羟基喜树碱对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白分泌的影响

目的观察羟基喜树碱对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白分泌的影响。方法人增生性瘢痕标本取自整形患者。采用组织块法培养人增生性瘢痕成纤维细胞,并用ELISA方法检测羟基喜树碱干预下体外培养的人增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分泌量。结果各剂量浓度（63、125、250、500、1000ng/mL）羟基喜树碱均抑制人增生性瘢痕成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白的分泌,随着作用浓度的升高,抑制强度增加,但与作用时间无明显关系。结论羟基喜树碱对人增生性瘢痕成纤维细胞胶原蛋白的分泌有明显的抑制作用,对防治增生性瘢痕有一定意义。     

姜黄素对体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞的生物学作用

目的：观察姜黄素体外抗增生性瘢痕的作用．方法：以增生性瘢痕成纤维细胞为靶细胞,分别用不同浓度的姜黄素培养液培养,MTT法测定细胞的增殖情况,透射电镜进行形态学检测,流式细胞仪技术结合PI及Annexin V双标记染色检测姜黄素的促凋亡作用,实时荧光定量聚合酶链反应检测Ⅰ,Ⅲ型前胶原及Bcl-2 mRNA的表达情况．结果：姜黄素对增生性瘢痕成纤维细胞的增殖有抑制作用;透射电镜观察发现,处理组凋亡细胞增多,凋亡细胞表现出典型的超微结构特征;流式细胞仪检测发现,随着药物浓度的增加,增生性瘢痕成纤维细胞的凋亡率也在逐渐升高;实时荧光定量聚合酶链反应检测结果显示,姜黄素处理后Ⅰ、Ⅲ型前胶原及Bcl-2 mRNA的表达水平均下调．结论：姜黄素具有一定的体外抗增生性瘢痕的作用．     

尿酸对人尿道成纤维细胞TGF-β1、Smad3的影响

目的 观察人尿道成纤维细胞在尿液、尿酸刺激下TGF-β1、Smad3的表达变化,探讨尿道瘢痕的形成机制.方法 体外培养人尿道成纤维细胞,以尿液、350 μmol/L浓度的尿酸刺激溶液刺激人尿道成纤维细胞,通过免疫荧光染色和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分别检测各组细胞TGF-β1、Smad3因子表达变化,ELISA法比较各组细胞上清液Ⅰ型胶原蛋白差异.结果 免疫荧光检测提示TGF-β1与Smad3蛋白在人尿道成纤维细胞中均有表达,尿液及生理浓度的尿酸刺激后,TGF-β1与Smad3的mRNA表达上调,蛋白表达明显升高(P＜0.05);ELISA法检测显示,尿液和尿酸刺激人尿道成纤维细胞24、48 h后,细胞上清液中Ⅰ型胶原蛋白含量显著升高(P＜0.05).结论 尿酸刺激引起人尿道成纤维细胞TGF-β1、Smad3的表达升高;尿酸可能对尿道瘢痕的形成起促进作用.     

姜黄素通过抑制NF-κB的活化增加胃癌细胞的放疗敏感性

目的检测姜黄素对胃癌细胞的放疗增敏作用,并探讨其具体分子机制。方法MTr法检测姜黄素对胃癌细胞系增殖的影响。克隆形成实验检测姜黄素对放疗敏感性的影响。胃癌细胞系BGC-823经射线照射并利用姜黄素干预后,利用Westernblot技术检测细胞内p65、pSO、AKT和p-AKT的表达情况。结果姜黄素能够抑制胃癌细胞的增殖及细胞照射后的克隆形成能力。姜黄素能够抑制照射后胃癌细胞中的NF-κB亚基p65和p50的核内表达水平,降低细胞中AKT的磷酸化水平（P〈0．05）。结论NF-κB的活性增高和AKT信号通路的活化可能是导致胃癌细胞放疗敏感性降低的重要途径之一。而姜黄素能够通过抑制NF-κB的表达及AKT信号通路的活化增加胃癌细胞的放疗敏感性。     

姜黄素调节Bcl-2、Bax蛋白表达诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡

目的 研究姜黄素诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡及其分子机制.方法 用10、20、40 μmol/L姜黄素(对照组0μmol/L)处理增生性瘢痕成纤维细胞24 h,MTT法检测姜黄素对细胞增殖的影响,Annexin V-FITC/PI双标法检测细胞凋亡率,分光光度法检测Caspase-9、Caspase-3活性,Western Blot法检测Bcl-2、Bax蛋白表达.结果 MTT结果显示姜黄素对增生性瘢痕成纤维细胞具有抑制作用,抑制率随姜黄素浓度增加而上升(P＜0.05);Annexin V-FI℃/PI双标法结果显示成纤维细胞凋亡率随姜黄素浓度增加而上升(P＜0.05);经姜黄素作用,Caspase-9、Caspase-3的活性随姜黄素浓度增加而升高(P＜0.05);West-ern Blot结果显示Bcl-2蛋白表达下降,Bax蛋白表达升高,Bax/Bcl-2比值增大,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 姜黄素对增生性瘢痕成纤维细胞有抑制增殖和诱导凋亡的作用,其机制与下调Bcl-2蛋白表达、上调Bax蛋白表达,升高Caspase-9、Caspase-3活性有关.     

姜黄素诱导增生性瘢痕成纤维细胞凋亡机制研究

目的:研究姜黄素对增生性瘢痕成纤维细胞增殖的作用,以期为姜黄素用于增生性瘢痕的治疗提供实验依据。方法:以增生性瘢痕成纤维细胞(HSFBs)和正常皮肤成纤维细胞(NSFBs)作为工具细胞,分别通过MTT细胞毒性试验、细胞生长曲线和蛋白印记法分析姜黄素对细胞的增殖影响。结果:姜黄素能够抑制HSFBs细胞的增殖而姜黄素对NSFBs的抑制作用相对较小;在姜黄素处理后NSFBs细胞p-JNK蛋白表达上调,使用JNK抑制剂后,能阻断JNK蛋白的磷酸化,并且降低姜黄素诱导细胞凋亡的能力。结论:姜黄素能够选择性的抑制HSFBs细胞的增殖,或可成为治疗增生性瘢痕的药物。     

三维及二维培养的病理性瘢痕成纤维细胞内胶原合成的定量分析

目的 定量分析比较三维及二维培养的病理性瘢痕成纤维细胞内合成的前胶原蛋白。方法 以成纤维细胞为实验对象，应用定量免疫细胞化学技术及粘附式激光扫描细胞仪，检测三维及二维培养系统中成纤维细胞内的I型前胶原蛋白。结果 三维系统中瘢痕成纤维细胞内I型前胶原蛋白的量远低于后二维培养系统。结论 三维培养系统更好地模拟了体内瘢痕的形成过程。     

复方消斑灵对创伤性瘢痕作用的实验研究

目的:观察复方消斑灵对体外培养的成纤维细胞的胶原蛋白合成的影响,以及对水浴烫伤动物模型的作用。方法:采用光镜、电镜研究用药前、后成纤维细胞的形态学变化,以3 H-脯氨酸掺入等方法检测成纤维细胞胶原蛋白的合成,通过建立水浴烫伤动物模型,观察复方消斑灵对增生性瘢痕的作用。结果:消斑灵能明显影响成纤维细胞的超微结构,抑制胶原蛋白的合成,并呈量效关系;在大鼠水浴烫伤实验中复方消斑灵可抑制瘢痕增生,而且大剂量使用未发现药物毒性。结论:复方消斑灵对创伤性瘢痕有良好的治疗作用。     

低血清培养对瘢痕成纤维细胞PCNA、p16、Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白的影响

近年报道瘢痕皮下组织氧分压只是正常组织的27%,低氧分压是由于缺氧造成胶原蛋白沉积导致的血管阻塞而加重缺氧和缺血现象使瘢痕疙瘩局部处于低氧、低血供、低营养状态[1,2]. 本实验旨在研究低营养状态下瘢痕疙瘩、增生性瘢痕和正常皮肤成纤维细胞的增殖及生物合成功能. 1 材料与方法 低血清成纤维细胞培养方法:将体外培养5代以内的瘢痕疙瘩、增生性瘢痕及正常皮肤成纤维细胞(fibroblast,FB)各6例分别置于含0.5%(体积分数)胎牛血清的DMEM培养液(低血清培养)中培养7 d,取材.以含10% (体积分数)胎牛血清的DMEM培养液为对照组. 增殖细胞核内抗原(proliferating cell nuclear antigen, PC NA) 、p16、Ⅰ型及Ⅲ型胶原蛋白的检测方法:以上各组标本经100 g*L-1多聚甲醛(pH 7.2～ 7.5)固定10 min后,利用免疫组织化学方法(SP法,试剂盒由北京中山生物技术有限公司购置)检测增殖细胞核内抗原PCNA、p16、Ⅰ型和Ⅲ型胶原蛋白的含量.     

periostin在人瘢痕成纤维细胞中的表达及氢化可的松对其表达的影响

目的:通过检测periostin在人过度增生性瘢痕成纤维细胞中的表达及其对氢化可的松作用的反应,探讨periostin在瘢痕形成中的作用.方法:采用组织块培养法体外培养原代成纤维细胞,以RT-PCR及免疫细胞化学技术分别检测24例人瘢痕和正常皮肤成纤维细胞中periostin的mRNA和蛋白的表达,氢化可的松(0.1g /L)的作用时间为96h.结果:periostin的mRNA在瘢痕疙瘩成纤维细胞(1.645±0.549)和增生性瘢痕成纤维细胞(1.084±0.396)中的表达均高于正常皮肤成纤维细胞(0.274±0.215;P<0.05),两者分别增加83%和75%.氢化可的松作用后,瘢痕疙瘩成纤维细胞中和增生性瘢痕成纤维细胞中periostin的mRNA表达量分别减少32%和47%,两者与氢化可的松作用前相比差异均有统计学意义.Periostin蛋白主要分布在成纤维细胞核周围的胞浆中,它在瘢痕疙瘩和增生性瘢痕的成纤维细胞中的表达(分别为91.815±0.961和70.166±2.250)高于在正常皮肤成纤维细胞中的表达(41.011±1.576,P<0.01),两者分别增加55%和42%.结果:periostin在过度增生性瘢痕成纤维细胞中的表达增高,氢化可的松可能抑制其基因的表达;periostin可能影响过度增生性瘢痕成纤维细胞的功能,它可能是一种瘢痕相关基因.