SIRT1与乙酰化底物、NAD+或烟酰胺的相互作用

沉默信息调节因子2相关酶1（SIRT1）是一类腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖性去乙酰化酶。烟酰胺是SIRT1催化的去乙酰化反应的产物,也是SIRT1的一种非竞争性抑制剂。利用蛋白同源模建和分子对接方法构建了“SIRT1/NAD+/p53乙酰化多肽”和“SIRT1/ADPR（二磷酸腺苷核糖）/烟酰胺”的两种复合物结构模型。根据“SIRT1/NAD+/p53乙酰化多肽”的复合物模型,发现SIRT1的265位丝氨酸(S265)和346位天冬酰胺(N346)与NAD+有相互作用,275位丝氨酸(S275)位于NAD+结合口袋的入口处。通过酶动力学实验证明：将S265、N346和S275突变之后会降低甚至消除NAD+与SIRT1的相互作用。另外,根据“SIRT1/ADPR/烟酰胺”的复合物模型,烟酰胺的酰胺基团与347位异亮氨酸(I347)、348位天冬氨酸(D348)形成了氢键,同时其嘧啶环埋在由262位丙氨酸(A262)、270位异亮氨酸(I270)、273位苯丙氨酸(F273)、316位异亮氨酸(I316)和347位异亮氨酸(I347)所包围的疏水环境中。将I316突变成丙氨酸,提高了酶与烟酰胺的结合能力,也显著提高了烟酰胺的抑制活性,这一现象表明烟酰胺结合在SIRT1的C口袋处。     

烟酰胺磷酸核糖转移酶抑制剂在肿瘤治疗方面的研究进展

烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)是生命体内200多种氧化还原反应的辅酶,在很多细胞生理过程中发挥着重要作用。烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)是哺乳动物NAD合成途径的限速酶,调节着细胞内的NAD水平,是生物体内进行各种生命活动和能量代谢的重要蛋白,具有多种生物学活性。在癌症中,肿瘤细胞为了快速增殖,对细胞内NAD水平的依赖比正常细胞更强。研究表明Nampt有促血管生成活性,支持着一些肿瘤细胞的生长,抑制Nampt酶活性可起到很好的抗肿瘤作用。这使得Nampt成为近年来药物研究中一个非常有吸引力的靶标,Nampt抑制剂被用于肿瘤化疗干预研究。目前有研究报道的Nampt抑制剂共4个：FK866、CHS828、CB30865、IS001。本文就近年来Nampt抑制剂在肿瘤治疗方面的研究进展进行综述,以期为Nampt调控剂的开发和应用提供参考。     

烟酰胺磷酸核糖转移酶在扩张型心肌病中的表达及机制初探

目的 探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶（nicotinamide phosphoribosyltransferase，NAMPT）在扩张型心肌病（dilated cardiomyopathy，DCM）中的表达及其与DCM发生发展的关系。方法 收集2010~2013年期间经四川大学华西医院确诊的131例中国汉族DCM患者外周血，随机选择在四川大学华西医院体检中心体检的中国汉族健康人137例作为对照组。利用ELISA和Real time-PCR检测DCM组及对照组各样本NAMPT血浆蛋白及细胞内NAMPT mRNA表达水平。同时构建细胞内NAMPT过表达及空质粒转染大鼠心肌细胞系H9C2细胞，通过WST-1、细胞周期及流式细胞术检测NAMPT对H9C2细胞增殖、H₂O₂诱导氧化应激前后细胞凋亡的影响。结果 DCM组血浆细胞外NAMPT蛋白水平高于对照组（P<0.05），且不同心衰程度及左室大小之间患者血浆NAMPT蛋白水平差异有统计学意义（P 均< 0.05）。DCM组细胞内NAMPT mRNA水平低于对照组（P<0.05）。体外实验中，转染NAMPT过表达质粒后H9C2细胞增殖能力较空质粒组显著增强，S期比例增加。直接转染或转染后用H₂O₂诱导氧化应激前后，NAMPT过表达组H9C2存活细胞比例高于空质粒组，晚期凋亡及坏死细胞比例降低。结论 细胞外NAMPT血浆蛋白水平的高表达与外周血细胞内NAMPT mRNA水平的低表达是DCM的生物学特征之一。细胞内NAMPT降低可能是DCM发病机制中的重要因素。     

烟酰胺在口腔及全身疾病防治中的研究进展

烟酰胺是烟酸的酰胺形式，也是烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（nicotinamide adenine dinucleotide, NAD+）的前体之一，可以作为膳食补充剂或临床治疗药物，用于补充体内的NAD+水平，参与机体细胞代谢、DNA修复等关键功能。烟酰胺成本低廉、来源广泛、生物安全性好，还具有抗菌、抗炎、调节细胞免疫等多重生物功能，对皮肤疾病、神经变性疾病等具有明显的改善作用。然而，目前大部分有关烟酰胺的研究仍停留在实验室阶段，本文将对烟酰胺在口腔及全身疾病预防和治疗中的作用和机制进行综述，探究烟酰胺作为临床治疗药物的潜能，为烟酰胺在不同疾病防治中的临床应用提供一定的依据和参考，并对其未来的研究和应用前景进行展望。     

烟酰胺磷酸核糖转移酶在炎症中的作用研究进展

烟酰胺磷酸核糖转移酶（Nampt）又称内脏脂肪素（Visfatin）和前B细胞克隆增强因子。研究发现,Nampt是催化烟酰胺腺嘌呤二核苷（NAD）合成的限速酶,也是一种脂肪因子、细胞因子,参与免疫、代谢和应激等相关生理病理过程;值得关注的是,Nampt参与了一系列与炎症相关的疾病,包括急性肺损伤、动脉粥样硬化、心肌梗死、肥胖、2型糖尿病、关节炎等,因而Nampt被认为是炎症相关疾病的治疗药物开发新靶点。本文就Nampt在炎症中的作用研究进展作一综述。     

内脂素的炎症作用研究进展

内脂素(visfatin)作为一个新的脂肪因子在改善糖耐量及肥胖相关的胰岛素抵抗和2型糖尿病的发生方面起重要作用,同时其还可催化哺乳动物细胞氧化型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)合成补救途径的限速步骤,烟酰胺磷酸核糖转移酶(Nampt)有两种形式:细胞内Nampt和细胞外,二者分别调节细胞内外烟酰胺合成NAD,因而涉及许多细胞的调节过程[1].Visfatin/ PBEF/ Nampt编码的基因于1994年首次在人外周淋巴细胞cDNA文库中发现,2005年日本学者FUKUHARA等[2]在脂肪组织中分离到这一脂肪因子且证实内脏脂肪产生的内脂素高于皮下脂肪.     

NAMPT基因对肾癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制研究

目的:探讨烟酰胺磷酸核糖转移酶(NAMPT) 在肾癌中的表达情况及对肾癌细胞增殖和凋亡的影响。方法:通过TCGA在线数据库ualcan分析NAMPT在肾癌组织和正常肾组织中的表达,通过Kaplan-Meier plotter数据库分析NAMPT对肾癌预后的影响。qPCR检测NAMPT基因在肾癌细胞769P、A704、786-O及正常化肾小管上皮细胞HK2中的表达。分别设计NAMPT特异性shRNA（shNAMPT组）和对照序列（scramble组）转染肾癌细胞786-O,用NAMPT抑制剂FK866及对照试剂DMSO处理肾癌细胞786-O,分别采用CCK-8法、平板克隆实验及流式细胞术检测NAMPT对肾癌细胞786-O增殖、克隆形成及凋亡的影响,NAD+/NADH检测试剂盒检测细胞内烟酰胺腺嘌呤二核苷酸（NAD+）的含量,Western印迹检测NAMPT的表达及干扰NAMPT对磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B（PI3K/Akt）通路的影响。结果:生物信息学分析显示NAMPT在肾癌中的表达高于正常肾组织（P＜0.05）,NAMPT高表达组总生存率较低表达组明显降低（P<0.01）;肾癌细胞769P、A704、786-ONAMPT的表达均高于肾小管上皮细胞HK2（t=6.680,P=0.0026,t=14.12,P=0.001,t=13.43,P=0.002）;细胞学实验结果显示,与DMSO组相比,FK866组肾癌细胞786-O的增殖能力减弱（t=2.625,P<0.05）,克隆形成能力明显受抑制（t=5.687,P<0.01）,凋亡细胞比例增高（t=6.325,P＜0.01）,NAD+生成明显下降（t=17.62,P<0.001）。与scramble组相比,shNAMPT组肾癌细胞786-O的增殖能力减弱（t=3.959,P<0.05）,克隆形成能力明显受抑制（t=8.684,P<0.05）,凋亡细胞比例增高（t=14.05,P＜0.01）,NAD+生成明显下降（t=10.93,P<0.001）,Akt通路关键蛋白p-PI3K及p-Akt的表达明显下调（t=7.721,P＜0.01,t=14.78,P＜0.001）。结论:NAMPT在肾癌中高表达,且与患者预后差相关,干扰NAMPT的表达,可以通过减少NAD+的生成,抑制PI3K/Akt通路的激活,从而降低肾癌细胞的增殖,促进其凋亡。     

脓毒症患者血清NAMPT、SIRT1表达与急性肺损伤的相关性研究

目的：检测脓毒症患者血清烟酰胺磷酸核糖转移酶（NAMPT）、沉默信息调节因子1（SIRT1）水平，并探讨其与脓毒症患者急性肺损伤的关系。方法：选取2017年3月-2021年2月台州市立医院收治的脓毒症患者238例为研究对象，根据是否并发急性肺损伤，分为无急性肺损伤组120例和急性肺损伤组118例。收集患者临床资料，并在患者入院24 h内进行急性生理学与慢性健康状况评分系统Ⅱ（APACHE Ⅱ）评分；肺功能测定仪检测患者肺功能指标第1秒用力呼气容积占预计值百分比（FEV1%）、第1秒用力呼气容积占用力肺活量百分比（FEV1/FVC）、计算呼吸指数（RI）、氧合指数（OI），血气分析仪检测动脉血氧分压（PaO2）、二氧化碳分压（PaCO2）水平；采用酶联免疫吸附法测定患者血清NAMPT、SIRT1水平；采用Pearson相关性分析血清NAMPT、SIRT1水平与APACHE Ⅱ评分、RI、OI、PaCO2、PaO2的相关性；采用二元Logistic回归分析脓毒症患者发生急性肺损伤的影响因素；采用受试者工作特征（ROC）曲线分析血清NAMPT、SIRT1对脓毒症患者发生急性肺损伤诊断价值。结果：与无急性肺损伤组比较，急性肺损伤组患者APACHE Ⅱ评分、PaCO2、RI、血清NAMPT水平显著升高，PaO2、OI、血清SIRT1水平显著降低（P＜0.05）；血清NAMPT水平与APACHE Ⅱ评分、RI、PaCO2水平均呈正相关（P<0.05），与OI、PaO2呈负相关（P<0.05）；血清SIRT1水平与APACHE Ⅱ评分、RI、PaCO2水平均呈负相关（P<0.05），与OI、PaO2呈正相关（P<0.05）；血清NAMPT、SIRT1、APACHE Ⅱ评分是脓毒症患者发生急性肺损伤的独立危险因素（P＜0.05）；血清NAMPT、SIRT1、二者联合检测对脓毒症患者发生急性肺损伤诊断的曲线下面积（AUC）分别为0.771（95%CI：0.710~0.831）、0.835（95%CI：0.779~0.890）、0.908（95%CI：0.869~0.947）。结论：脓毒症急性肺损伤患者血清NAMPT异常高表达、SIRT1异常低表达，二者联合检测可为脓毒症患者临床评估急性肺损伤提供一定参考。     

烟酰胺对白介素-1β引致小鼠糖尿病的防治作用

目的　观察白介素 1β(IL 1β)对小鼠体内胰岛 β细胞的损害及其引致小鼠糖尿病的情况 ,并观察烟酰胺 (NAA)对IL 1β诱导的糖尿病的防治作用。 方法　 6 0只C5 7小鼠随机分为 5组 :正常对照组予生理盐水0 .1ml/d ;IL 1β组予IL 1β 5 0ng/d ;NAA组予NAA 10mg/d ;防治Ⅰ组同时予上述剂量的IL 1β和NAA腹腔注射 ,连续治疗 7d ;防治Ⅱ组先予IL 1β 7d ,再予NAA 7d。每 2～ 3天测一次血糖 ,观察各组小鼠糖尿病的发病率 ,4周后测定小鼠的血清胰岛素、一氧化氮 (NO) ,并分离胰岛 ,测定胰岛细胞内胰岛素、NO、烟酰胺二核苷酸(NAD)和DNA含量的变化。结果　IL 1β组糖尿病发病率为 75 % ,明显高于正常对照组 (0 ) ,两组间差异有显著性 (P <0 .0 1) ;防治Ⅰ组小鼠糖尿病发病率仅为 8.3% ,血清胰岛素、NAD、DNA均接近正常对照组 ,但明显高于IL 1β组 (P <0 .0 1) ;防治Ⅱ组除胰岛细胞内NAD含量高于IL 1β组外 ,其余各项指标与IL 1β组的差异均无显著性 (P >0 .0 5 )。结论　早期应用NAA可有效防止IL 1β对胰岛细胞的损伤及诱导糖尿病发生     

血管紧张素Ⅱ损伤人胰岛细胞功能相关机制的研究

目的探讨分离纯化的人胰岛细胞是否表达NAD（P）H氧化酶亚基p22phox，通过体外实验了解该酶在血管紧张素Ⅱ损伤胰岛细胞功能中所起的作用。方法对分离纯化后的胰岛分别进行p22phox亚基和胰岛素免疫荧光检测；使用化学发光法检测不同浓度血管紧张素Ⅱ、AT，受体拮抗剂及NAD（P）H氧化酶抑制剂干预下胰岛细胞胰岛素分泌功能。结果免疫荧光标记胰岛p22phox亚基和胰岛素均呈强阳性；血管紧张素Ⅱ抑制高糖刺激下胰岛细胞胰岛素的分泌，使用AT1受体拮抗剂或者NAD（P）H氧化酶抑制剂能拮抗血管紧张素Ⅱ的抑制作用。结论分离纯化的人胰岛细胞表达NAD（P）H氧化酶；血管紧张素Ⅱ可能通过激活细胞表面NAD（P）H氧化酶使胰岛细胞发生氧化应激损伤，从而损伤胰岛细胞的分泌功能。     

菸酰胺治疗房室传导阻滞的疗效观察

本文报道应用菸酰胺治疗8例房室传导阻滞患者,其中4例是高度房室传导阻滞患者,实践提示应用此药治疗本症是一种满意的方法。     

NNMT基因重组表达质粒的构建以及在大肠杆菌中的表达

目的利用p GEX—4T-2表达系统表达制备尼克酰胺N-甲基转移酶（NNMT）抗原。方法根据NCBI核苷酸数据库编码为gi：12652950人NNMT cDNA序列，设计合成编码NNMT的DNA引物，并分别在5’端和3’端设计BamHI和XhoI位点，利用RT-PCR从人肝组织中克隆NNMT基因，经T—A克隆、亚克隆至p GEx-4T-2表达载体，重组质粒转化到大肠杆菌BL-21-STAR（DE3），经异丙基-β—D-硫代乳糖苷诱导表达，Glutathione Sepharose 4B亲和层析制备融合蛋白（GST-NNMT）。通过DNA测序来证实质粒p GEX-4T-2／NNMT的正确性，SDS—PAGE电泳以及Western—blot判断GST-NNMT蛋白的准确性。结果限制性内切酶和DNA测序结果表明，编码NNMT蛋白的DNA序列准确插入到 p GEX-4T-2多克隆位点，成功构建表达质粒p GEX-4T-2，NNMT。菌液超声破碎后，融合蛋白主要存在于裂解上清液中，表达量约占菌体总蛋白表达量的20％，每升菌液可表达融合蛋白约4．5mg。Western-blot证实制备的蛋白为GST-NNMT。结论成功地利用基因重组技术制备了NNMT，为制备抗NNMT单克隆抗体和ELISA试剂盒打下基础。     

胰岛素对雷公藤多甙联合烟酰胺方案干预LADA疗效的影响

目的 对比研究胰岛素（强化治疗）与口服降糖药二甲双胍对雷公藤多甙联合烟酰胺方案干预LADA早期患者疗效的影响。方法 病程在1年内LADA患者62例，随机分为胰岛素强化治疗组（A组）与二甲双胍组（B组），两组均使用相同的雷公藤多甙联合烟酰胺干预方案。随访时间24月，A、B两组实际完成随访观察各30例。结果 两组C肽水平均较治疗前显著升高（P〈0．05），但A组C肽水平高于B组（P〈0．05）；A组与B组分别有10例与7例ICA阳性病例转阴；两组患者的血清sIL-2R与LPO水平均较治疗前明显下降（P〈0．01-0．05）。结论 雷公藤多甙联合烟酰胺方案对LADA早期患者具有调节免疫，保护残存胰岛β细胞功能的作用。胰岛素强化治疗可提高该方案的干预效果。     

铅对人红细胞膜作用的电子自旋共振自旋标记研究

用电子自旋标记研究铅对人红细胞膜脂质及膜蛋白的作用，并观察了尼克酰胺的保护作用，结果表明，在一定量的铅作用下，膜脂质表层及深层均无明显变化，膜蛋白则变化较明显，尼克酰胺具有膜保护作用，可拮抗铅对膜蛋白的影响。说明铅主要作用于红细胞的膜蛋白，而不是膜脂质，铅对红细胞膜的损伤主要与膜蛋白构象改变有关。     

内脂素在非酒精性脂肪肝病大鼠肝组织中的表达及意义

目的 观测内脂素（Visfatin）在非酒精性脂肪肝病大鼠肝组织中的表达情况,拟为非酒精性脂肪肝病的诊治开阔出新的思路.方法 将40只SD大鼠按随机数字表法分为对照组和造模组,每组20只.对照组予基础饲料喂养,并每周两次腹腔内注射生理盐水（0.2 ml/100 g体质量）;造模组予高脂饲料喂养,并每周两次腹腔内注射40％ CCl4色拉油溶液（0.2 ml/100 g体质量）.分析各组在2、4、6、8周4个时间点血清ALT、AST、TG、TC的变化及肝组织Visfatin的表达情况.结果 随着造模时间延长,造模组大鼠血清ALT、AST、TG、TC逐渐升高（P＜0.05）.免疫组化及RT-PCR显示造模组大鼠各时期肝组织中内脂素水平随着造模时间的延长而增高,较同期对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 （1）高脂喂养并腹腔内注射CCl4可以成功构建SD大鼠非酒精性脂肪肝病模型;（2）内脂素在非酒精性脂肪肝病大鼠肝脏组织中的表达水平随着肝脏脂肪变性程度增强而增高,因此可作为诊治非酒精性脂肪肝病并观测其严重程度的新指标.     

烟酸和烟酰胺治疗血液透析患者高磷血症的研究进展

【摘要】 慢性肾脏病（CKD）是全球公共健康问题之一。在中国,成年人CKD患病率高达108%。高磷血症是CKD患者常见的严重并发症之一,往往发生于终末期肾病（End stage renaldisease,ESRD）阶段。高磷血症也是CKD患者心血管事件（CVD）发生的高危因素,在血液透析(Hemodialysis,HD)患者中较为普遍,增加CKD患者死亡风险。目前,控制高磷血症通常需要联合低磷饮食、充分透析、降磷药物治疗。其中,磷酸盐结合剂在临床上运用较多。但近年来,大量研究表明烟酸和烟酰胺能有效降低血液透析患者血磷水平,本文就此研究进展作一综述。     

NADH对X射线照射正常肝细胞L02后PARP和Caspase 3活性的影响

目的：为了研究NADH对X射线诱导的细胞凋亡和PARP、Caspase 3活性的影响。方法设假照射组、对照组及处理组。处理组正常肝细胞在6MV Varian 5．0Gy照射后立即加入含NADH（400μg／mL） RPMI 1640完全培养基,假照射组和对照组只加入培养液,培养24 h,用Annexin V／PI法检测细胞凋亡率;流式细胞仪检测bcl－2和bax蛋白阳性表达率;免疫印迹检测PARP和Caspase3活性。结果处理组与对照组相比细胞凋亡率明显下降, bax蛋白阳性表达百分率明显下调,而bcl－2表达则明显上调（P＜0．05）。对照组PARP和Caspase 3蛋白均出现剪切片断,处理组未发现剪切片断形成。结论 NADH具有抗辐射诱导的L02肝细胞凋亡损伤作用,其作用机制可能通过bcl－2和bax调控线粒体途径有关。     

复方叶酸B_(12)注射液导数光谱测定法

复方叶酸B_(12)注射液在江苏省药品质量标准中只测定叶酸含量,用还原-重氮化-偶合-比色法,操作步骤多,易造成误差。本文采用紫外分光光度法直接测定叶酸含量,并用一阶导