百里醌诱导膀胱癌细胞凋亡作用机制的研究

目的 探讨百里醌对人膀胱癌细胞株BIU-87细胞凋亡的影响及对其诱导凋亡的潜在作用机制。方法 应用CCK8法检测细胞增殖活性, Hoechst33258染色法检测细胞凋亡, 荧光定量PCR检测基因Bcl-2、Bax、caspase-3、c-myc mRNA的表达水平, Wsetern blot法检测不同浓度百里醌作用后Bcl-2、Bax、c-myc蛋白表达水平的变化。结果 细胞增殖抑制曲线结果显示百里醌能明显抑制BIU-87细胞增殖, 其24、48、72h半数抑制浓度(IC₅₀)分别是38.75±0.58、34.33±1.01和32.43±0.71μmol/ L。百里醌能以剂量依赖性方式诱导膀胱癌细胞凋亡。百里醌作用于BIU-87细胞后, Bcl-2、c-myc mRNA及Bcl-2、c-myc蛋白的表达量呈浓度依赖性降低, 而caspase-3、Bax mRNA及caspase-3、Bax蛋白表达水平呈浓度依赖性递增。结论 百里醌能抑制BIU-87细胞的增殖, 且能诱导BIU-87细胞的凋亡, 其诱导凋亡机制可能与Bcl-2、c-myc表达水平降低及caspase-3、Bax表达水平上调有关。     

枸杞多糖诱导雄激素不依赖型人前列腺癌细胞凋亡及相关基因表达的研究

目的 研究枸杞多糖对诱导人前列腺癌PC-3细胞凋亡及相关蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法 体外培养的人前列腺癌PC-3细胞经枸杞多糖作用后，采用MTT法测定细胞的增殖情况。采用TUNEL观察PC-3细胞凋亡的变化，用免疫组化法检测其Bcl-2和Bax蛋白的表达。结果 一定剂量的枸杞多糖可明显抑制PC-3细胞的生长，并能渍导人前列腺癌PC-3细胞凋亡，凋亡率为41．5％，同时PC-3细胞Bcl-2／Bax蛋白比值显著下降，呈明显的剂量／效应关系。结论 枸杞多糖能诱导人前列腺癌PC-3细胞的凋亡，其机制与调节人前列腺癌PC-3细胞Bcl-2和Bax蛋白表达有关。     

昆布多糖硫酸酯对非激素依赖型人前列腺癌 PC-3 细胞及 bcl-2、caspase-3 基因表达的影响

目的 研究昆布多糖硫酸酯 (LAMS) 对体外培养的非激素依赖型人前列腺癌 PC-3 细胞株的作用,以及对 bcl-2 和 caspase-3 基因表达的影响,探讨其抗肿瘤的作用机制。方法 分别用 0、50、100、200 μg/mL LAMS 作用于 PC-3 细胞,用 WST-8 法检测细胞生长的抑制作用,利用流式细胞术 (FCM) 分析细胞周期和凋亡的变化,用荧光显微镜观察 PC-3 细胞形态,RT-PCR 和 Western blotting 检测细胞增殖、凋亡相关基因 bcl-2 和 caspase-3 mRNA 及蛋白的表达。结果 LAMS 能抑制 PC-3 细胞的增殖,呈时间-剂量效应;不同质量浓度 LAMS 诱导 PC-3 细胞出现剂量依赖性 S+G₂ 期阻滞;LAMS 作用于 PC-3 细胞后出现凋亡的形态学改变,LAMS 对 PC-3 细胞 bcl-2 mRNA 和蛋白表达均呈剂量依赖性减弱,对 PC-3 细胞 caspase-3 mRNA 和蛋白表达均呈剂量依赖性增强。结论 LAMS 能抑制体外 PC-3 细胞的生长,并促进其 S+G₂ 期阻滞和凋亡,LAMS 影响 PC-3 细胞相关基因蛋白的表达,可能是其抑制前列腺癌的作用机制之一。     

氯化两面针碱对前列腺癌细胞PC-3增殖与凋亡的影响

目的 探讨氯化两面针碱对前列腺癌细胞PC-3增殖及凋亡的影响作用。方法 采用MTT、细胞划痕和Transwell侵袭实验评估氯化两面针碱对人前列腺癌细胞PC-3增殖与侵袭的影响;流式细胞术检测氯化两面针碱对PC-3细胞凋亡的影响;免疫印迹检测AKT/mTOR及细胞凋亡蛋白B细胞淋巴瘤基因-2相关X蛋白(Bax)和B细胞淋巴瘤基因-2(Bcl-2)的表达,应用PI3K通路抑制剂LY294002探讨抑制AKT通路对前列腺癌细胞PC-3的影响。结果 氯化两面针碱能抑制PC-3细胞的增殖与侵袭,且具有剂量依赖性(P<0.01)。氯化两面针碱可下调Bcl-2、而上调Bax的蛋白表达,Bax/Bcl-2比例明显上升(P<0.01),抑制AKT和mTOR通路的磷酸化,诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡。联合应用LY294002发现,抑制AKT通路可增强氯化两面针碱对前列腺癌细胞PC-3增殖和侵袭的抑制作用。结论 氯化两面针碱能够抑制前列腺癌细胞PC-3的增殖与侵袭,诱导其凋亡,并通过抑制AKT/mTOR磷酸化发挥其抗前列腺癌作用,可作为一种潜在治疗前列腺癌的药物。     

姜黄素联合多烯紫杉醇诱导PC-3细胞凋亡的实验研究

目的探讨姜黄素联合多烯紫杉醇对人前列腺癌PC-3细胞凋亡的影响及其作用机制。方法将体外培养的PC-3细胞分为对照组(仅加培养基)、姜黄素组(5.0μmol/L姜黄素处理)、多烯紫杉醇组(2.5nmol/L多烯紫杉醇处理)及联合组(5.0μmol/L姜黄素与2.5nmol/L多烯紫杉醇联合处理),作用24h。用流式细胞仪分析PC-3细胞凋亡率,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot法分别检测Bcl-2及Bax mRNA和蛋白的表达情况。结果姜黄素和多烯紫杉醇均可诱导PC-3细胞凋亡,二者联合用药组的细胞凋亡率明显高于单药组(P<0.05);RT-PCR及Western blot显示姜黄素和多烯紫杉醇都可明显下调Bcl-2mRNA和蛋白的表达率,而上调Bax mRNA和蛋白表达率,且联合组细胞Bax与Bcl-2表达的改变更明显。结论姜黄素和多烯紫杉醇可能通过下调Bcl-2,上调Bax的表达协同诱导PC-3细胞的凋亡。     

白藜芦醇对前列腺癌PC-3细胞Bcl-2和Survivin表达的影响

目的 研究白藜芦醇(Resveratrol,Res)对人前列腺癌PC-3细胞体外生长的抑制作用和对Bcl-2和Survivin蛋白表达的影响.方法 分别用不同浓度的白藜芦醇作用前列腺癌PC-3细胞24 h和48 h,MTT法分别测定细胞抑制率,免疫组化SP法分析100 μmol/L 浓度白藜芦醇作用48 h时 PC-3细胞Bcl-2和Survivin蛋白的表达.结果 不同浓度白藜芦醇作用24 h与48 h时PC-3细胞生长明显受到抑制(P＜0.01);Bcl-2和Survivin蛋白免疫组化染色明显减弱(P＜0.01).结论 白藜芦醇对前列腺癌PC-3细胞体外生长有明显的抑制作用,其机制可能与下调Bcl-2和Survivin蛋白表达,增加前列腺癌PC-3细胞凋亡有关.     

N-乙酰半胱氨酸萝卜硫素通过上调Bak和下调Bcl-2蛋白表达诱导前列腺癌细胞凋亡

目的探究N-乙酰半胱氨酸萝卜硫素(D,L-sulforaphane N-Acetyl-L-cysteine,SFN-NAC)诱导前列腺癌细胞凋亡的分子机制。方法将前列腺癌细胞DU145和PC-3分别培养在6孔板中,当细胞密度达到70%-80%时,分别随机分为对照组(不加SFN-NAC)和加药组(加入终浓度为30μmol/L的SFN-NAC),继续在37℃培养24 h。利用AnnexinⅤ异硫氰酸荧光素/碘化丙啶(FITC/PI)双染流式细胞术检测细胞凋亡程度;利用Western blot检测Bak、Bax、Bcl-2和cleaved Caspase-3蛋白表达水平。结果与对照组相比,加药组的细胞凋亡率增高(P<0.01)。加药组细胞Bak蛋白表达较对照组升高(P<0.05);Bax蛋白表达也有少量增加,但与对照组相比,无统计学差异(P>0.05);Bcl-2蛋白表达下降(P<0.05);Bax/Bcl-2比值增加(P<0.01);细胞cleaved Caspase-3表达水平升高(P<0.01)。结论 N-乙酰半胱氨酸萝卜硫素通过上调Bak、下调Bcl-2蛋白表达,活化Caspase-3,诱导前列腺癌细胞凋亡,说明N-乙酰半胱氨酸萝卜硫素通过线粒体途径发挥抗癌作用。     

双氢青蒿素对前列腺癌裸鼠种植瘤Bcl-2和Bax表达的调控

目的研究双氢青蒿素(DHA)诱导前列腺癌细胞凋亡作用及其机制。方法采用人前列腺癌PC-3细胞株建立裸鼠种植瘤模型,将20只模型鼠随机平均分为对照组、溶剂(DMSO)组、DHA200μmol/kg体质量组和DHA100μmol/kg体质量组,经13d干预后,电镜观察肿瘤组织形态学表现;免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax的表达水平;TUNEL法检测肿瘤组织细胞凋亡。结果与对照组及DMSO组比较,DHA治疗组电镜观察肿瘤组织中散在凋亡细胞及凋亡小体;免疫组化检测凋亡相关基因Bcl-2表达减弱、Bax表达增强,差异均有统计学意义(P<0.05);TUNEL检测结果显示肿瘤组织细胞凋亡率明显升高,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论DHA具有较强的诱导前列腺癌细胞凋亡作用,这种作用可能是通过下调Bcl-2和上调Bax表达实现的。     

虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制研究

目的 研究虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞凋亡的影响及其机制。方法 采用CCK-8实验检测不同浓度虫草素作用于MG-63骨肉瘤细胞24h和48h后对癌细胞增殖的抑制作用;采用流式细胞术分析虫草素对MG-63细胞周期分布及凋亡的影响;采用Western blot法检测虫草素对MG-63细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及NICD1、Hes1蛋白表达的影响。结果 虫草素对人骨肉瘤MG-63细胞有明显的增殖抑制作用,导致MG-63细胞周期阻滞于G₀/G₁期并诱导细胞凋亡;虫草素可上调Bax、cleaved caspase-9和cleaved caspase-3蛋白的表达并下调Bcl-2,NICD1和Hes1蛋白的表达。结论 虫草素通过抑制骨肉瘤细胞增殖,诱导细胞周期阻滞于G₀/G₁期并通过线粒体凋亡途径诱导MG-63细胞凋亡从而发挥抗骨肉瘤作用,可能骨肉瘤细胞中Notch信号通路活性下调有关。     

白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制

研究白藜芦醇诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡的作用机制。采用MTT检测细胞增殖情况,活性氧试剂盒分析细胞内ROS水平;流式细胞术观察细胞凋亡和细胞周期的变化。Western blot检测凋亡相关蛋白以及相关通路蛋白表达。结果表明,经不同药物浓度处理,白藜芦醇可以诱导DU145细胞发生凋亡,使细胞周期阻滞于G₀/G₁期,提高细胞内ROS水平,降低细胞内线粒体膜电位水平,并呈剂量依赖性。白藜芦醇通过上调Bax蛋白的表达和抑制Bcl-2蛋白表达,促使Bax/Bcl-2比值升高,激活Caspase级联反应从而诱导细胞发生凋亡。进一步研究发现白藜芦醇可以升高细胞内ROS水平,降低线粒体膜电位水平,从而通过线粒体途径诱导DU145细胞发生凋亡。因此,白藜芦醇可能通过ROS-线粒体途径诱导人前列腺癌DU145细胞凋亡。     

丹参酮ⅡA诱导人小细胞肺癌细胞凋亡及其分子机制

目的 了解丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌细胞（H446细胞）的凋亡诱导作用,并探讨其可能的分子机制。方法 采用MTT法检测不同浓度丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌H446细胞增殖的影响结果;Hoechst 33258法检测不同浓度丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响;qPCR法检测不同浓度丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌H446细胞凋亡基因的影响;Westen blot法检测不同浓度丹参酮ⅡA对人小细胞肺癌H446细胞凋亡的影响。结果 不同药物浓度的丹参酮ⅡA （0.3、0.6、1.25、2.5、5和10μg/ml）抑制人小细胞肺癌H446细胞增殖且呈浓度和时间依赖性;随着药物浓度的提高,人小细胞肺癌H446细胞凋亡小体的形成数量增加,高浓度组差异有统计学意义（P<0.05）;高浓度组丹参酮ⅡA促进凋亡基因（Bax,caspase-9、caspase-3）的表达,抑制凋亡抑制基因（Akt,Bcl-2）的表达且差异有统计学意义（P<0.05）;高浓度组丹参酮ⅡA促进凋亡蛋白（Bax,caspase-9,caspase-3）的表达,抑制凋亡抑制蛋白（Akt,Bcl-2）的表达且差异有统计学意义（P<0.05）。结论 丹参酮ⅡA可能是通过Akt-Bax/bcl-2-caspase9-caspase3信号通路诱导人小细胞肺癌H446细胞的凋亡。     

低频超声增强双氢青蒿素诱导前列腺癌 PC-3细胞凋亡的生物学效应研究

目的研究低频超声能否增强双氢青蒿素(DHA)对前列腺癌PC-3细胞种植瘤的致凋亡作用,并探讨其对DHA诱导前列腺癌PC-3细胞凋亡增敏作用的机理。方法采用前列腺癌PC-3细胞建立裸鼠种植瘤模型,20只实验裸鼠随机分为4组:空白对照组、单纯DHA组、单纯超声组和超声+DHA组,经过13d共计7次药物或加超声干预后,采用免疫组织化学法(SP)检测凋亡相关基因Bcl-2、Bax、VEGF、Caspase-3及CHOP的表达水平。结果观察瘤体外形见空白对照组与单纯超声组肿瘤体积稍大,切开瘤体见内部均有明显液化坏死区域,免疫组织化学结果显示超声+DHA组、单纯DHA组和单纯超声组的Bcl-2及VEGF表达均低于空白对照组,超声+DHA组、DHA组和超声组的Bax、Caspase-3及CHOP表达均高于空白组。结论对正常细胞不致明显损伤的低频超声,可致前列腺癌PC-3种植瘤细胞相关凋亡基因的改变,DHA可单独致PC-3细胞凋亡及相关基因的改变,超声能明显增强DHA诱导前列腺癌PC-3种植瘤细胞凋亡作用。     

泰山银杏外种皮多糖对食管癌细胞增殖和凋亡的影响

【目的】 探讨泰山银杏外种皮多糖(Ginkgo biloba exocarp polysaccharides,GBEP)对体外培养的食管癌细胞增殖和凋亡的影响及其作用机制。 【方法】 通过沸水浸提,有机溶剂沉淀,并通过sevage法除去蛋白,获得GBEP。利用MTT法检测不同浓度的GBEP对食管癌细胞EC-9706增殖的影响;流式细胞术检测细胞周期的分布;Annexin-V/PI双染分析凋亡率;蛋白质印迹法检测与细胞周期及细胞凋亡相关的蛋白表达变化。 【结果】 GBEP显著抑制EC-9706细胞的增殖,并呈时间、剂量依赖性。其半数抑制浓度(IC50)为138.9 μg/mL。细胞周期分析结果表明,GBEP处理后G1期细胞比例由52.25%增加至69.76%,蛋白质印迹结果显示细胞周期蛋白D1的表达呈浓度依赖性下降。说明GBEP诱导EC-9706细胞G1期阻滞。流式细胞术分析结果表明,GBEP诱导的EC-9706细胞凋亡随剂量和作用时间增加而增加。同时GBEP抑制抗凋亡蛋白Bcl-2的表达,增加促凋亡蛋白Bax的表达,促进caspase3的激活和PARP的剪切。 【结论】 泰山银杏外种皮多糖抑制食管癌细胞的增殖,诱导细胞G1期阻滞,并激活内源性细胞凋亡。     

17β雌二醇对丙泊酚诱导皮层神经元凋亡的影响

目的 探讨17β雌二醇对丙泊酚诱导原代培养皮层神经元凋亡的影响及机制。方法 原代培养7 d的大鼠皮层神经元,随机分为三组:溶剂对照组(给予等溶剂20%脂肪乳),丙泊酚组(丙泊酚终浓度为500μmol/L),17β雌二醇+丙泊酚组(17β雌二醇终浓度为0.1μmol/L,丙泊酚终浓度为500μmol/L)。上述药物处理皮层神经元12 h后,用Hoechst 33258核染色法和TUNEL法检测皮层神经元调亡,Western-blot法测定神经元Bcl-2,Bax和cleaved caspase-3蛋白的水平。结果 与溶剂对照组比较,丙泊酚组神经元凋亡率显著性增加(P<0.01),Bcl-2蛋白水平显著性下降(P<0.01),Bax蛋白水平显著性增加(P<0.01),Bcl-2/Bax显著性降低(P<0.01),cleaved caspase-3蛋白水平显著性增加(P<0.01)。与丙泊酚组比较,17β雌二醇+丙泊酚组神经元凋亡率显著性下降(P<0.01),Bcl-2蛋白水平显著性增加(P<0.01), Bax蛋白水平显著性下降(P<0.01),Bcl-2/Bax显著性增加(P<0.01),cleaved caspase-3蛋白水平显著性下降(P<0.01)。结论 17β雌二醇可通过影响Bc1-2和Bax蛋白水平抑制皮层神经元凋亡,产生保护作用。     

精氨酸代琥珀酸合成酶⁃1对胰岛β细胞增殖与凋亡的影响

目的：探讨精氨酸代琥珀酸合成酶-1(argininosuccinate synthetase 1,ASS1)对胰岛β细胞增殖与凋亡的影响及机制。方法：利用siRNA和慢病毒载体在胰岛β-TC6细胞中分别敲低和过表达ASS1;5-乙炔基-2′-脱氧尿嘧啶核苷(5-ethynyl-2′- deoxyuridine,EdU)和CCK-8检测细胞增殖能力;Annexin V-PI流式细胞术和原位末端转移酶标记技术(terminal dUTP nick-end labeling assay,TUNEL)检测细胞凋亡水平;Western blot检测B细胞淋巴瘤-2(B-cell leukaemia-2,Bcl-2)蛋白、Bcl-2相关X蛋白 (Bcl-2 associated X protein,Bax)、半胱氨酸天冬氨酸酶3(Caspase3)、切割型半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-3(cleaved Caspase- 3)、凋亡诱导因子(apoptosis inducing factor,AIF)、细胞核增殖抗原(Ki67)和哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mammalian rapamycin target protein,mTOR)的表达水平;RT-qPCR检测AIF、Ki67和mTOR mRNA水平。结果：①与对照相比,敲低ASS1后,胰岛β细胞EdU阳性率和CCK-8细胞增殖活力降低,TUNEL阳性细胞数和AV/PI检测的细胞凋亡率升高。胰岛β细胞内AIF表达量明显升高,Bax/Bcl-2比值下降,Caspase-3活性降低。②过表达ASS1后,TUNEL阳性细胞数和AV/PI检测的细胞凋亡率均较对照组降低,伴随胰岛β细胞内Ki67和mTOR表达量升高。但胰岛β细胞EdU阳性率和CCK-8细胞增殖活力无明显变化。结论： ASS1 过表达可能激活 mTOR 信号通路促进胰岛β细胞增殖;ASS1 表达降低时,胰岛β细胞可通过 AIF 途径启动细胞凋亡。 ASS1可能在胰岛β细胞的增殖和凋亡中发挥一定调控作用。     

IRAK4对心肌细胞凋亡的影响

目的 探讨白介素-1受体相关激酶-4（interleukin 1 receptor-associated kinase-4,IRAK-4）对心肌肥厚诱导的心肌细胞凋亡的影响。方法 本研究采用野生型（C57）和IRAK4基因敲除型（heterozygous IRAK4 knockout,IRAK4 HET）两组小鼠,行胸主动脉缩窄术（aortic banding,AB）建立动物模型。术后4周取材,用TUNEL法检测心肌组织细胞凋亡水平,Western blot法检测Bcl-2、Bax、C-caspase-3的表达水平。观察IRAK4基因敲除对压力负荷诱导的小鼠心肌组织中心肌细胞凋亡的影响;采用H9C2细胞（对照组）和IRAK4过表达的H9C2细胞（pcDNA3.1-IRAK4）,使用血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）分别刺激0、15、30、60min,用Western blot法检测各组细胞中Bcl-2、Bax、C-caspase-3的表达水平;AngⅡ组和pcDNA3.1-IRAK4组细胞经AngⅡ刺激48h后,用TUNEL法检测心肌细胞凋亡水平。观察IRAK4过表达对AngⅡ诱导的心肌细胞凋亡的影响。结果 AB术后,与C57组小鼠相比,IRAK4 HET小鼠Bax、C-caspase-3蛋白表达水平显著增高,Bcl-2蛋白表达水平降低,心肌细胞凋亡水平明显增加;AngⅡ刺激后,与AngⅡ组细胞比较,PC DNA3.1-IRAK4组细胞Bcl-2的表达水平上调,Bax、C-caspase-3的表达水平下调,细胞凋亡数量明显降低。结论 IRAK4对心肌肥厚所诱导的心肌细胞凋亡具有保护作用。     

二烯丙基二硫诱导人鼻咽癌CNE1细胞凋亡

目的 探讨二烯丙基二硫(DADS)诱导人鼻咽癌CNEl细胞凋亡的生物学效应.方法 通过MTT法检测DADS对CNE1细胞生长的影响;用光学显微镜、流式细胞仪研究DADS诱导细胞凋亡的作用.免疫组织化学法检测细胞内Bcl-2、Bax蛋白的表达,Western blot法检测细胞内Caspase-3蛋白的表达.结果 DADS能抑制CNE1细胞的生长.DADS处理CNE1细胞后,细胞呈凋亡特征性改变.流式细胞分析显示DADS呈浓度依赖性诱导CNE1细胞凋亡.免疫组织化学结果表明DADS处理细胞后,Bax蛋白表达升高,Bcl-2蛋白表达下降.随药物浓度的增加Caspase-3蛋白表达增强.结论 DADS具有诱导CNE1细胞凋亡的作用,其机制可能与Bcl-2/Bax下降,促进Caspase-3活化有关.     

岩大戟内酯4种活性单体对人脑胶质瘤U251细胞增殖及凋亡的影响

目的 研究岩大戟内酯4种活性单体对人脑胶质瘤U251细胞增殖抑制及诱导凋亡的作用。方法 用不同浓度的岩大戟内酯A （JA）、17-羟-岩大戟内酯A （HJA）、岩大戟内酯B （JB）、17-羟-岩大戟内酯B （HJB）处理U251细胞,分别在12、24、48h时间点,用MTT法检测细胞增殖抑制率;在24h时间点,通过LDH释放检测细胞毒性,流式细胞术检测细胞早期凋亡率,Western blot法检测凋亡相关信号蛋白Bax、Bcl-2、cleaved-caspase-3的表达。结果 JA、HJA对U251细胞无作用。与空白对照组比较,JB、HJB使细胞增殖均受到抑制,并呈浓度和时间依赖关系（P<0.05）;使LDH释放率、早期凋亡率、Bax和cleaved-caspase-3表达均随着给药浓度的升高而增大,而Bcl-2的表达降低（P<0.05）。结论 JB和HJB可能通过诱导细胞凋亡而对人脑胶质瘤U251细胞产生作用。     

Bcl-2抑制剂S1诱导的卵巢癌细胞凋亡对自噬影响的实验研究

【目的】 凋亡与自噬密切相关,但二者之间的关系尚需进一步探究。本研究利用Bcl-2抑制剂S1建立卵巢癌细胞(SKOV3)凋亡模型,初步探究S1诱导的SKOV3细胞中凋亡对自噬的影响。 【方法】 培养SKOV3细胞。用MTT法检测S1对细胞生存率的影响。用流式细胞术检测细胞凋亡率。用蛋白质印迹方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、caspase3和自噬相关蛋白Beclin1、LC3的变化。用免疫荧光技术检测Beclin1及LC3蛋白的表达情况。在S1作用的基础上,应用广谱caspase抑制剂Z-VAD抑制caspase后,检测SKOV3细胞中自噬相关蛋白Beclin1、LC3的变化。 【结果】 S1能够降低SKOV3细胞的生存率;增加SKOV3细胞的凋亡率。与对照组(0 h)相比,S1组(2、4、8、12、24、48 h)中的Bcl-2蛋白表达持续降低,Bax及caspase3蛋白表达持续增高,呈现出明显的时间依赖性;S1组(2、4、8、12、24、48 h)中自噬的发生也呈时间依赖性,但自噬并不是持续增强的,在12 h时,自噬相关蛋白Beclin1和LC3蛋白表达水平最高,12 h后则呈下降趋势,Beclin1和LC3的荧光结果也表现出一致的现象。与S1单独作用(8、24 h)相比较,给予广谱caspase抑制剂Z-VAD,8 h结果显示 Beclin1及LC3蛋白的表达水平基本无变化,而24 h结果显示Beclin1及LC3蛋白的表达水平显著增高,同时荧光实验也显示出同样的结果。 【结论】 在SKOV3细胞中,S1通过抑制Bcl-2、促进Bax释放,诱导细胞发生凋亡,并呈时间依赖性增强。同时S1通过抑制Bcl-2,释放自噬起始基因Beclin1,诱导自噬发生。但是自噬并未始终呈时间依赖性增强,自噬水平在S1长时间作用下反而出现下降的趋势。据此推测,随着S1诱导凋亡的不断增强,大量活化的caspase可能通过裂解自噬起始基因Beclin1,从而抑制Beclin1诱导的自噬。     

EGCG诱导前列腺癌细胞PC-3凋亡及对Survivin蛋白表达的影响

目的探讨表没食子儿茶素没食子酸酯(epigallocat-echin-3-gallate,EGCG)对人前列腺癌细胞PC-3凋亡及对其Survivin蛋白表达的影响。方法使用不同浓度的EGCG(0、20、40、80μg/mL)处理前列腺癌细胞株PC-3,通过细胞增殖曲线实验检测EGCG对PC-3细胞增殖的影响;流式细胞仪检测不同浓度EGCG处理PC-3细胞48h后对细胞周期及凋亡的影响;用RT-PCR法检测各浓度EGCG作用48h后PC-3细胞中Survivin基因的表达差异,使用Western blot进行确认。结果 EGCG可以抑制PC-3细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用随EGCG浓度的增加而增强(P<0.05);Sur-vivin在PC-3细胞中高表达,EGCG促使PC-3细胞的Survivin表达下调,其表达水平随EGCG浓度的增加而减少(P<0.01)。结论 EGCG能下调PC-3细胞中Survivin蛋白的表达,这可能是EGCG抑制PC-3细胞增殖、诱导其凋亡的关键机制。