桑叶提取物对大鼠体内细胞色素P450酶活性的影响

目的 采用“Cocktail”混合探针药物法,探究桑叶水提物（aqueous extract of mulberry leaves,AML）、桑叶醇提物（ethanol extract of mulberry leaves,EML）对大鼠体内细胞色素P450（cytochrome P450,CYP450）酶活性的影响,从代谢酶的角度预测它可能引起的药物相互作用,为临床合理用药提供参考。方法 选用非那西丁、安非他酮、双氯酚酸钠作为大鼠体内3种CYP450酶（CYP1A2、CYP2B6、CYP2C9）的探针药物。雄性SD大鼠连续灌胃桑叶提取物14 d,第14天灌胃后30 min尾静脉注射混合探针药物,根据不同时间点采血。采用超高效液相色谱- 串联质谱测定各组血药浓度,用DAS 2.0和SPSS 21.0软件拟合药物代谢动力学参数并进行统计学分析。结果 连续灌胃桑叶提取物14 d后,与9.0 g/L氯化钠注射液相比,AML组中非那西丁、双氯酚酸钠代谢减慢,安非他酮则不明显;与羧甲基纤维素钠组相比,EML组中安非他酮、双氯酚酸钠代谢减慢,非那西丁则不明显。结论 AML对大鼠体内CYP1A2、CYP2C9可能存在一定的抑制作用,对CYP2B6可能无显著性影响;EML对大鼠体内CYP2B6、CYP2C9可能存在一定的抑制作用,对CYP1A2可能无显著性影响。     

氯胺酮多次给药对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶的诱导作用

目的考察氯胺酮对大鼠肝微粒体内细胞色素P450_2B酶活性的影响。方法以10mg.kg-1.d-1氯胺酮灌胃给予大鼠,连续给药10d。在第11d处死大鼠,以钙离子沉淀法制备肝微粒体。采用Omura和Sato方法测定细胞色素P450含量,采用7-戊氧基试卤灵-O-去烷基反应测定细胞色素P450_2B酶的活性。结果给药组和对照组细胞色素P450的总含量分别是（0.679±0.216）nmol·mg-1和（0.398±0.109）nmol·mg-1,细胞色素P450_2B酶的活性分别是（13.40±3.15）pmol·min-1.mg-1和（7.04±2.09）pmol·min-1.mg-1。结论氯胺酮能够增加大鼠肝微粒中细胞色素P450含量,并能显著诱导细胞色素P450_2B酶的活性。     

单探针与混合探针底物法在细胞色素P450酶底物酶促动力学中的比较研究

[目的] 研究5种细胞色素P450酶亚型的特异性探针底物非那西丁（CYP1A2）、右美沙芬（CYP2D6）、甲苯磺丁脲（CYP2C9）、奥美拉唑（CYP2C19）、咪达唑仑（CYP3A4）在人和大鼠肝微粒体中的酶动力学特征,比较两种探针底物法的适用性。[方法] 5种特异性探针底物分别经人或大鼠的肝微粒体代谢反应后,采用高效液相色谱法测定特异性探针底物的代谢速率,根据底物浓度-代谢速率曲线计算酶动力学常数。[结果] 单探针与混合探针两种方法在人肝微粒体中所得的V_max、K_m值具有一致性;而在大鼠肝微粒体中所得的K_m具有一定差异,表明该混合探针底物法在用于药物对大鼠肝微粒体中的细胞色素P450酶活性评价时可能会出现一定程度的影响。[结论] 在人肝微粒体中,两种探针底物法的V_max、K_m值具有一致性,因而混合探针底物法可代替单探针法用于细胞色素P450酶活性评价;在大鼠肝微粒体中,探针底物混合后可使得部分探针底物的K_m值升高,与酶亲和力下降,在细胞色素P450酶活性评价中可能出现假阴性结果。     

菟丝子水煎液对大鼠肝微粒体细胞色素P450亚型酶活性的影响

目的 观察菟丝子对大鼠肝细胞色素P450酶系统中CYP1A2,2D6以及3A4 3种亚型活性的影响.方法 对照组和实验组大鼠分别经口给予生理盐水和菟丝子水煎液2周,差速离心分离肝微粒体,HPLC法分别测定大鼠肝微粒体中CYP1A2,2D6以及3A4探针药物的代谢率;通过Western blot测定大鼠肝微粒体中CYP1A2,2D6以及3A4蛋白的相对含量.结果 ①实验组探针药物非那西丁代谢率高于对照组(P＜0.05),Western blot分析显示实验组CYP1A2蛋白表达略高于对照组;②实验组探针药物右美沙芬的代谢率明显高于对照组(P＜0.05),CYP2D6蛋白表达亦明显高手对照组;③两组间探针药物咪哒唑仑代谢率及CYP3A4蛋白表达无明显差异.结论 中药菟丝子水煎液可诱导大鼠肝微粒体中的CYP2D6和CYP1A2,而对CYP3A4无影响.     

五味子和甘草对大鼠肝药酶的诱导作用导致利多卡因药动学的改变

过大鼠的体外和体内药代动力学研究 ,探讨了五味子和甘草与其他药物之间的相互作用。雄性SD大鼠口服 6d五味子或甘草水煎液 ,剂量为生药 1 g或 3g/kg ,空白对照和阳性对照分别给予蒸馏水和苯巴比妥钠 ( 0 .1 2 g/kg) ,制备各给药组肝微粒体并测定P450 水平。以利多卡因为探针药物 ,以给予五味子、甘草或苯巴比妥钠 6d的大鼠肝微粒体研究其体外代谢速率 ;在体内药代动力学的研究中 ,大鼠先口服 6d五味子、甘草或苯巴比妥钠 ,第 7天静脉给予利多卡因 ( 1 0mg/kg) ,测定血浆和尿液中利多卡因的浓度 ,计算出药动学参数。结果 :五味子组和甘草组大鼠P450 水的平与对照相比有显著差异 ,P450 水平与剂量和时间呈相关性。第 6天 ,与空白对照的P450 水平 ( 0 .695 μmol/g)相比 ,五味子组、甘草组和苯巴比妥钠组分别增加了 5 8%、91 %和 2 70 %。在服用了五味子、甘草和苯巴比妥钠的大鼠肝微粒体中利多卡因的代谢速率明显高于空白对照 ,而体内的药动学参数也明显改变。在五味子组和甘草组中 ,利多卡因的半衰期分别缩短了 2 8%和 39% ,总清除率增加了 76%和 5 9%。表明五味子和甘草对P450 同工酶具有诱导作用。因此 ,当其他药物与五味子或甘草合用时 ,其有效性和安全性将会受到影响。     

左归饮对大鼠体内Cyp3a1、Cyp2d2、Cyp1a2代谢酶活性的研究

目的:全面系统地探讨左归饮对大鼠体内3种细胞色素P450酶不同亚型体内代谢活性的影响,为临床安全、合理用药提供基础研究。方法:采用Cocktail探针药物法,结合LC-MS/MS检测技术,选择咪达唑仑、氢溴酸右美沙芬、非那西丁作为探针底物,研究左归饮对大鼠肝脏细胞色素P450不同亚型Cyp3a1、Cyp2d2、Cyp1a2活性的影响。结果:建立的LC-MS/MS方法,可以同时测定3种探针药物非那西丁、氢溴酸右美沙芬及咪达唑仑在大鼠体内的血药浓度。各吸收峰分离完全,线性关系良好,准确度、精密度及稳定性均符合生物样本检测要求,操作简便。同空白组相比,实验组咪达唑仑和氢溴酸右美沙芬的主要药动学参数T1/2、V、CL、AUC(0~t)和AUC(0~∞)有显著性差异,而非那西丁无显著性差异。结论:左归饮在大鼠体内对Cyp3a1酶和Cyp2d2酶活性有诱导作用,对Cyp1a2无显著影响。     

大鼠肝细胞组织化培养用于药物Ⅰ和Ⅱ相代谢研究

目的：比较大鼠肝细胞在单层贴壁、胶原凝胶包埋和聚球体三种培养方式下药物代谢酶的活性及β-萘黄酮（BNF）对酶的诱导作用，考察组织化培养大鼠肝细胞的药物代谢能力。方法：大鼠肝细胞经三种培养方式培养一定时间后，分别加入非那西丁和7-羟基香豆素（7-HC），高效液相色谱法测定代谢产物对乙酰氨基酚、葡萄糖化7-羟基香豆素（7-HC GLUC）和硫酸化7-羟基香豆素（7-HC SULF）的浓度，分别用于表征Ⅰ、Ⅱ相药物代谢酶的活性。以BNF作为药物代谢酶的诱导剂，分别考察它对Ⅰ、Ⅱ相药物代谢酶的诱导情况。结果：单层贴壁培养肝细胞Ⅰ相药物代谢酶活性在第5天已检测不到，Ⅱ相药物代谢酶的活性在第7天已低于检测下限。在胶原凝胶包埋和聚球体两种培养方式下，大鼠肝细胞的Ⅰ和Ⅱ相酶活性在第7天还能保持初始值的32％～50％，且肝细胞聚球体的对乙酰氨基酚生成速率到第7天仍维持第1天的96％。肝细胞培养1～3d，肝细胞聚球体培养Ⅰ相药物代谢酶的活性比单层贴壁培养高2．7～3．9倍（P〈0．01，P〈0．05）。BNF处理后，三种培养模型的Ⅰ相酶的活性都有2．5倍左右的提高（P〈0．05），而Ⅱ相酶的活性增加并不明显。结论：在保持药物代谢酶活性方面，肝细胞的胶原凝胶包埋和聚球体培养方式比单层贴壁培养方式更优，可能成为研究药物代谢和药物相互作用更合适的体外模型。     

银杏叶提取物对大鼠肝微粒体细胞色素P4502D6活性的影响

目的：观察银杏叶提取物（GBE）对大鼠肝细胞色素P450酶系统中CYP2D6活性的影响。方法：HPLC法测定大鼠尿液和肝微粒体中探针药物右美沙芬的含量。对照组和实验组大鼠分别经口给予生理盐水和银杏叶提取物两周,差速离心分离肝微粒体,HPLC法测定大鼠尿液和肝微粒体中CYP2D6探针药物的代谢率。观察银杏叶提取物对CYP2D6活性的影响。结果：实验组大鼠给予银杏叶提取物（100mg/kg）,其尿样中右美沙芬的代谢率与对照组相比没有明显差别（P〉0.05）;实验组大鼠肝微粒体中加入右美沙芬（0.324mmol/L）,其右美沙芬的代谢率与对照组相比没有明显差别（P〉0.05）;银杏叶提取物没有明显降低右美沙芬的代谢率（P〉0.05）。结论：银杏叶提取物对CYP2D6酶无明显影响。     

壮骨关节丸对大鼠肝微粒体P450的影响

[目的] 考察壮骨关节丸对大鼠肝微粒体细胞色素P450的影响。[方法] 壮骨关节丸及其两个新工艺按含生药2.1 g/kg连续给大鼠灌胃7 d,末次药后24 h断头处死大鼠并取肝脏,用钙沉降法制备肝微粒体。在体外用含氨苯砜、非那西丁、奥美拉唑、氯唑沙宗的cocktail探针代谢来考察肝微粒体CYP3A、CYP1A2、CYP2C19、 CYP2E1的活性。[结果] cocktail探针在体外肝微粒体系统中代谢1 h后,包括壮骨关节丸及其两个新工艺的给药组剩余氯唑沙宗浓度显著高于对照组,而奥美拉唑、非那西丁、氨苯砜浓度与对照组之间差异无统计学意义。[结论] 壮骨关节丸可以抑制大鼠肝脏CYP2E1活性,但对CYP1A2、CYP3A及CYP2C19无显著影响。     

枸杞多糖对大鼠CYP450酶的调控作用

目的：评价枸杞多糖对大鼠肝细胞色素P450（CYP450）酶活力和基因表达的调控作用。方法：SD大鼠随机分为实验组（低剂量组、高剂量组）和对照组,分别给予低高剂量（250、500 mg/kg）枸杞多糖和纯化水2周,于第15天同时给予4种探针药（非那西丁、安非他酮、甲苯磺丁脲、咪达唑仑）的混合溶液,测定给药后不同时间点探针药的浓度并计算药动学参数,推测相关CYP450酶活力变化。RT-PCR法用于观测CYP450的基因表达变化。结果：与对照组相比,高剂量组大鼠甲苯磺丁脲药动学参数CLz/F降低27%,AUC(0-t)和Cmax分别增加50%和28%;低剂量组大鼠咪达唑仑CLz/F和Vz/F分别降低了25%和35%,AUC(0-t)增加了38%;高剂量组大鼠咪达唑仑的CLz/F和Vz/F分别降低了34%和38%,AUC(0-t)、Tmax和Cmax分别增加了51%、50%和65%（P＜0.05）;非那西丁和安非他酮药动学参数差异无统计学意义（P＞0.05）。RT-PCR检测发现,与对照组比较,枸杞多糖能显著下调大鼠CYP2C11（高剂量组）、CYP3A1（低剂量组）和CYP3A1（高剂量组）mRNA水平,分别为56%、44%和68%,而对CYP1A2和CYP2B1没有影响。结论：枸杞多糖会降低CYP2C11和CYP3A1酶活力及mRNA表达水平。     

葛根素对鼠肝微粒体细胞色素P450的影响

目的:观察葛根素对鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP)的影响.方法:实验动物分别腹腔注射生理盐水、苯巴比妥(40mg/kg.d)、葛根素(100和200 mg/kg.d),给药7d后,用分光光度法测定肝微粒体CYP和细胞色素b5(Cytb5)的含量,以及苯胺羟化酶(ANH)和氨基比林N-脱甲基酶(ADM)的活性.结果:苯巴比妥和葛根素均能显著缩短戊巴比妥钠对小鼠的催眠时间,显著提高小鼠肝脏指数、CYP含量,以及大鼠CYP和Cytb5含量,且以苯巴比妥组更为显著.苯巴比妥能非常显著地提高大鼠ANH和ADM活性,葛根素仅提高ADM活性,对ANH无明显影响.结论:葛根素对小鼠和大鼠肝微粒体CYP有诱导作用,但诱导能力显著弱于苯巴比妥.     

Cocktail探针药物评价姜黄对肝细胞色素P_(450)酶的影响

用Cocktail探针药物法 ,研究姜黄对大鼠肝细胞P4 50 (CYP4 50 )的影响。将SD雄性大鼠分组 ,给予姜黄的水提物 ,以生理盐水组为空白对照 ,以苯巴比妥组为阳性对照 ,通过HPLC检测Cocktail探针药物的代谢率来评价各组的CYP4 50 。结果 :给予姜黄组的大鼠CYP1A2和CYP2E1的水平显著低于对照组 ,CYP3A4的水平没有显著变化。表明 :姜黄对大鼠CYP1A2和CYP2E1有抑制作用 ,但对大鼠CYP3A4的影响不显著。     

甘草和五味子对大鼠丙咪嗪药代动力学的影响

以丙咪嗪为探针药物,采用体内代谢的方法研究甘草和五味子对大鼠肝微粒体细胞色素P450(CYP450)的影响。将大鼠随机分为甘草、五味子、生理盐水(空白对照)、苯巴比妥(阳性对照)组,测定各组CYP450的质量摩尔浓度。并于末次给药次日,进行大鼠右侧颈静脉插管手术。手术后第2天静脉给予丙咪嗪,定点取血,HPLC法测定丙咪嗪体内代谢变化。结果:各中草药组CYP450的水平均被显著诱导,丙咪嗪的体内代谢发生了明显改变。研究显示甘草和五味子对大鼠CYP450有诱导作用,且与剂量及诱导时间有关;被诱导的大鼠丙咪嗪的体内代谢加快,甘草和五味子与丙咪嗪合用时药代动力学发生改变。     

曲马多对大鼠CYP450及其肝功能的影响

目的 考察曲马多依赖性大鼠模型肝脏CYP450酶活力及肝功能指标的变化。 方法 将30只SD大鼠分为空白组、阳性对照组和实验组,每组10只,各组分别以生理盐水、80 mg/(kg·d)苯巴比妥和60 mg/(kg·d)曲马多灌胃给药,建立曲马多依赖性大鼠模型;采用Cocktail体外孵育法结合液质联用(LC-MS)技术测定大鼠肝脏中CYP1A2、CYP2B1、CYP2C11、CYP2D2、CYP2E1、CYP3A1各同工酶酶活性;RT-qPCR技术对上述同工酶的mRNA表达水平进行检测;血生化仪分析肝功指标。 结果 ①与空白组相比,阳性对照组CYP1A2、CYP2B1、CYP2C11、CYP2E1、CYP3A1酶活性分别为(190.15±33.58)、(98.02±36.00)、(1 348.79±40.76)、(3 214.66±133.51)、(292.76±33.32)μg/ml,显著高于空白组,差异有统计学意义(P<0.05);②与空白组相比,阳性对照组CYP1A2、CYP2B1、CYP2C11、CYP2E1、CYP3A1 mRNA表达显著上调,分别上调(89.88±14.22)%、(95.12±16.00)%、(351.25±32.33)%、(556.85±42.88)%、(52.56±11.12)%,差异有统计学意义,CYP2D2 mRNA无明显变化。实验组CYP1A2、CYP2B1、CYP2E1、CYP2D2 mRNA表达分别上调(75.12±21.45)%、(66.32±18.14)%、(81.35±23.55)%、(382.74±33.25)%,差异有统计学意义,CYP2C11、CYP3A1 mRNA表达无明显变化。③在肝脏生化指标水平上,与空白组相比,阳性对照组和实验组ALT、AST、LDH含量均明显上升,差异有统计学意义。 结论 曲马多滥用会诱导大鼠CYP1A2、CYP2B1、CYP2E1和CYP2D2酶活性升高和肝脏损伤。      

唑来膦酸对去势大鼠骨折后骨痂和骨微结构的影响简

目的 探讨唑来膦酸对去势大鼠骨折后骨痂和骨微结构的影响.方法 将45只SD雌性大鼠分为骨质疏松组（30只）和正常对照组（15只）,骨质疏松组雌性大鼠被切除双侧卵巢制作骨质疏松动物模型,正常对照组大鼠仅给予假手术;骨质疏松模型建模成功后,将骨质疏松组30只大鼠再次随机分为生理盐水组（15只）和唑来膦酸组（15只）;对两组大鼠制作股骨骨折模型,并分别给予生理盐水和唑来膦酸进行干预;在药物干预4周后,比较生理盐水组和唑来膦酸组骨质疏松大鼠股骨骨痂和骨微结构情况.结果 卵巢切除术后8周,正常对照组和骨质疏松组大鼠股骨的骨密度分别为（0.197±0.028）g/cm2和（0.128±0.037）g/cm2,差异有统计学意义（P＜0.05）;在药物干预4周后,两组骨质疏松大鼠股骨均有骨痂形成,而唑来膦酸组大鼠骨痂明显大于生理盐水组,且骨折线较为模糊;与生理盐水组大鼠比较,唑来膦酸组大鼠骨小梁间隙较小,排列也较为整齐致密,更接近正常对照组大鼠.结论 唑来膦酸可促进骨质疏松大鼠骨折后骨痂形成,并提高其骨密度.     

大豆异黄酮载药纳米颗粒对肝纤维化大鼠的抗过氧化作用

目的：观察大豆异黄酮载药纳米颗粒对肝纤维化大鼠的抗过氧化作用。方法采用四氯化碳灌胃法建立肝纤维化大鼠模型,随机分成对照组、肝纤维化组、空白纳米颗粒组（ SPIO组）、大豆异黄酮组（ SI组）、载药纳米颗粒组（ SI-SPIO组）,每组24只。对照组给予生理盐水尾静脉注射,其他各组除四氯化碳灌胃外,分别给予生理盐水尾静脉注射、SPIO、大豆异黄酮和SI-SPIO载药纳米颗粒尾静脉注射治疗,观察对照组和治疗组之间肝脏生化指标、过氧化损伤指标和肝脏组织学变化。结果8周后对各组大鼠的肝脏生化指标和肝纤维化程度进行评估,SI组和SI-SPIO组明显优于肝纤维化组和SPIO组;过氧化指标检测,与对照组相比,肝纤维化组和SPIO组MDA明显升高（2．45±0．77,2．69±1．01,P＜0．05）,GSH -Px 和SOD明显降低（300．74±16．25,299．18±15．57和409．77±20．46,431．56±19．25,P＜0．05）;与肝纤维化组相比,SI组和SI-SPIO组MDA明显降低（0．85±0．12,0．90±0．02,P＜0．05）,GSH-Px和SOD明显升高（340．25±11．85,366．45±14．83和467．27±16．11,485．75±22．54,P＜0．05）。 SI-SPIO组过氧化指标较SI组改善更为明显（P＜0．05）。结论大豆异黄酮具有抗氧化作用,能够抑制大鼠肝纤维化形成,载药纳米有助于药效的发挥。     

养阴活血方药对糖尿病大鼠肝脏线粒体琥珀酸脱氢酶和三磷酸腺苷酶的影响

目的 探讨养阴活血方药对糖尿病大鼠肝脏线粒体琥珀酸脱氢酶（SDH）和三磷酸腺苷酶（ATP酶）活性的影响.方法 选取SD大鼠24只,随机分为三组：正常对照组,糖尿病模型组,中药干预组.除正常对照组外,其他两组腹腔注射链脲佐菌素（STZ）造糖尿病模型.正常对照组和糖尿病模型组自由饮水,中药干预组按人与动物间体表面积折算的等效剂量比值灌喂给药.造模成功后10周,股动脉放血,并取肝脏,提取大鼠肝脏线粒体,并测定SDH和ATP酶活性的变化,观察肝细胞线粒体超微结构.结果 与正常对照组[（3.91 ±0.43） U/mgprot]比较,糖尿病模型组大鼠肝脏线粒体SDH[（2.31 ±0.27） U/mgprot]活性显著降低（P＜0.01）,Na＋-K＋-ATP酶[（0.57±0.18） U/mgprot]活性显著低于对照组[（2.39±0.28）U/mgprot] （P＜ 0.01）,Ca2＋-Mg2＋-ATP酶[（0.95±0.19） U/mgprot]活性显著低于对照组[（2.18±0.09）U/mgprot]（P＜ 0.01）,肝组织透射电镜观察：肝细胞线粒体空泡化,线粒体嵴、膜大部分融合、消失,粗面内质网脱颗粒现象明显.与糖尿病模型组相比,中药干预组SDH[（3.39±0.29） U/mgprot]、Na＋-K＋-ATP酶[（1.70±0.22） U/mgprot]和Ca2＋-Mg2＋-ATP[（1.75±0.09） U/mgprot]酶活性均有显著升高（P＜0.01）,肝组织透射电镜观察：细胞线粒体无空泡,损伤程度轻.结论 养阴活血方药可有效提高大鼠肝脏线粒体SDH活性、Na＋-K＋-ATP酶和Ca2＋-Mg2＋-ATP酶活性,这可能是养阴活血方药对糖尿病大鼠肝脏线粒体保护作用机制之一.