乙型肝炎病毒宫内感染相关因素的探讨

目的探讨孕妇乙型肝炎病毒感染状态及胎盘感染与宫内感染关系，进而分析乙型肝炎病毒宫内感染的危险因素。方法采用荧光定量PCR技术及酶联免疫吸附试验，对92例HBsAg阳性孕妇及其新生儿的外周血行HBV DNA及乙肝血清标志物检测。采用免疫组化S-P法，对92例HBsAg阳性孕妇分娩时胎盘组织行HBsAg及HBcAg的检测。结果（1）HBeAg阳性孕妇与HBeAg阴性孕妇HBV宫内感染率分别为21．2％（11／52）和0（0／40），差异有显著性（P〈0．01）；HBV DNA阳性孕妇与HBV DNA阴性孕妇HBV宫内感染率分别为18．64％（11／59）和0（0／33），差异有显著性（P〈0．025）。（2）92例HBsAg阳性孕妇的胎盘中共检测出43例HBsAg和（或）HBcAg阳性，阳性率由胎盘的母面至胎儿面有逐渐下降的趋势。由胎盘屏障的蜕膜细胞（DC）、滋养层细胞（TC）、绒毛间质细胞（VSC）和绒毛毛细血管内皮细胞（VCEC）感染而致的宫内传播的相对危险度比值比（0R）分别为4．53、7．15、9．33和24．33，0R值从胎盘的母面至胎儿面有逐渐上升的趋势。结论新生儿宫内感染与孕妇乙肝感染状态有关，HBV宫内感染以经胎盘感染为主，感染胎儿的途径可能是通过细胞转移方式实现的，胎盘屏障对胎儿有一定的保护作用。HBeAg阳性、HBV DNA阳性及绒毛毛细血管内皮细胞（VCEC）感染是新生儿宫内HBV感染的危险因素。     

HBcAg在乙型肝炎病毒携带者孕妇胎盘中的识别与意义

目的 研究胎儿感染乙型肝炎病毒(HBV)与胎盘感染之间的关系及其意义。方法 用PCR 及斑点杂交法检测母血、新生儿静脉血 HBV DNA(确定胎儿感染者),用免疫组化方法(LSAB法)检测61例HBV携带者母亲胎盘HBcAg。结果 ① 胎儿HBV感染率为22.92% (33/144); ② 61例胎盘HBcAg阳性率为68.85%(41/61),胎儿感染组阳性率(82.14%)高于对照组(54.55%),P＜0.025; ③ 母血HBeAg/HBVDNA 阳性者,胎盘HBcAg阳性率(82.05%)高于母血HBeAg/HBVDNA阴性者(40.91%),P＜0.005; ④ 胎盘各种细胞成分中,以与母血直接接触的蜕膜细胞、末梢绒毛合体细胞及EVT(绒毛外滋养细胞)HBcAg阳性率较高(36.07%～49.18%)。结论 胎儿感染HBV与胎盘感染有关,胎盘屏障对HBV有一定阻挡作用。     

HBV-DNA的含量与宫内感染的关联性

目的：探讨孕妇血清中HBV—DNA含量与胎儿宫内感染及造成宫内感染的相关因素．方法：用ELISA方法筛选HBsAg阳性孕妇228例,并用定量PCR技术检测HBsAg阳性孕妇血清以及脐血中HBV—DNA．新生儿根据有无HBV感染分为胎儿感染组及非感染组（对照组）,调查宫内感染的相关因素,结果：HBsAg,HBeAg、抗HBc阳性孕妇的新生儿脐血HBV—DNA捡出率21％（14／68）;HBsAg．抗HBe,抗HBc阳性者为1．7％（2／117）;HBsAg和HBeAg双阳性者为20％（3／15）;HBsAg和抗HBc阳性者为11％（2／19）;HBsAg单一抗原阳性者脐血中未捡出HBV—DNA．胎儿总感染率为9,2％（21／228）．胎儿宫内感染率随孕妇血清中HBV—DNA含量增加而升高,宫内感染的危险性越大．胎儿感染组与非感染组在多种临床相关因素中先兆早产孕妇胎儿感染者多于非感染组（P〈0．05）．结论：孕妇不同的感染状态影响宫内HBV感染率,HBeAg与HBV—DNA高滴度是胎儿宫内感染的高危因素．孕妇出现先兆早产使胎儿的感染率增加．     

乙肝表面抗原阳性孕妇胎盘组织中bcl-2、bax和HBcAg的表达

目的 通过检测乙肝表面抗原（HBsAg）阳性孕妇胎盘组织细胞中bcl-2、bax基因及HBcAg的表达，探讨bcl-2、bax与HBcAg之间的关系。方法 46例HBsAg阳性孕妇足月产胎盘（排除其他疾病）为HBV组，25例HBsAg阴性（HBV-DNA阴性）足月产妇胎盘做为对照组。HBV组中根据HBcAg结果分为阳性组和阴性组。采用免疫组化法测定两组孕妇胎盘组织细胞中bcl-2、bax、HBcAg的表达。结果 （1）HBV组和对照组比较bcl02基因表达无统计学意义（P〉0．05），bax基斟表达阳性率明显高于对照组，两者比较有统计学意义（P〈0．05）；（2）胎盘组织细胞中HBcAg的表达：HBcAg阳性信号表达于胎盘各层细胞中，滋养层细胞感染率为41．3％，绒毛问质细胞感染率为15．2％，绒毛毛细血管内皮细胞感染率为6．5％；（3）HBcAg阳性组与HBcAg阴性组中bcl-2基因表达比较无统计学意义（P〉0．05），bax基因表达在HBcAg阳性组明显高于HBcAg阴性组，有统计学意义（P〈0．05）。结论 HBV感染孕妇胎盘组织中bax表达明显升高，提示bax可能参与了胎盘组织细胞凋亡的过程；HBsAg阳性孕妇胎盘中HBcAg可能是逐层感染胎盘各型细胞，且胎盘组织中HBcAg阳性者bax表达与HBcAg关系密切。     

太原市HBsAg阳性孕妇新生儿HBV感染状况的研究

目的 了解目前太原市HBsAg阳性孕妇新生儿HBV感染状况。方法 ELISA法检测新生儿外周血HBsAg；巢式聚合酶链反应(nPCR)检测新生儿外周血HBV DNA；选择性聚合酶链反应(sPCR)检测外周血单个核细胞(PBMC)HBV DNA，其中任一项阳性即判为发生新生儿HBV宫内感染。结果 151例HBsAg阳性孕妇所生新生儿，ELISA法检测5例HBsAg阳性，nPCR检测29例HBV DNA阳性，sPCR检测36例PBMC HBV DNA阳性，新生儿任一项阳性者57例，合计宫内感染率37．75％(57／151)。结论 检测PBMC内HBV DNA是对外周血HBV DNA的一个重要补充，太原市HBsAg阳性孕妇新生儿HBV宫内感染率37．75％，与国内外同类研究结果相比，处于低水平。     

乙型肝炎病毒宫内感染的机制

目的 探索乙型肝炎病毒（HBV）宫内传播的机制和时间。方法 孕妇和新生儿血清HBsAg和HBVDNA检测采用ELISA和PCR法,引产胎儿肝组织和胎盘的HBsAg,HＢt HBVDNA检测采用ＡＢＣ免疫组化染色和原位杂交。结果 母亲外周血HBV高浓度（≥0.02ug.L^-1)、先光早产和胎盘毛毛细血管内皮细胞HBV感染导致宫内感染发生的危险性比值比（OR）分别为7.06,13.08和16.15,胎盘HBV感染从孕早期、孕中期至足月分娩愈来愈严重且广泛,在足月分娩胎盘中,从母面蜕膜细胞至胎儿面绒毛毛细血管内皮细胞HBV感染率呈逐渐下降趋势,但胎儿宫内感染的OR值却越来越大,1例孕19wk引产胎儿肝组织中检出HBVDNA和抗原。结论 胎儿宫内感染的发生可经2条途径,即血源性和细胞性,宫内感染可发生孕9wk前,但主要时期是在孕晚期。     

乙型肝炎病毒宫内感染与胎盘感染关系的研究

目的:通过研究乙型肝炎病毒(HBV)携带者孕妇胎儿宫内感染的发生率,分析胎儿宫内感染与胎盘感染的关系。方法:对160例HBV携带者孕妇临产前检测HBV eA g及HBVDNA,产后抽取新生儿脐血/静脉血检测HB sA g及HBVDNA判断宫内感染;对其中80例孕妇胎盘用免疫组化法测HB cA g。结果:①胎儿感染率为7.50%(12/160);②母血HB eA g/HBVDNA阳性者,胎儿感染率分别为12.78%(11/86)及13.63%(12/88),高于母血HB eA g/HBVDNA阴性者1.35%(1/74)及0.0%(0/72);③80例胎盘HB cA g阳性率为81.25%(65/80),胎儿感染组阳性率91.67%(11/12),高于胎儿未感染组79.41%(54/68),P<0.05;④胎盘各层细胞可被HBV感染,HB sA g/HB cA g主要分布在与母血直接接触的蜕膜细胞、绒毛间质中,合体细胞阳性率较高。结论:①脐血检测HBVDNA是诊断胎儿宫内感染HBVDNA的一个敏感方法,而外周静脉血的检测具有确诊意义;②孕妇血HBVDNA、HB eA g阳性是胎儿感染的高危因素;③胎儿感染与胎盘感染有关;④胎盘屏障对胎儿有一定的保护作用。     

胎盘HBV感染的危险因素及与TLR3的关系研究

目的 探讨HBsAg阳性孕妇胎盘乙型肝炎病毒（HBV）感染状况及其危险因素，了解TLR3在胎盘HBV感染中的作用。方法 采用ELISA检测孕妇血清HBsAg和HBeAg；荧光定量PCR定量检测孕妇血清HBV DNA；免疫组织化学SABC法检测胎盘组织中TLR3和瑚BsAg；非条件Logistic回归模型分析胎盘HBV感染的危险因素。结果 102例胎盘中有33例存在不同程度的HBV感染，且蜕膜细胞（Dc）、滋养层细胞（TC）、绒毛间质细胞（VMC）和绒毛毛细血管内皮细胞（VCEC）阳性率呈逐层下降趋势（趋势χ^2=16．67，P〈0．001），阳性率分别为32．4％（33／102），20．6％（21／102），18．6％（19／102）和8．8％（9／102）；胎盘HBV感染的危险因素为母亲血清HBV DNA阳性和胎盘TLR3阳性，OR值分别为6．865和0．103。结论 HBV可感染胎盘各层细胞，HBV经胎盘及胎儿的主要途径是经血和（或）细胞传递方式实现；母亲血清HBV DNA阳性是胎盘感染的危险因素，胎盘TLR3阳性是胎盘感染的保护因素。     

应用多聚酶反应技术检测HBV宫内感染

采用多聚酶反应技术对218例孕妇－引产胎儿进行HBV宫内感染的检测。结果表明,（1）HBsAg阳性孕妇HBV DNA宫内感染率为66．67％。说明HBV宫内感染率较高。（2）HBsAg阴性孕妇静脉血中6．2％检出HBV DNA,提示HBsAg阴性孕妇也可能发生HBV宫内感染,应引起人们的重视。（3）母血中HBsAg、HBeAg、抗－HBc同时阳性其相应胎儿HBV DNA感染率为92．5％。进一步说明了乙肝大三阳是HBV宫内感染的危险因素。     

腮腺组织HBsAg、HBcAg和HBVDNA的检测

目的 观察乙型肝炎病毒感染者腮腺组织中HBsAg、HBcAg和HBV DNA的表达情况。方法 对22例血清学HBV标志阳性的腮腺肿瘤患者用免疫组化方法检测腮腺活检组织HBsAg、HBcAg的表达；应用PCR技术对免疫组化阳性病例进一步检测腮腺组织HBV DNA。结果 22例腮腺组织中HBsAg阳性10例。阳性率为45．5％；HBcAg阳性9例，阳性率为40．9％。总阳性率为54．5％(12／22)，其中HBsAg和HBcAg同时阳性7例。占31．8％。阳性信号呈棕褐色细颗粒状，弥漫分布于腮腺腺泡细胞。12例免疫组化阳性患者检出HBV DNA7例，阳性率为58．3％。结论 腮腺组织对HBV有较强的亲和力，唾液中HBV的出现可能源于受染的唾液腺组织，含HBV的唾液是乙型肝炎生活接触性传播的媒介。     

胎儿乙型肝炎病毒感染的研究——胎盘组织HBVDNA、HBcAg的检测及其意义

用ELISA、RIA及DNA斑点杂交法检测30例HBsAg阳性母亲及7例HBsAg阴性但血清其他HBV感染指标阳性母亲的新生儿脐血Anti-HBclgM,HBV-DNA等指标,分别发现4例(4/30)及2例(2/7)胎儿HBV感染病例。1年后的随访结果表明,部分胎儿HBV感染病例对出生后的疫苗注射有反应,而部分则无。用DNA原位杂交及PAP法检测HBsAg阳性产妇胎盘组织HBV-DNA、HBcAg,阳性率分册为20/29,19/30。表明胎盘组织受HBV感染,可能导致胎儿HBV感染,但非胎儿感染HBV的唯一途径,其他途径如经生殖细胞传播也可能存在。HBsAg阴性但其他血清HBV感染指标阳性者及血清HBV感染指标全阴产妇的胎盘组织中也可检出HBV-DNA、HBcAg,表明组织HBV感染指标较敏感,以及HBV相关变型病毒感染等因素存在的可能性。     

乙型肝炎病毒宫内传播因素和机制的分子流行病学研究

目的应用分子流行病学方法研究乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）经胎盘引起宫内感染的危险因素与机制,方法 收集连续性入院的４０２例乙型肝炎表面抗原阳性孕妇及其新生儿作为研究对象,其中,发生宫内感染的１５例作为病例组,余为对照组,进行病例对照研究,同时分别检测１８２份与１８５份母血的ＨＢｓＡｇ滴度和ＨＢＶＤＮＡ浓度,筛选危险因素;另外收集胎盘标本进行免疫组化染色与原位杂交,确定ＨＢＶ感染状状;最后进行综合分析。结     

乙型肝炎病毒在卵巢组织中的表达、定位及临床意义

目的 通过对乙型肝炎病毒(HBV)感染者卵巢组织中HBsAg、HBcAg和HBV DNA的检测来观察HBV在卵巢组织中表达与定位情况.方法 对26例血清学HBV标志阳性的卵巢肿瘤患者用免疫组化方法检测卵巢活检组织HBsAg、HBcAg的表达;应用PCR技术对免疫组化阳性病例进一步检测卵巢组织HBVDNA.结果 26例卵巢组织中HBsAg阳性9例,HBcAg阳性9例,阳性率均为34.6%.总阳性率为46.2%(12/26);其中HBsAg和HBcAg同时阳性6人,占23.1%.阳性信号呈棕褐色细颗粒状弥漫分布.HBV血清学标志多项阳性者卵巢组织中HBsAg、HBcAg的检出率与HBV血清学标志单项阳性者差异无显著性.12例免疫组化阳性患者检出卵巢HBV DNA的有7例,阳性率为58.3%.结论 HBV感染者卵巢组织中可检出HB-sAg、HBcAg和HBV DNA,卵巢组织中HBsAg、HBcAg受血清HBV的变化影响小,与肝炎病变不呈平行关系.说明HBV可以感染与定位到卵巢组织,卵巢组织中检出HBV丰富和扩充了经典的母婴传播机制.     

HBsAg阳性孕妇足月分娩胎盘HBV感染状态的免疫组织化学研究

目的：拟从观察胎盘乙型肝炎病毒（ＨＢＶ）感染状态，探讨ＨＢＶ宫内传播发生的机制，以期为进一步预防ＨＢＶ宫内传播提供科学依据．方法：采用ＡＢＣ免疫组织化学染色检测ＨＢｓＡｇ阳性孕妇足月分娩胎盘ＨＢｓＡｇ和ＨＢｃＡｇ感染和分布状态．结果：在６２例足月分娩胎盘中，２１例检出了ＨＢｓＡｇ，８例检出ＨＢｃＡｇ．ＨＢｓＡｇ主要分布于蜕膜血管内皮细胞（１８例）、蜕膜细胞（２１例）、滋养层细胞（８例）、绒毛间质细胞（８例）和绒毛血管内皮细胞（５例）的胞浆和绒毛间隙（２１例）中．ＨＢｃＡｇ分布于蜕膜细胞（５例）、蜕膜血管内皮细胞（８例）和绒毛间质细胞（８例）的胞核内．结论：结果提示，ＨＢＶ可在胎盘组织中复制．ＨＢＶ经胎盘感染胎儿的主要途径可能是经血和（或）细胞传递方式实现的．即ＨＢＶ经蜕膜细胞和（或）绒毛间感染滋养层细胞，然后感染绒毛间质细胞，最终感染胎儿毛细血管内皮细胞     

乙型肝炎病毒体外感染人绒毛膜癌JEG3细胞的实验研究

目的建立乙型肝炎病毒(HBV)体外感染人绒毛膜癌滋养层细胞(JEG3)模型,探讨HBV宫内感染机制。方法应用HBV阳性且高载量的血清,感染JEG3细胞。应用实时荧光定量PCR(RT-PCR)技术检测感染后细胞上清液和细胞内的HBV载量;应用ELISA方法检测感染后不同时间、不同代次上清液的HBsAg、HBeAg浓度;应用SP免疫组化检测感染细胞内HBsAg、HBeAg的表达。结果感染初代的JEG3细胞,随着时间增加病毒载量亦增加。传代后细胞及上清中的HBV载量随传代次数增加逐渐降低,5代后检测均为阴性;感染初代上清液HBsAg含量随时间增加,120h含量最高。传代细胞的上清液HBsAg检测1～4代为阳性,但浓度逐渐降低,5代后均为阴性。上清液的HBeAg检测,各时间点、各代均为阴性;1、2、3、4代细胞HBsAg、HBcAg染色可见阳性细胞。结论HBV可以在体外感染滋养层细胞,且能在传代细胞中有持续的表达。感染过程中参与调控的相关细胞因子及HBV复制的持续与否有待进一步探讨。     

乙肝病毒宫内传播与胎盘感染的关系

目的：母亲乙肝病毒（ＨＢＶ）感染在宫内即可造成其胎儿感染，但其机理尚不清楚，作者试图了解胎盘细胞中ＨＢＶ的感染情况，宫内传播的危险因素和母胎传播的可能途径。