骨桥蛋白在大鼠慢性移植肾肾病中的表达及意义

目的:探讨慢性移植肾肾病(chronic allograft nephropathy,CAN)大鼠的组织学改变与骨桥蛋白(osteopontin,OPN)表达的关系?方法:以F344大鼠为供体,Lewis大鼠为受体,行原位异体肾移植,建立大鼠CAN模型,作为CAN组;以Lewis大鼠做供?受体,行原位异体肾移植,作为对照组?12周后,观察两组大鼠肾功能?肾组织学改变;免疫组织化学法检测OPN及转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达?结果:与对照组比较,CAN组大鼠24 h尿蛋白定量?血肌酐及尿素氮明显升高,差异有统计学意义(P < 0.01);根据Banff 97评分标准,CAN组和对照组肾小管萎缩评分分别为1.70±0.82?0.10±0.30,肾小管间质纤维化评分分别为2.20±0.79?0.30±0.48,差异均有统计学意义(P < 0.01);CAN组移植肾肾小管上皮细胞中TGF-β1蛋白的阳性表达率为100%,而在对照组移植肾组织中未见阳性表达;CAN组移植肾组织中OPN的阳性表达率为90%,而在对照组移植肾组织中未见阳性表达,两者均存在明显差异?结论:OPN在CAN大鼠移植肾组织中高表达,可能作为TGF-β1的下游分子参与TGF-β1介导的慢性移植肾病变的发生发展?     

移植肾转化因子β与慢性移植肾肾病关系的研究

目的:探讨移植肾转化生长因子β1(TGF-β1)与慢性移植肾肾病的关系.方法:2000年9月～2001年6月期间,对181例肾功能正常的肾移植患者检测尿TGF-β1含量,所得相对浓度为150.7～527.1(pg/mg.Cr),分别选出浓度最高和最低的各25例患者构成A组、B组.检测两组血TGF-β1浓度;两组中分别有16例和13例患者进行了移植肾穿刺活检,检测活检组织中TGF-β1mRNA的表达量;3年后,比较两组肾功能有无差异;分析TGF-β1mRNA表达量与肾功能有无相关性;对肾功能不全者作移植肾穿刺活检,明明是否为慢性移植肾肾病;结果:两组患者血TGF-β1浓度没有明显差异;A组活检组织中TGF-β1mRNA表达量为1.37±0.29,明显高于B组(0.87±0 24);2年后,A组肌酐清除率(Ccr)减少了17.4±6.6ml/min和2例);TGF-β1mRNA表达量与3年后的肾功能之间有着明显的相关性;肾功不全的患者,移植肾穿刺活检均证实为慢性移植肾肾病.结论:TGF-β1与慢性移植物肾病的发生有着密切的关联;肾移植后检测尿TGF-β1对远期肾功能具有预测作用.     

小剂量阿斯匹林对受体大鼠慢性移植肾肾病的治疗作用

目的观察小剂量阿斯匹林对同种异基因移植受体大鼠慢性移植肾肾病的作用并探讨可能的作用机制。方法建立大鼠肾移植慢性排斥反应模型,移植受体大鼠随机分为2组(n=10),均自术前1d开始每日以环孢素A5mg/kg灌胃,治疗组每日给予阿斯匹林5mg/kg灌胃,对照组每日给予生理盐水2ml灌胃,术后8周采静脉血测定血清肌酐、尿素氮水平;处死动物取移植肾组织进行H-E染色及免疫组化染色(测定TGF-β1表达)。结果阿斯匹林治疗组大鼠血肌酐、尿素氮升高程度,组织病理损害及TGF-β1表达程度均较生理盐水对照组轻(P<0.05)。结论肾移植术后在常规抗排斥治疗基础上使用小剂量阿斯匹林对慢性移植肾肾病有治疗作用,其机制可能与致纤维化因子TGF-β1的表达减少有关。     

肾移植受者TGF-β1与慢性移植肾肾病相关性的研究

目的探讨移植肾内转移生长因子β1(TGF-β1)的表达与慢性移植肾肾病的关系.方法2000年9月至2001年1月期间,检测146例肾功能正常的肾移植患者尿中TGF-β1含量,测得相对浓度为152.8～516.2(pg/mg Cr),将TGF-β1相对浓度最高和最低的各20例患者分为A组、B组,检测两组血TGF-β1水平;两组中分别有14例和12例患者进行了移植肾穿刺活检,比较活检组织中TGF-β1mRNA的表达量.3年后,比较两组肾功能有无差异,对肾功能不全者作移植肾穿刺活检,明确是否为慢性移植肾肾病.结果两组患者血TGF-β1浓度没有明显差异;A组活检组织中TGF-β1mRNA表达量为1.37±0.29,明显高于B组0.82±0.21;3年后,A组肌酐清除率(Ccr)减少了(17.4±7.2)mL/min、有7例患者肾功不全,B组Ccr减少了(6.2±4.5)mL/min、有1例肾功不全,两组差异有统计学意义(P＜0.05);肾功不全的患者,移植肾穿刺活检均证实为慢性移植肾肾病.结论移植肾中TGF-β1与慢性移植肾肾病的发生有着密切的关联,尿TGF-β1相对浓度高者远期肾功能差.     

基质金属蛋白酶-9在慢性同种移植肾病早期大鼠肾组织中的表达及意义

目的研究基质金属蛋白酶9(MMP9)在慢性移植肾病早期肾组织的表达及其与转化生长因子β1(TGFβ1)表达、小管间质单个核细胞浸润及血管平滑肌细胞增殖和移行的关系。方法以雄性Fisher大鼠作供体,雄性Lewis大鼠作受体进行同种肾移植,Fisher及Lewis雄性大鼠单肾切除作对照。移植后12周作肾功能、移植肾组织学检测,应用免疫组织化学方法测定肾组织中MMP9及TGFβ1子的表达,应用逆转录聚合酶链反应(RTPCR)方法检测肾组织MMP9mRNA表达水平及β肌动蛋白mRNA的表达。结果实验组大鼠12周时24h尿蛋白定量(g/d)0.025±0.028,与F344、Lewis对照组间24h尿蛋白水平差异无统计学意义;血清肌酐(μmol/L)96±36,显著高于F344组,与Lewis组比较差异无统计学意义;肌酐清除率(ml·min-1·100g体重-1)0.18±0.10,三组间差异无统计学意义。实验组大鼠肾动脉血管壁及肾间质MMP9(分别为0.095±0.020,0.32±0.09)与TGFβ1蛋白表达水平(分别为0.086±0.017,0.58±0.10)及肾组织MMP9mRNA表达水平(1.34±1.06)均显著高于对照组。相关分析结果显示,肾组织MMP9mRNA表达水平与间质单个核细胞浸润程度呈显著正相关,肾组织MMP9蛋白表达水平与间质中单个核细胞数量、血管平滑肌细胞数量、肾组织TGFβ1蛋白表达水平均呈显著正相关。结论MMP9在慢性移植肾病早期的病理变化中发挥关键性的作用,其产生机制与TGFβ1表达增强有关。     

TGF-β1与慢性移植肾肾病关系的临床研究

目的:探讨移植肾转化生长因子β1(TGF-β1)与慢性移植物肾病的关系。方法:对152例肾功能正常的肾移植患者检测尿TGFβ1含量,所得相对浓度为157.0～520.7(pg/mg·Cr),分别选出浓度最高和最低的各25例患者构成A组、B组。检测两组血TGF-β1浓度;两组中分别有15例和12例患者进行了移植肾穿剌活检,比较活检组织中TGFβ1mRNA和TGFβ1蛋白的表达;3年后,比较两组肾功能有无差异,对肾功能不全者作移植肾穿剌活检,明确移植肾在病理上是否为非特异性损害(即慢性移植肾肾病的改变)。结果:两组患者血TGFβ1浓度没有明显差异;A组活检组织中TGF-β1mRNA表达量和TGFβ1免疫荧光强度分别为(1.38±0.28)×106和(10.80±2.31)×106,明显高于B组,后者分别为(0.88±0.25)×106和(6.41±1.57)×106;3年后,A组肌酐清除率(Ccr)为(79.2±11.2)ml/min、有7例患者肾功不全,与B组比较有显著差异;肾功不全的患者,移植肾穿剌活检均证实为慢性移植肾肾病。结论:TGF-β1与慢性移植物肾病的发生有着密切的关联;肾移植后检测尿TGF-β1对远期肾功能具有预测作用。     

缺血再灌注损伤致慢性移植肾肾病的发病机理及药物干预的实验研究

目的 探讨缺血再灌注损伤致慢性移植肾肾病(CAN)的机理及药物干预的防治效果和作用机制.方法 利用已建立的大鼠原位异体肾移植硬化加快模型进行原位肾移植.实验分组:A组单用环孢素A(CsA) 10 mg/(kg·d),B、C、D组分别给予小剂量[4 mg/(kg·d)]、大剂量[8 mg/(kg·d)]益生注射液或吗替麦考酚酯[MMF,20 mg/(kg·d)], 联合应用CsA[10 mg/(kg·d)],E组为空白对照.移植术后4、8及12周处死动物,观察移植肾病理变化并测定肾功能.采用免疫组化和实时荧光定量PCR检测各组TGF-β1、Smad2、Smad7蛋白和mRNA表达及其在移植肾的定位情况.结果 大剂量益生组,血浆肌酐水平升高较小剂量组低,CAN病理改变较小剂量组为轻.移植肾标本中,A、B组Smad2、TGF-β1表达上调、Smad7表达下调,尤以A组明显,A组与其它各组相比在各时间点上差异均有统计学意义(P＜0.05);移植肾肾小管上皮细胞、间质细胞及肾小球,Smad2、TGF-β1表达均呈强阳性,Smad7表达呈弱阳性;C、D组Smad2、TGF-β1表达下调,而Smad7表达上调,组间差异无统计学意义.结论 缺血再灌注损伤致CAN机理可能是通过TGF-β1过表达及上调Smad2表达,下调Smad7表达,直接或间接致移植肾实质和血管的纤维化.中药益生注射液及MMF可能通过下调TGF-β1及Smad2表达、上调Smad7表达而发挥其抗纤维化作用.     

尿毒清胶囊及其拆方对5/6肾切除大鼠肾组织TGF-β1 mRNA表达的影响

[目的]观察尿毒清胶囊及其拆方对慢性肾功能哀竭(CRF)模型大鼠肾组织转化生长因子β1(TGF-β1)mRNA表达的影响.[方法]采用5/6肾切除法复制CRF大鼠模型,造模成功的SD大鼠随机分为模型组、黄芪组(剂量1.5 g·kg-1·d-1)、丹参组(剂量为1 g·kg-1·d-1)、大黄组(剂量为1 g·kg-1·d-1)、黄芪丹参大黄组(剂量为1 g·kg-1·d-1)、尿毒清组(剂量为1 g·kg-1·d-1);各给药组灌胃给药6周后,检测各组大鼠血清尿素氮(BUN)、肌酐(SCr)水平,并采用逆转录聚合酶链反应检测各组大鼠肾组织TGF-β1 mRNA的表达水平.[结果]各给药组均可降低血清BUN、SCr水平,与模型组比较均有显著性差异(P＜0.05或P＜0.01),其中尿毒清组降低SCr水平作用优于大黄组(P＜0.05);TGF-β1 mRNA在各组肾组织中均有不同程度的表达,其中模型组表达最强烈,尿毒清组和黄芪丹参大黄组表达最轻.[结论]尿毒清治疗CRF的作用与其能下调TGF-β1 mRNA在肾组织中表达有关,且中药复方作用优于单味中药.     

氯沙坦对5/6肾切除大鼠残余肾组织中TGF-β1，p-Smad2/3及Smad7的作用

目的:观察氯沙坦对5/6肾切除大鼠肾组织中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的影响,探讨氯沙坦抗肾小球硬化的作用机制.方法:雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组和氯沙坦治疗组,用两步法建立5/6肾切除模型,于术后12周处死各组大鼠.处死前留取24 h尿检测尿蛋白,心脏取血检测血清肌酐、尿素氮,行HE和Masson染色观察各组大鼠肾组织病理改变,用免疫组织化学的方法检测肾组织中TGF-β1,p-Smad2/3及Smad7的表达.结果:模型组大鼠24 h尿蛋白、血清肌酐、尿素氮和肾组织胶原相对面积明显较假手术组增多(P＜0.01),氯沙坦治疗后上述指标均得到不同程度的改善.肾组织TGF-β1和p-Smad2/3在假手术组低表达,模型组呈强阳性表达,而氯沙坦治疗组TGF-β1和p-Smad2/3表达较模型组明显减弱(P＜0.01).假手术组肾组织可见较多的Smad7表达,模型组其表达明显减弱(P＜0.01),而氯沙坦治疗后Smad7表达较模型组增强(P＜0.01).结论:氯沙坦可以通过影响5/6肾切除大鼠肾组织中TGF-β/Smads信号通路中TGF-β1,p-Smad2/3和Smad7的表达而起到抗肾小球硬化的作用.     

氯沙坦对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1、p38MAPK表达的影响

目的研究氯沙坦对糖尿病大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1、p38MAPK表达的影响.方法将60只Wistar大鼠随机等分为对照组、糖尿病组和氯沙坦组;给予一次腹腔注射链尿佐菌素(STZ)制造糖尿病模型,模型成功后,氯沙坦组给予氯沙坦40mg/kg·d-1灌胃,正常对照组和糖尿病组给予等量清水灌胃.第8周测定各组大鼠尿蛋白、内生肌酐清除率,处死大鼠取肾组织石蜡包埋切片,免疫组织化学法观察肾小管上皮细胞TGF-β1、p38MAPK表达并进行半定量分析.结果糖尿病大鼠尿蛋白排泄、内生肌酐清除率均显著高于对照组(P＜0.01),肾间质损害明显;氯沙坦组24h尿蛋白排泄、肾间质纤维化均较糖尿病组减轻;糖尿病组大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1、p38MAPK阳性表达相对面积分别为0.2209±0.0405和0.1942±0.0857,与对照组比较均显著上调 (P＜0.01);氯沙坦组肾小管上皮细胞TGF-β1、p38MAPK阳性表达相对面积分别为0.0873±0.0176和0.1284±0.0571,较糖尿病组显著下调(P＜0.01). 结论氯沙坦能显著下调糖尿病大鼠肾小管上皮细胞TGF-β1、p38MAPK表达.