愈痫灵方对PTZ致痫大鼠脑组织海马CA3区TLR4、NF-kB P65、TNF-α表达的影响

目的 探讨愈痫灵方对痫性大鼠脑组织海马区炎性反应因子表达的影响.方法 取健康雄性SD大鼠120只,从中随机选取10只作为正常对照组,10只作为假手术组,腹腔注射生理盐水;其余大鼠用戊四氮造模,将符合模型标准的大鼠随机分为愈痫灵组、丙戊酸钠组和模型组,每组10只.灌胃后采用免疫组织化学方法检测TLR4、NF-kB P65和TNF-α在海马CA3区的表达变化.结果 与正常组、假手术组比,模型组、愈痫灵方组、丙戊酸钠组均上调TLR4、NF-kB P65和TNF-α在脑组织海马CA3区的表达(P<0.01),但后两组表达均低于模型组(P<0.05),且愈痫灵方组抑制TLR4和NF-kB P65在脑组织海马CA3区表达的作用优于丙戊酸钠组(P<0.05),而TNF-α在脑组织海马CA3区的表达两组间无明显差异(P>0.05);结论 愈痫灵方可抑制PTZ致痫大鼠脑组织海马CA3区TLR4、NF-kB P65和TNF-α的表达,对癫痫反应中炎性因子的表达有一定的抑制作用.     

愈痫灵方对PTZ致痫大鼠脑组织海马CA3区TLR4、NF-kBP65、TNF-α表达的影响

目的探讨愈痫灵方对痫性大鼠脑组织海马区炎性反应因子表达的影响。方法取健康雄性SD大鼠120只,从中随机选取10只作为正常对照组,10只作为假手术组,腹腔注射生理盐水;其余大鼠用戊四氮造模,将符合模型标准的大鼠随机分为愈痫灵组、丙戊酸钠组和模型组,每组10只。灌胃后采用免疫组织化学方法检测TLR4、NF-kB P65和TNF-α在海马CA3区的表达变化。结果与正常组、假手术组比,模型组、愈痫灵方组、丙戊酸钠组均上调TLR4、NF-kB P65和TNF-α在脑组织海马CA3区的表达(P0.01),但后两组表达均低于模型组(P0.05),且愈痫灵方组抑制TLR4和NF-kB P65在脑组织海马CA3区表达的作用优于丙戊酸钠组(P0.05),而TNF-α在脑组织海马CA3区的表达两组间无明显差异(P0.05);结论愈痫灵方可抑制PTZ致痫大鼠脑组织海马CA3区TLR4、NF-kB P65和TNF-α的表达,对癫痫反应中炎性因子的表达有一定的抑制作用。     

愈痫灵颗粒对戊四氮致痫大鼠海马CA3区超微结构及认知功能障碍的影响

目的探讨愈痫灵颗粒（YXL）对痫性大鼠海马CA3区超微结构及认知功能障碍的影响。方法采用腹腔注射戊四氮点燃癫痫大鼠模型,随机分为癫痫模型组、愈痫灵颗粒干预组、丙戊酸钠干预组、拉莫三嗪干预组、正常对照组共5组：跳台实验测试大鼠的学习记忆能力,透射电镜观察海马CA3区超微结构。结果造模后反应期和学习成绩比较。正常组与其它各组差异有统计学意义（P〈0．01）,潜伏期和记忆成绩比较,正常组与其它各组差异无统计学意义（P〉0．05）;抗痫药物干预后各组反应期和潜伏期及学习、记忆成绩比较差异有显著统计学意义（P〈0．001）,愈痫灵组与正常组比较差异无统计学意义（P〉0．05）,愈痫灵组、拉莫三嗪组优于丙戊酸钠组与模型组,差异有统计学意义（P〈0．05）;抗痫药物干预前后反应期、潜伏期、学习、记忆成绩比较,愈痫灵组、拉莫三嗪组差异有统计学意义（P〈0．01）,丙戊酸钠组、模型组差异无统计学意义（P〉0.05）,正常组反应期、潜伏期、记忆成绩差异无统计学意义（P〉0．05）,学习成绩差异有统计学意义（P〈0．01）。电镜观察模型组大鼠海马CA3区神经元可见明显损伤。愈痈灵组多数神经元结构正常。少数粗面内质网有轻度脱颗粒。结论愈痫灵颗粒减少戊四氮致痫大鼠海马组织神经元坏死可能是其改善癜痫大鼠认知功能障碍的作用机制之一。     

愈痫灵方对难治性癫痫大鼠多药耐药相关蛋白MRP1、P-gp、LAP、MCP-1表达的作用

目的：探讨“愈痫灵”方对红藻氨酸（KA）致痫难治性癫痫模型大鼠海马及颞叶皮质区多药耐药相关蛋白1（MRP1）、P糖蛋白（P-gp）、层黏连蛋白（LAP）以及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响。方法（1）造模：在脑立体定位仪引导下,海马区微量进样器注入KA1.0μL（即1.0μg）点燃发作,选取发作行为级别在Racines标准Ⅳ级以上者,以丙戊酸钠及卡马西平灌胃干预14 d后,再次以亚惊厥剂量KA0.5μL复燃,筛选再次发作级别在Ⅳ级以上或持续状态大鼠,且脑电图检测有癫痫样波放电者为造模成功的耐药难治性癫痫模型鼠。（2）分组与处理：造模成功鼠随机分为愈痫灵方干预组、拉莫三嗪对照组、模型组,另设假手术对照组、空白对照组共5组,分别给予“愈痫灵”汤剂、拉莫三嗪及同等体积的蒸馏水(2 mL/d)灌胃30 d。（3）标本处置与检测：采用免疫组织化学技术,检测多药耐药相关蛋白MRP1、P-gp、LAP、MCP-1在海马与颞叶皮层的表达。结果与假手术对照组、空白对照组间比较,造模成功组海马区及颞叶皮质区MRP1、P-gp、LAP、MCP-1的表达均明显升高,差异有统计学意义(P<0.01);与模型组比较,愈痫灵、拉莫三嗪干预处理后能显著降低模型鼠海马区MRP1、P-gp表达水平（P<0.05）,海马区及颞叶皮质区LAP、MCP-1的表达差异均无统计学意义(P>0.05);愈痫灵方组与拉莫三嗪组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);各组间颞叶皮质区LAP、MCP-1表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论耐药性癫痫大鼠模型海马及颞叶皮质区多药耐药相关蛋白MRP1、P-gp、LAP、MCP-1表达均明显升高,逆转与降低海马区MRP1、P-gp的表达可能是“愈痫灵”方抗耐药性癫痫作用机制之一。     

拉莫三嗪对慢性致痫大鼠海马细胞凋亡的影响

目的 通过观察拉莫三嗪对戊四氮慢性致痫大鼠海马Bcl-2和Bax表达的影响来探讨其抗凋亡作用. 方法 选取健康成年雄性Wistar大鼠80只,按体重随机分为:正常组;模型组;丙戊酸钠低、中、高剂量组;拉莫三嗪低、中、高剂量组;每组10只.模型组,丙戊酸钠和拉莫三嗪低、中、高剂量组,每日腹腔注射戊四氮35 mg/(kg·d)制作慢性点燃癫痫模型(大约2周).然后腹腔注射戊四氮35 mg/(kg·d),隔日一次;同时丙戊酸钠和拉莫三嗪各剂量组分别给予相应剂量的丙戊酸钠和拉莫三嗪灌胃,每天一次,共3周.然后取海马标本做免疫组化检测Bcl-2和Bax的表达. 结果 模型组Bcl-2和Bax表达显著高于正常组(P<0.001).与模型组比较,丙戊酸钠和拉莫三嗪各剂量组Bcl-2高表达,Bax低表达(P<0.001).其中拉莫三嗪低剂量组与丙戊酸钠低剂量组之间差异没有统计学意义(P>0.05);拉莫三嗪中剂量组与丙戊酸钠中、高剂量组之间差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01). 结论 拉莫三嗪和丙戊酸钠对戊四氮慢性致痫大鼠海马细胞凋亡均具有抑制作用,但拉莫三嗪优于丙戊酸钠.     

天麻素对戊四氮致痫模型大鼠的治疗作用及对细胞自噬、凋亡机制的研究

目的探讨天麻素对戊四氮致痫模型大鼠的治疗作用及对细胞自噬、凋亡机制的研究。方法 2018年11月—2019年11月于贵州中医药大学实验室进行实验。将Wistar雄性大鼠以戊四氮(PTZ)32 mg·kg~(-1)·d~(-1)腹腔注射诱导癫痫模型,通过筛选将造模成功的100只大鼠按随机数字表法分为戊四氮致痫模型组、丙戊酸钠(VPA)干预组、天麻素小剂量干预组、天麻素中剂量干预组、天麻素大剂量干预组,每组20只,另纳入20只大鼠为正常对照组,共120只。造模成功后天麻素小、中、大剂量干预组分别予大鼠腹腔注射天麻素30、60、120 mg·kg~(-1)·d~(-1),丙戊酸钠干预组予大鼠腹腔内注射丙戊酸钠120 mg·kg~(-1)·d~(-1)。治疗2周后用免疫组化染色及蛋白印迹法检测大鼠海马组织LC3、Beclin1、Bax、Caspase-3表达及检测大鼠海马区细胞凋亡率。结果与正常对照组比较,模型组LC3、Bax、Beclin1、Caspase-3水平均升高,差异有统计学意义(P<0.05);天麻素各剂量组及丙戊酸钠干预组LC3、Beclin1、Bax、Caspase-3表达均低于模型组(P<0.05),天麻素小、中剂量组LC3、Bax、Beclin1、Caspase-3表达均高于天麻素大剂量组及丙戊酸钠干预组(P<0.05),天麻素大剂量组与丙戊酸钠干预组表达比较差异无统计学意义(P>0.05)。与正常对照组比较,模型组海马区细胞凋亡率升高,差异有统计学意义(P<0.05);天麻素各剂量组及丙戊酸钠干预组海马区细胞凋亡率均低于模型组(P<0.05),且天麻素大剂量组大鼠海马区细胞凋亡率低于天麻素小剂量组和天麻素中剂量组,差异均具有统计学意义(P<0.05),天麻素大剂量组海马区凋亡率与丙戊酸钠干预组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论天麻素能通过调控戊四氮致痫模型大鼠海马区LC3、Bax、Caspase3、Beclin1等表达,抑制大鼠海马区细胞凋亡、自噬,抑制癫痫发作。     

愈痫灵对红藻氨酸致痫大鼠行为的影响

为观察愈痫灵颗粒剂对致痫大鼠行为的影响,探讨该方的癫痫作用。采用红藻氨酸造模,随机将40只SD大鼠分为模型组、中药汤剂 、中药颗粒剂组、西药组,按Schultz-Krohn标准观察行为表现。结果显示愈痫灵汤剂组、颗粒剂组可延长癫痫发作潜伏时间（P＜0．05）,减少湿狗样抖动次数（P＜0．05）。提示愈痫灵颗粒剂有显著的抗痫作用。     

青藤碱对佐剂性关节炎大鼠TLR4/MyD88信号通路的影响

目的:探讨青藤碱对佐剂性关节炎大鼠TLR4/MyD88信号通路诱导炎症的影响。方法:选择清洁级SD大鼠40只,随机分为模型组、青藤碱组、甲氨蝶呤组及正常对照组。前3组大鼠右后足跖皮内注射弗氏完全佐剂诱发大鼠佐剂性关节炎模型,正常对照组大鼠右后足跖皮内注射等量0.9%氯化钠注射液。4组分别干预4周后,取膝关节滑膜,采用Real-time PCR法检测TLR4 mRNA、MyD88 mRNA表达,ELISA法检测炎性因子TNF-α。结果:模型组大鼠膝关节滑膜组织TLR4 mRNA、MyD88 mRNA及炎性因子TNF-α表达均较正常对照组明显升高(P<0.01)。经青藤碱治疗后,TLR4 mRNA、MyD88 mRNA及炎性因子TNF-α表达均较模型组明显下降(P<0.01)。结论:青藤碱可改善佐剂性关节炎大鼠的关节炎症,该作用可能与抑制TLR4/MyD88信号通路有关。     

愈痫灵方对难治性癫痫大鼠多药耐药相关蛋白MRP_1、P-gp、LAP、MCP-1表达的作用

目的探讨"愈痫灵"方对红藻氨酸(KA)致痫难治性癫痫模型大鼠海马及颞叶皮质区多药耐药相关蛋白1(MRP1)、P糖蛋白(P-gp)、层黏连蛋白(LAP)以及单核细胞趋化蛋白1(MCP-1)表达的影响。方法 (1)造模:在脑立体定位仪引导下,海马区微量进样器注入KA1.0μL(即1.0μg)点燃发作,选取发作行为级别在Racines标准Ⅳ级以上者,以丙戊酸钠及卡马西平灌胃干预14 d后,再次以亚惊厥剂量KA0.5μL复燃,筛选再次发作级别在Ⅳ级以上或持续状态大鼠,且脑电图检测有癫痫样波放电者为造模成功的耐药难治性癫痫模型鼠。(2)分组与处理:造模成功鼠随机分为愈痫灵方干预组、拉莫三嗪对照组、模型组,另设假手术对照组、空白对照组共5组,分别给予"愈痫灵"汤剂、拉莫三嗪及同等体积的蒸馏水(2 m L/d)灌胃30 d。(3)标本处置与检测:采用免疫组织化学技术,检测多药耐药相关蛋白MRP1、P-gp、LAP、MCP-1在海马与颞叶皮层的表达。结果与假手术对照组、空白对照组间比较,造模成功组海马区及颞叶皮质区MRP1、P-gp、LAP、MCP-1的表达均明显升高,差异有统计学意义(P0.01);与模型组比较,愈痫灵、拉莫三嗪干预处理后能显著降低模型鼠海马区MRP1、P-gp表达水平(P0.05),海马区及颞叶皮质区LAP、MCP-1的表达差异均无统计学意义(P0.05);愈痫灵方组与拉莫三嗪组比较,差异均无统计学意义(P0.05);各组间颞叶皮质区LAP、MCP-1表达差异无统计学意义(P0.05)。结论耐药性癫痫大鼠模型海马及颞叶皮质区多药耐药相关蛋白MRP1、P-gp、LAP、MCP-1表达均明显升高,逆转与降低海马区MRP1、P-gp的表达可能是"愈痫灵"方抗耐药性癫痫作用机制之一。     

愈痫灵对慢性致痫大鼠海马区氨基酸含量的影响

目的探讨以化瘀通络为组方原则的愈痫灵 (YXL)颗粒剂对慢性致痫大鼠氨基酸含量的影响。方法采用腹腔注射戊四氮 (PTZ)造成慢性癫痫大鼠模型 ,以高效液相色谱法 (HPLC)检测海马区氨基酸的含量。结果愈痫灵颗粒剂可明显减轻癫痫大鼠发作程度或缩短发作时间 ;使癫痫大鼠海马区兴奋性氨基酸Glu、Asp的含量减少 ,抑制性氨基酸GABA含量升高 ,与模型组比较具有统计学意义 (P <0 .0 5 )。结论愈痫灵颗粒剂可调节海马区兴奋性和抑制性氨基酸含量的平衡失调 ,从而减轻癫痫大鼠发作程度和发作时间     

miR-146a经TLR4/MyD88途径加速巨噬细胞迁移所致动脉硬化的作用机制

目的 探讨微小RNA-146a(miR-146a)经Toll样受体4(TLR4)/髓系分化因子88蛋白(MyD88)途径调控巨噬细胞迁移所致动脉硬化的具体机制。 方法 RAW264.7巨噬细胞分为空白组、ox-LDL组、miR-146a mimic组、miR-146a inhibitor组、shRNA-MyD88组、shRNA-NC组、shRNA-MyD88+miR-146a mimic组、shRNA-MyD88+miR-146a inhibitor组,除空白组,其他各组均用50 mg/L ox-LDL进行干预;采用Western blotting法检测TLR4、MyD88、核因子κB(NF-κB)、白细胞介素-6(IL-6)蛋白表达水平。采用qPCR法检测miR-146a、TLR4、MyD88、NF-κB、IL-6基因表达水平。采用Transwell法检测巨噬细胞迁移能力。 结果 (1)ox-LDL组细胞内TLR4、IL-6蛋白含量及巨噬细胞迁移率均高于空白组(P均<0.01),miR-146a低于空白组(P<0.01);(2)miR-146a mimic组细胞TLR4 mRNA相对表达量及蛋白含量、巨噬细胞迁移率低于ox-LDL组,miR-146a mRNA相对表达量高于ox-LDL组(P均<0.01);miR-146a inhibitor组细胞TLR4 mRNA相对表达量及蛋白含量、巨噬细胞迁移率高于ox-LDL组,miR-146a mRNA相对表达量低于ox-LDL组(P均<0.01);(3)shRNA-MyD88组MyD88、NF-κB、IL-6蛋白含量、巨噬细胞迁移率低于ox-LDL组(P<0.01),miR-146a、TLR4表达无明显差异(P>0.05);shRNA-MyD88+miR-146a mimic组miR-146a表达高于shRNA-MyD88组,TLR4蛋白含量低于shRNA-MyD88组(P<0.01),MyD88、NF-κB、IL-6蛋白含量表达、巨噬细胞迁移率与shRNA-MyD88组无明显差异(P>0.05);shRNA-MyD88+miR-146a inhibitor组miR-146a表达低于shRNA-MyD88组,TLR4蛋白含量表达高于shRNA-MyD88组(P<0.01),MyD88、NF-κB、IL-6蛋白含量表达、巨噬细胞迁移率与shRNA-MyD88组无明显差异(P>0.05)。 结论 miR-146a是动脉粥样硬化的保护性因子,通过拮抗TLR4/MyD88途径调控炎症因子分泌进而抑制巨噬细胞迁移所致动脉粥样硬化进程,为动脉粥样硬化的防治提供新的治疗靶点。     

参苓白术散对溃疡性结肠炎脾虚湿困证大鼠结肠组织TLR2、MyD88、COX-2表达的影响

目的观察参苓白术散对溃疡性结肠炎脾虚湿困证大鼠结肠组织Toll样受体2(TLR2)、髓样分化因子88(MyD88)及环氧化酶-2(COX-2)表达的影响,探讨参苓白术散改善溃疡性结肠炎的作用机制。方法采用TNBS/乙醇灌肠结合环境与饮食干预法复制溃疡性结肠炎脾虚湿困证大鼠模型。按照随机数字表将大鼠分为正常组、模型组、参苓白术散组(15.6 g/kg)、参苓白术散(15.6 g/kg)+TLR2激动剂(50μg/只)组、参苓白术散(15.6 g/kg)+TLR2拮抗剂组(0.121 2μg/g),每组12只,连续给药14 d。ELISA法检测血清肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素6(IL-6)及白细胞介素1β(IL-1β)水平,免疫组织化学法和Western blot法测定结肠组织中TLR2、MyD88、COX-2蛋白表达,Real-time PCR法检测结肠组织TLR2、MyD88、COX-2 mRNA表达。结果模型组大鼠血清TNF-α、IL-6及IL-1β水平均升高(P<0.05),结肠组织TLR2、MyD88、COX-2蛋白和mRNA表达增强(P<0.01);与模型组比较,参苓白术散组和参苓白术散+TLR2拮抗剂组大鼠血清TNF-α、IL-6及IL-1β水平均下降,结肠组织TLR2、MyD88、COX-2蛋白和mRNA表达下调(P<0.01)。与参苓白术散组比较,参苓白术散+TLR2拮抗剂组大鼠血清TNF-α、IL-6及IL-1β水平,结肠组织TLR2、MyD88、COX-2蛋白和mRNA表达差异无统计学意义(P>0.05);参苓白术散+TLR2激动剂组大鼠血清TNF-α、IL-6及IL-1β水平,结肠组织TLR2、MyD88、COX-2蛋白和mRNA表达均高于参苓白术散组(P<0.01)。结论参苓白术散可下调溃疡性结肠炎脾虚湿困证大鼠结肠组织TLR2、MyD88、COX-2表达,降低炎性因子的释放;参苓白术散通过负性调控TLR2/MyD88信号通路,减轻肠道炎症反应,可能是其治疗溃疡性结肠炎的重要机制之一。     

大蒜素抑制慢性肾衰竭大鼠炎症反应

【目的】探讨大蒜素对慢性肾衰竭大鼠的治疗作用及机制。【方法】将50只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组及大蒜素低、中、高剂量组,每组各10只。除假手术组,其余各组大鼠采用5/6肾切除法建立慢性肾衰竭模型。造模成功后,大蒜素低、中、高剂量组分别给予10、20、40 mg·kg^-1·d^-1大蒜素灌胃,假手术组与模型组给予等体积生理盐水灌胃,每日1次,连续4周。应用全自动生化分析仪检测血清肌酐(SCr)、尿素氮(BUN)水平,酶联免疫吸附分析(ELISA)检测大鼠血清白细胞介素(IL)-1β、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平,采用苏木素-伊红(HE)染色和马松(Masson)染色观察肾组织病理学变化,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测肾组织Toll样受体(TLR)4、髓样细胞分化因子(MyD)88、核转录因子(NF)-κB蛋白表达水平,实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)法检测肾组织TLR4、MyD88、NF-κB mRNA表达水平。【结果】与假手术组比较,模型组大鼠血清SCr、BUN、IL-1β、IL-6、TNF-α水平均显著升高(均P<0.05),HE染色、Massion染色结果显示大鼠肾组织发生明显病理改变,肾组织中TLR4、My D88、NF-κB蛋白及mRNA表达水平显著升高(均P<0.05);与模型组比较,大蒜素低、中、高剂量组大鼠血清SCr、BUN、IL-1β、IL-6、TNF-α水平下降(均P<0.05),HE染色、Massion染色结果显示肾组织病理改变减轻,肾组织TLR4、MyD88、NF-κB蛋白及m RNA表达水平下降(均P<0.05),且呈剂量依赖性。【结论】大蒜素可能通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,抑制肾组织炎症反应,进而延缓慢性肾衰竭进程。     

Cdk5/p35和tau蛋白对戊四氮点燃模型海马苔藓纤维出芽的作用

目的 动态观察细胞周期素依赖性激酶5(Cdk5)及调节亚基p35、骨架蛋白在戊四氮致痫大鼠海马各区的表达变化和苔藓纤维出芽(MFS)的情况,以探讨cdk5/p35对MFS的作用及其机制.方法 SD雄性成年大鼠240只,随机分为PTZ组和对照组;PTZ组分为PTZ第一次注射后3 d、1周、2周、4周、6周共5个亚组,每亚组24只,对照组随机分为5个亚组,与PTZ组各时间点对应.以上各亚组再分4个小组,每小组6只大鼠,分别进行(1)Timm染色并评分;(2)Cdk5/p35的免疫组化和原位杂交;(3)Cdk5活性测定;(4)tau蛋白表达及磷酸化水平(免疫组化和免疫印迹).结果 PTZ组CA3区苔藓纤维出芽最为明显,而非内分子层,苔藓纤维出芽的程度与点燃大鼠痫性发作的行为学表现一致;PTZ组Cdk5/p35 mRNA和蛋白、总tau蛋白和P-ptau(ser202)蛋白在3 d时表达增多,4周达高峰,6周时接近正常水平,与CA3区苔藓纤维出芽的过程一致.对照组无动态变化.结论 Cdk5/p35及其底物tau蛋白可能参与r苔藓纤维出芽,了解苔藓纤维出芽的机制,有助于抑制癫痫的发生.

Abstract：

Objective To observe the expression of eyclin-dependent kinase 5(Cdk5),p35,tau protein and the activity of Cdk5 in rat hippoeampus during pentylenetetrazole(PTZ)kindling process and their correlation with mossy fiber sprouting(MFS)so as to investigate the role of Cdk5/p35 in epileptogenesis.Methods A total of 240 healthy male SD rats were divided randomly into normal controls and pentylenetetrazole(PTZ)treatment groups.The epileptic models were established by injection of PTZ intraperitoneally.At Day 3,Weeks 1,2,4 & 6 after a daily injection of PTZ,Timm staining was scored in the CA3 region and dentate gyrus.At the same time,the mRNA and protein of Cdk5 and p35,total tau protein and its phosphorylation at set202 and Cdk5 activity were analyzed in the hilus and stratum granulosum of dentate gyms and the CA 1,CA3 regions of hippocampus.The methods of in situ hybridization,immunohistochemistry,Western blot and immuno-precipitation and liquid scintillation counter were employed respectively.Results Prominent MFS was observed in area CA3 rather than the inner molecular layer in PTZ-treated rats.And the degree of MFS progressed with the development of behavioral kindled seizures.The expressions of Cdk5/p35 mRNA and protein,tau protein and its phosphorylation at Set202 significantly increased from Day 3 to Week 4 in the PTZ treatment group.It was in accordance with the progression of MFS in area CA3.Conclusion CdkS/p35 and its substrate tau protein may be involed in M FS.Undeerstanding the molecular mechanisms of MFS may lead to therapeutic interventions for limiting epileptogenesis.     

TLR4/MyD88/NF-κB 信号通路对甲基苯丙胺依赖CPP大鼠海马的影响

  目的  研究TLR4/MyD88/NF-κB信号通路对甲基苯丙胺（methamphetamine,MA）依赖的条件性位置偏好（conditioned place preference,CPP）大鼠海马的影响,同时采用特异性抑制剂TAK-242抑制Toll样4受体（Toll-like receptor 4,TLR4）,减轻MA依赖诱导的海马神经炎症。  方法  建立MA（10 mg/kg,ip,14 d）依赖大鼠CPP模型,分别为生理盐水组、MA组、TAK-242组、MA+TAK-242组。TAK-242组和MA+TAK-242组先分别腹腔注射抑制剂TAK-242（3 mg/kg）,1h后MA+TAK-242组再腹腔注射MA（10 mg/kg）。采用Western Blot实验和采用荧光定量PCR实验检测MA依赖CPP大鼠海马中TLR4、MyD88、TRAF6、IκB-α、p-IκB-α、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白的表达和mRNA表达。  结果  与生理盐水组相比,MA组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均升高（P < 0.001或P < 0.01）,IκB-α的蛋白和mRNA表达下降（P < 0.01）,p-IκB-α、p-NF-κBp65的表达升高（P < 0.01或P < 0.05）;与MA组相比,MA+TAK-242组TLR4、MyD88、TRAF6、NF-κBp65的蛋白和mRNA表达均下降（P < 0.001、P<0.01或P < 0.05）,IκB-α的蛋白和mRNA表达升高（P < 0.01）,p-IκB-α、p-NF-κBp65表达下降（P < 0.01或P < 0.05）。  结论  MA依赖可通过激活TLR4/MyD88/NF-κB信号通路,诱导CPP大鼠海马神经炎症的发生,采用特异性TLR4抑制剂可以减轻MA诱导的神经炎症。     

乌司他丁减轻失血性休克大鼠肺炎性损伤的机制

目的探讨乌司他丁对创伤失血性休克大鼠肺炎性介质及其信号通路miR-146a/TLR4/NF-κB的影响。方法72只SD大 鼠,随机分为休克不复苏组（SR,n=24）,醋酸钠林格液组（AR,n=24）及乌司他丁组（UR,n=24）。通过股动脉放血将3组制成休 克模型（平均动脉压维持在30~40 mmHg）,SR组休克制备成功后不予复苏,并分别于休克后1、4、6 h（若大鼠死亡则大鼠死亡即 刻）取大鼠肺组织;AR组、UR组分别系维持休克60 min后应用醋酸钠林格液、醋酸钠林格液联合乌司他丁进行30 min液体复 苏,并分别于复苏后1、4、6 h取大鼠肺组织。利用实时荧光定量PCR法检测各组肺组织中miR-146a、TNF-α、IL-1、IL-4、IL-6、 IL-10的mRNA含量以及通过Western blot检测TLR4、MyD88、IκB-α、p-IκB-α、NF-κB p65、IRAK4、p-IRAK4（Thr345、Ser346）、 p-IRAK4（Thr342）、TRAF6的蛋白相对表达量。在光镜下观察3组肺组织病理学变化。结果与休克组相比,醋酸钠林格液组 肺组织炎症浸润程度稍减轻,其中miR-146a、IL-4 和IL-10 的mRNA水平升高（P<0.05）,IκB-α、p-IRAK4（Thr342）及p-IRAK4 (Thr345、ser346)的蛋白表达增加（P<0.05）;TNF-α、IL-1和IL-6的水平降低（P<0.05）,TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-IκB-α、IRAK- 4及TRAF6的蛋白表达减少（P<0.05）。与醋酸钠林格液组比较,乌司他丁组的肺组织炎性损伤得到了进一步改善,升高了miR- 146a、IL-4 和IL-10 的mRNA水平（P<0.01）及IκB-α、p-IRAK4（Thr342）及p-IRAK4(Thr345、ser346)的蛋白表达（P<0.01）,降低 了TNF-α、IL-1和IL-6的水平（P<0.01）和TLR4、MyD88、NF-κB p65、p-IκB-α、IRAK-4及TRAF6的蛋白表达（P<0.01）。结论乌 司他丁联合醋酸钠林格液复苏创伤失血性休克大鼠可能是通过增强miR-146a的表达,负反馈调控TLR4/NF-kB信号通路,进而 调节体内促炎因子和抗炎因子平衡,以达到保护肺组织的作用。