苦参碱对多发性骨髓瘤细胞的体外作用机制研究

目的:阐明苦参碱对多发性骨髓瘤(MM)细胞的作用和内在机理。方法:MTT法检测苦参碱对多发性骨髓瘤细胞株RPMI8226和多发性骨髓瘤原代细胞增殖的影响;根据中效原理分析苦参碱联合亚砷酸对RPMI8226细胞株的联合作用;应用DAPI染色检测细胞凋亡。结果:M1TT比色法检测结果显示,苦参碱对RPMI8226细胞及MM原代细胞均有生长抑制作用,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。体外联合亚砷酸作用RPMI8226细胞抑制率>50%时联合指数(CI)<1。DAPI荧光染色,荧光显微镜下观察苦参碱以终浓度2.0g/L作用于RPMI8226细胞12h后可见明显的凋亡小体出现。结论:苦参碱对RPMI8226细胞和MM原代细胞均有生长抑制作用,体外联合亚砷酸作用MM细胞株RPMI8226细胞,抑制率>50%时呈协同作用。苦参碱通过诱导细胞凋亡抑制RPMI8226细胞的增殖。     

激发型抗CD40单抗介导恶性肿瘤细胞凋亡及其机制探讨

目的 探讨激发型CD40单克隆抗体对人B淋巴细胞恶性肿瘤的生物学效应及其机制。方法 将激发型CD40单克隆抗体5C11加入肿瘤细胞的体外培养体系，采用细胞计数，流式细胞仪等方法分析单克隆抗体5C11对不同肿瘤细胞株的作用。结果 5C11能引起CD40表达的多发性骨髓瘤（MM）细胞株XG2和恶性淋巴瘤细胞株Daudi发生同型聚集，抑制其生长并介导凋亡；CD40分子介导的XG2和Daudi细胞凋亡作用与可溶性TNF产生无关。结论 激发型CD40单克隆抗体通过诱导B细胞恶性肿瘤细胞的凋亡。抑制肿瘤细胞的体外生长。     

拓扑替康治疗多发性骨髓瘤的实验研究

目的研究抗肿瘤植物药拓扑替康（TPT）对多发性骨髓瘤（MM）细胞株的作用,为其临床治疗MM提供实验依据。方法应用MTT等方法,检测TPT对多发性骨髓瘤细胞株增殖、凋亡及周期的影响。结果不同剂量TPT作用RPMI8226细胞48h,其半数抑制浓度为57ng／mL。不同浓度梯度TPT作用于RPMI8226细胞48h,其早期凋亡细胞百分数均分别高于空白对照组。TPT可使RPMI8226细胞阻滞于S期,减少或停止向G2／M期转化,表现为典型的细胞S期捕获。结论（1）TPT可直接抑制MM细胞株的生长,并促进其凋亡,且呈时间和浓度依赖性。（2）TPT可阻滞大部MM细胞株于S期。     

TNFα和β2-MG联合检测在多发性骨髓瘤中的应用及临床意义

目的 探讨多发性骨髓瘤患者中肿瘤坏死因子(TNFα)、β2-微球蛋白(β2-MG)联合检测的临床应用价值.方法 本院38例经血液病诊断标准确诊的多发性骨髓瘤(MM)患者,采用放射免疫分析法联合测定其TNFα和β2-MG水平并进行分析,同时随机选取30名健康体检组最为对照者.结果 ①初诊MM息者(14例)及复发患者(16例)的TNFα和β2-MG水平均显著高于平稳期MM息者和对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).②Ⅲ期MM息者的TNFα和β2-MG水平均显著高于Ⅱ期患者,Ⅱ期患者又显著高于Ⅰ期患者,差异均有统计学意义(P＜0.01);Ⅲb期MM息者的TNFα水平显著高于Ⅲa期,差异有统计学意义(P＜0.01),而β2MG水平无统计学差异(P＞0.05);Ⅱb期MM患者的β2-MG水平显著高于Ⅱa期,差异有统计学意义(P＜0.01),而TNFα水平无统计学差异(P＞0.05).结论 TNFα和β2-MG联合检测是MM临床分期、预后及疗效判断的有效指标,能指导临床开展有效的诊疗工作.     

TNFα和β2-MG联合检测在多发性骨髓瘤中的应用及临床意义

目的 探讨多发性骨髓瘤患者中肿瘤坏死因子(TNFα)、β2-微球蛋白(β2-MG)联合检测的临床应用价值.方法 本院38例经血液病诊断标准确诊的多发性骨髓瘤(MM)患者,采用放射免疫分析法联合测定其TNFα和β2-MG水平并进行分析,同时随机选取30名健康体检组最为对照者.结果 ①初诊MM息者(14例)及复发患者(16例)的TNFα和β2-MG水平均显著高于平稳期MM息者和对照组,差异有统计学意义(P＜0.01).②Ⅲ期MM息者的TNFα和β2-MG水平均显著高于Ⅱ期患者,Ⅱ期患者又显著高于Ⅰ期患者,差异均有统计学意义(P＜0.01);Ⅲb期MM息者的TNFα水平显著高于Ⅲa期,差异有统计学意义(P＜0.01),而β2MG水平无统计学差异(P＞0.05);Ⅱb期MM患者的β2-MG水平显著高于Ⅱa期,差异有统计学意义(P＜0.01),而TNFα水平无统计学差异(P＞0.05).结论 TNFα和β2-MG联合检测是MM临床分期、预后及疗效判断的有效指标,能指导临床开展有效的诊疗工作.     

多发性骨髓瘤细胞体内生长特性的实验研究

目的:为建立人多发性骨髓瘤(Multiple Myeloma,MM)荷瘤SCID小鼠模型,研究人多发性骨髓瘤在SCID小鼠体内生长的特性。方法:体外培养IL-6依赖的人MM细胞株XG7,接种于SCID小鼠皮下;观察肿瘤生长状态,通过流式细胞技术监测肿瘤细胞表型。结果:成瘤后的肿瘤细胞CD28、CD138等分子的表达与接种前没有明显变化。结论:通过研究人MM细胞的体内生长特性可为MM的治疗奠定良好的基础。     

骨髓瘤冻融物致敏树突状细胞诱导特异性细胞免疫反应

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者肿瘤冻融物致敏的树突状细胞(DC)诱导T细胞对不同靶细胞产生的细胞毒作用.方法GM-CSF、IL-4和TNF-α体外联合诱导生成MM患者自身DC,患者骨髓瘤冻融物冲击致敏DC诱导自身淋巴细胞;MTT法检测致敏DC对不同靶细胞(患者骨髓瘤细胞、K562细胞株)的杀伤率及其与效靶比的关系.结果当效靶比为20:1时,骨髓瘤细胞冻融物致敏的DC加IL-2诱导的自身T细胞对骨髓瘤细胞有明显的溶解作用,而它对K562细胞则无明显影响.结论MM患者肿瘤冻融物致敏的DC能有效地诱导自身T细胞对其骨髓瘤细胞的特异性杀伤作用.     

骨髓瘤冻融物致敏树突状细胞诱导特异性细胞免疫反应

目的研究多发性骨髓瘤(MM)患者肿瘤冻融物致敏的树突状细胞(DC)诱导T细胞对不同靶细胞产生的细胞毒作用。方法GM-CSF、IL4和TNF-α体外联合诱导生成MM患者自身DC，患者骨髓瘤冻融物冲击致敏DC诱导自身淋巴细胞；MTT法检测致敏DC对不同靶细胞(患者骨髓瘤细胞、K562细胞株)的杀伤率及其与效靶比的关系。结果当效靶比为20：1时，骨髓瘤细胞冻融物致敏的DC加IL-2诱导的自身T细胞对骨髓瘤细胞有明显的溶解作用，而它对K562细胞则无明显影响。结论MM患者肿瘤冻融物致敏的DC能有效地诱导自身T细胞对其骨髓瘤细胞的特异性杀伤作用。     

多发性骨髓瘤血清β2微球蛋白检测的临床意义

目的探讨多发性骨髓瘤(multiple myeloma,MM)患者血清β2微球蛋白(β2—MG)检测的临床意义。方法采用放免法检测34例多发性骨髓瘤患者血清β2—MG。结果正常对照组与多发性骨髓瘤组、多发性骨髓瘤组Ⅰ期与Ⅱ期、Ⅱ期与Ⅲ期以及化疗后完全缓解组或部分缓解组(CR或PR)与化疗前患者β2—MG相比,后组均明显高于前组,差异有统计学意义。结论血清β2—MG可作为患者分期、预后及疗效判断的辅助标准。     

葫芦素E抑制多发性骨髓瘤细胞增殖及与阿霉素的协同效应?

目的：研究葫芦素 E 对人多发性骨髓瘤细胞增殖和凋亡的影响,并观察葫芦素 E 与阿霉素的协同效应。方法采用 CCK-8测定葫芦素 E 对4种多发性骨髓瘤细胞 MM1.S、MM1.R、U266和 RPMI8226的半数生长抑制率(GI50),并通过 CalcuSyn 协同效应分析软件,计算药物合用指数(CI),评价葫芦素 E 与阿霉素协同抗多发性骨髓瘤作用;流式细胞术检测葫芦素 E 对 MM1.S、MM1.R 的细胞周期、线粒体膜电位和细胞凋亡的影响;Western blot 检测凋亡相关蛋白 Caspase-3和 PARP 的变化,以及葫芦素 E 对 IL-10刺激的 RPMI8226细胞STAT3蛋白磷酸化的抑制作用。结果葫芦素 E 对4种多发性骨髓瘤细胞的 GI50均在(12.3~161.7)nM 范围内;葫芦素 E 导致多发性骨髓瘤细胞的 SubG1期细胞比例、凋亡细胞比例和线粒体膜电位下降细胞比例均明显增加,并出现凋亡相关的活化蛋白如 Cleaved Caspase-3和 Cleaved-PARP。葫芦素 E 能有效抑制 IL-10诱导的RPMI8226细胞 STAT3磷酸化,并能与阿霉素协同抗多发性骨髓瘤。结论葫芦素 E 通过抑制 STAT3蛋白磷酸化,诱导多发性骨髓瘤细胞凋亡,并能协同阿霉素抗多发性骨髓瘤。     

血清中巨噬细胞炎症蛋白水平在判断多发性骨髓瘤骨病中的临床意义

【目的】探讨多发性骨髓瘤（MM）患者血清中巨噬细胞炎症蛋白（MIP）水平与多发性骨髓瘤骨病（MBD）之间的关系。【方法】采用酶联免疫吸附法检测了42例初诊MM病人（观察组）以及25例健康体检者（对照组）外周血清中MIP-1α及MIP-1β的水平、其下游信号传导因子可溶性核转录因子-κB受体活化因子的配体（sRANKL）和骨保护素（OPG）水平、以及破骨细胞代谢指标抗酒石酸酸性磷酸酶-5b（TRAP-5b）与Ⅰ型胶原蛋白羧基末端交联肽(CTP-Ⅰ)的水平,同时根据全身X光摄片判断MM患者骨损害情况,分析MIP-1α及MIP-1β与sRANKL /OPG比值、TRAP-5b 和CTP-Ⅰ 及MBD之间的相关性。【结果】观察组患者血清中MIP-1α及MIP-1β中位水平为125.18 ng/mL和134.35ng/mL,均明显高于对照组（p<0.05）;将观察组患者按X光结果分为有MBD组（29例）和无MBD组（13例）发现：MBD组的MIP-1α及MIP-1β水平高于无MBD组（p<0.05）,且MIP-1α及MIP-1β水平与骨病分级之间均存在相关性（γ分别为0.381和0.429, p<0.05）;进一步分析发现：MIP-1α及MIP-1β与sRANKL /OPG比值(γ分别为0.641和0.451, p<0.05)、TRAP-5b(γ分别为0.547和0.529,p<0.05)和CTP-Ⅰ(γ值分别为0.476和0.512,p<0.05)水平之间均存在相关性。【结论】MM患者血清中MIP-1α及MIP-1β水平不仅升高,还与MBD分级有关,它可通过调节sRANKL /OPG比值和增加破骨细胞代谢来引起MBD,所以MIP-1α及MIP-1β水平可作为判断MBD的一个较好的参考指标。     

IL-12在牙龈卟啉单胞菌脂多糖促泡沫细胞形成过程中的作用

目的观察白细胞介素-12（IL-12）预刺激在牙龈卟啉单胞菌脂多糖（P．gingivalis LPS）促泡沫细胞形成过程中对细胞因子的影响。方法用氧化低密度脂蛋白（oxLDL）将人THP-1单核细胞来源的巨噬细胞诱导48h形成泡沫细胞。在巨噬细胞和泡沫细胞培养液中分别加入IL-12作用2h后,巨噬细胞培养液中加入oxLDL和P．gingivalisLPS,泡沫细胞培养液中加入P．gingivalis LPS。使用ELISA法检测培养液上清中IL-1β和肿瘤坏死因子-α（TNF-α）的水平,实时定量PCR检测细胞内IL-1β、IL-10、IL-12和IL-18mRNA的转录水平。结果在泡沫细胞形成过程中,IL-12预刺激可以降低培养液上清内TNF-α水平。降低细胞内IL-10和IL-12mRNA转录水平;泡沫细胞受P．gingivalisLPS刺激过程中,IL-12预刺激可以增加培养液上清IL—1β水平。减少细胞内IL-18mRNA的转录水平,增加IL-10mRNA的转录水平。结论IL-12预刺激影响P．gingivalisLPS促泡沫细胞形成过程中炎症细胞因子的转录和分泌。     

miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子表达的调控作用

目的探讨miR-20b对小鼠RAW264．7细胞血管内皮生长因子（VEGF）表达的影响。方法以不同浓度（1、10、50、100、200ng／mL）TNF-α刺激小鼠RAW264．7细胞24h,ELISA法检测上清中VEGF的分泌情况。TNF-α（50ng／mL）刺激RAW264．7细胞6h,Real-TimePCR检测miR．20b和VEGFmRNA的表达。使用PicTar算法预测VEGF是否为miR-20b的调控靶点。利用脂质体Lipofectamine2000介导miR-20b模拟物及其对照转染RAW264．7细胞,用TNF-α（100ng／mL）刺激24h,ELISA法检测VEGF的产生情况。结果TNF-α能够诱导小鼠RAW264．7细胞分泌VEGF,50-100ng／mLTNF-α．是最适合的刺激浓度;50ng／mLTNF-α刺激RAW264．7细胞6h,VEGFmRNA的相对表达量升高至对照组的（1．60±0．85）倍,而miR-20b的相对表达量降至对照组（0．55±0．33）倍。PicTar算法表明,小鼠VEGF的3’-UTR区含有miR-20b种子区域AAAGUGC的互补序列GCACUUU。转染miR-20b模拟物后,TNF-α诱导的VEGF蛋白表达升高被完全抑制（P〈0．01）,但转染miR-20b模拟物对照对VEGF的产生无明显影响（P〉0．05）。结论小鼠RAW264．7细胞中miR-20b负性调节VEGF的表达。     

雌马酚对大肠癌细胞增殖的影响

目的：检测大豆异黄酮代谢产物雌马酚对大肠癌细胞增殖的影响,并探讨其分子作用机制。方法：培养大肠癌细胞 DLD1、HCT15、COLO205、LOVO和SW480,用3-(4,5-二甲基噻唑-2)-2,5-二苯基四氮唑溴盐［3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide,MTT］法检测雌马酚对大肠癌细胞增殖的影响,用逆转录PCR和蛋白免疫印迹法分别检测雌激素受体和核因子红系2相关因子2［nuclear factor (erythroid derived 2)-like 2,Nrf2］表达状况。用MTT法检测雌激素受体抑制剂和激动剂对大肠癌细胞增殖的影响。结果：DLD1、HCT15、COLO205、LOVO和SW480均表达雌激素受体（estrogen receptor, ER）β,但只有DLD1和HCT15有ERα弱表达。MTT试验显示不同剂量雌马酚（0、0.5、1、5、10 μmol/L）不仅能够显著抑制ERα和ERβ均表达的大肠癌细胞HCT-15的增生,且呈现明显的剂量效应关系,而且能够抑制只有ERβ表达的大肠癌细胞LOVO和SW480的增生,且呈现明显的剂量效应关系。此外,逆转录PCR发现不同剂量雌马酚刺激后,HCT-15的雌激素受体ERα和ERβ表达明显增加,呈剂量效应关系。蛋白免疫印迹法进一步证实雌激素受体ERα和ERβ蛋白表达随雌马酚剂量的增加而增加,蛋白免疫印迹法发现Nrf2随干预剂量的增加而表达明显增加。采用ERβ激动剂、雌激素受体抑制剂和特异性雌激素受体ERα激动剂对SW480、LOVO、HCT-15细胞刺激后,只发现不同剂量ERβ激动剂能够显著抑制大肠癌细胞SW480、LOVO、HCT-15的增生,且呈明显的剂量效应关系,但是,雌激素受体抑制剂和特异性雌激素受体ERα激动剂对SW480、LOVO和HCT-15细胞没有呈现显著的影响。结论：雌马酚能够通过雌激素样作用和抗氧化活性抑制大肠癌细胞的增殖。     

蛇床子素对小鼠胚胎长骨雌激素受体α、β蛋白表达的影响

【目的】研究蛇床子素对小鼠胚胎长骨雌激素受体α（estrogen receptorα,ERα）和骨雌激素受体β（estrogen receptorβ,ERβ）蛋白表达的影响,探讨其作用于骨组织的调控机制。【方法】取16 d胎龄雌性小鼠前肢尺骨,置BGJb培养基中孵育,经不同浓度蛇床子素（1×10^-4、1×10^-5、1×10^-6、1×10^-7mol/L）和雌酚酮（1×10^-6mol/L）作用48 h后,采用免疫组织化学染色方法观察ERα、ERβ在小鼠尺骨骺板静止区、增殖区和肥大区中的定位和表达情况,并通过图像分析系统测定骺板各区免疫反应阳性细胞数和阳性细胞面积。【结果】与对照组相比较,各浓度蛇床子素和雌酚酮组均能显著上调软骨骺板静止区、增殖区和肥大区ERα、ERβ蛋白的表达水平（P〈0.01）。在1×10^-7-1×10^-5mol/L区间内,随着蛇床子素浓度的升高,各区ERα、ERβ蛋白的表达水平显著升高（P〈0.01）。除1×10^-5mol/L组外,其它各浓度蛇床子素对ERα、ERβ蛋白的调控作用明显弱于雌酚酮组（P〈0.05）,1×10^-5mol/L蛇床子素组作用与雌酚酮组无统计学差异。【结论】蛇床子素对骨组织的作用可能与其上调长骨骺板中ERα及ERβ表达有关。     

ERβ在结肠癌细胞株的表达及他莫昔芬对结肠癌细胞株体外抑制实验

目的：探讨ERβ在结肠癌细胞株Lovo、HT-29的表达和他莫昔（tamoxifen,TAM）对结肠癌细胞株抑制作用.方法：体外培养人结肠癌细胞株Lovo、HT-29,用细胞爬片免疫组化、RT-PCR、Western blot方法检测ER α、ERβ表达,用MTT法检测不同浓度的17β-E2、TAM、5-Fu、TAM＋5-Fu、TAM对结肠癌细胞株的生长影响作用.流式细胞仪（FCM）测定细胞凋亡率.结果：①在结肠癌细胞株Lovo、HT29中稳定表达ERβ而不表达ER α ②TAM、5-Fu能抑制Lovo、HT29细胞株的增殖 ③TAM协同5-FU对Lovo、HT29细胞株有促使细胞凋亡的作用.结论：①结肠癌细胞株Lovo表达ERβ而不表达ER α ②TAM以ERβ为靶点抑制Lovo细胞株的增殖 ③TAM协同5-FU抑制Lovo细胞株的增殖,TAM协同5-FU对Lovo、HT29细胞株促细胞凋亡的作用.     

缺氧诱导滋养细胞转化生长因子3β表达及机理的实验研究

【目的】探讨低氧对滋养细胞转化生长因子-3β(TGF- 3β)的表达的诱导作用,以及缺氧诱导因子1(HIF -1)对TGF -3β表达的调控作用。【方法】滋养细胞来源的BeWo细胞系分4组培养:正常对照组、缺氧组、HIF- 1α反义组和HIF -1α正义组。HIF -1α反义组和HIF -1α正义组先加入HIF -1α寡核甘酸,常氧条件培养6h ,再低氧条件培养4 8h。4 8h后,收集细胞,实时定量PCR方法检测TGF- 3β和HIF -1αmRNA表达水平,Westernblot方法检测TGF- 3β和HIF 1α蛋白表达水平。【结果】与正常对照组相比,缺氧组的HIF -1αmRNA和蛋白表达增加,TGF- 3βmRNA和蛋白表达也升高;与HIF- 1α正义组比较,HIF- 1α反义组HIF -1αmRNA和蛋白表达降低,TGF- 3βmRNA和蛋白表达也下降。【结论】缺氧可以诱导滋养细胞TGF- 3β表达,并且缺氧对TGF- 3β表达的诱导作用可能通过HIF 1调控。     

重组人穿孔素协同TNF-α对HIV感染CD4^＋细胞的影响

目的观察重组人穿孔素协同TNF-α对HIV感染CD4^＋细胞的影响。方法HIV-1SF33感染MT4细胞，加入重组人穿孔素和TNF-α作用24h。倒置显微镜观察细胞形态，单细胞凝胶电泳技术观察DNA损伤情况，吖啶橙／溴乙啶双荧光染色和原位（缺口）末端标记法检测细胞凋亡。结果HIV感染MT4细胞形态尚好，仅出现荧光团，可见个别凋亡细胞；单纯TNF-α作用后，胞浆内可见少量颗粒，部分细胞核出现弥散和微量的彗星拖尾现象，凋亡细胞较正常对照组增多；穿孔素和TNF-α协同作用后，部分细胞体积变小，细胞内颗粒增多，明显的彗星拖尾现象，凋亡细胞数增多。结论穿孔素协同作用可明显增强TNF-α致HIV感染CD4^＋细胞的凋亡。     

低剂量辐射增强荷瘤小鼠腹腔巨噬细胞的IL-1βDTNFαmRNA转录水平

目的：探讨低剂量辐射（LDR）对荷瘤机体巨噬细胞（Mφ）内白细胞介素I（IL—1）和肿瘤坏死因子（TNF）mRNA转录水平的影响。方法：采用C(57)BL／6J小鼠右后肢腓肠肌内接种Lewis肺癌细胞做为实验动物模型，在荷瘤后10d给予75mGyX射线全身照射，照射后18h冲洗腹腔，用贴壁法分离MФ，应用原位杂交组织化学方法检测MФ内IL—1β和TNFa的mRNA转录水平，结果用病理图像密度扫描仪测定的平均密度值（MA）表示。结果：照射组小鼠的MФ内阳性颗粒数明显增多，染色加深；照射组IL—1β和TNFα阳性颗粒的MA值分别为：0．285士0．005、0．272士0·012，假照组分别为：0．216土0．015、0．204士0．005，二者相比具有显著的差异（P＜0．01）。结论:LDR可明显增高荷瘤小鼠MФ的IL—1β和TNFαmRNA转录水平，促进二者的直接抑瘤和免疫调节效应，从而增强了荷瘤机体的免疫功能和杀灭肿瘤细胞的功能。     

神经生长因子对子宫腺肌病基质细胞生存率及雌激素受体α表达的影响

目的研究神经生长因子（NGF）对子宫腺肌病患者离体培养在位子宫内膜基质细胞雌激素受体仅表达的影响。方法用10ng／ml、50ng／ml和100ng／ml的神经生长因子分别对体外原代培养人子宫内膜细胞进行干预,用MTT法测定内膜基质细胞生长的增殖情况,用Westen—blotting测定50ng／mlNGF对病例组基质细胞雌激素受体仪表达的变化。结果50ng／ml的NGF可促进子宫内膜基质细胞增殖,细胞存活率为82．61％,比其他浓度NGF显著升高（P〈0．05）;50ng／mlNGF对病例组和对照组不同细胞雌激素受体表达有影响,病例组腺上皮细胞和基质细胞总体均数差异均具有统计学意义（P〈0．01）。结论50ng／ml的NGF可促进子宫腺肌病在位内膜基质细胞增殖及腺上皮细胞和基质细胞雌激素受体仅表达。