白介素-1β通过改变PKC、Rho激酶活性调节家兔内毒素休克后肠系膜上动脉钙敏感性

目的观察在内毒素休克及白介素-1β介导家兔肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA)钙敏感性改变中SMA PKC、Rho激酶活性的变化。方法健康成年家兔96只,雌雄不拘,分为两实验大组:①内毒素休克组(包括5小组:正常对照组、LPS 30 min组、LPS 1 h组、LPS 2 h组和LPS 4 h组);②IL-1β处理组(包括3小组:0 ng/ml IL-1β组、50 ng/ml IL-1β组、100 ng/ml IL-1β组),每小组12只家兔。经耳缘静脉注入1 mg/kg LPS(O111∶B4)复制内毒素休克模型,在给LPS前及给LPS后30 min,1、2、4 h取家兔SMA,提取其PKC及Rho激酶蛋白并纯化,检测PKC及Rho激酶活性的变化,并与内毒素休克后血管钙敏感性变化进行相关分析;无菌条件下取正常成年家兔SMA,在0、50、100 ng/ml IL-1β作用12 h后,检测其PKC及Rho激酶活性的变化,并与IL-1β处理后家兔SMA钙敏感性变化进行相关分析。结果在给LPS后30 min至1 h成功复制出内毒素休克模型,与正常对照组相比,PKC、Rho激酶活性均在给LPS 30 min后升高(P<0.01),在2 h及4 h后均降低(P<0.01),与钙敏感性变化均呈显著正相关(r=0.912和0.968,P<0.05)。与0 ng/mlIL-1β组相比,100 ng/ml IL-1β能使PKC、Rho激酶活性明显降低(P<0.05),与钙敏感性变化均呈显著正相关(r=0.922和0.934,P<0.05)。结论 IL-1β能通过改变PKC、Rho激酶活性来调节家兔肠系膜上动脉钙敏感性,IL-1β可能通过改变PKC、Rho激酶活性调节家兔内毒素休克后肠系膜上动脉钙敏感性变化。     

TNF-α对家兔内毒素休克钙敏感性的影响及其与Rho激酶和蛋白激酶C的关系

目的观察肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factorα,TNF-α)对内毒素休克血管钙敏感性的影响及其与Rho激酶和蛋白激酶C(protein kinase C,PKC)的关系。方法取正常和内毒素休克家兔肠系膜上动脉(superior mesenteric artery,SMA),采用离体血管环张力测定技术,用去极化状态下(120mmol/LKCl)SMA血管环对梯度浓度钙的收缩力反映血管的钙敏感性。用ELISA法测定血浆炎性因子TNF-α的水平,观察TNF-α对SMA血管环钙敏感性的影响及与PKC和Rho激酶的关系。结果家兔LPS(1mg/kg)静脉注射后,早期(即LPS注射后30min和1h)SMA血管环对钙的反应性升高,量-效曲线左移,最大收缩力(Emax)升高(P0.05);随着时间的延长,SMA血管环对钙的反应性逐渐下降,到LPS注射后6h明显降低,其量-效曲线明显右移,最大收缩力(Emax)明显降低(P0.01)。家兔LPS(1mg/kg)静脉注射后2h,血清中TNF-α的水平逐渐升高,4h达到高峰,6h有所降低但仍高于正常组(P0.05,P0.01),其变化趋势与血管钙敏感性变化呈一定负相关关系(r=-0.6753)。低浓度的TNF-α(20ng/ml)孵育可明显升高SMA对钙的反应性,高浓度的TNF-α(200ng/ml)可明显降低SMA对钙的反应性(P0.05,P0.01)。Rho激酶特异性抑制剂Y-27632(1×10-5mol/L)可明显降低低浓度的TNF-α升高SMA对钙的反应性(P0.05,P0.01);而PKC的抑制剂Staurosporine(1×10-7mol/L)无拮抗作用(P0.05)。结论TNF-α对内毒素休克血管的钙敏感性有重要的调节作用,其调节作用可能主要与Rho激酶有关,与PKC关系不大。     

内毒素休克后家兔血管低反应性的变化规律及其与血流动力学变化的关系

目的 了解内毒素休克后血管反应性的变化规律及其与血流动力学变化的关系.方法 将10只家兔用于测定内毒素休克后的血流动力学变化,另外48只随机分为6组,依次为正常对照组、给LPS后0.5、1、2、4、6h组,分别测定各组肠系膜上动脉(SMA)离体血管环对NE、Ach的收缩和舒张反应性.结果 家兔LPS(1mg/kg)静注后,MAP在静注LPS后早期就迅速下降,继而保持平缓的下降趋势;反映心肌收缩功能的左室最大收缩压(LVSP)、左室内压最大上升速率( dp/dt max)及下降速率(-dp/dt max)等指标先迅速下降然后有一定的回升继而再平稳下降,而左室舒张末压(LVEDP)则没有明显变化;SMA血管环对NE的反应性在早期无显著变化,晚期显著降低;SMA血管环对Ach的反应性在早期升高,晚期下降.结论 内毒素休克血管反应性呈现早期高舒张反应、晚期低收缩反应的规律.早期心肌收缩功能的显著下降和血管的高舒张反应可能共同参与了早期MAP的迅速下降;晚期的低收缩反应可能参与了晚期持续性低血压的发生.     

黄芩苷对脂多糖诱导牙周膜成纤维细胞表达炎症因子的影响

【】目的：探讨黄芩苷对脂多糖促人牙周膜成纤维细胞炎症因子表达的影响。方法：将培养后的人牙周膜成纤维细胞用不同浓度的黄芩苷处理,CCK8实验观察不同浓度黄芩苷对人牙周膜成纤维细胞的细胞毒性。将培养后的人牙周膜成纤维细胞分为空白对照组、LPS组、黄芩苷组和LPS+黄芩苷组。空白对照组仅加入2%胎牛血清的培养液;LPS组加入加入100μg/mLLPS ;黄芩苷组分别加入黄芩苷200、500ng/mL ;LPS+黄芩苷组加入100μg/mL LPS,同时分别加入黄芩苷 200ng/mL 、500ng/mL。24h收集细胞, 检测各组IL-6、IL-8、IL-1βmRNA表达的变化。结果： 500ng/mL浓度以下黄芩苷添加至细胞没有明显的细胞增殖毒性。单独加入黄芩苷200ng/mL和500ng/mL的黄芩苷组和空白对照组比较,IL-6、IL-8、IL-1β均无明显变化(P＞0.05)。 和空白对照组比较,LPS组IL-6、IL-8、IL-1β明显上升,差异有统计学意义 (P<0.05),同时加入LPS和200ng/ml黄芩苷,相比单独加入LPS组,IL-6、IL-8、IL-1β明显下降,差异有统计学意义(P<0.05)。而同时加入LPS和500ng/mL黄芩苷,相比单独加入LPS组,IL-6、IL-8、IL-1β明显上升,差异有统计学意义 (P<0.05) 结论：黄芩苷在低浓度时显示有抑炎作用,而在浓度增加达到500ng/mL时显示有促炎作用。     

胸腺肽β4提高内毒素休克小鼠存活率并下调炎症介质释放

目的:研究胸腺肽β4(thymosinβ4,Tβ4)对内毒素休克小鼠72h存活率的影响,检测TNF-α及IL-1α变化,初步探讨Tβ4治疗内毒素休克的机制.方法:选用清洁级昆明小鼠腹腔注射脂多糖(LPS)制备内毒素休克动物模型,①观察内毒素休克前后Tβ4变化情况.②Tβ4对内毒素休克小鼠存活率的影响.动物随机分为4组,每组30只,均腹腔注射LPS(25mg/kg),Ⅰ组为LPS对照组,Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ组分别于LPS腹腔注射后0h;0h、2h;0h、2h、4h尾静脉注射Tβ4(5mg/kg),观察72h存活率.③ELISA法检测Tβ4对内毒素休克小鼠血浆TNF-α及IL-1α变化情况.结果:Tβ4在内毒素休克小鼠的血浆中明显降低,Tβ4可提高内毒素休克小鼠72h存活率,并下调TNF-α及IL-1α的释放.结论:Tβ4治疗内毒素休克应在LPS腹腔注射后0h、2h、4h连续注射Tβ4(5mg/kg),实验提示Tβ4可能是通过下调炎症介质的释放来治疗内毒素休克的.     

首都医科大学实验动物科学部

目的观察异丙酚对内毒素血症大鼠血清TNF-α、IL-1β及IL-10作用的影响。方法24只雄性Wistar大鼠分为三组,内毒素组(L组)、异丙酚 内毒素组(P组)和对照组(C组)。L组股静脉注入内毒素(LPS)8mg/kg,后持续输注生理盐水1ml·kg-1·h-1;P组股静脉注入LPS后静脉注射异丙酚10mg/kg,随后以10mg·kg-1·h-1维持;C组静脉注入等量生理盐水。于注射LPS后60、120、180、240min取血,用酶联免疫吸附法(ELISA)测定血清中肿瘤坏死因子(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及白细胞介素-10(IL-10)含量。结果L组血清中TNF-α、IL-1β及IL-10浓度显著升高(P<0.01),P组各项指标均明显低于L组(P<0.01)。结论异丙酚可显著抑制内毒素血症时TNF-α、IL-1β及IL-10的水平,减轻内毒素导致的急性肺损伤。     

胸腺素β4治疗脂多糖诱导小鼠内毒素休克的实验研究

目的研究胸腺素β4(thymosin β4,Tβ4)对内毒素休克小鼠72 h存活率的影响,并初步探讨Tβ4治疗内毒素休克的机制.方法选用清洁级昆明小鼠腹腔注射脂多糖(LPS)制备内毒素休克动物模型,(1)观察内毒素休克前后Tβ4变化情况;(2)观察注射LPS后不同时间给予Tβ4对内毒素休克小鼠存活率的影响;(3)观察不同剂量Tβ4对内毒素休克小鼠存活率的影响;(4)ELISA法检测Tβ4对内毒素休克小鼠血浆TNF-α及IL-1β变化情况的影响;(5)用RT-PCR的方法检测外周血单核细胞(PBMC)的TNF-α mRNA及IL-1β mRNA表达情况.结果 Tβ4在内毒素休克小鼠的血浆中明显降低,A、B、C组内毒素休克小鼠72 h存活率均明显低于D组(P＜0.01,P＜0.05),Tβ4预处理LPS组TNF-α及IL-1β血浆水平明显低于LPS组(P＜0.01),LPS组TNF-α mRNA及IL-1α mRNA的表达明显高于Tβ4预处理LPS组(P＜0.01).结论 Tβ4治疗内毒素休克应在LPS腹腔注射后0 h、2 h、4 h连续注射Tβ4(5 mg/kg),Tβ4可降低PBMC表达TNF-α mRNA及IL-1β mRNA.实验提示Tβ4可能是通过下调炎症介质的基因表达来治疗内毒素休克的.     

TGF-β1/Smad2通路参与IL-17诱导的A549细胞上皮-间质转化

目的:探讨白细胞介素(IL)-17对A549细胞上皮-间质转化的影响及TGF-β1/Smad2信号通路在其中的作用。方法:用不同浓度(0,10,25,50,100ng/ml)IL-17刺激A549细胞48h,RT-PCR检测E-钙黏蛋白(E-cad)、α-平滑肌肌动蛋白(SMA)、TGF-β1的表达。将体外培养的细胞分为3组:对照组、IL-17(100ng/ml)组、IL-17+SB431542组。48h后收集各组细胞,RT-PCR和Western Blot检测E-cad、α-SMA、TGF-β1、Smad2、和p-Smad2的表达。结果:不同浓度的IL-17作用后,E-cad在50ng/ml IL-17组时表达下调,与浓度呈负相关;α-SMA在100ng/ml IL-17组时表达上调;TGF-β1在25ng/ml IL-17组时表达上调,与浓度呈正相关。与对照组相比,IL-17组E-cad表达下调,α-SMA、TGF-β1、p-Smad2表达均增加,Smad2蛋白表达水平无明显变化;与IL-17组比较,IL-17+SB431542组Smad2蛋白表达水平无明显变化,TGF-β1、p-Smad2、α-SMA蛋白表达均降低,E-cad的表达明显增加。结论:TGF-β1/Smad2通路参与IL-17诱导的A549细胞上皮-间质转化。     

核因子-资B/白细胞介素1茁在脂多糖诱导小鼠附睾炎中的作用研究

目的探讨核因子-资B（NF-资B）/白细胞介素1β（IL-1β）在脂多糖（LPS）诱导小鼠附睾炎中的作用机制。方法40只雄性小鼠按随机数字表法分为3组,LPS组30只,磷酸盐缓冲液（PBS）组（对照）5只,LPS+JSH-23组5只。LPS组小鼠于造模0、6、12、24、48h及3周,PBS组、LPS+JSH-23组分别于造模3周采用颈椎脱臼法处死,收集血清及附睾;观察LPS小鼠血清、附睾IL-1β浓度及mRNA表达水平变化,同时比较LPS组与PBS组造模3周后附睾精子常规参数,以及3组小鼠附睾NF-资Bp65蛋白表达及血清、附睾IL-1β浓度及附睾组织mRNA表达水平,血清睾酮浓度。结果与0h比较,LPS组小鼠6、12、24h血清、附睾IL-1β浓度及附睾组织mRNA表达水平明显升高,且呈时间依赖性（P＜0.05）;至48h开始降低（P＜0.05）。造模3周,LPS组精子总数、活动精子百分比、前向运动精子百分比、非前向运动精子百分比较PBS组均明显降低（均P＜0.05）,不活动精子百分比高于PBS组（均P＜0.05）。与PBS组比较,LPS组小鼠附睾组织NF-资Bp65蛋白表达上调（P＜0.05）,LPS+JSH-23组明显下调（P＜0.05）。与PBS组比较,LPS组小鼠血清、附睾IL-1β浓度及附睾组织mRNA表达水平均明显升高（均P＜0.05）,LPS+JSH-23组较LPS组明显降低（均P＜0.05）。LPS组小鼠血清睾酮浓度较PBS组明显降低（P＜0.05）,LPS+JSH-23组较LPS组明显升高（P＜0.05）。结论LPS能显著诱导小鼠附睾炎中IL-1β表达,而NF-资B抑制剂能有效抑制LPS诱导小鼠附睾炎中炎症因子IL-1β的产生,进而抑制小鼠附睾的炎性反应。     

3种急性肺损伤兔模型的比较

目的:比较3种常用的急性肺损伤(ALI)动物模型造模效果。方法:24只健康成年日本大白兔随机分为3组,每组8只,气管插管后,行机械通气。盐酸造模组(HCL组):经气管导管给予0.1mol/L的盐酸3ml/kg;脂多糖造模组(LPS组):通过中心静脉30min内缓慢滴注LPS1mg/kg;肠系膜上动脉缺血再灌注复合腹腔内放置粪便组(SMA组):钳闭肠系膜上动脉30min,期间腹腔内放置肠内容物(1ml/kg)与血(1ml/kg)的混合物。连续描记平均动脉压(MAP)和心率(HR)的变化;检测基础(T0)及造模后1,2,4,6,8h(T1,T2,T4,T6和T8)的动脉血气和血清内IL-1β的浓度;实验结束测定血清内肺表面活性物质相关蛋白A(SP-A)的浓度。结果:PaO2在T1,T2时点,HCL组较LPS组和SMA组明显降低(P<0.01);在T4时点3组无统计学差异;在T6,T8时点HCL组和SMA组较LPS组明显降低(P<0.01)。MAP和HR在HCL组和LPS组内各时点无统计学差异;SMA组内与T0时点相比较,T4～T8时点的MAP较低(P<0.01)、HR较快(P<0.01)。IL-1β浓度在HCL组各时点无统计学差异,而LPS组和SMA组则随着时间的发展,IL-1β的浓度逐渐变化;血清内SP-A的浓度,SMA组明显高于另外两组(P<0.01)。结论:与盐酸支气管滴注造模和脂多糖中心静脉滴注造模相比,肠系膜上动脉缺血再灌注复合腹膜内放置粪便法,既可持续保持PaO2水平较低,也可保证血清内炎性因子浓度较高,更可能会发展为急性呼吸窘迫综合征(ARDS)。