橙皮甙对人非小细胞肺癌A549/DDP细胞增殖的影响

目的 观察橙皮甙对耐顺铂的人非小细胞肺癌A549/DDP细胞增殖的影响.方法 培养A549及A549/DDP细胞,绘制细胞生长曲线 ;MTT法测定A549/DDP细胞对顺铂的耐药倍数 ;②测定6、12、24、48及96 mg/L橙皮甙在6、12、24及48 h对A549/DDP细胞增殖的抑制率.③用24 mg/L橙皮甙处理A549/DDP细胞24 h后,用流式细胞计量术分析细胞周期.结果 ①A549/DDP细胞和A549细胞的生长曲线相似,倍增时间分别为(33.68±0.11)h和(33.54±0.84)h; A549/DDP细胞对顺铂的耐药倍数为12.90.②橙皮甙对A549/DDP细胞的抑制率随橙皮甙浓度增加和(或)时间的延长而增强(Pearson相关分析P＜0.05).③24 mg/L橙皮甙作用A549/DDP细胞24 h后,实验组G2/M期和S期细胞数比对照组减少(P＜0.05).结论 ①A549/DDP细胞基本保留了A549细胞的生长特性,对顺铂有明显耐药性.②橙皮甙对A549/DDP生长有抑制作用.③橙皮甙可诱导A549/DDP细胞阻滞于G2/M期.     

姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响

目的探讨姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖活性的影响.方法采用细胞计数法绘制亲代A549和A549/DDP细胞生长曲线,MTY法测定A549/DDP对顺铂的耐药指数以及姜黄素对A549/DDP细胞抑制率.将不同浓度姜黄素作用于A549/DDP细胞24h 后,Hoechst33258染色荧光显微镜下观察细胞核形态,流式细胞仪检测细胞凋亡率.以20μmol/L的姜黄素作用细胞24h 后,流式细胞仪分析细胞周期.结果亲代A549细胞和A549/DDP细胞的生长曲线相似,倍增时间分别为(33.24±0.24)h和(32.88±0.11)h(P＞0.05);顺铂处理A549和A549/DDP细胞72h 后,半数抑制浓度(IC50)分别为13.57 μmol/L 和146.79 μmol/L,A549/DDP细胞对顺铂的耐药指数为10.82.姜黄素对A549/DDP细胞增殖有抑制作用,并且呈时间浓度依赖性(P＜0.05).姜黄素作用后,Hoechst染色显示A549/DDP细胞核缩小变形,致密浓染荧光成团块分布.流式细胞仪分析结果示细胞凋亡率呈明显剂量依赖关系(P＜0.05).20 μmol/L的姜黄素作用细胞24h,引发G2期阻滞.结论姜黄素对人肺腺癌A549/DDP细胞增殖具有抑制作用,并呈时间、浓度依赖.其作用可能是通过阻滞细胞周期进程和诱导细胞凋亡来实现的.     

miR-194对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响

目的:探讨microRNA-194(miR-194)对非小细胞肺癌A549/DDP细胞顺铂耐药性的影响及其可能的作用机制?方法:采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测非小细胞肺癌耐药细胞A549/DDP及其亲本细胞株A549中miR-194的表达差异,并在A549/DDP细胞中转染miR-194-inhibitor后检测miR-194的表达变化;应用MTT法?克隆形成实验?流式细胞术检测转染后A549/DDP细胞对DDP的敏感性?细胞增殖能力及凋亡变化;Western blot检测转染后A549/DDP细胞中Bax和Bcl-2的表达变化?结果:miR-194在耐药细胞A549/DDP中的表达量显著高于其亲本细胞株A549(P < 0.05),A549/DDP在转染miR-194-inhibitor 24 h后miR-194的表达水平较对照组显著下降(P < 0.05)?抑制miR-194表达后,相对于对照组,DDP对转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)减低(P < 0.05),转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞增殖能力减弱,经DDP处理后凋亡细胞增多(P < 0.05)?Western blot结果显示,与对照组相比,转染miR-194-inhibitor的A549/DDP细胞Bax表达水平升高,Bcl-2表达水平降低?结论:miR-194可能通过抑制细胞凋亡,上调Bcl-2蛋白及下调Bax蛋白表达而增加A549/DDP细胞对DDP的耐药性,抑制miR-194的表达可逆转A549/DDP细胞的耐药性?     

β-Catenin信号转导通路在肺癌A549细胞顺铂耐药中的作用

目的建立肺癌A549顺铂多药耐药细胞株,研究肺癌耐药的机制。方法使用顺铂逐步增加剂量和间歇大剂量冲击相结合的方法诱导肺癌A549细胞,以建立其多药耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验比较A549与A549/DDP细胞对顺铂的敏感性;绘制A549和A549/DDP细胞生长曲线,观察二者的增殖速度变化;Western blotting实验显示A549和A549/DDP细胞之间Akt、p-Akt、GSK-3β、p-GSK-3β和β-Catenin蛋白的表达改变。结果经过30周的诱导我们建立了肺癌A549细胞的顺铂耐药细胞株A549/DDP;MTT细胞毒实验结果显示顺铂对A549和A549/DDP细胞的IC50值分别为(1.37±0.09)和(11.63±0.74)μmol/L,与A549细胞比较,A549/DDP细胞对顺铂耐药8.47倍,生长曲线结果显示A549/DDP细胞的增殖速度与A549细胞没有显著性差异;Western blotting的结果显示A549/DDP细胞的Akt磷酸化水平升高,抑制了下游GSK-3β的活性,导致了细胞内β-Catenin蛋白的上调。结论建立了肺癌A549顺铂多药耐药细胞系A549/DDP,A549/DDP细胞中β-Catenin通路的激活与其耐药性的形成有一定的相关性。     

川芎嗪对人非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP的相关ATP结合盒转运体表达水平的影响

目的：观察川芎嗪（四甲基吡嗪）对耐药相关ATP结合盒转运体B1(ABCB1)、C1(ABCC1)和G2(ABCG2)表达水平的影响，揭示其逆转人非小细胞肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP耐药的机制。方法：采用细胞增殖（CCK8）实验，分析人肺腺癌细胞株A549及顺铂耐药株A549/DDP对顺铂的耐受性，计算耐药指数。分析A549/DDP对川芎嗪的耐受性，遴选逆转耐药所需的工作浓度并检测逆转效果。设置空白组接种A549细胞，模型组、实验组和阳性对照组均接种A549/DDP细胞；空白组和模型组均用1640完全培养基孵育，实验组用含工作浓度川芎嗪的1640完全培养基孵育，阳性对照组用含Tariquidar的1640完全培养基孵育。提取各组全部蛋白及mRNA，用免疫印迹法（Western Blot）和逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）分析川芎嗪对ABCB1、ABCC1和ABCG2及其m RNA表达水平的影响。结果：A549细胞对顺铂的半数抑制浓度（IC50）为（28.33±3.19）μM,A549/DDP对顺铂的IC50为（983.43±101.67）μM,A549/DDP的耐药指数为34....     

水飞蓟宾联合顺铂诱导人肺腺癌细胞A549凋亡及机制

目的探讨水飞蓟宾联合顺铂对人肺癌细胞A549的杀伤效应及机制。方法将人肺癌细胞A549分别用水飞蓟宾、顺铂及两者联合干预后,采用MTT法检测不同干预方案对A549细胞的抑制作用,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot法检测细胞Bcl-2与Bax的表达;利用小RNA抑制Bax的表达后,观察水飞蓟宾联合顺铂对A549细胞凋亡的诱导作用。结果水飞蓟宾联合顺铂对A549细胞增殖的抑制率(69.9±6.8)%,凋亡率(53.5±4.2)%;水飞蓟宾对A549细胞增殖的抑制率(6.9±0.7)%,凋亡率(7.9±1.5)%;顺铂分别为(13.3±2.9)%和(16.8±2.2)%。水飞蓟宾联合顺铂治疗A549细胞的增殖抑制率和凋亡率均优于单用水飞蓟宾和顺铂治疗组(P0.05)。水飞蓟宾联合顺铂诱导A549细胞凋亡依赖于细胞内Bcl-2/Bax的比值,当转染Bax si RNA后,水飞蓟宾联合顺铂对A549的凋亡诱导率为(27.6±3.0)%,未转染Bax si RNA则两者联合治疗A549凋亡诱导率为(50.6±4.7)%,差异有统计学意义(P0.05)。结论水飞蓟宾联合顺铂通过降低Bcl-2/Bax比例诱导人肺癌细胞发生凋亡。     

白花蛇舌草乙醇提取物逆转肺癌细胞化疗耐药作用研究

目的探讨白花蛇舌草乙醇提取物(EEHDW)在肺癌化疗耐药中的作用及可能的机制。方法 EEHDW作用于多西他赛耐药细胞系A549/DTX后,采用集落形成、Transwell和CCK-8检测处理前后细胞的增殖、侵袭和半数抑制量(IC50)情况,Western blot检测上皮间质转化(EMT)相关蛋白E-钙黏蛋白(E-cadherin)和波形蛋白(vimentin)的表达,同时分析PI3K/Akt信号通路中磷酸化PI3K(p-PI3K)和磷酸化Akt(p-Akt)蛋白表达情况。结果与亲本A549细胞比较,多西他赛耐药的A549/DTX发生EMT;与对照组比较,EEHDW(2、4、6mg/mL)能抑制A549/DTX细胞的集落形成[(101.67±9.23)、(69.35±4.25)、(68.25±3.12)比(201.22±8.18),P均0.05]和侵袭能力[(42.20±5.58)、(21.30±3.25)、(21.58±4.36)比(128.67±9.23),P均0.05];Western blot结果显示,EEHDW(2mg/mL)能够上调E-cadherin蛋白表达,下调vimentin蛋白表达[(76.05±7.81)比(31.35±5.27)、(35.04±5.32)比(82.24±6.80),P均0.05];EEHDW(2mg/mL)处理A549/DTX细胞48h后,细胞对多西他赛的半数抑制量IC50显著降低[(45.38±6.82)比(81.36±7.58),P0.05];此外,与对照组比较,EEHDW(2mg/mL)能够抑制p-PI3K[(22.85±4.29)比(45.62±6.15),P0.05]和p-Akt[(23.25±3.67)比(43.51±3.18),P0.05]蛋白表达水平。结论 EEHDW能够抑制A549/DTX细胞增殖、侵袭,逆转多西他赛诱导的EMT和化疗耐药,其机制可能与PI3K/Akt信号通路有关。     

抑制miR-21对非小细胞肺癌顺铂耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡的影响及可能机制探讨

目的:探讨抑制miR-21表达对非小细胞肺癌耐药细胞株A549/DDP增殖和凋亡的影响及可能的机制?方法:应用Real-time PCR技术分别检测人非小细胞肺癌细胞株A549及其耐药株A549/DDP中miR-21的表达;将miR-21抑制剂(miR-21 inhibitor) ASO-21转染至A549/DDP中,下调其miR-21的表达,在不同时间点使用MTT检测细胞的增殖,流式细胞仪Annexin-FITC检测细胞凋亡;使用生物信息学和miR的预测软件预测miR-21在非小细胞肺癌中的可能靶点?结果:①miR-21在A549/DDP细胞株的表达均为A549的3倍;②A549/DDP细胞株中转染ASO-21孵育,加入顺铂后,与对照组相比,其凋亡增加,增殖能力明显降低;③生物信息学软件分析后发现miR-21在非小细胞肺癌A549有多个调节靶点,一些蛋白分子可以调节miR-21的表达,组成肿瘤细胞的调节网络而影响肺癌细胞对顺铂的敏感性?结论:抑制miR-21可以促进顺铂耐药细胞A549/DDP的凋亡增加及抑制其增殖,miR-21可能成为逆转肺癌对顺铂耐药的新靶点?     

长非编码RNA BANCR逆转非小细胞肺癌细胞株顺铂耐药的研究

目的:研究长非编码RNA BANCR对人非小细胞肺癌耐顺铂细胞株A549/DDP耐药性的影响及其可能的作用机制?方法:应用实时荧光定量PCR法(qRT-PCR)检测耐顺铂细胞株A549/DDP及其亲本细胞株A549中BANCR的表达差异,发现BANCR在A549/DDP细胞中显著低表达?在A549/DDP细胞中过表达BANCR,分别应用MTT法?克隆形成实验?流式细胞术检测过表达后A549/DDP细胞对顺铂药物敏感性,细胞增殖能力,联合顺铂处理后细胞凋亡变化;Western blot检测过表达BANCR后A549/DDP细胞p53的表达变化?结果:BANCR在A549/DDP细胞中的表达量显著低于A549细胞(P < 0.05),在A549/DDP细胞中过表达BANCR可产生以下效应:相较于对照组,顺铂对A549/DDP/BANCR细胞的半数抑制浓度(half inhibition concentration,IC50)减低(P < 0.05),A549/DDP/BANCR细胞的增殖能力减弱,A549/DDP/BANCR经过顺铂处理后细胞凋亡增多(P < 0.05)?Western blot结果显示,与空白对照组比较,过表达BANCR的 A549/DDP细胞p53表达水平明显升高?结论:BANCR可能通过诱导细胞凋亡,抑制细胞增殖,上调p53蛋白表达而逆转 A549/DDP细胞对DDP的耐药性?     

老年晚期非小细胞肺癌EGFR基因突变情况的研究

目的 通过检测非小细胞肺癌(NSCLC)的人表皮生长因子受体(EGFR)基因突变,以探讨老年晚期患者的EGFR突变类型及突变特征。方法 45例经CT引导下经皮肺穿刺术的NSCLC的病理组织标本,经基因测序法检测其EGFR基因突变情况,并对EGFR基因各外显子的突变类型进行统计分析。结果 45例NSCLC标本,EGFR基因突变率为37.8%,其中外显子19约占52.9%;外显子21占41.2%,两者合占基因总突变数的94.1%。外显子19突变主要发生在DNA链上的碱基序列第746～753位密码子上,均为碱基删除突变,其中,最常见的突变类型是del E746-A750;外显子20突变1例,突变发生在DNA链上的碱基序列第768位密码子上的错义突变;外显子21突变发生在DNA链上的碱基序列第848、858、861位密码子上的错义突变,而L858R是最常见类型。突变阳性率,男性22.7%,女性52.2%;吸烟者15.4%,非吸烟者46.9%;鳞癌14.2%,腺癌48.4%;Ⅲ期26.5%,Ⅳ期36.8%,EGFR基因突变率在性别比例、吸烟情况以及病理类型之间的比较,差异均有显著性学意义(P&lt;0.05);在肺癌分期的比较,差异无意义(P&gt;0.05)。结论 (1)EGFR基因突变约占NSCLC总数的37.8%, 以外显子19、21突变为主。(2)EGFR主要突变类型为碱基删除突变、错义突变,大部分突变发生在女性、非吸烟、腺癌患者,其中,半数以上存在复合突变。     

iCHRCloud: Web &amp; Mobile based Child Health Imprints for Smart Healthcare

Reducing child mortality with quality care is the prime-most concern of all nations. Thus in current IT era, our healthcare industry needs to focus on adapting information technology in healthcare services. Barring few preliminary attempts to digitalize basic hospital administrative and clinical functions, even today in India, child health and vaccination records are still maintained as paper-based records. Also, error in manually plotting the parameters in growth charts results in missed opportunities for early detection of growth disorders in children. To address these concerns, we present India’s first hospital linked, affordable automated vaccination and real-time child’s growth monitoring cloud based application- Integrated Child Health Record cloud (iCHRcloud). This application is based on HL7 protocol enabling integration with hospital’s HIS/EMR system. It provides Java (Enterprise Service Bus and Hibernate) based web portal for doctors and mobile application for parents, enhancing doctor-parent engagement. It leverages highchart to automate chart preparation and provides access of data via Push Notification (GCM and APNS) to parents on iOS and Android mobile platforms. iCHRcloud has also been recognized as one of the best innovative solution in three nationwide challenges, 2016 in India. iCHRcloud offers a seamless, secure (256 bit HTTPS) and sustainable solution to reduce child mortality. Detail analysis on preliminary data of 16,490 child health records highlight the diversified need of various demographic regions. Thus, primary lesson would be to implement better validation strategies to fulfill the customize requisites of entire population. This paper presents first glimpse of data and power of the analytics in policy framework.     

An Integrated Approach Using Chaotic Map &amp; Sample Value Difference Method for Electrocardiogram Steganography and OFDM Based Secured Patient Information Transmission

This paper presents a patient’s confidential data hiding scheme in electrocardiogram (ECG) signal and its subsequent wireless transmission. Patient’s confidential data is embedded in ECG (called stego-ECG) using chaotic map and the sample value difference approach. The sample value difference approach effectually hides the patient’s confidential data in ECG sample pairs at the predefined locations. The chaotic map generates these predefined locations through the use of selective control parameters. Subsequently, the wireless transmission of the stego-ECG is analyzed using the Orthogonal Frequency Division Multiplexing (OFDM) system in a Rayleigh fading scenario for telemedicine applications. Evaluation of proposed method on all 48 records of MIT-BIH arrhythmia ECG database demonstrates that the embedding does not alter the diagnostic features of cover ECG. The secret data imperceptibility in stego-ECG is evident through the statistical and clinical performance measures. Statistical measures comprise of Percentage Root-mean-square Difference (PRD), Peak Signal to Noise Ratio (PSNR), and Kulback-Leibler Divergence (KL-Div), etc. while clinical metrics includes wavelet Energy Based Diagnostic Distortion (WEDD) and Wavelet based Weighted PRD (WWPRD). The various channel Signal-to-Noise Ratio scenarios are simulated for wireless communication of stego-ECG in OFDM system. The proposed method over all the 48 records of MIT-BIH arrhythmia database resulted in average, PRD = 0.26, PSNR = 55.49, KL-Div = 3.34 × 10^?6, WEDD = 0.02, and WWPRD = 0.10 with secret data size of 21Kb. Further, a comparative analysis of proposed method and recent existing works was also performed. The results clearly, demonstrated the superiority of proposed method.