电化学发光免疫分析法定量测定HBsAg最适稀释度的研究

目的:探讨电化学发光免疫分析法(ECLIA)定量测定HBsAg的最适稀释度.方法:采用正常混合血清倍比稀释HBsAg( )/HBeAg( )/HBcAb( )、HBsAg( )/HBeAb( )/HBcAb( )和HBsAg( )/HBcAb( )三种模式血清,应用ECLIA夹心法定量测定其HBsAg的含量.结果:ECLIA法定量测定HBsAg阳性的三种血清学模式血清稀释度不同,HBsAg( )/HBeAg( )/HBcAb( )模式存在HD-HOOK效应,其最适稀释度为1:32;HBsAg( )/HBeAb( )/HBcAb( )和HBsAg( )/HBcAb( )模式不需进行稀释,原倍血清HBsAg测定值最高.结论:利用ECLIA法定量测定HBsAg( )/HBeAg( )/HBcAb( )模式血清中HBsAg时,应对其血清进行预稀释,同时测定原倍和1:32稀释血清HBsAg含量,根据测定情况计算其结果,而HBsAg( )/HBeAb( )/HBcAb( )和HBsAg( )/HBcAb( )模式,其血清HBsAg测定一般不需进行预稀释.     

电化学发光与酶免疫分析检测HBsAg的比较

目的: 比较电化学发光(ECLIA)和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测HBsAg的结果。方法: 选择HBsAg阳性标准品和99例4种模式样本[①HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBcAb(+);②HBsAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+);③HBsAg(+)/HBcAb(+);④HBeAg(+) HBcAb(+)],分别采用ECLIA和ELISA一步法、二步法检测HBsAg。结果: ECLIA的日内CV比ELISA一步法、二步法分别提高3.3%和3.2%,日间CV分别提高3.5%和3.3%,敏感度各为0.063、0.5和0.25ng/ml。①②③模式3种方法HBsAg100%阳性率。④模式2例ECLIA1:50稀释和ELISA二步法为阳性,而ECLIA原倍和ELISA一步法为阴性。①模式1:50稀释后的HBsAgCOI值比原倍血清高。结论: ELISA一步法检测HBsAg,简便快速,标本的含量较低或浓度过高可出现假阴性。为避免一步法Hook效应造成的假阴性,可采用经典的两步法。ECLIA灵敏度高,但也存在Hook效应,必要时应稀释标本进行检测或进行中和确证试验。     

HBV-DNA与乙肝两对半检测结果的相关性探讨

目的:探讨HBV-DNA的检出情况与乙肝两对半结果之间的关系。方法:运用荧光定量PCR(FQ-PCR)检测307例疑似乙肝患者血清中的HBV-DNA,同时运用ELISA方法进行两对半指标的检测,并对结果进行相关性探讨。结果:HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)组(大三阳组)患者血清HBV-DNA检出率为98.8%(84/85),平均拷贝数为1.82E+07/ml;HBsAg(+)HBeAb(+)HBcAb(+)组(小三阳组)患者血清HBV-DNA检出率为64.6%(53/82),平均拷贝数为1.82E+04/ml;HBsAg(+)HBcAb(+)组血清HBV-DNA检出率为63.6%(7/11),平均拷贝数为7.94E+04/ml。结论:血清HBV-DNA水平与HBVM表现模式有关,HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBcAb(+)的标本HBV-DHA值显著高于HBsAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)的标本和HBsAg(+)/HBcAb(+)的标本,提示HBsAg与HBeAg的存在影响HBV-DNA水平。FQ-PCR能实现准确定量,可以检测HBV的真实感染和复制情况,对于乙型肝炎的临床诊断、治疗方案的选择和疗效考察有较大的指导意义。     

深圳地区慢性HBV感染者血清中HBx基因多态性分析

目的:研究HBV感染者血清学模式与HBx基因多态性的关系。方法:采用聚合酶链反应、单链构象多态性和异源双链分析的方法对HBV感染者血清中HBx基因进行多态性分析。结果:在HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBcAb(+)、HBsAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)和HBsAg(+)/HBcAb(+)血清学模式中,HBx基因双链区(nt1595-1881)多态性不明显(P(0.05),带形基本一致;HBx基因单链区(nt1365-1625)多态性明显,HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBcAb(+)模式PCR扩增产物条带数与HBsAg(+)/HBcAb(+)模式相比,差异显著(P(0.05)。结论:慢性HBV感染者不同血清学模式HBx基因存在多态性,其多态性主要表现在HBx基因单链区。     

关于母婴垂直传播乙肝病毒的临床研究

目的 检测乙肝病毒感染孕妇血液和新生儿脐带血中的HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBcAb,探讨上述四种乙肝病毒标志在母婴垂直传播的关系.方法 对3025名孕妇采集肘静脉血和其分娩的新生儿出生后立即消毒的脐带血分别采用酶联免疫吸咐法测定HBsAg、HBeAg、HBeAb、HBcAb.并对上述四种乙肝病毒标志进行母婴垂直传播的分析.结果 3025例孕妇血清中HBsAg阳性者289例,孕妇乙肝病毒感染为11.37%.母亲HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBcAb(+)新生儿组脐带血HBsAg阳性率高达19.0%;母亲HBsAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)新生儿组脐带血HBsAg(+)检出率为2.84%,对照组的新生儿则无一例HBsAg阳性.3组结果差异有非常显著性,P<0.05.168名母亲HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBcAb(+)新生儿组中HBeAg的阳性为80例,阳性率为47.6%.母亲HBsAg(+)/HBeAg(+)/HBcAb(+)新生儿组脐带血HBcAb检测结果:HBcAb(+)176例,HBcAb检出率为97.0%.母亲HBsAg(+)/HBeAb(+)/HBcAb(+)新生儿组脐带血HBcAb(+)检测结果:HBcAb(+)161例,HBcAb检出率为91.5%.2组之间没有显著性差异(P>0.05).结论 母亲血清HbeAg阳性在母婴垂直传播中具有重要意义,应加强对这类病人进行宫内阻断,减少新生儿乙肝宫内感染的发生.     

血清HBV-DNA与HBV免疫学标志物相关性研究

目的 探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术定量检测HBV-DNA与乙型肝炎病毒(HBV)血清学标志物之间的相关性.方法 采用ELISA和FQ-PCR法对250例乙肝患者进行HBV-M以及HBV-DNA定量检测.比较不同乙肝病毒血清学标志物阳性组合HBV-DNA阳性情况.结果 HBsAg(+)HBeAg(+)HBcAb(+)血清中HBV-DNA阳性率和含量最高,血清中HBeAg与HBV-DNA含量密切相关,但部分HBeAg阴性或HBeAb阳性患者也有较高的HBV-DNA阳性率及含量.结论 荧光定量PCR法检测血清中HBV-DNA含量可以准确地反映病人体内病毒的感染和复制情况,可准确地为临床提供科学的诊断依据.     

HBV-M定性与HBV-DNA定量联合检测在诊治乙型肝炎中的临床价值

目的 观察荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)技术在乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸(HBV-DNA)定量检测中的应用价值,同时观察乙型肝炎患者血清乙肝病毒标志物(HBV-M)定性检测的价值。方法 选取2015年1月—2018年9月我院收治的900例乙型肝炎患者作为研究对象,分别采用酶联免疫吸附测定(ELISA)、FQ-PCR技术对其血液标本进行HBV-M定性、HBV-DNA定量检测。分析不同HBV-M模式下HBV-DNA检测结果。结果 HBV-M共检出8种模式。HBV-DNA检测阳性率为55.00%(495/900);HBsAg+HBeAg+HBcAb模式下HBV-DNA的阳性率高于HBsAg+HBeAb+HBcAb、HBsAg+HBeAb、HBsAb+HBeAb+HBcAb模式的阳性率(P<0.001或P<0.05)、HBsAg+HBeAg模式阳性率显著高于HBsAg+HBeAb+HBcAb、HBsAg+HBeAb、HBsAb+HBeAb+HBcAb模式(P<0.01)。HBsAg+HBeAg+HBcAb模式的HBV-DNA含量显著高于HBsAg+HBeAg、HBsAg+HBeAb+HBcAb、HBsAg+HBeAb、HBsAb+HBeAb+HBcAb模式(P<0.001)。结论 不同HBV-M模式的HBV-DNA阳性率及表达水平存在差异,故联合HBV-M定性与HBV-DNA定量检测对乙型肝炎临床诊治意义重大。     

携带HBV孕产妇血清免疫标志物含量与HBV-DNA载量分析

目的:探讨携带HBV孕产妇血清免疫标志物(HBV-M)含量与乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)载量之间的关系.方法:应用电化学发光法(ECLIA)检测240例携带HBV孕产妇血清标本中HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb含量,用荧光定量聚合酶链式反应(FQ-PCR)技术同时检测HBV-DNA载量,对2组检测结果进行统计学分析.结果:ECLIA检出不常见模式47例,出现10种血清模式,模式1～5组均有HBV-DNA阳性检出,其中模式1,2,5组的检出率为100％,HBV-DNA载量分别为6E+07±9.02E+07、4.85E+06±3.01E+06、1.51E+07±2.13E+07,模式6～10组HBV-DNA载量<5E+02;HBV-DNA阳性患者HBsAg、HBsAb、HBeAg的定量结果与阴性患者差异有统计学意义(P<0.05),而HBV-DNA阳性患者HbeAb、HBcAb的定量结果与阴性患者差异无统计学意义(P>0.05).240例携带HBV孕产妇血清HBsAg、HBeAg、HBeAb含量与HBV-DNA载量呈正相关(r=0.657、0.562、0.501,P<0.05),HBsAb含量与HBV-DNA载量呈负相关(r=-0.438,P<0.05).结论:HBV-M含量和HBV-DNA载量密切相关,建议将两者相结合,合理制定HBV母婴传播的预防措施.     

荧光定量PCR检测乙型肝炎的临床研究

目的:探讨荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)方法检测乙型肝炎的临床价值。方法:应用FQ-PCR技术对1562例乙型肝炎阳性血清标本和无症状健康者血清进行HBV-DNA检测并对不同血清型的HBV-DNA进行比较。结果:经FQ-PCR检测,380例HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)其HBV-DNA阳性率100%;246例HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)其HBV-DNA阳性率88.6%;210例HBsAg(+)、HBeAg(+)其HBV-DNA阳性率98.1%;190例HBsAg(+)、HBcAb(+)其HBV-DNA阳性率69.5%;146例HBsAb(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)其HBV-DNA阳性率22.6%;66例HBsAb(+)其HBV-DNA阳性率6.1%;20例HBsAb(+)、HBcAb(+)其HBV-DNA阳性率60.0%;18例HBsAb(+)、HBeAb(+)其HBV-DNA阳性率55.5%;286例“两对半”五项全阴性的病例中有4例HBV-DNA阳性,其阳性率为1.4%。结论:血清中HBV-DNA水平反映了体内HBV是否复制及复制的程度,定量PCR是鉴别HBV感染各期有价值的工具,是评价传染性的可靠方法。定量PCR测定灵敏度高,对乙型肝炎的临床诊断、治疗方案的选择和疗效观察有重要意义。     

647例乙肝患者前S1抗原与HBV-M、HBV-DNA检测结果的评价

目的:探讨乙型肝炎前S1抗原与乙肝血清标志物(HBV-M)、HBV-DNA检测的实际意义。方法:采用ELISA法检测HBsAg、HBsAb、HBeAg、HBeAb、HBcAb前S1抗原,采用PCR法检测HBV-DNA。结果:292例HBsAg(+)、HBeAg(+)、HBcAb(+)病人组中的前S1抗原阳性率为82.2%,HBV-DNA抗原阳性率为78.1%;134例HBsAg(+)、HBeAb(+)、HBcAb(+)病人组中的前S1抗原阳性率为29.9%,HBV-DNA抗原阳性率为10.4%;160例HBsAg(+)、HBcAb(+)病人组中的前S1抗原阳性率为31.3%,HBV-DNA抗原阳性率为15.6%;9例HBsAg(+)、HBeAg(+)病人组中的前S1抗原阳性率为88.9%,HBV-DNA抗原阳性率为88.9%;52例HBeAb(+)、HBcAb(+)病人组中的前S1抗原阳性率为9.6%,HBV-DNA抗原阳性率为7.7%;结论:前S1抗原与HBV-DNA、HBeAg阳性呈高度正相关,在防治中应引起重视。     

HBsAg阴性preS1Ag阳性的HBV携带者血清学标志物及其HBV DNA动态观察

目的探讨HBsAg(-)/HBeAg( )/HBcAb( )/preS1Ag( )少见血清学模式形成的原因,了解该少见模式乙肝病毒携带者体内血清学标志物及其HBVDNA变化情况。方法采用ELISA、电化学发光免疫分析法(ECLIA)、巢式PCR和实时荧光定量PCR,对该少见模式乙肝病毒携带者HBV血清学标志物和HBVDNA进行检测,每隔3个月复查一次,持续15个月。结果在研究的时间内,国产ELISA试剂盒检测结果均为HBsAg(-)/HBeAg( )/HBcAb( )/preS1Ag( );电化学发光免疫分析法检测HBsAg均为阳性,并随时间延续HBsAg水平逐渐下降;巢式PCR与实时荧光定量PCR检测HBVDNA为阳性,病毒载量上下波动。结论该乙肝病毒携带者血清学少见模式HBsAg为假阴性,动态观察HBsAg与HBVDNA水平,了解HBV复制情况,可为临床诊治提供可靠的依据。     

乙肝HBV DNA荧光定量检测与血清标志物结果相关性分析

目的 研究乙肝血清学标志物（HBV-M）结果与HBV-DNA水平的关系，分析HBV DNA阳性率在各年龄组的分布情况。方法对深圳市部分服务行业人员血清应用荧光定量PCR检测和ELISA法检测并对结果进行分析。结果1781例乙肝血清学标志物阳性血清中有1102例HBV-DNA阳性。其中883例1．3．5阳性（俗称“大三阳”）血清中HBV-DNA的阳性率为96．15％；722例1．4．5阳性（俗称“小三阳”）血清中HBV-DNA的阳性率为24．38％；138例1．5阳性血清中HBV-DNA的阳性率为38．41％；22例1．3阳性血清中HBV-DNA的阳性率为90．91％；11例HBsAg阳性血清中HBV-DNA阳性率为36．36％。结论两种方法检测乙肝标志物有密切的相关性。荧光定量PCR是检测HBV-DNA含量较精确的方法，能正确反映乙肝病毒的复制水平和活跃程度；HBsAg和HBeAg与HBV-DNA含量有着明显的相关关系。     

乙型肝炎病毒DNA检测与其血清标志物的相关性

目的探讨实时荧光聚合酶链反应（FIQ—PCR）检测HBV—DNA与乙型肝炎病毒五项血清标志物（HBV—M）的关系。方法采用FO—PCR技术和酶联免疫吸附法（ELISA）分别检测637例患者血清中的HBV—DNA拷贝数和乙肝五项血清标志物。结果HBV—DNA在“大三阳”组（HBsAg＋HBeAg＋抗HBc＋和HBsAg＋HBeAg＋）和“小三阳”组（HBsAg＋抗HBe＋抗HBc＋和HBsAg＋抗LHBc＋）可检出,在“单纯抗体阳性”组（抗HBs＋抗HBe＋抗HBc＋、抗HBs＋抗HBc＋、抗HBs＋抗HBe＋、抗HBs＋、抗HBe＋抗HBc＋及抗HBc＋）未捡出。“大三阳”组患者血清中HBV—DNA检出率为92．13％。且82．68％的患者HBV—DNA拷贝数在105copies／ml以上;“小三阳”组患者血清中HBV—DNA检出率为44．39％,HBV—DNA拷贝数分布范围广。结论HBeAg的存在可间接反映HBV在体内的复制状态,而HBV—DNA的检测更客观地反映了HBV复制的程度和传染性。     

乙型肝炎病毒血清学标志物与HBV-DNA含量的相关性分析

目的分析乙型肝炎病毒载量（HBV-DNA）与乙肝病毒血清标志物（HBVM）之间的关系。方法运用酶联免疫吸附测定法（ELISA法）、荧光定量聚合酶链反应（FQ-PCR）技术对200例乙型肝炎患者分别检测血清标志物及HBV-DNA含量。结果当HBV-DNA含量在107-108U/ml时,HBeAg阳性的大三阳模式组即HBsAg＋HBeAg＋HBcAb＋的血清学检测率（45.3%）明显高于其他模式组,HBV-DNA含量在不同模式组有显著性差异（P〈0.01）;当HBV-DNA含量在103-104U/ml时,小三阳模式组即HBsAg＋HBeAb＋HBcAb＋的血清学检测率（61.3%）明显高于其他模式组,HBV-DNA含量在不同模式组有显著性差异（P〈0.01）;而在4例HBV血清标志物全阴性的标本中仍检出HBV-DNA;1例HBsAb＋患者也检出了HBV-DNA.结论在各种HBV模式中,以HBeAg阳性者病毒复制水平最高,而血清中未检出标志物者并不能排除HBV感染,HBsAb＋的病人也可能有传染性。两种方法联合检测对临床有不同的指导意义。     

HBV-M与HBV-DNA的定量关系探讨

目的:探讨时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)检测乙型肝炎患者血清免疫标志物(HBV-M)与实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)定量检测乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)含量之间的关系。方法:采用FQ-PCR技术检测239例患者血清中HBV-DNA含量,同时用TRFIA检测乙型肝炎病毒五项标志物及含量,并对各项检测结果进行统计学分析,同时以HBV-DNA拷贝数的对数为横坐标,HBV-M含量的对数为纵坐标,求线性回归及相关系数(r)。结果:239例乙肝患者血清中,HBV-DNA的阳性率与HBV-M不同组合之间有差异,HBsAg+/HBeAg+/HBcAb+组HBV-DNA的阳性检出率明显高于其它组,达96.33%(105/109),HBsAg+/HBeAb+/HBcAb+组为43.90%(54/123),HBsAg+/HBcAb+组为42.86%(3/7)。并且随HBsAg、HBeAg含量增高,HBV-DNA含量也增高,存在一定的相关性(r=0.364,r=0.536)。抗-HBs,抗-HBe及抗-HBc与HBV-DNA之间,无明显相关性。结论:HBeAg阳性是病毒复制的重要指标;抗-HBe的出现不能作为HBV复制停止的指标;HBsAg、HBeAg浓度与HBV-DNA之间有良好的相关性,HBsAg和HBeAg浓度变化可以作为临床评价乙肝病毒复制程度和抗病毒疗效的参考指标;联合采用TRFIA检测HBV-M与FQ-PCR定量检测HBV-DNA能更早的诊断HBV感染,了解病毒的复制情况和观察疗效及判断预后。     

血清HBV-DNA检测的临床价值

选用分子斑点杂交法和多聚酶链反应（ＰＣＲ）观察１０７例疑为乙型肝炎患者ＨＢＶ－ＤＮＡ检出情况，分析ＨＢＶ－ＤＮＡ与ＨＢＶ血清抗原抗体标记物检出的关系，初步比较目前采用的这两种方去，认为分子斑点杂交法在应用中优于ＰＣＲ，值得推广。     

HBV携带者血清和白带HBV-DNA FQ-PCR检测分析

目的了解乙型肝炎病毒HBV携带者血清与白带中HBV—DNA含量的关系及其意义。方法选择经血清学检测诊断为女性HBV携带者867例，采用荧光定量聚合酶链反应（FQ—Pen）技术测定其白带中和血清HBV—DVA含量，并对所有检测指标进行相关性分析。结果867例携带HBV女性中，HbsAg、HbeAg、HbcAb三大阳者的血清和白带中HBV—DNA的阳性检出率均为100％；HbsAg、HbeAb、HbcAb三小阳组阳性率分别为85．6％和84．3％；HB．sAg、HBsAb两组的阳性率分别为86．6％和83，7％，白带HBV—DNA含量与血清HBV—DNA含量呈正相关（r=0，896），且白带HBV—DNA含量低于血清含量近10^1。蛄论白带与血清中HBV—DNA含量呈正相关。血清HBV—DVA阳性的育龄女性应作白带HBV—DVA检测，以对其阳性者采取防治措施，降低HBV母婴播率具有重要意义重大。     

乙型肝炎患者HBV-M与HBV-DNA检测结果分析

目的了解分析各型乙型肝炎患者血清的标志物HBV-M(HBsAg、抗-HBs、HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)与从基因水平测得的HBV-DNA的关系.方法采用ELISA法检测HBV-M,FQ-PCR法检测HBV-DNA.结果各种HBV-M模式都有一定的HBV-DNA检出率.HBsAAg、HBeAg、抗-HEe阳性和HBsAg、HbsAg阳性这两种模式HBV-DNA阳性率最高,分别为91.5%、90.6%.其次为HbsAg、抗-HBc阳性;HbsAg阳性;HbsAg、抗-HBe、抗-HBc阳性,HBV-DNA阳性率分别为50.0%、28.6%和23.4%.在HBsAg阴性的模式中,HBV-DNA阳性率可达8.1%(15/105),单项抗-HBc阳性患者血清HBV-DNA阳性率为8.3%,抗-HBs阳性的病例中亦可检出HBV-DNA阳性(6.0%).HBeAg组的HBV-DNA阳性率为91.4%与抗HBe组的HBV-DNA阳性率(21.1%)比较,有显著差异(P＜0.01).结论 HBeAg与HBV-DNA关系密切,乙型肝炎患者血清学标志物HBV-M无论何种模式,都应检测HBV-DNA,以此确证HBV感染后在体内的复制情况并追踪预后.