EGb761对谷氨酸诱导海马神经元兴奋毒性损伤中p75NTR表达的影响

目的：观察谷氨酸诱导海马神经元兴奋毒性损伤中神经营养因子受体p75（p75neurotrophin receptor,p75NTR）表达水平的变化,探讨银杏叶提取物（EGb761）抗兴奋毒性神经保护作用与p75NTR的相关性.方法：建立谷氨酸诱导的新生大鼠海马神经元兴奋毒性损伤模型,观察25200mg/L剂量下EGb761的神经保护作用;RT-PCR,Western Blot及细胞免疫荧光染色方法检测p75NTR的表达变化.结果：100mg/LEGb761预处理给药的神经保护效果最明显;谷氨酸刺激后,p75NTR在mRNA和蛋白质水平的表达较对照组明显增高（P〈0.01）;EGb761本身对p75NTR表达无影响,而EGb761预处理组p75NTR在mRNA和蛋白质水平的表达较谷氨酸组均显著降低（P〈0.05）.结论：p75NTR在谷氨酸诱导兴奋毒性神经损伤中起着重要作用,EGb761抗兴奋毒性神经保护作用可能与抑制p75NTR的表达有关.     

脑源性神经营养因子对皮层神经细胞的保护作用及其机制

目的 探讨脑源性神经营养因子(brain-derived neurotrophic factor, BDNF)对高浓度谷氨酸损伤皮层神经元的保护作用及机制.方法 原代培养皮层神经元细胞,通过建立谷氨酸组、BDNF组、对照组进行对照研究.AO/EB荧光染色法观察细胞凋亡形态,MTT法观察细胞凋亡率,Western blot观察p75NTR、JNK、ERK等蛋白的表达量.结果 与空白对照组(1.26±0.06)相比,谷氨酸组细胞活力(0.72±0.10)显著降低(P<0.05);而与谷氨酸组比较,BDNF组(1.14±0.06)细胞活力显著提高(P<0.01).谷氨酸组细胞凋亡比BDNF组明显增多(P<0.05).荧光染色谷氨酸组细胞膜破坏增多.Western blot检测结果示:p75NTR表达在BDNF组(0.78±0.09)和谷氨酸组(0.90±0.18)均高于对照组(0.15±0.12)(P<0.05);JNK在BDNF组(0.56±0.16)比谷氨酸组(0.95±0.06)表达显著降低(P<0.05);而ERK在BDNF组(0.83±0.16)比谷氨酸组(0.57±0.08)表达显著升高(P<0.05),ERK在谷氨酸组中显著降低.结论 BDNF对皮层神经元细胞具有保护作用,主要通过调节p75NTR和TrkB受体之间的比例,上调ERK,下调JNK蛋白的表达来抑制凋亡,增加细胞的存活.     

戊四氮点燃大鼠海马脑源性神经营养因子受体TrKB、P75NTR表达的变化

目的:探讨戊四氮点燃大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)受体TrKB、P75NTR表达的变化.方法:40只成年健康雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组采用戊四氮点燃法制备癫(癎)模型,对照组不做处理.第2周及第4周,2组各取10只大鼠,采用免疫组织化学方法观察海马结构内TrKB、P75NTR的表达水平.结果:第2周及第4周,对照组大鼠海马CA1、CA3区锥体细胞层及齿状回和门区可见TrKB阳性神经元和纤维;CA1、CA3 区锥体细胞层、齿状回及门区可见大量P75NTR阳性神经元.与对照组比较,实验组海马相应部位TrKB的表达升高(P<0.05),P75NTR的表达降低(P<0.05).结论:在癫(癎)形成过程中,BDNF的2类受体TrKB 、P75NTR可能参与了癫(癎)后海马异常苔藓纤维出芽及突触重建过程;2类受体可能相互拮抗.     

利培酮对大鼠各脑区组织BDNF-TrkB信号通路的影响

目的 探索非典型抗精神病药利培酮对大鼠脑区中脑源性神经生长因子（brain-derived neurotrophic factor,BDNF）及其受体酪氨酸激酶受体B（tyrosine kinase receptor, TrkB）、P75神经营养因子受体(P75 neurotrophin receptor,P75NTR)的调控作用。方法 将大鼠随机分为利培酮处理组（ n=8)和对照组（ n=8),利培酮处理组采用0.25 mg/kg利培酮腹腔内注射,对照组采用等量安慰剂腹腔内注射,连续处理14 d后处死大鼠。取大鼠左右前额叶皮质、左右颞叶皮质及海马,提取RNA并进行BDNF、TrκB和P75NTR mRNA的实时荧光定量PCR分析。结果 利培酮处理组大鼠的左右前额叶皮质、左右颞叶皮质及海马中BDNF及TrkB mRNA的表达水平较对照组增高（P<0.05）,而利培酮处理组P75NTR mRNA的表达与对照组间差异无统计学意义（P>0.05）。结论 利培酮能够上调大鼠左右前额叶皮质、左右颞叶皮质及海马BDNF-TrkB信号通路,而不能改变上述脑区中P75NTR mRNA的表达水平。     

p75NTR在大鼠外胚间充质干细胞不同融合状态中的表达差异与矿化相关性研究

目的 探讨不同融合状态对p75 neurotrophin receptor(p75 NTR) 在外胚间充质干细胞(ectomesenchymal stem cells,EMSCs) 中的表达影响.方法 用酶消化法获取SD大鼠胚胎12. 5 d(E12. 5d) EMSCs,以不同细胞密度铺板,贴壁后即获得4种融合状态: 半融合状态(1. 0 × 104 /cm2 ) 、融合前状态(1. 5 × 104 /cm2 ) 、融合状态(2. 5 × 104 /cm2 ) 、融合后状态(3. 5 × 104 /cm2 ) .检测4种融合状态细胞矿化诱导前后p75NTR、Runt相关转录因子2(Runx2) 和碱性磷酸酶(ALP) 、Ⅰ型胶原蛋白(Col1) 在mRNA水平和蛋白水平的表达,茜素红染色检测钙盐沉积情况.结果 矿化诱导0 d时, p75NTR mRNA和蛋白在融合状态组表达最高,Runx2、ALP、Col1在4种融合状态表达水平无明显差异.矿化诱导3、7 d时,融合状态组p75NTR、Runx2、ALP mRNA表达水平均显著高于其他3组(P＜0. 05);同时融合状态组p75NTR、Runx2、Col1蛋白表达水平最高,差异具有统计学意义(P＜0. 05) .矿化诱导21 d时,融合状态组钙盐沉积量高于其他3组(P＜0. 01) .结论 不同融合状态p75NTR表达差异显著,在融合状态组p75NTR表达最高,此时细胞矿化能力最强,表明p75NTR的表达与矿化呈正相关.     

人巨细胞病毒诱导分化中的神经干细胞分泌神经生长因子前体

目的 研究人巨细胞病毒(human cytomegalovirus, HCMV)感染对人神经干细胞(neural stem cells,NSC)向星形胶质细胞分化过程中神经生长因子(nerve growth factor, NGF)及其受体p75NTR、trkA表达的影响,为阐明HCMV感染致NSC损伤的分子机制提供理论依据.方法 体外培养人海马NSC,感染组以感染复数(multiplicity of infectin,MOI)为5的HCMVAD169株感染NSC,对照组只加入与病毒悬液等体积的培养液,在感染病毒的同时,诱导感染组和对照组NSC向星形胶质细胞分化,分别在感染后0、1、3、5、7、9d收获细胞,用RT-PCR、免疫荧光和Western blot方法检测细胞内NGF及其受体p75NTR、trkA的转录水平和蛋白表达水平.结果 对照组NSC不表达NGF及其受体P75NTR和trkA.感染组细胞在第3天开始出现NGFmRNA的表达,第5天出现P75NTR mRNA的表达,且其表达强度随时间增强;第5天出现相对分子质量为40000和100000NGF前体蛋白(ProNGF)和P75NTR蛋白,随时间延长,表达强度升高.免疫荧光检测显示,NGF前体蛋白位于细胞的细胞质;整个感染过程中未检测到trkA的表达.结论 HCMV感染可诱导向星形胶质细胞分化的海马NSC分泌NGF前体蛋白及其受体p75NTR.     

Expression of neurotrophin-3 and its receptors in lung tissues of rats with asthma

目的 研究神经营养素3 (NT-3)及其受体酪氨酸激酶C(TrkC)和p75神经营养素受体(p75 NTR)在哮喘大鼠肺组织中的表达情况.方法 将28只4～6周龄的SD大鼠随机分为分为哮喘组(n=16)(以卵蛋白致敏和激发建立大鼠哮喘模型)和正常对照组(n=12).取两组大鼠的肺组织制作病理切片,HE染色后光学显微镜下观察支气管和肺组织的病理学特征.采用Real-Time PCR技术检测两组大鼠肺组织中NT-3、TrkC和p75NTR mRNA的表达,并分析三者之间的相关性.结果 光学显微镜观察发现:哮喘组大鼠支气管壁周围有较多淋巴细胞和嗜酸性粒细胞浸润,可见支气管气道上皮脱落、杯状细胞增生及黏液栓增多等变化;正常对照组大鼠支气管及肺泡结构未见明显异常.哮喘组大鼠肺组织中NT-3、TrkC和p75NTR mRNA的相对表达量均显著高于正常对照组,差异有统计学意义(P＜0.05).相关性分析结果显示:NT-3 mRNA与TrkC mRNA的表达、NT-3mRNA与p75NTR mRNA的表达以及TrkC mRNA与p75NTR mRNA的表达均呈正相关(r分别为0.89、0.90和0.82,均P＜0.01).结论 致敏哮喘大鼠肺组织内NT-3 mRNA表达水平升高.NT-3通过上调TrkC和p75NTR mRNA的表达,增强NT-3的功能效应,三者共同参与了哮喘气道神经源性炎症的发生.     

糖皮质激素促β-淀粉样蛋白致海马神经元损伤的机制

目的探讨糖皮质激素(GCs)促进β-淀粉样蛋白(Aβ)引起海马神经元损伤的机制。方法地塞米松(DEX)和Aβ与胎鼠海马神经细胞共同孵育后,通过LDH释放法检测细胞活力,用激光共聚焦显微镜检测神经元[Ca2 ]i的变化,用RT-PCR来检测cdk5、p53在细胞内的表达情况。结果DEX促进Aβ25～35引起海马细胞活力的下降(P<0.05),促进Aβ25～35引起上升的[Ca2 ]i的水平(P<0.05),上调Aβ25～35引起的上升的cdk5mRNA的水平(P<0.05),但DEX未能进一步促进Aβ25～35引起的上升的p53mRNA水平(P>0.05)。结论DEX可促进Aβ的海马神经元毒性,DEX可能通过上调[Ca2 ]i的水平、上调cdk5mRNA的水平促进Aβ引起海马神经元tau异常磷酸化,导致海马神经元损伤。     

pBDNF过表达对转基因阿尔茨海默病鼠学习记忆功能的影响

目的 探讨海马注射携带脑源性神经营养因子前肽(pBDNF)基因的腺相关病毒基因整合载体(AAV-pBDNF)对阿尔茨海默病鼠(AD鼠)学习记忆功能的影响及可能机制.方法 选用18只6月龄APP/PS1转基因AD小鼠,采用抛硬币法随机分为空载体对照组、AAV-pBDNF组、AAV-pBDNF+p75NTR抗体组,每组6只.空载体对照组右侧海马注射AAV-GFP(2μL,1x1012 vg/mL),AAV-pBDNF组右侧海马注射AAV-pBDNF(2 μL,1×1012 vg/mL),AAV-pBDNF+p75NTR抗体组右侧海马注射AAV-pBDNF(2 μL,1x1012 vg/mL)和p75NTR抗体(2 μL,10 μg/mL).海马注射4周后行Morris水迷宫实验检测AD鼠学习记忆能力的变化.免疫荧光检测AAV-pBDNF在AD鼠脑内转染情况.Western blot检测海马突触后致密蛋白-95(postsynaptic density protein 95,PSD-95)的表达.结果 水迷宫实验结果显示:各组小鼠的运动速度无明显差异.第5天时,对照组与AAV-pBDNF+p75NTR抗体组小鼠的逃避潜伏期均较第1天有明显下降(P＜0.05),而AAV-pBDNF组AD鼠的逃避潜伏期虽然也较第1天有所缩短,但差异无统计学意义.AAV-pBDNF组AD小鼠穿越平台次数较其余两组少(P＜0.05).免疫荧光检测结果发现:AAV-pBDNF转染之后,在脑内神经元成功表达pBDNF,而胶质细胞不表达pBDNF.Western blot结果显示:AAV-pBDNF组AD鼠的PSD-95表达量低于对照组和AAV-pBDNF+p75NTR抗体组(P＜0.05).结论pBDNF可能通过p75NTR受体信号通路下调海马PSD-95的表达,降低AD鼠的学习记忆能力.     

海马神经元谷氨酸损伤研究

目的:本研究通过观察体外培养的大鼠胚胎海马神经元在谷氨酸损伤后,细胞活力变化及细胞损伤的方式,初步探讨谷氨酸对神经元的损伤机制。方法:通过MTT,观察不同浓度(62.5μM、125μM、250μM、500μM)的谷氨酸损伤后不同时间(6 h、12 h、18 h、24 h)海马神经元活力的变化。经相差显微镜观察谷氨酸对海马神经元胞体及突起的影响。通过TUNEL、Hoechst染色比较正常培养组和损伤组的凋亡率,分析谷氨酸对海马神经元的损伤作用。结果:MTT结果显示,谷氨酸对体外培养的胎鼠海马神经元有兴奋毒性,在所观察的剂量范围内,随着谷氨酸浓度的增加,作用逐步增强,至500μM达峰值,随着损伤后孵育时间的延长,海马神经元活力逐渐下降。TUNEL和Hoechst染色结果也显示,125μM谷氨酸对体外培养的胎鼠海马神经元有兴奋毒性,主要引起海马神经元的凋亡。结论:谷氨酸对体外培养的胎鼠海马神经元有兴奋毒性,且这种作用呈现剂量相关性。中等剂量(125μM)谷氨酸损伤主要引起海马神经元的凋亡。