丙型肝炎病毒不同片段抗体蛋白芯片的制备及评价

目的: 制备丙型肝炎病毒(hepatitis virus C, HCV)不同片段抗体蛋白芯片,并对其临床应用价值进行评价. 方法: 分别取HCV融合抗原及分片段抗原,点至醛基化玻片上,制成HCV不同片段抗体蛋白芯片. 进行抗-HCV(ELISA)试剂和RIBA试剂与蛋白芯片法的比较. 结果: 蛋白芯片的融合抗原检测与ELISA法相比,阴性符合率为93.8 %,阳性符合率为97.1% . 蛋白质芯片分片段检测与ELISA法相比,阴性符合率为96.8 %,阳性符合率为97.1%. 蛋白芯片的融合抗原检测与RIBA法相比,阴性符合率为96.9% , 阳性符合率为98.5 %. 蛋白芯片分片段检测与RIBA法相比,阴性符合率为100%, 阳性符合率为98.5%. 结论: 蛋白芯片法与RIBA试剂检测结果相比较,与RIBA试剂有良好的一致性(P<0.05)),证明其具有良好的检测准确率,并可以降低ELISA法的假阳性.     

陕西咸阳地区无偿献血者抗-HCV检测及RIBA确证分析

目的:了解咸阳地区无偿献血者丙肝感染情况。方法:使用不同酶联免疫吸附试剂对咸阳市2015-2016年90588人次的无偿献血者标本进行丙肝抗体进行初筛,并对初筛阳性的血液标本进行RIBA确证检测,比较不同厂家对抗-HCV的确诊阳性率以及抗-HCV的S/CO值与确证结果的相关性。结果:期间咸阳市无偿献血者共90588人,初检阳性率为0.41%(369人),经RIBA实验进行确诊,确诊符合率为59.35%(219人);ELISA-1检测抗-HCV的阳性率0.28%,ELISA-2检测抗-HCV阳性率0.34%,两者比较差异有统计学意义(χ2=14.78,P=0.00);ELISA-1试剂确证阳性符合率77.52%和ELISA-2试剂确证阳性符合率59.58%之间比较有统计学差异(χ2=20.78,P=0.00);ELISA-1试剂抗-HCV S/CO>10.0样本的确证阳性符合率较高(99.30%),差异有统计学意义(χ2=87.03,P=0.00);ELISA-2试剂的抗-HCV S/CO>10.0的样本的确证阳性符合率100.00%,与ELISA-1试剂相比较差异有统计学意义(χ2=209.47,P=0.00);抗-HCV RIBA确证试验阳性标本的核抗原的条带阳性比例较高(85.39%),而条带NS的阳性比例最低(34.25%)。结论:咸阳地区无偿献血人群中HCV初筛阳性率呈中态流行趋势。     

抗-HCV ELISA试剂评估结果分析

目的 用酶联免疫吸附试验（ELISA）的双抗原夹心法和间接法检测抗-HCV,并对不同检测方法的试剂进行评估.方法 用1种双抗原夹心法和4种间接法检测抗-HCV血清盘和不同浓度的室内质控品,严格按试剂说明书在Xantus全自动加样仪和FAME全自动酶免分析仪中进行检测.结果 经用不同的ELISA法检测抗-HCV后,血清盘中阴性参考品符合率均为20/20,阳性参考品符合率均为20/20.双抗原夹心法灵敏度高,0.05NCU/mL的室内质控品能完全检测出来,间接法最低检出为0.5 NCU/mL,间接法的10个单试剂阳性标本用双抗原夹心法和RIBA确认法检测全部为阴性.结论 双抗原夹心法的抗-HCV ELISA试剂灵敏度和特异性均优于间接法.     

斑点免疫金渗滤技术检测抗心磷脂抗体

目的建立斑点免疫金渗滤技术检测抗心磷脂抗体(Ac Ab)的新方法。方法采用牛心磷脂抗原,以胶体金颗粒结合的羊抗人Ig G为标记抗体,根据斑点免疫金渗滤技术原理,建立斑点免疫金渗滤技术法检测人血清抗心磷脂抗体。分别检测78份抗心磷脂抗体阳性血清和80份正常体检女性血清,并与酶联免疫吸附试验(ELISA)的结果对比分析。结果与酶联免疫吸附试验的结果对比,其符合率为91.77%,特异性为95.00%,敏感性为88.46%,交叉试验与重复试验结果显示,斑点免疫金渗滤技术测定抗心磷脂抗体具有较好的稳定性和特异性。结论斑点免疫金渗滤技术可以快速准确地测定血清抗心磷脂抗体,便于推广普及。     

血站实验室梅毒抗体酶联免疫吸附测定检测试剂的评价及应用

目的对本血站实验室两种梅毒抗体筛查酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂进行比较和评价。方法选择2013年12月至2014年3月北京市符合《献血者健康检查要求》(GB18467-2001)的无偿献血者血液标本17 963例,进行梅毒抗体的ELISA筛查和梅毒螺旋体明胶颗粒凝集试验(TPPA)确证。结果 17 963例无偿献血者标本中,107例血样呈ELISA法梅毒抗体反应性,反应性率为0.6%,TPPA确认反应性为83例,反应性率为0.5%,在本血站检验判断规则下,梅毒抗体ELISA检测灵敏度为100.0%,特异度为99.9%;其中两种ELISA试剂均呈反应性的为88例,灵敏度为98.8%,特异度为100.0%。103例金豪ELISA试剂检测反应性的标本中TPPA确认反应性数为82份,灵敏度为98.8%,特异度为100.0%,漏诊率为1.2%;92例万泰试剂检测反应性的标本,确认反应性为83份,灵敏度为100.0%,特异度为99.9%,漏诊率为0.0%。结论 ELISA方法单一种试剂梅毒抗体反应性假阳性率高,建议相应血液报废,献血者进行归队允许再次献血。     

丙型肝炎病毒抗体单片段检测与总抗体检测的比较研究

目的 通过对国产HCV抗体分片段酶联免疫检测试剂与进口第三代抗-HCV检测试剂检测丙型肝炎病毒抗体的研究来了解丙肝病毒抗体单片段检测的意义。方法 采用国产基因重组表达的丙型肝炎病毒不同区(C、NS3、NS4、NS5)特异性抗原分别包被酶标板，以间接EIA法检测75例丙肝患血清中不同区特异性抗体。并以Ab—bott公司第三代抗-HCV试剂进行总抗体检测，同时做HCV—RNA检测。结果 75例血清中HCV不同区抗原片段NS3、HCV～C、NS4、NS5的抗体检出率分别为93．3％(70／75)、92．0％(69／75)、70．7％(53／75)、64．0％(48／75)。含2个片段以上的抗体检出率为94．7％(71／75)；抗-HCV总抗体的检出率为98．7％(74／75)；HCV—RNA检出率为77．4％(58／75)。结论 HCV不同区抗原片段的抗体检出率有差别，NS3、HCV—C检出率较高，其次为NS4、NSS。两种试剂有较好的相关性，HCV抗体单片段试剂可作为检测丙型肝炎病毒抗体的补充试剂，单独片段抗体阳性具有一定意义，动态观察NS3、NS4抗体水平可预测IFN的治疗效果。     

新旧两种人类免疫缺陷病毒抗体筛查试剂的比较

目的:比较新旧两种人类免疫缺陷病毒(HIV)抗体筛查试剂的一致性以及其与CDC确证结果的符合率。方法:选择阴性阳性标本各40例,用新旧两种HIV抗体筛查试剂同时进行检测比较两者的一致性;将日常监测阳性标本送CDC进行确证,比较两种HIV抗体筛查试剂的灵敏度及特异性。结果:两种HIV抗体筛查试剂的一致性良好(Kappa=1),旧试剂符合率为100%,新试剂符合率为96.08%。结论:两种HIV抗体筛查试剂的一致性良好,新试剂适用于临床检测,但灵敏度太高,容易造成假阳性。     

8种抗-HCVELISA试剂质量比较

目的对8厂家抗HCV抗体检测试剂盒进行质量比较.方法使用卫生部临检中心的2NCU/L质控血清及抗HCV质控血清盘对8个厂家的试剂进行灵敏度、特异性、孔间变异系数、阴性及阳性符合率的对比.结果 8厂牌试剂在灵敏度、特异性、孔间变异系数、阴性及阳性符合率各指标相差较大,质量有一定差距.结论丙肝试剂盒各生产厂家的质量仍有较大差异,使用时切不可忽视在使用试剂前的质量评估工作,应把质量评估结果作为选用试剂盒的参考依据.     

8种抗—HCVELISA试剂质量比较

目的 对8厂家抗-HCV抗体检测试剂盒进行质量比较。方法 使用卫生部临检中心的2NCU／L质控血清及抗HCV质控血清盘对8个厂家的试剂进行灵敏度、特异性、孔间变异系数、阴性及阳性符合率的对比。结果 8厂牌试剂在灵敏度、特异性、孔间变异系数、阴性及阳性符合率各指标相差较大，质量有一定差距。结论 丙肝试剂盒各生产厂家的质量仍有较大差异，使用时切不可忽视在使用试剂前的质量评估工作，应把质量评估结果作为选用试剂盒的参考依据。     

宁夏首例HIV-1/2型混合感染者的实验室诊断

目的 对筛查HIV呈阳性的标本进行实验室最终确认。方法 采用两种酶联免疫试剂对标本进行HIV抗体检测，结果 呈阳性的标本，再使用免疫印迹试剂对HIV抗体进行最终确认。结果标本筛查和复检试验均呈阳性，使用免疫印迹试剂分别检测到9条HIV-1型特异性抗体条带和6条HIV-2型特异性抗体条带。结论 此份标本为HIV-1型阳性和HIV-2型血清学阳性，在宁夏首次发现HIV-1／2型混合感染者。     

HCV核心抗原检测技术的临床应用

目的:探讨丙型肝炎病毒核心抗原酶联免疫吸附试验(ELISA)检测方法的临床应用价值。方法:采用丙型肝炎病毒核心抗原ELISA试剂盒对临床丙肝感染者血清进行检测,同时用HCV抗体ELISA检测试剂盒和HCV RNA基因扩增试验作为对照进行比较。结果:以HCV RNA PCR检测为对照,HCV抗原检测试剂盒的灵敏度为95.65%,特异性为100%,23例HCV RNA PCR检测阳性血清,用HCV抗体检测法进行检测,其中有3例阴性,将这3例阴性标本用HCV核心抗原检测法进行检测,其中2例为阳性。结论:丙型肝炎核心抗原ELISA检测方法能缩短窗口期,敏感性高,特异性好,费用低廉,在临床上具有很好的推广前景。     

三种检测梅毒螺旋体血清学方法评估

目的 寻求一种敏感度和特异性高的方法用于输血前和临床诊断检查梅毒螺旋体抗原血清学试验。方法 应用TPPA、ELISA、TRUST等三种梅毒螺旋体血清学检测方法，对25例各期梅毒血清标本进行检测，对其敏感性及特异性进行比较。结果 25例梅毒血清标本，ELISA法和TPPA法检测阳性率为100％，TRUST法为93％；经稀释法检测，ELISA法较TPPA法敏感。对815例临床标本检测，ELISA方法与TPPA法的检出符合率为100％。结论 ELISA法操作简单，结果判断可标准化，特异性强，敏感性高；既可用于过筛试验，又可用于筛检阳性样本的确认。     

可溶性FL酶联检测试剂盒的研制及其运用

目的建立灵敏、特异和稳定的人可溶性FL（sFL）酶联检测试剂盒,探讨其临床检测意义。方法采用鼠抗人FL单克隆抗体2D2为包被抗体,识别人FL不同位点的商品化多克隆抗体为检测抗体,建立双抗体夹心的人sFL酶联免疫检测方法（sFL-ELISA）。在此基础上,分别对不同血清样本中sFL的含量进行定量分析。结果成功研制人sFL酶联检测试剂盒,灵敏度为7.8pg/ml。该试剂盒4℃放置3个月,离散度（CV%）〈7.6%,加入rh-FL/Fc重组蛋白后的回收率在97%～110%。应用该试剂盒测得的健康供血员、再生障碍性贫血患者和白血病患者血清中sFL含量分别为（328.6±42.89）、（2607±286.8）、（1091±255.2）pg/ml。结论研制成灵敏、特异和稳定的人sFL酶联检测试剂盒,能对血清中sFL进行准确定量分析,具有良好的应用前景。     

早期感染丙型肝炎病毒样本抗原和核酸检测的数据分析

目的评价对丙型肝炎病毒（HCV）早期感染血液样本游离核心抗原（HCVcAg）和核酸（RNA）检测的意义。方法用国外HCVcAg试剂对8649份自然供血员及566份HCV可疑感染者血清进行检测,利用一种核酸试剂（TMARNA）也对这566份血清进行检测,并对检测数据进行分析。结果HCVcAg试剂在8649份自然供血员血清中筛出一份HCVcAg单独阳性血清,在566份HCV可疑感染者血清中,筛出1份HCVcAg和抗体同时阳性血清,确证产生的是核心区抗体。TMARNA试剂筛出6份HCVRNA阳性而抗体阴性的血清,利用傲拓HCV总抗原试剂检测,发现其中5份HCV总抗原阳性,同时这些血清在澳大利亚国家血液中心进行复核,RNA结果与我们一致。结论由于检出了HCVcAg单独阳性的窗口期样品和HCVRNA单独阳性的窗口期样品,认为利用HCV抗体试剂对血液进行筛查的同时,使用HCVcAg和RNA试剂做必要的补充实验,可以减少因窗口期造成的漏检。     

斑点免疫渗滤法检测丙肝IgG抗体试剂盒的研制

用基因工程重组的丙肝抗原包被于硝酸纤维素膜，建立了检测丙肝ＩｇＧ抗体的斑点免疫渗滤法。与ＥＬＩＳＡ试剂盒进行双盲式同步测定，二法检验结果差异无显著性。渗滤法简便快速，适用于各级医院，有很强的推广价值。     

贵阳地区无偿献血人群HCV筛查的结果分析

目的 比较献血人群抗-HCV反应性、HCV核酸检测结果及HCV重组免疫印迹试验(RIBA)确证实验结果.方法 对2013年10月至2015年3月采集的无偿献血者血液标本,采用2个不同厂家的国产酶联免疫吸附试验(ELISA)试剂检测和1个进口核酸检测试剂及配套检测系统对HCV进行筛查,对抗-HCV呈反应性或/和NAT检测阳性标本进行RIBA,将2种ELISA试剂检测反应性的结果与核酸检测结果、RIBA确证实验结果进行分析与比较.结果 共检测133 959例无偿献血者标本,其中覆盖核酸检测结果的标本113 380例,抗-HCV检测呈反应性标本比例0.19％(252/133 959),NAT检测阳性共27例,阳性检出的比例0.02％(27/113 380);HCV反应性标本经RIBA确证实验确证阳性的比例19.8％(50/252)、阴性的比例54.8％(138/252)、不确定的比例25.4％(64/252);27例核酸检测阳性的标本均为ELISA检测双试剂反应性和确证实验阳性;2家ELISA试剂检测结果、RIBA确证实验结果和核酸检测结果差异有统计学意义(P＜0.05).结论 选用2次ELISA+1次核酸检测的检测策略更为安全;针对较高比例的假阳性标本,应建立献血者跟踪随访制度,最大限度地保留献血人群.     

生物素-亲和素系统检测弓形虫病的研究

①目的建立简易、实用的生物素－亲和素系统（ＡＢＣ）的免疫酶染色试验（ＡＢＣ－ＩＥＳＴ）和斑点酶联免疫吸附试验（ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ）的方法，以检测弓形虫病的微量抗体。②方法以全虫和可溶性虫体为抗原，在常规ＩＥＳＴ和Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的基础上，加用ＡＢＣ，观察其特异度和敏感度。③结果ＡＢＣ－ＩＥＳＴ和ＡＢＣ－Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ的特异度和常规法相同，但敏感度有显著提高。④结论ＡＢＣ法可应用于微量抗体及早期感染的检测。     

应用抗BNP特异性多肽检测血浆BNP实验方法的建立

目的 利用抗人B型钠尿肽（BNP）的特异性多肽,建立检测BNP的实验方法。方法 化学合成抗人BNP的特异性12肽,测定包被化学合成12肽的合适浓度;采用双抗体夹心ELISA方法建立检测BNP的实验体系,检测含BNP血浆标本,结果与免疫化学发光法进行比较;将化学合成12肽与载体蛋白交联,打点印迹法鉴定交联结果,分光光度法计算偶联物的结合比。结果 包被化学合成12肽的合适浓度为0.625～4 mg/ml,应用化学合成12肽成功建立检测人BNP的方法,与免疫化学发光法的检测结果比较,两者存在正相关（P<0.001）,并成功交联12肽与载体蛋白。结论 化学合成的抗BNP特异性12肽,能应用于BNP的检测,为下一步制备BNP的快速检测试剂盒提供了重要的基础。     

Development of a Novel PmpD-N ELISA for Chlamydia psittaci Infection

ObjectiveChlamydia psittaci is an avian respiratory pathogen and zoonotic agent.The wide prevalence ofC. psittaci poses a threat to the poultry industry and its employees. However, few commercial kits are available for detecting avian antibodies excluding the in-house ELISA kit. In this study, we developed a novel ELISA kit for detecting antibodies againstC. psittaci based on the N-terminal fragment of polymorphic outer membrane protein D (PmpD-N) as the coating antigen.
Methods The antigen concentrations, primary antibody, and cut-off value were determined and optimized. The ELISA, designated PmpD-N ELISA, was assessed for sensitivity, specificity, and concordance using sera samples from 48 experimentally infected and 168 uninfected SPF chickens.
Results The sensitivity and specificity of PmpD-N ELISA were 97.9%, 100%, respectively, while the concordance was 98.1% as compared to that of MOMP-ELISA. No cross-reaction with positive sera for other avian pathogens was found. Using PmpD-N ELISA, 799/836 clinical samples were positive, including 93.0% and 98.1% positivity in layers and broilers, respectively.
Conclusion These data indicate that indirect ELISA with PmpD-N as the antigen candidate is a promising approach for the surveillance ofC. psittaci infection.