荧光法测定羟自由基的研究

羟自由基(·OH)是一种活性氧自由基,具有细胞毒性,近年来有关其在生物学与医学上的作用进行了广泛的研究。在研究过程中,经常需要测知·OH的含量,关于·OH的测定方法有很多种,如ESR,HPLC,GLC及荧光法等。由于·OH是反应性很强的物种,存在寿命极短,故经常需加入各种捕获剂,荧光分析法即属于此种,在反应体系中,先加入一定量的苯甲酸,生成的·OH即刻被苯甲酸所捕获,生成     

玉郎伞提取物对超氧阴离子自由基和羟自由基的抑制和清除作用

目的 :探讨玉郎伞提取物 (YL S)对氧自由基的抑制和清除作用。方法 :采用分光光度法检测 YL S对超氧阴离子自由基(O2 · - )和羟自由基 (· OH )的清除及抑制作用。结果 :YL S浓度为 0 .15、0 .30、0 .6 0 g/ ml在体外对· OH的清除率分别为7.1%、2 9.1%、6 8.5 % ,对 O2 · -的清除率分别为 4 0 .5 %、4 9.9%和 6 4 .5 % ,对 O2 · -生成的抑制率分别为 4 8.0 %、6 0 .3%和6 8.8%。结论 :YL S对 O2 · - 具有明显的抑制及清除作用 ,对· OH也有一定的清除作用。     

动力学分光光度法测定中药多糖对羟自由基的清除率

目的 根据羟自由基与水杨酸(SA)氧化反应的动力学过程,建立动力学分光光度法测定中药多糖对羟自由基(·OH)的清除率。方法 应用紫外分光光度法,建立·OH与SA反应的动力学曲线,根据动力学曲线斜率的变化测定中药陈皮和灵芝多糖对·OH的清除率,并用维生素C进行方法的重复性与可靠性验证。结果 测定陈皮多糖对·OH 的50%清除率(IC50)为232.6 mg·L^-1;灵芝IC50为0.856 1 g·L^-1;维生素C的 IC50为0.254 4 mmol·L^-1,RSD为0.2％(n＝5)。结论 此方法灵敏可靠,可用于中药多糖成分对·OH清除率的测定。     

二茂铁衍生物清除羟自由基的构效关系

采用化学发光法检测并比较了10种二茂铁衍生物清除羟自由基(·OH)活性,用循环伏安法研究了其电化学性质,进而探讨了取代基结构与清除·OH活性间的关系。结果表明,取代基共轭效应、诱导效应和体积都对衍生物清除·OH活性有明显影响。含共轭或吸电子取代基二茂铁衍生物,半波电位(E1/2)较高,清除·OH活性较弱;而含给电子取代基的二茂铁衍生物,E1/2较低,清除·OH活性较强。     

甘露醇对羟自由基所致乳头肌收缩性能异常的保护作用

目的观察甘露醇对羟自由基（·OH）所致兔乳头肌损伤的保护作用。方法在浴槽中加入CuCl2、VitC及H2O2等量混合液生成·OH，并用八道生理记录仪记录乳头肌张力变化。结果·OH生成液1mmol／L灌流使兔当乳头肌收缩力下降，＋dP／dtmax下降，－dP／dtmax亦减小（P＜0．05），静息肌张力明显升高（P＜0．01）；当灌流甘露醇1mmol·L－3后，再灌流·OH自由基生成液，则未见上述乳头肌收缩功能发生明显异常变化。结论甘露醇对·OH自由基所致乳头肌收缩功能损伤有一定保护作用。     

卡托普利对外源性羟自由基诱导心肌细胞凋亡的影响

目的　观察卡托普利对外源性羟自由基诱导心肌细胞凋亡的影响 .方法　采用培养的第 2代心肌细胞 ,随机分成 4组 :1正常对照组 :仅用 DMEM培养 ;2羟自由基组 :OH-终浓度为 10 - 4 m ol· L- 1 ;3卡托普利组 :卡托普利终浓度为 10 - 5mol· L- 1 ;4卡托普利 +羟自由基组 :卡托普利10 - 5mol· L- 1 +10 - 4 mol· L- 1 OH- .观察心肌细胞存活率和形态学 ,流式细胞仪双标法检测细胞凋亡率 .结果　 1羟自由基组心肌细胞存活率降低 ,和对照组比较有显著性差异(P<0 .0 5 ) ;卡托普利 +羟自由基组细胞存活率较羟自由基组高 (P<0 .0 5 ) . 2 Annexin V+/PI- 细胞即凋亡细胞在羟自由基组有较高的发生率 ,明显高于其他各组 (P<0 .0 5 ) ;卡托普利 +羟自由基组的细胞凋亡率显著低于羟自由基组 (P <0 .0 5 ) . 3羟自由基组凋亡心肌细胞呈特征性超微结构 .结论　卡托普利能减轻外源性羟自由基诱导的心肌细胞凋亡     

葛根体外清除氧自由基作用的研究

目的探讨葛根在体外对氧自由基的清除作用。方法用改良的邻苯三酚自氧化法测定超氧阴离子自由基 (O2 —·) ;用邻二氮菲Fe2 + 氧化法测定羟自由基 (·OH)。结果葛根及葛根粉对O2 —· 和·OH均有显著的清除作用 (P <0 .0 1 )。结论葛根的有效成分具有较为显著的抗氧化作用。     

离体肝脏保存-再灌注损伤的发生机制及丹参的保护作用的实验研究

目的探讨羟自由基(·OH)与细胞凋亡、Bcl-2蛋白表达在大鼠肝脏不同保存时相再灌注过程中的变化规律及相互关系,阐明丹参对肝脏保存再灌注损伤的影响.方法以大鼠肝脏非循环灌注为模型,用高效液相色谱(HPLC)紫外检测法测定·OH生成物二羟苯甲酸(DHBA)含量,用原位末端标记法及电子显微镜观察细胞凋亡,用免疫组织化学法检测Bcl-2蛋白表达,观察了正常组(未保存)、对照组(乳酸林格液即LR液)及丹参组(LR液 丹参)保存鼠肝不同时相的效果.结果随着保存时间延长(18h内),·OH水平及细胞凋亡指数(AI)呈进行性升高,且两者呈显著正相关(r=0.81),相同保存时间丹参组明显低于对照组(P《0.05);而Bcl-2蛋白表达指数(BI)呈进行性降低,BI与·OH水平及AI呈显著负相关(r=-0.84),相同保存时间丹参组BI显著高于对照组(P《0.05).丹参组ATP含量及分泌胆汁量明显高于对照组,丹参组流出液天门冬氨酸转氨酶(AST)明显低于对照组,差异有显著性(P《0.05).结论 ·OH及细胞凋亡同时参与肝脏保存-再灌注损伤,丹参对该损伤具有明显的保护作用,其作用机制与抗氧自由基、抑制细胞凋亡、提高Bcl-2蛋白表达及改善低温保存肝脏的能量代谢作用有关.     

五种维吾尔药的清除羟自由基及抗DNA损伤作用研究

目的　研究 5种维吾尔药的清除羟自由基 (· OH)及保护 DNA氧化损伤的作用。方法　采用现代生物化学发光分析技术 ,以 Cu SO4- Vit C- H2 O2 -酵母菌发光体系测定药材对· OH的清除作用。结果　研究表明 ,5种维吾尔药材对· OH具有不同程度的清除作用 ,并能保护 DNA的氧化损伤 ,而且它们清除· OH及抗 DNA氧化损伤的作用与它们的浓度之间存在正比性依赖关系。结论　 5种维吾尔药清· OH及抗 DNA损伤的作用可能是它们抗衰老、防治某些疾病的主要作用机制之一。     

中医药抗自由基损伤研究概况

目前国内外有关中医药对自由基影响的研究日趋活跃，笔者拟就有关文献和报道资料概述如下。1自由基理论简述人体的器官和组织是由分子构成，分子是由原子构成。当两个原子结合成一个分子时其形成结合的共价健如果被裂断，完整的分子残缺不全，成为游离存在的物质，称为自由基或游离基’‘”’。机体内的自由基主要有两类：①氧自由基：如超氧化物阴离子自由基（OZ）、羟自由基（·OH）、过氧化氢（H。Oz）、单线态氧等。②脂质自由基：如烷氧自由基、烷过氧基等”’。机体也存在对抗自由基反应的抗氧化酶（包括超氧化物歧化酶（SOD）、…     

槲皮素及异槲皮素、芦丁抗自由基活性的比较研究

目的评价3种黄酮类同系化合物槲皮素及其单糖苷异槲皮素和双糖苷芦丁的体外抗自由基作用,进一步研究其构效关系。方法采用H2O2/Fe2 体系,通过Fenton反应生成羟自由基(·OH);采用邻苯三酚自氧化法产生超氧阴离子(O2-)。利用·OH造成肝细胞脂质过氧化以及红细胞膜破裂,观察受试化合物的保护作用,并计算IC50。结果在以上4种体外模型中,3种药物均表现出极强的清除自由基能力。在·OH以及O2-清除实验中,抗氧化活性顺序为芦丁>异槲皮素>槲皮素;在抑制肝匀浆脂质过氧化及红细胞膜破裂实验中,抗氧化活性顺序为槲皮素>异槲皮素>芦丁。结论3种受试黄酮类化合物均具有十分强大的自由基清除作用,且呈现明显的剂量依赖性和糖基结构依赖性,在不同的实验体系中其抗自由基活性强弱顺序不同。     

碱提山茱萸多糖的理化性质及抗氧化活性研究

目的　研究碱提山茱萸多糖的单糖组成及抗氧化活性。方法　经热水抽提后的山茱萸残渣用碱提取、盐酸中和、浓缩、透析、乙醇沉淀、DEAE-纤维素柱色谱分离 ,再通过 Sephadex G- 2 0 0柱色谱进一步纯化 ,得到白色粉末状多糖 PFCC 。结果　该多糖经过完全酸水解、薄层色谱、红外光谱分析 ,证明 PFCC 由木糖和葡萄糖以 18.8∶ 81.2摩尔比组成 ,平均相对分子质量为 7.5 7× 10 4。以羟基自由基 (· OH)清除剂苯甲酸和甘露醇为对照 ,用Fenton反应检测 PFCC 对· OH的清除作用 ,三者对· OH的清除率达 5 0 %所需浓度为 18,330 ,80μg/ m L。PFCC 可以有效抑制猪油和芝麻油的氧化 ,对 O÷2 的清除率达 5 0 %所需浓度为 35 .0 μg/ m L。结论　该多糖为首次提取制得 ,具有良好的抗油脂氧化及清除自由基能力     

倒卵叶五加总皂甙的抗氧化作用

目的探讨倒卵叶五加总皂甙 (SAOH)的体内外抗氧化作用。方法在体实验采用结扎左冠状动脉前降支 30min、再灌注 4 0min复制大鼠心肌缺血再灌注损伤 (IRI)的模型 ,结扎前 1 0min分别舌下静脉注射SAOH5 0mg/kg、1 0 0mg/kg ,观察SAOH对再灌注产生氧自由基 (OFR)的作用 ;体外实验采用抗坏血酸体系产生羟自由基 (·OH- )的原理 ,观察SAOH清除·OH的作用。结果SAOH能提高心肌IRI后血浆超氧化物歧化酶 (SOD)活性 ,减少组织丙二醛 (MDA)的生成量 ;减轻IRI后心肌细胞琥珀酸脱氢酶 (SDH)及细胞色素氧化酶 (CCO)的损伤性反应。SAOH浓度在 0 .2～ 1 .4g/L时体外·OH- 清除率为38.5 %～ 1 0 0 % ,且呈量效关系 (r=0 .91 )。结论SAOH具有抗氧化作用 ,其机制与清除·OH- 有关。     

平阳霉素与 Fe~(2+)反应产生·OH的自旋共振研究

运用电子自旋共振（ＥＳＲ）自旋捕获技术检测到平阳霉素与Ｆｅ２＋在有氧条件下产生的羟自由基（·ＯＨ）的信号。这是首次用ＥＳＲ证明该体系可生产·ＯＨ，为进一步研究平阳霉素毒性的自由基机理提供了一个重要的实验证据。     

白藜芦醇苷的体外抗氧化活性

目的研究白藜芦醇苷的清除自由基、抗氧化活性.方法以NADH-PMS-NBT系统产生氧自由基O 2-;EDTANa2-Fe(Ⅱ)-H2O2系统和Fe2++Vit C系统产生羟自由基(·OH);H2O2诱导大鼠红细胞氧化溶血来研究白藜芦醇苷的生物活性.结果白藜芦醇苷体外可清除O2-及·OH;抑制H2O2诱导的大鼠红细胞氧化性溶血;抑制·OH引起的小鼠肝微粒体过氧化脂质(LPO)和大鼠红细胞膜丙二醛(MDA)含量的升高.结论白藜芦醇苷具清除自由基及抗脂质过氧化的作用.     

左卡尼汀DN液体外抗氧化活性

目的观察左卡尼汀体外清除自由基、抗氧化活性。方法超氧阴离子（O2^-）由黄嘌呤（X）与黄嘌呤氧化酶（XOD）反应体系产生,羟自由基（·OH）由Fenton反应体系产生,观察不同浓度下左卡尼汀口服液产生超氧阴离子自由基（O2^-）和羟自由基（·OH）的能力;测定H2O2诱导大鼠红细胞氧化溶血及对EDTANa2-Fe^2＋-H2O2系统所产羟自由基诱生的大鼠红细胞膜丙二醛（MDA）含量的影响来观察左卡尼汀的生物活性。结果分别在10-100g/L及1-100g/L浓度范围内,左卡尼汀口服液产生超氧阴离子自由基和羟自由基的能力随浓度降低而增加且与稀释倍数呈良好的线性关系,直线回归方程分别为Y=14．0652＋24.9066X（O2^-）与Y=34．2673＋38.0382X（·OH）,相关系数（r）分别为0．9830（O2^-）和0．9969（·OH）;在10—100g／L浓度范围内,显著抑制H2O2诱导的大鼠红细胞氧化性溶血并显著降低大鼠红细胞膜丙二醛含量,且抑制能力与浓度呈良好的性关系,直线回归方程分别为Y=23.5309＋0．293X与Y=-0．6978＋0．8971X,r分别为0.9811和0．9998。结论左卡尼汀具清除自由基及抗脂质过氧化的作用。     

Change of Hydroxyl Radical Content in Isolated Rat Heart Perfused with Adriamycin and the Influence of Cordyceps Sinensis Alc

本实验采用Ｌａｎｇｅｎｄｏｒｆ大鼠离体心脏灌流模型，以水杨酸为捕捉剂，利用其与阿霉素灌流时产生的ＯＨ·反应生成的羟苯甲酸（ＤＨＢＡ）为指标，用高效液相色谱法（ＨＰＬＣ）检测了阿霉素损伤时冠脉流出液和心肌组织中ＤＨＢＡ含量，初步探讨了阿霉素性心肌损伤和ＯＨ·的关系。同时用生化方法测定了冠脉流出液中乳酸脱氢酶（ＬＤＨ）含量，作为心肌损伤的参考指标。并且观察了冬虫夏草醇提取物（ＣＳＡＥ）预灌注时对ＯＨ·生成量和ＬＤＨ漏出量的影响。结果表明：１５ｍｇ／Ｌ阿霉素灌注时，冠脉流出液和心肌组织中ＯＨ·含量显著增加，损伤加重；而使用０．４ｇ／ＬＣＳＡＥ预灌时，ＯＨ·含量明显下降，损伤减轻（Ｐ均＜０．０１）。ＬＤＨ与冠脉流出液及心肌组织中ＯＨ·含量均呈正相关（γ分别为０．９２２和０．９４９）。提示：①阿霉素性心肌损伤和ＯＨ·的产生增多有关。②ＣＳＡＥ能拮抗ＯＨ·的产生或清除已产生的ＯＨ·，具有保护作用。     

壳聚糖/羧甲基壳聚糖金属配合物对氧自由基的清除作用研究

以NADH-PMS-NBT体系产生超氧阴离子自由基(o2-·)和EDTANa2·Fe(Ⅱ)-H2O2体系产生 羟自由基(·OH)来研究壳聚糖Cu(Ⅱ)、Zn(Ⅱ)配合物、羧甲基壳聚糖Cu(Ⅱ)、Zn(Ⅱ)配合物时氧自由基的 清除作用。结果显示配合物对O2-·和·OH均具有明显的清除作用,其中铜(Ⅱ)配合物对O2-·的清除活 性最高,而锌(Ⅱ)配合物比铜(Ⅱ)配合物具有更强的清除·OH的能力,羧甲基壳聚糖Cu(Ⅱ)、Zn(Ⅱ)配合 物与含有相同金属离子的壳聚糖配合物相比对O2-·和·OH具有更高的抑制活性。     

庆大霉素引起内耳组织自由基增加的直接证据

目的　探讨庆大霉素体内注射与耳蜗组织自由基含量的关系 .方法　用电子顺磁共振法 (electron paramagneticresonance,EPR)直接检测正常的和注射庆大霉素后豚鼠耳蜗组织羟自由基含量 ,并比较其含量的变化 .结果　正常情况下豚鼠耳蜗组织存在一定量的羟自由基 ,其相对值为 0 .13±0 .0 1,当体内注射庆大霉素后 ,耳蜗组织羟自由基含量相对值为 0 .2 8± 0 .0 0 ,比前者增加 110 % ,两者比较有显著差异 (P<0 .0 5 ) .结论　 EPR检测动物耳蜗组织自由基含量是一种直接、有效的方法 ,庆大霉素体内注射后可引起豚鼠耳蜗组织羟自由基含量显著增加     

自由基与心肌损伤

越来越多的资料表明,氧自由基在放射损伤、炎症以及氧中毒等多种病理过程中起着重要的作用。本文阐述了活性氧对心肌缺血后再灌流损伤的促进作用。活性氧包括超氧化物阴离子(?)、过氧化氢(H_2O_2)与羟自由基(·OH)。由于自由基含有不配对电子,实际上它们