中药生殖毒性体外实验研究进展

生殖毒性作为中药学重要研究内容之一,是中药安全性研究的重要组成部分。目前对中药生殖毒性研究评价主要采用国内外新药临床前安全性评价指南所推荐的三阶段试验,然而存在费用高、实验周期长等缺点。欧洲替代方法研究中心(ECVAM)所推荐的胚胎干细胞试验、胚胎细胞微团培养试验及全胚胎培养试验等体外替代试验已应用于中药生殖、胚胎毒性的研究。该文就中药单体或复方生殖毒性体外试验评价的现状,对体外替代试验方法及其优缺点、必要性等进行了讨论。     

原代肾细胞体外培养及其在药物毒理学中的应用

近年来,肾细胞体外模型的使用非常广泛,从外源性化合物的毒性筛选、危险性评价到肾损伤机制的研究都广泛地应用到离体肾细胞模型.原代肾细胞的体外培养是研究肾脏疾病及药物对肾毒性的一项重要技术,目前该细胞分离方法 有酶分离法、化学分离法、筛网分离法、显微解剖分离法、流式细胞仪分离法、免疫分离法等.本文就原代肾细胞体外培养及其在药物毒理学中的应用综述如下.     

国外药物毒理学发展趋势分析与展望

近年来国外药物毒理学发展迅速,在研究思路和观念、技术和手段、策略和方法上发生了巨大转变,其主要表现为研究过程和实验操作逐步走向规范化、标准化;逐步采用体外筛选评价模型代替整体动物实验;在药物开发、申报、临床监测的各个环节发挥药物毒理学的主动指导作用;研究对象从患者群体转向个体;基因技术全面进入药物毒理学各个研究领域;利用毒代动力学和其他分子细胞生物学新的概念和方法研究药物毒性作用机制或进行药物毒性的风险评价.     

抗癌药物的体外筛选技术

细胞、组织和器官在体外培养获得成功已有大半个世纪,但真正地采用体外细胞和组织培养进行药理研究,只是近二、三十年中的事,由于细胞培养在药理学中的应用,也使药理学的发展从整体过程深入到细胞和分子水平。肿瘤细胞体外培养方法,是以人或动物肿瘤细胞为材料,在体外进行短期培养,观察细胞生长和药物作用,在抗癌药物筛选、抗癌作用机理以及     

药物代谢细胞色素P450酶学与研究方法应用进展

细胞色素P450酶(CYP450s)参与多种生理性物质、毒性致癌物以及约90%常用药物的代谢和转化,在药物代谢中占重要地位。CYP450s受药物的诱导或抑制可影响药物的代谢速率和作用时间,因而研究和探索CYP450s对于预测以代谢为机制的药物相互作用有重要意义。目前研究CYP450s的方法包括体内试验与体外实验两种,体外实验有原代肝细胞培养法、肝微粒体法、肝切片法、基因重组P450酶系、肝脏灌流技术以及"cocktail"探针法,体内常以动物作为模型,一般使用探针药物法。     

化学品鱼类急性毒性的决策树及替代试验

化学品大量使用给人类健康和生态环境带来危害,鱼类急性毒性试验是生态环境评价的基本方法.为适应3R原则和动物福利要求,有必要建立化学品急性毒性的决策树判定程序,运用细胞,组织和胚胎体外培养模型及数学模型,或者应用多种体外系统的组合试验策略进行风险决策.体外方法是传统动物试验的有益补充和代替,可用于化学品生态毒性筛查、评估和作用机制的研究.     

血清药理学方法研究进展

血清药理学方法是指动物经口服给药后采集含药血清进行体外实验的一种方法。1984年由日本学者首次提出,国内90年代初开始探索,近年来越来越多地应用于中药药理的研究,现已成为中药体外药效学研究的一种重要方法。它是在以前体外实验的基础上加以改进形成的,以中药血清代替中药粗提物进行体外实验,避免了中药直接体外用药的一系列干扰,不但能反映中药及其代谢产物的药理作用,而且能反映可能由药物诱导机体内源性成分所产生的作用,更接近药物在体内环境产生的真实过程[1],为从细胞分子水平研究中药药理学作用提供了新的手段。作为一种新的实验方法,它不仅具有体外实验条件可控性强、使用材料少等优点,而以其更适合中药及其复方制剂研究的独特之处受到了医学界的广泛关注,在实验对象的选择、给药剂量的确定,给药方案、采血时间、血清的处理等方面正在日趋规范,但还存在一些问题,现就研究现状作一综述。1实验动物选择在中药血清药理学实验中,动物常采用大鼠、小鼠、兔、豚鼠等。陆慧晶[2]认为:原则上,选择动物时应尽量选与人类生物特性近似的物种,制备血清的动物应与获取离体器官、组织、细胞的动物相一致,从而缩小或避免动物血清之间以及动物血清和人类血清之间在理化、生...     

睾丸支持细胞生殖毒性研究进展

睾丸支持细胞是雄性动物睾丸曲细精管内唯一的体细胞,可以维持和调节正常的生精过程,在精子发育成熟过程中具有极为重要的作用。睾丸支持细胞结构和功能的完整性对生精细胞增殖和成熟十分关键,其改变可导致生精细胞脱落和死亡。本研究将近年来关于环境毒物、药物通过睾丸支持细胞产生生殖毒性的机制研究进行综述。     

中医药抗肝纤维化实验研究进展

中医药抗肝纤维化的实验研究从动物体内实验到细胞体外实验均取得了较大进展，随着分子生物学技术的广泛应用及血清药理方法学、肝星状细胞分离培养技术的引入，中医药抗肝纤维化的机制研究已经接近国际先进水平。现从实验模型研究和实验技术方法2个方面就近5a来中医药抗肝纤维化实验研究作一综述。     

基于体内外相结合的中药配伍减毒研究思路探讨

中药配伍减毒在人体内的作用机制主要有药物作用受体调节、药物代谢组学的影响、药物蛋白组学的影响、药物基因组学的影响。配伍药物在体内会改变有毒中药发挥药效物质的分布表现、药物浓度和人体对药物的吸收,同时可以改变有毒物质的分子结构,从而达到减毒增效的目的。体外机制包括组织器官结构和细胞分子水平的影响,Caco-2细胞模型、肝肠微粒体模型、肠道菌代谢模型可以很好地解释体外机制。总之,中药在配伍过程中药效及毒性均会发生一定变化,变化的具体方式需要体内及体外共同研究确定,进而充分了解药物的毒性改变,对中药配伍研究及中医药发展具有重要意义。     

药物胚胎毒性体外试验的研究进展

胚胎是反映环境中有害因素影响的敏感生物标志物，胚胎毒性研究对环境保护、物种质量和数量的保证具有重要的意义。因此在强调可持续发展的当今社会，胚胎毒性研究受到越来越多的重视和关注。目前常用的胚胎毒性检测方法有体内胚胎毒性试验和体外胚胎毒性试验及流行病学调查。本文主要对体外胚胎毒性试验的研究进展进行综述，分别介绍了细胞体外培养法、啮齿类动物胚胎培养法、鸡胚培养法、两栖动物非洲爪蟾胚胎培养法、器官体外培养等方法。通过这些方法可以对待测化合物的胚胎毒性进行初筛，为进一步的体内胚胎毒性研究奠定基础。     

人软骨细胞体外分离与培养及其在中医药研究中的应用

<正>20世纪60年代起人们对软骨组织的研究进入到细胞水平。1967年Manning WK等[1]使用胰蛋白酶联合细菌胶原酶消化分离与培养人软骨细胞获得成功。目前人软骨细胞体外分离与培养的方法已被广泛应用于软骨细胞生物学研究,为髌骨软化症、骨关节炎（osteoarthritis,OA）等疾病的防治及组织工程技术修复软骨缺损等研究提供了重要的方法学参考[2-3]。鉴于中医药在防治疾病方面多靶点、多层次、多环节整体调控的独特优势,借助中医药方法干预人软骨细胞体外分离与培养的骨科方面研究也备受关注。1人软骨细胞体外分离与培养的研究1.1人软骨细胞体外分离获取的几种方法比较目前较常用的人软骨细胞体外分离获取方法可以归纳     

三邻甲苯基磷酸酯的神经毒性研究进展

三邻甲苯基磷酸酯(TOCP)是众多有机磷酸酯类化合物代表之一,有多器官毒性作用主要表现在对动物生殖毒性、免疫毒性和神经毒性。本文主要综述了TOCP分子理化特性、TOCP神经毒性作用的研究,并从骨架蛋白含量改变、氧化应激、细胞凋亡与细胞自噬等方面对TOCP神经毒性作用机制进行了综述。     

TLR7激动剂偶联OCT4对小鼠卵母细胞发育成熟的影响

【立论依据】 TLR7激动剂是疫苗研发的理想佐剂,其抗肿瘤的作用表现为多效性,而肿瘤蛋白OCT4在生殖肿瘤中高度表达。更有研究表明,肿瘤免疫是以细胞免疫为主,而TLR配体与蛋白的偶联能产生更强的T细胞免疫效应。因此,本课题选择易合成及改造性强的小分子TLR7激动剂作为佐剂,首次将TLR7激动剂与OCT4蛋白偶联,有关研究已初步证实了偶联疫苗产生强而显著的抗肿瘤活性,具有临床应用价值。但是,OCT4在生殖细胞中亦高表达,该疫苗是否具有生殖细胞毒性尚需要进一步探明,为后续临床应用提供参考,此方面研究目前尚未见相关报道。 【设计思路】 用腹腔给药的方法研究体内生长发育成熟卵母细胞的超排情况,用液滴培养法研究3种试剂对体内发育体外成熟卵母细胞的情况,以及采用液滴包埋培养窦前卵泡模拟体外生长环境研究试剂对其体外发育成熟情况。 【实验内容】 选取雌性小鼠作为研究对象,分别采用体内超排、卵母细胞体外分段培养成熟技术检测TLR7、OCT4以及TLR7-OCT4作用后对卵母细胞数目、卵母细胞的成熟率以及体外培养卵泡直径与卵母细胞发育成熟状态的影响。 【材料】 实验动物:SPF级 KM小鼠;主要试剂:TLR7、OCT4、T7-OCT4、α-MEM培养基、注射用青霉素钠和硫酸链霉素、胎牛血清、矿物油、rLH、FSH、HCG及PMSG;实验仪器:二氧化碳培养箱、-80℃超低温冰箱、高压湿热灭菌锅、超净工作台、恒温水浴箱、倒置显微镜、正置显微镜等。 【可行性】 本实验室创立的生殖毒性检测系统现已完善,且各实验用品来源充足,窦前卵泡体外培养技术成熟。 【创新性】 实验材料价值大:OCT4控制细胞多能性的作用机制目前并未明确。本实验针对Oct4的作用特点研究其对女性生殖系统的影响,率先阐明Oct4在这一领域的具体作用价值;实验方法先进:率先将生殖工程中的前沿技术——腔前卵泡培养成熟技术应用于本实验的检测与评价中,高度接近人体生殖细胞的环境,该技术可靠性与准确性高;思路新:首次检测Oct4基因,腔前卵泡及卵母细胞发育,系统研究细胞毒性的发生过程及机制;意义深:在基因水平研究TLR激动剂对生殖系统的影响,从基因水平到具体性状,从微观水平到宏观水平,纵向剖析对生殖系统的具体影响,对生殖细胞的分化、生长、应激有着举足轻重的意义。     

Caco-2细胞模型及其对黄酮类成分作用机制研究进展

Caco-2细胞模型作为ADME/Tox研究平台中肠吸收模型之一,已广泛用于药物动力学研究,可通过体外试验预测药物在体内的吸收和代谢,阐明药物在体内的吸收机制、毒性、药物吸收过程中的相互作用、药物的化学结构和体内转运关系以及药物代谢稳定性等。以黄酮类成分为代表,介绍Caco-2细胞模型在中药有效成分吸收代谢机制研究方面的应用进展。     

生殖支原体耐药及机制研究进展

生殖支原体是男性非淋球菌性尿道炎的独立致病菌之一。其体外分离培养十分困难,相应的诊断和治疗药物监测手段受到限制。生殖支原体的体外药物敏感性方法从传统的琼脂稀释法及肉汤稀释法,发展为细胞培养法,且随着分子生物技术的发展也在不断改进。生殖支原体对阿奇霉素会出现耐药,其耐药机制主要是23S rRNAⅤ区的基因突变并可能与L22和L4核糖体蛋白基因突变有关。最近,不断出现二线药物莫西沙星治疗失败的案例,其耐药机制可能与拓扑异构酶Ⅳpar C亚基的基因突变有关。临床上快速出现的对一线、二线抗菌药抵抗的生殖支原体,甚至是多重耐药生殖支原体,更加大了治疗难度。对生殖支原体耐药机制的探讨及寻找新的更有效的药物成为研究热点。     

铝对大鼠睾丸支持细胞雄激素结合蛋白mRNA表达的影响

目的:研究氯化铝对体外培养大鼠睾丸支持细胞的雄激素结合蛋白(ABP)mRNA表达的影响。方法:体外培养大鼠睾丸支持细胞为模型,分为对照组、低剂量组、中剂量组、高剂量组(0,300,400,500μmol/L)氯化铝染毒睾丸支持细胞,培养24h后采取MTT法检测细胞活性,RT-PCR法检测ABP mRNA的表达水平。结果:随着氯化铝染毒剂量的增大,ABP mRNA的表达下降。高剂量染毒组与对照组相比较,ABP mRNA的表达差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:氯化铝对体外培养的睾丸支持细胞具有毒性作用,抑制ABP mRNA的表达,从而损伤支持细胞功能,导致生殖功能障碍。     

蜂胶对人牙周膜成纤维细胞毒性及细胞回复能力的影响

目的 体外研究蜂胶对人牙周膜成纤维细胞的细胞毒性及毒性的可逆性.方法 体外培养人牙周膜成纤维细胞(human periodontal ligament fibroblasts,HPDLFs),选用蜂胶为实验组,碘酚溶液和奥硝唑溶液为药物对照组,培养基作为空白对照组,分别与HPDLFs接触进行细胞培养24h,用MTT法测定细胞相对增殖率(RGR),更换新鲜培养基继续培养细胞24h,测定细胞回复度.结果 3种药物随着药物浓度的增加,细胞相对增殖率均成下降趋势,同种药物不同浓度间比较,差别具有统计学意义(P＜0.05).所选浓度的蜂胶和奥硝唑细胞毒性为1～2级,而对照药物碘酚细胞毒性为4级.更换新鲜培养基继续培养细胞24h后,蜂胶组和奥硝唑组细胞回复度均大于80％,表现出较小的细胞毒性;而碘酚组回复度小于30％,表现出一定的细胞毒性.结论 蜂胶对HPDLFs具有较小的细胞毒性,且毒性可逆.     

邻苯二甲酸二乙基己酯的生殖发育毒性

邻苯二甲酸酯作为增塑剂已被广泛应用于各种塑料品中,在动物实验中已证实邻苯二甲酸二乙基己酯的暴露对生殖系统的功能有损伤.本文就邻苯二甲酸二乙基己酯的雄性生殖毒性、雌性生殖毒性、发育毒性及毒性机制等作一综述.     

敌百虫对非洲蟾蜍卵母细胞体外成熟过程中MAPK信号途径的影响

目的：探讨敌百虫（TCF）生殖毒性机制。方法：采用不同剂量TCF预处理非洲爪蟾卵母细胞,检测细胞中相关蛋白的表达水平。结果：TCF激活ERK1,但不影响Mos蛋白表达水平。结论：敌百虫影响非洲蟾蜍卵母细胞体外成熟过程中的丝裂原活化蛋白激酶（MAPK）信号途径。