miR-193a-3p在子宫内膜癌中的表达及临床病理的关系

目的 探究miR-193a-3p在子宫内膜癌组织中相对表达及其对子宫内膜癌细胞株的生物学行为的影响。方法子宫内膜癌、正常子宫内膜组织样本均取自徐州医科大学附属医院2020年7月~2021年4月行手术切除的患者。实时荧光定量PCR(qPCR)检测子宫内膜癌组织和正常子宫内膜组织样本中miR-193a-3p的表达,分析miR-193a-3p的相对表达量与临床病理之间的关系。此研究选用Ishikawa细胞株作为研究,分为正常组(未作任何处理组)、对照组(转染miR-193a-3p-NC组)和过表达组(转染miR-193a-3p-mimics组),qPCR检测各组细胞miR-193a-3p的表达水平,CCK-8、Transwell小室检测各组处理前后Ishikawa细胞增值、迁移和侵袭差异性。结果 正常子宫内膜组织、子宫内膜癌组织中miR-193a-3p相对表达量分别为1.00,0.50±0.11,子宫内膜癌组织中miR-193a-3p相对表达水平较正常子宫内膜组织明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。子宫内膜癌组织miR-193a-3p的表达水平与患者临床分期以及是否发生淋巴结转移相关(P<0.05),与年龄、病理分级和病理类型无关(P>0.05)。使miR-193a-3p过表达可减弱子宫内膜癌细胞的恶性生物学行为。结论 miR-193a-3p的低表达可能起到促癌的作用,过表达miR-193a-3p可抑制癌的细胞的增殖、迁移和侵袭。     

miR-613靶向PTBP1抑制子宫内膜癌细胞侵袭和迁移的实验研究

  目的  探讨微RNA-613(miR-613)靶向多聚嘧啶区结合蛋白1(PTBP1)对子宫内膜癌细胞(Ishikawa)增殖、迁移及侵袭的影响。  方法  采用RT-qPCR法检测子宫内膜癌组织miR-613及PTBP1 mRNA表达;体外培养Ishikawa细胞并对Ishikawa细胞进行干预,过表达miR-613、抑制PTBP1表达或共同过表达miR-613与PTBP1,分别检测Ishikawa细胞增殖、迁移与侵袭及PTBP1、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、MMP-9蛋白表达情况;双荧光素酶报告实验验证miR-613与PTBP1的靶向关系。  结果  子宫内膜癌组织中miR-613表达水平为0.48±0.09,显著低于癌旁组织的1.03±0.11(P＜0.05),PTBP1 mRNA表达水平为2.78±0.23,显著高于癌旁组织的1.01±0.12(P＜0.05),miR-613与PTBP1 mRNA呈负相关关系(r=-0.523,P＜0.05);双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-613靶向负调控PTBP1表达;过表达miR-613与抑制PTBP1表达,Ishikawa细胞存活率、细胞迁移与侵袭数、PTBP1、MMP-2及MMP-9表达水平显著降低(均P＜0.05);过表达PTBP1逆转过表达miR-613对Ishikawa细胞增殖、迁移与侵袭的抑制作用。  结论  miR-613在子宫内膜癌组织中低表达,过表达miR-613可通过靶向抑制PTBP1表达,抑制人子宫内膜癌细胞的增殖、迁移及侵袭。      

miR-34c抑制人子宫内膜癌的机制分析

目的 MicroRNAs (miRNAs)是内源性表达长度约为22个核苷酸的小RNA分子,通过结合到靶mRNA上而抑制基因的表达。近年的研究表明某些miRNAs可以调节肿瘤细胞的增殖与迁移,然而miRNA在子宫内膜癌中的作用有待于进一步探索。本研究旨在探讨miR-34c在人子宫内膜癌中的表达规律、功能和分子机制。 方法 通过荧光定量PCR技术检测20例人子宫内膜癌组织标本中miR-34c的表达。通过阳离子脂质体介导的方法将miR-34c转染入人子宫内膜癌细胞RL95-2中,应用MTS法检测子宫内膜癌细胞的增殖,克隆形成实验检测子宫内膜癌细胞的生长,流式细胞术检测细胞周期,Transwell实验检测子宫内膜癌细胞的迁移。生物信息学和荧光素酶报告基因实验确认miR-34c作用的靶基因。RNAi技术下调c-Met的表达。通过蛋白印迹检测miR-34c对c-Met蛋白以及细胞内重要信号通路与细胞周期相关蛋白的影响。 结果 miR-34c在子宫内膜癌中表达明显降低。miR-34c能使子宫内膜癌细胞RL95-2细胞周期滞留在G₁期,显著抑制细胞的增殖。细胞移形实验发现miR-34c能够显著抑制RL95-2细胞迁移。生物信息分析表明c-Met是miR-34c作用的靶基因,进一步通过荧光素酶报告基因实验得以证实。蛋白印迹分析发现miR-34c能下调RL95-2细胞中的c-Met蛋白、p-Akt蛋白以及p-ERK1/2蛋白表达情况,同时还能够下调CDK4、CDK6蛋白以及p-Rb蛋白的表达水平。RNAi技术下调c-Met的表达能够明显抑制子宫内膜癌细胞的增殖与迁移。 结论 本研究结果证明miR-34c通过作用于靶基因c-Met而抑制子宫内膜癌细胞的增殖与迁移,说明miR-34c是子宫内膜癌中的重要抑癌基因。      

miR-135b对子宫内膜癌HOXA10基因表达的调控作用

目的 探讨miR-135b对子宫内膜癌中HOXA10基因表达的调控作用.方法 RT-PCR方法检测28例子宫内膜癌组织及相应癌旁组织中miR-135b及HOXA10的表达;用miR-135b模拟物及抑制物转染RL-952子宫内膜癌细胞株,RT-PCR检测转染效果并检测FOXO1 mRNA的变化,划痕实验检测转染后对细胞迁移的影响,流式细胞技术检测转染对细胞增殖的影响,Western blot检测HOXA10蛋白的变化.结果 miR-135b在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达升高(P<0.05),HOXA10则降低(P<0.05),经miR-135b模拟物转染后,子宫内膜癌细胞中HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平下降(P<0.05);经miR-135b抑制物转染后,子宫内膜癌细胞中HOXA10 mRNA和蛋白的表达水平升高(P<0.05);miR-135b能促进子宫内膜癌细胞的增殖(P<0.05).结论 miR-135b 在子宫内膜癌发生发展中有一定作用,子宫内膜中HOXA10的异常表达受miR-135b的调控.     

miR-216a-5p和WASL在子宫内膜癌组织中的表达及其调控子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的分子机制

目的：探讨微小RNA-216a-5p（miR-216a-5p）靶向湿疹血小板减少伴免疫缺陷综合征样蛋白（WASL）对子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭的影响,阐明miR-216a-5p与WASL基因的靶向关系及其作用机制。方法：收集行手术切除的47例子宫内膜癌患者癌组织和癌旁组织;将miR-216a-5p模拟物（miR-216a-5p）、模拟物阴性对照（miR-con）、沉默对照（si-con）、沉默WASL的小干扰RNA（si-WASL）、抑制物阴性对照（anti-miR-con）、miR-216a-5p抑制物（anti-miR-216a-5p）、miR-216a-5p及空载质粒（pcDNA）和miR-216a-5p及WASL过表达质粒（pcDNA-WASL）分别转染子宫内膜癌HEC-1-B细胞作为miR-216a-5p组、miR-con组、si-con组、si-WASL组、anti-miR-con组、anti-miR-216a-5p组、miR-216a-5p+pcDNA组和miR-216a-5p+pcDNA-WASL组。采用逆转录实时荧光定量PCR（Real-time RT-qPCR）和Western blotting法分别检测子宫内膜癌组织、癌旁组织和各组HEC-1-B细胞中miR-216a-5p和WASL mRNA及蛋白表达水平。采用MTT法检测各组细胞增殖活性,Transwell法检测各组迁移和侵袭细胞数。采用双荧光素酶报告基因法检测各组细胞双荧光素酶活性,以此确定WASL是否为miR-216a-5p的靶基因。结果：与癌旁组织比较,子宫内膜癌组织中miR-216a-5p表达水平明显降低（P<0.05）,WASL mRNA和蛋白表达水平明显升高（P<0.01）,两者呈负相关关系（r=-0.317,P<0.01）。与miR-con组和si-con组比较,miR-216a-5p组和si-WASL组细胞中WASL蛋白表达水平（P<0.01）和细胞增殖活性均明显降低（P<0.05）,迁移和侵袭细胞数明显降低（P<0.05）。双荧光素酶报告基因和Western blotting检测,WASL为miR-216a-5p的靶基因。与miR-216a-5p+pcDNA组比较,miR-216a-5p+pcDNA-WASL组细胞增殖活性、迁移细胞和侵袭细胞数均明显升高（P<0.05或P<0.01）。结论：miR-216a-5p在子宫内膜癌组织中呈低表达,其可能通过靶基因WASL抑制子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力,可能是子宫内膜癌治疗的潜在靶点。     

TET1在子宫内膜病变中的表达及其对癌细胞增殖和迁移能力的影响

目的探讨不同类型子宫内膜病变中TET1的表达水平和干扰TET1蛋白表达对子宫内膜癌细胞系Hec-1a和Ishikawa细胞生物学行为的影响。方法免疫组织化学检测组织中TET1的表达;应用干扰TET1表达的siRNA转染Hec-1a和Ishikawa细胞,以仅加入转染试剂的细胞作为阴性对照;Western blotting检测转染效率;SRB法检测细胞增殖能力改变;Transwell侵袭试验检测细胞侵袭能力改变;划痕试验检测细胞迁移能力改变;流式细胞术检测细胞周期改变。结果子宫内膜组织中TET1的表达随病理类型进展而升高;干扰组TET1蛋白表达水平明显低于对照组;干扰TET1表达后子宫内膜癌细胞增殖、迁移和侵袭能力均受到不同程度抑制,同时出现G1/S期细胞周期阻滞。结论子宫内膜癌及子宫内膜增生性病变组织中TET1表达水平明显高于正常对照组织;干扰TET1表达后子宫内膜癌细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降,且出现G1/S期细胞周期阻滞,提示TET1在子宫内膜癌的增殖和转移过程中发挥重要作用。     

沉默miR-6771-3p通过靶向AXIN2/Wnt信号通路调控异位子宫内膜间质细胞增殖和迁移实验研究

目的:探讨微小RNA(miRNA)miR-6771-3p在子宫内膜异位组织中的表达及其通过靶向调控AXIN2对异位子宫内膜间质细胞增殖和迁移的影响。方法:收集因子宫内膜异位症行手术治疗的患者子宫在位内膜组织和异位内膜组织34例，采用实时聚合酶链式反应(RT-qPCR)检测组织中miR-6771-3p的表达水平。将异位子宫内膜间质细胞分为沉默组(转染靶向沉默miR-6771-3p的短发夹RNA载体)和空载体组(转染对照载体)。噻唑蓝(MTT)法分析转染后各组异位子宫内膜间质细胞的增殖能力，细胞划痕愈合实验分析转染后各组异位子宫内膜间质细胞的迁移能力，生物信息学技术和双荧光素酶报告基因实验验证miR-6771-3p和轴抑制蛋白2(AXIN2)的靶向关系，RT-qPCR检测转染后各组细胞AXIN2 mRNA表达水平。Western blot检测转染后各组细胞AXIN2蛋白和Wnt信号通路蛋白的表达水平。结果:子宫异位内膜组织中miR-6771-3p表达显著高于子宫在位内膜组织(P<0.01)。与空载体组异位子宫内膜间质细胞比较，沉默组异位子宫内膜间质细胞增殖能力显著降低(P<0....     

miR-26a靶向HMGA1基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响

目的：探讨miR-26a靶向高迁移率族蛋白1（HMGA1）基因对结肠癌细胞生长、侵袭和迁移的影响,阐明HMGA1基因是否为miR-26a的靶基因。方法：将miR-NC （对照）、miR-26a mimics （模拟物）和miR-26a inhibitor （抑制物）转染人结肠癌SW480细胞作为miR-NC组、miR-26a mimics组和miR-26a inhibitor组。RT-PCR和Western blotting法分别检测各组SW480细胞中HMGA1 mRNA和蛋白表达水平。采用荧光素酶报告基因检测试剂盒检测各组SW480细胞中双荧光素酶活性,以此确定HMGA1是否为miR-26a的靶基因。采用CCK8实验检测各组细胞增殖活力,Transwell小室法检测各组细胞侵袭数和迁移数。结果：HMGA1基因是miR-26a的靶基因。与miR-NC组比较,转染24、48和72 h时miR-26a mimics组SW480细胞增殖活力明显降低（P<0.01）,而miR-26a inhibitor组细胞增殖活力明显升高（P<0.01）。与miR-NC组比较,各时间点miR-26a mimics组和miR-26a mimics+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均降低（P<0.01）,而miR-NC+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均升高（P<0.01）;与miR-26a mimics组比较,各时间点miR-26a mimics+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均升高（P<0.01）;与miR-NC+pcDNA3.1-HMGA1组比较,各时间点miR-26a+pcDNA3.1-HMGA1组细胞增殖活力、细胞侵袭数和细胞迁移数均降低（P<0.01）。结论：HMGA1是miR-26a的靶基因。上调miR-26a表达可抑制人结肠癌SW480细胞增殖,下调miR-26a表达可促进人结肠癌SW480细胞增殖。     

Fhit基因在子宫内膜癌增殖、侵袭中的作用和临床意义

目的探讨Fhit基因在子宫内膜癌中的表达情况,并通过RNA激活上调Fhit表达后观察其对子宫内膜癌细胞增殖和侵袭、迁移的影响。方法收集135例子宫内膜癌组织和40例正常子宫内膜组织,使用免疫组织化学和Western blotting检测Fhit基因的表达情况并分析Fhit表达与临床病理特征的联系。构建Fhit-saRNA表达载体,转染至子宫内膜癌ISK细胞株,建立上调Fhit基因表达的子宫内膜癌细胞株。Western blotting和RT-PCR验证转染效果。通过CCK-8和Transwell试验分析转染前后增殖、迁移、侵袭能力的差异。结果免疫组织化学和Western blotting结果均显示在子宫内膜癌组织中Fhit基因表达与正常子宫内膜组织相比明显降低甚至缺失（P < 0.01）;CCK-8结果显示Fhit基因表达上调后子宫内膜癌细胞生长明显减慢,与未转染组比较差异有统计学意义（P < 0.01）;Transwell试验结果显示Fhit基因表达上调后子宫内膜癌细胞迁移和侵袭能力显著减弱,空白对照组的穿膜细胞数显著高于转染组（P < 0.01）。结论相比于正常子宫内膜组织,Fhit基因在子宫内膜癌组织中表达较低且与临床病理特征相关。在子宫内膜癌细胞株中通过saRNA上调Fhit后,其增殖、迁移、侵袭能力受到明显抑制。     

miR-367通过靶向调控TET2对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响

目的探讨miR-367通过靶向调控10-11异位的甲基胞嘧啶双加氧酶2(TET2)对子宫内膜癌细胞增殖、迁移及侵袭的影响。 方法将人子宫内膜癌HEC-1A细胞分为5组:空白组(NG)、阴性转染组(mimics NC)、miR-367过表达组(miR-367 mimics)、inhibitor NC组、miR-367 inhibitor组。qRT-PCR检测HEC-1A细胞中TET2 mRNA、miR-367表达水平;MTT法检测细胞增殖情况;Transwell法检测细胞侵袭和迁移能力;TargetScan数据库预测miR-367的靶基因并用双荧光素酶报告基因实验加以验证;Western blotting检测TET2、c-myc、cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白表达水平。 结果与NG、mimics NC组相比,miR-367 mimics组HEC-1A细胞TET2 mRNA表达水平下降(P < 0.05),miR-367表达水平升高,24、48 h细胞存活率上升,侵袭、迁移细胞数增加(P < 0.05),TET2蛋白表达水平降低(P < 0.05),MMP-2、MMP-9、c-myc、cyclin D1蛋白表达水平升高(P < 0.05)。与NG、inhibitor NC组相比,miR-367 inhibitor组HEC-1A细胞TET2 mRNA表达水平升高(P < 0.05),miR-367表达水平下降,24、48 h细胞存活率降低,侵袭、迁移细胞数减少,TET2蛋白表达水平升高(P < 0.05),MMP-2、MMP-9、c-myc、cyclin D1蛋白表达水平降低(P < 0.05)。TargetScan数据库预测显示miR-367是TET2潜在靶基因。荧光素酶报告实验结果显示,miR-367 mimics+WT组HEC-1A细胞荧光素酶活性低于miR-367 NC+WT组(P < 0.05),miR-367 NC+MUT组与miR-367 mimics+MUT组荧光素酶活性差异无统计学意义(P>0.05)。 结论miR-367过表达可能通过靶向抑制TET2促进子宫内膜癌HEC-1A细胞增殖、迁移和侵袭。     

敲低ACTL8基因对子宫内膜癌细胞增殖与迁移的影响

目的探讨采用携带shRNA特异序列的载体转染子宫内膜癌细胞敲低肌动蛋白样蛋白8(ACTL8)基因对细胞增殖、侵袭迁移能力的影响及其机制。方法选取人子宫内膜癌Ishikawa细胞株进行实验研究,以携带shRNA特异序列的载体及空载质粒分别转染Ishikawa细胞株,形成敲低ACTL8基因的shACTL8组和以空载质粒转染的对照组。荧光定量聚合酶链反应(PCR)检测两组细胞中ACTL8 mRNA表达,Western blot法检测两组细胞ACTL8蛋白表达,Transwell迁移和侵袭实验分析Ishikawa细胞侵袭和迁移能力,CCK8细胞增殖实验及平板克隆实验检测细胞的增殖情况,Western blot法检测两组细胞的E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)、P21蛋白的表达情况。结果shACTL8组的ACTL8 mRNA、ACTL8蛋白相对表达强度均低于对照组(P＜0.05);shACTL8组的Ishikawa细胞侵袭、迁移水平均低于对照组(P＜0.05);在细胞培养后1天、2天、3天,shACTL8组的Ishikawa细胞数目测定OD值显著低于对照组(P＜0.05);平板克隆实验培养3天,可见shACTL8组培养皿中细胞生长数目明显少于对照组(P＜0.05);shACTL8组E-cadherin蛋白、P21蛋白表达强度高于对照组(P＜0.05);shACTL8组N-cadherin蛋白、MMP-9蛋白表达强度低于对照组(P＜0.05)。结论敲低ACTL8基因抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞增殖、迁移、侵袭。     

高迁移率族蛋白A1在子宫内膜癌中的表达及意义

目的 探讨高迁移率族蛋白A1(high mobility group protein A1,HMGA1)在子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa以及子宫内膜癌组织、正常子宫内膜组织中的表达及意义.方法 采用半定量RT-PCR和Western Blot检测子宫内膜癌细胞系AN3CA、Ecc-1、Ishikawa以及21例子宫内膜癌组织(研究组)、18例正常子宫内膜组织(对照组)中HMGA1-mRNA与HMGA1蛋白的表达水平.结果 HM-GA1-mRNA与HMGA1蛋白在子宫内膜癌细胞系AN3CA、ECC-1、Ishikawa以及两组子宫内膜组织标本中均有不同程度的表达,研究组中HMGA1-mKNA与HMGA1蛋白的平均表达水平显著高于对照组(P＜0.05),并与手术一病理分期有关(P＜0.05),与子宫内膜癌组织的分化程度无关(P＞0.05).结论 HMGA1的过度表达可能参与了子宫内膜癌的发生和发展,在子宫内膜癌细胞的增殖与侵袭中可能发挥重要作用.     

miR-497-5p靶向VEGFA抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移和上皮间质转化的实验研究

目的探讨miR-497-5p对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移和上皮间质转化（EMT）的影响及其机制。方法将体外培养的Ishikawa细胞分为miR-NC组、miR-497-5p组、pLV-VEGFA组和miR-497-5p+VEGFA组,采用Real time PCR检测miR-497-5p和血管内皮生长因子A（VEGFA）mRNA的表达,双荧光素酶报告基因实验检测miR-497-5p和VEGFA的靶向关系,Western blot检测VEGFA蛋白和EMT相关蛋白神经型钙黏蛋白（N-cadherin）、波形蛋白（Vimentin）和E-钙黏蛋白（E-cadherin）的表达,Transwell小室实验检测Ishikawa细胞的侵袭和迁移。结果转染miR-497-5p mimics可升高Ishikawa细胞中miR-497-5p表达,降低VEGFA mRNA表达（P<0.05）,VEGFA是miR-497-5p的靶基因。与miR-NC组比较,miR-497-5p组细胞中VEGFA、Vimentin和E-cadherin蛋白的表达水平、侵袭细胞数和迁移细胞数均明显降低,而N-cadherin蛋白表达升高（P<0.05）;与pLV-VEGFA组比较,miR-497-5p+VEGFA组细胞中VEGFA、Vimentin和E-cadherin蛋白的表达水平以及侵袭、迁移细胞数量均明显降低,而N-cadherin蛋白表达明显升高（P<0.05）。结论 miR-497-5p可靶向VEGFA抑制子宫内膜癌Ishikawa细胞的侵袭、迁移和上皮间质转化。     

LINC00665通过let-7i/HMGA1促进肝癌细胞增殖与侵袭的机制研究

目的 探讨LINC00665通过let-7i/HMGA1对肝癌细胞增殖与侵袭能力的影响。方法 通过qRT-PCR分析LINC00665在肝癌组织中的表达情况。选择人肝癌细胞Hep3B和Huh7细胞，分别将其分为siRNA-NC组、siRNA-LINC00665组、let-7i mimics-NC组、let-7i mimics组进行转染；采用qRT-PCR和Western blot检测各组的HMGA1 mRNA和蛋白水平；CCK8法检测各组细胞的增殖活力；划痕实验检测各组细胞的划痕愈合率；Transwell实验检测各组细胞的侵袭数量。结果 LINC00665在肝癌组织中的表达量显著高于正常组织。hep3B和Huh7细胞转染48 h后，与si-NC组相比，si-LINC00665组细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降，HMGA1的mRNA和蛋白水平下降，let-7i的表达水平升高；与let-7i mimics-NC组相比，let-7i mimics组细胞的增殖、迁移和侵袭能力下降，HMGA1的mRNA和蛋白水平下降。结论 LINC00665通过let-7i/HMGA1途径，在肝癌进展中调控肿瘤增...     

miR-135b通过靶向FOXO1促进子宫内膜癌细胞的增殖

目的探讨miR-135b在子宫内膜癌中的表达及对子宫内膜癌细胞增殖的作用的机制。方法运用RT-PCR的方法检测22 对子宫内膜癌组织及相应的癌旁组织中的miR-135b 和FOXO1 的表达;运用RT-PCR 的方法检测JEC、Ishikawa、HEC-1-B、 RL-952这4种子宫内膜癌细胞株中miR-135b和FOXO1的表达。分别转染miR-135b的模拟物抑制物于子宫内膜癌细胞株,通 过RT-PCR检测转染的效果,通过MTT增殖试验检测对子宫内膜癌细胞增殖的影响。通过RT-PCR的方法检测FOXO1 mRNA 的变化,Western blotting 检测在FOXO1 蛋白的变化。结果miR-135b 在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达增高（P< 0.05）, FOXO1在子宫内膜癌组织中较对应的癌旁组织表达降低（P<0.05）。荧光定量PCR显示子宫内膜癌细胞中miR-135b与 FOXO1表达趋势成负相关。miR-135b能促进子宫内膜癌细胞增殖（P<0.05）。上调miR-135b能够降低FOXO1 mRNA和蛋白 的表达（P<0.05）,下调miR-135b能够提高FOXO1 mRNA和蛋白的表达（P<0.05）。结论miR-135b在子宫内膜癌的发生发展 中发挥重要的作用,其部分分子机制可能是通过调控靶基因FOXO1而发挥作用。     

Rac1小干扰RNA对胃肠道肿瘤细胞恶性生物学行为的影响

目的 观察Rac1小干扰RNA(Rac1 siRNA)对胃肠道肿瘤细胞增殖、迁移、侵袭和凋亡的影响.方法 Rac1 siRNA 在lipofectamineTM 2000介导下转染胃癌SGC803细胞和结直肠癌Lovo细胞, 转染48 h后,采用半定量RT-PCR和Western blot技术分别检测Rac1 mRNA及蛋白的表达;Cell Counting Kit-8检测Rac1 siRNA转染细胞的增殖变化;损伤刮擦实验和体外侵袭实验(Transwell小室)分别检测转染细胞株的迁移与侵袭能力;用流式细胞仪检测转染细胞株的凋亡.结果 成功转染Rac1 siRNA的肿瘤细胞,RT-PCR及Western blot显示Rac1 mRNA和蛋白表达在相应的肿瘤细胞中都明显下降;Rac1 siRNA对肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭均有显著的抑制作用并能促进肿瘤细胞的凋亡.结论 Rac1与胃肠道肿瘤细胞的恶性生物学行为密切相关.Rac1 siRNA能够部分逆转胃癌细胞SGC803和肠癌细胞Lovo的恶性生物学行为.     

miR-122通过AXL/HIF-1α通路抑制子宫内膜癌细胞增殖和上皮间质转化

【摘要】 目的 探讨miR-122对子宫内膜癌细胞（RL-952）增殖、上皮间质转化(EMT)及受体酪氨酸激酶(AXL)/缺氧诱导因-1α(HIF-1α)信号通路的影响。方法 体外培养人子宫内膜癌细胞株RL-952,将细胞分为空白对照组(仅用培养基)、阴性对照组(转染miR-122 NC)、miR-122 mimics组(转染miR-122 mimics),采用实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测各组细胞miR-122水平,利用人胆囊收缩素/缩胆囊素八肽(CCK-8)试剂盒检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡,Transwell实验检测细胞迁移和侵袭能力,蛋白印迹（WB）法检测AXL、HIF-1α蛋白以及EMT相关蛋白E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin的表达变化。结果 与空白对照组、阴性对照组相比,miR-122 mimics组RL-952细胞转染后48小时细胞增殖能力、细胞迁移数、细胞侵袭数、AXL、HIF-1α、N-cadherin和Vimentin蛋白表达均显著下降（P＜0.05）,E-cadherin、α-catenin蛋白表达、细胞凋亡率均明显升高（P＜0.05）,空白对照组与阴性对照组比较,细胞增殖能力、细胞迁移数、细胞侵袭数、细胞凋亡率、细胞AXL、HIF-1α、E-cadherin、α-catenin、N-cadherin和Vimentin蛋白表达差异均无统计学意义(P＞0.05)。结论 过表达miR-122可抑制子宫内膜癌细胞增殖、迁移、侵袭及上皮间质转化,促进细胞凋亡,可能是通过抑制AXL/HIF-1α通路而实现。     

Tie-2基因表达与子宫内膜癌生物学行为的关系

目的：通过研究50例子宫内膜癌及癌旁正常子宫内膜中Tie-2的表达,探讨Tie-2与子宫内膜癌的侵袭及转移等生物学行为的关系。方法：采用RT—PCR、蛋白质印迹技术对50例子宫内膜癌组织及正常组织的Tie-2mRNA、蛋白质行半定量检测;采用sP法免疫组化技术研究Tie-2的亚细胞定位。结果：子宫内膜癌中Tie-2mRNA及蛋白质表达水平明显高于正常内膜,且与子宫内膜癌肌层侵袭深度及淋巴结转移有关;低分化癌及未分化癌Tie。2的表达明显高于中、高分化癌,并富集于血管内皮及内膜癌细胞胞浆内。结论：子宫内膜癌及血管内皮细胞中均高表达Tie-2,且其表达与子宫内膜癌组织学分化呈正相关,因此Tie-2异常表达可能参与子宫内膜癌的侵袭及转移过程。     

肿瘤坏死因子受体相关因子6高表达对子宫内膜癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响

目的:探究肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)高表达对子宫内膜癌细胞侵袭、迁移及上皮间质转化的影响。方法:将Ishikawa细胞随机分为三组：对照组(子宫内膜癌细胞Ishikawa未转染)、NC组(子宫内膜癌细胞Ishikawa转染空载质粒)和TRAF6高表达组(子宫内膜癌细胞Ishikawa转染TRAF6过表达质粒);实时荧光定量PCR(RT-qPCR)和蛋白免疫印迹(WB)检测TRAF6 mRNA以及蛋白表达情况;Transwell实验、划痕实验以及裸鼠移植瘤实验检测细胞侵袭、迁移能力;WB检测上皮间质转化标志蛋白E型钙黏蛋白(E-cadherin)、闭合蛋白(Occludin)、N型钙黏蛋白(N-cadherin)、波形蛋白(Vimentin)表达水平。结果:相较于人子宫内膜上皮细胞,子宫内膜癌细胞Ishikawa中TRAF6 mRNA和蛋白表达显著降低(均P<0.05)。相较于对照组和NC组,TRAF6高表达组的TRAF6 mRNA水平和蛋白表达显著升高,细胞侵袭、迁移能力和Vimentin、N-cadherin蛋白表达显著降低,Occludin、E-cadherin...     

miR-490-3p调控SW1990胰腺癌细胞上皮间充质转化

  目的  研究miR-490-3p在分子水平上通过HMGA2蛋白对SW1990细胞上皮间充质转化的影响。  方法  通过实时荧光定量PCR法（RT-qPCR）检测正常胰腺导管上皮细胞HPDE和人胰腺癌细胞SW1990中miR-490-3p的表达。通过转染质粒[miR-490-3p阻遏物（inhibitor）和miR-490-3p模拟物（mimic）以及各自的阴性对照质粒]调控miR-490-3p在SW1990细胞中的表达并通过RT-qPCR法验证转染效率。转染48 h后，通过CCK8检测、划痕法、Transwell小室检测，流式细胞仪检测等分别检测细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭等恶性生物学特征的影响。通过Western blot检测细胞中上皮间充质转化相关蛋白E-cadherin和N-cadherin的蛋白表达水平。同时，用数据库预测miR-490-3p及其靶基因HMGA2的靶向关系，并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证，通过Western blot检测细胞中HMGA2的蛋白表达水平。  结果  （1）与HPDE正常细胞相比，SW1990癌细胞中miR-490-3p表达水平明显降低（P = 0.215）；（2）miR-490-3p 上调后，SW1990细胞的凋亡率显著高于对照组（P < 0.0001），而细胞增殖、迁移和侵袭能力显著低于对照组（P < 0.0001）。miR-490-3p 下调后，SW1990细胞的凋亡率显著低于对照组（P < 0.0001），而细胞增殖、迁移和侵袭能力显著高于对照组（P < 0.0001）；（3）miR-490-3p 上调后，SW1990细胞中的N-cadherin表达量显著高于对照组（P < 0.0001），而E-cadherin的表达水平显著低于对照组（P < 0.0001）；miR-490-3p 下调后，SW1990细胞中的N-cadherin表达量显著低于对照组（P < 0.0001），而E-cadherin的表达水平显著高于对照组（P < 0.0001）；（4）HMGA2是miR-490-3p的靶向基因。  结论  miR-490-3p可通过靶向HMGA2抑制SW1990胰腺癌细胞EMT，从而影响胰腺癌的的发生发展进程，揭示HMGA2和miR-490-3p可能为胰腺癌诊断和治疗的靶点。