEGF expression was significantly increased in the low-and medium-close brucine groups compared with the thalidomide group（P<0.05）.The MVD values in the three brucine and thalidomide groups were significantly lower than that in the model group（P<0.01）.The MVD values in the medium-and high-dose brucine groups were not significantly different from those in the thalidomide group（P>0.05）,while the MVD value showed a significant increase in the low-dose group compared with the thalidomide group（P<0.05）.Conclusion:Brucine could inhibit the growth of breast cancer to bone metastases,possibly by inhibiting tumor angiogenesis.     

Rituals can kill – A fatal case of brucine poisoning

In some parts of India people follow a religious ritual of drinking an herbal preparation made from the bark of the Alstonia scholaris tree (Blackboard tree) on the day of the new moon in the month of July. This tree could be easily confused with the Strychnos nux vomica tree. Brucine is the predominant alkaloid present in the bark of the Strychnos nux vomica tree. The toxicological property of brucine is similar to strychnine. Brucine is a neurotoxin. A 29-year-old male presented with a history of consumption of an herbal preparation made from the bark of the Strychnos nux vomica tree confusing it for Alstonia scholaris. Soon after, he developed convulsions and later died in hospital on the same day. The aim of this case report is to highlight the fact that people must be cautious when they follow religious rituals.     

大鼠口服灌胃腰痛宁粉的药物代谢动力学

采用高效液相色谱（HPLC）技术检测大鼠血浆中马钱子碱和士的宁的血药浓度,并研究了大鼠口服灌胃腰痛宁粉悬浊液后的药物代谢动力学行为。结果显示：不同质控浓度马钱子碱和士的宁的回收率均高于60%,日内及日间精密度相对标准偏差（RSD）均低于15%,稳定性及线性关系良好,满足生物样品定量分析要求;大鼠单剂量（800 mg/kg）灌胃给予（intragastric administration）腰痛宁后,马钱子碱和士的宁的代谢均符合二室开放模型;与士的宁相比,马钱子碱吸收较慢,消除较快,生物利用度较低。本法简便快捷、专属性强、结果准确,适于腰痛宁的药物代谢动力学行为研究。     

马钱子碱与异马钱子碱氮氧化物抗肿瘤细胞生长及抗氧化损伤作用的比较

目的：探讨马钱子经炮制后毒性下降而生物效应增强的机制。方法：采用体外培养肿瘤细胞的方法，观察马钱子碱（ｂｒｕｃｉｎｅ）和异马钱子碱氮氧化物（ｉｓｏｂｒｕｃｉｎｅＮ－ｏｘｉｄｅ）对肿瘤细胞株ＨＥｐ－２生长抑制作用及形态损伤作用；并采用电镜观察心肌细胞。结果：异马钱子碱氮氧化物能明显地抑制肿瘤细胞生长，而马钱子碱则无明显此效应。其细胞的形态损伤作用与生长抑制作用相一致；异马钱子碱氮氧化物还能明显地抵消黄嘌呤—黄嘌呤氧化酶（ＸＸＯＤ）引起的破坏培养的心肌细胞肌丝和线粒体等超微结构的作用，而马钱子碱无此作用。结论：异马钱子碱氮氧化物具有抗肿瘤细胞生长和抗氧化作用，而马钱子碱却无此明显作用。     

硫酸氨基葡萄糖对大鼠软骨细胞增殖的影响

目的：探讨硫酸氨基葡萄糖（GS）对大鼠软骨细胞体外增殖的影响。方法：采用二次酶消化法获得大鼠关节软骨细胞进行传代培养,并对第四代细胞进行药物干预,利用MTT比色、免疫组化检测增殖细胞核抗原（PCNA）、流式细胞术检测细胞周期等方法检测各代次大鼠软骨细胞和药物干预后第四代软骨细胞的增殖情况。结果：大鼠软骨细胞随传代培养,MTT比色显示增殖呈下降趋势,免疫细胞化学检测PCNA表达减少,流式细胞术显示细胞增殖指数下降;硫酸氨基葡萄糖可以抑制这一趋势,促进传代培养的细胞增殖能力。结论：GS对传代培养的大鼠软骨细胞的增殖能力有明显促进作用。     

鹿茸多肽对大鼠软骨细胞增殖的影响

目的：探讨鹿茸多肽（PAP）对大鼠软骨细胞体外增殖的影响。方法：采用二次酶消化法获得大鼠关节软骨细胞进行传代培养并对第四代细胞进行药物干预,利用MTT比色、免疫组化检测增殖细胞核抗原（PCNA）、流式细胞术检测细胞周期等方法来检测各代次大鼠软骨细胞和药物干预后第四代软骨细胞的增殖情况。结果：大鼠软骨细胞随传代培养,MTT比色显示增殖呈下降趋势,免疫细胞化学检测PCNA表达减少,流式细胞术显示细胞增殖指数下降;PAP可以抑制这一趋势,促进传代培养的细胞增殖能力。结论：PAP对传代培养的大鼠软骨细胞的增殖能力有明显促进作用。     

淫羊藿素对大鼠软骨细胞作用的实验研究

目的：研究淫羊藿素对大鼠软骨细胞增殖、凋亡的影响。方法：将细胞随机分为6组,分别予以浓度为 0,4,8,16,32,64 μmol/L的淫羊藿素(纯度为99%)处理不同时间组。药物作用于细胞后,MTT比色法检测大鼠软 骨细胞的增殖,Annexin V/PI双染色流式细胞术检测细胞的凋亡。结果：MTT 实验结果显示,4和8 μmol/L的淫羊藿素 作用于大鼠软骨细胞72 h,大鼠软骨细胞的增殖能力高于对照组(P<0.05);16,32,64 μmol/L的淫羊藿素作用于大鼠 软骨细胞72 h,大鼠软骨细胞的增殖能力低于对照组(P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,在药物处理24 h和48 h后, 4 μmol/L的淫羊藿素所引起的细胞凋亡率较对照组明显降低(P<0.05);8,16,32 μmol/L的淫羊藿素则会增加细胞的凋 亡率(P<0.05)。结论：淫羊藿素在低浓度(4,8 μmol/L)时能促进大鼠软骨细胞的体外增殖和抑制凋亡,而过高浓度的 淫羊藿素反会抑制细胞增殖和促进凋亡。