人类神经上皮肿瘤中Nestin~+细胞的分离培养和表达

目的:检测巢蛋白(Nestin)在神经上皮肿瘤组织、细胞中的表达,评价Nestin+细胞体外生物学特性并探讨其意义.方法:采用免疫组化法检测神经上皮肿瘤组织中Nestin的表达情况,免疫磁珠法分选肿瘤组织中的Nestin+细胞,悬浮细胞培养法进行Nestin+细胞的增殖、分化与鉴定,RT-PCR法检测Nestin蛋白在其中的活性表达情况.结果:Nestin在肿瘤内皮细胞中均有阳性染色,而在神经上皮肿瘤细胞中阳性染色比例为9.5%～96.2%,且Nestin+细胞比例及染色强度与肿瘤的恶性程度正相关.Nestin+细胞能在无血清培养基中形成典型的脑肿瘤球,在含血清培养基中分化为成熟的神经细胞系.Nestin蛋白在Nestin+细胞中活性表达强度约为阴性细胞的18.5倍,其表达强度取决于细胞的来源.结论:Nestin表达检测有助于正确评价神经上皮肿瘤的生物学行为和恶性程度,并可作为判断肿瘤病理级别和患者预后的重要依据.     

巢蛋白在肾小球足细胞中的研究进展

巢蛋白(Nestin)是一种属于中间丝的细胞骨架蛋白.自1990年Lendahl等[1]发现Nestin表达于CNS干细胞中以来,倍受研究者的关注.以往研究表明,在正常的中枢神经系统内,Nestin 主要在胚胎期和成熟的神经前体细胞一过性表达.因而Nestin常被视为神经前体细胞的标志物.然而,近年研究发现在肾脏足细胞中有大量Nestin表达.本文就Nestin在足细胞的研究进展作一综述.     

Nestin阳性细胞在小鼠心肌组织中的表达及分布特征

[目的]了解Nestin在小鼠正常和损伤心脏组织中的表达及分布特征,探讨Nestin能否作为心肌干细胞的标志物.[方法]通过倒置荧光显微镜观察、RT-PCR和实时荧光定量PCR检测,分析Nestin在胚胎期13.5 d、出生后1d、7d、1月、3月的Nestin-GFP转基因小鼠心脏组织中的表达情况;建立小鼠心肌梗死模型,观察损伤后心肌组织中Nestin的表达情况;利用免疫荧光染色法检测小鼠心脏组织中Nestin与多种干细胞标记物的共表达关系.[结果]胚胎13.5 d Nestin表达主要集中于大脑、脊髓、视网膜等部位,但在心脏组织中也可观察到Nestin的绿色荧光,小鼠出生后Nestin的表达随着小鼠年龄的增加而逐渐减少,并且RT-PCR、Q-PCR的结果显示Nestin表达同样呈递减趋势.在梗死部位的心肌组织中可见Nestin阳性的细胞较正常组织显著增多.可见Sca-1、c-kit、Isl-1、Nkx2.5在心肌组织中广泛表达,但是未与Nestin共表达,而Nestin在正常与损伤组织均可与musashi-1、vimentin共表达.[结论]Nestin与心脏发育成熟有密切的关系,可能为神经外胚层来源的一类心肌干细胞.     

Nestin 和 Ki67 在卵巢上皮性癌组织中的表达及临床意义简

目的 探讨Nestin及Ki67在卵巢上皮性癌组织中的表达及其与临床病理特征的关系.方法 对2007年1月～2009年1月邯郸市中心医院妇科60例卵巢癌患者及20例卵巢正常患者的病理资料进行回顾性分析,采用免疫组化SP法检测卵巢上皮性癌标本及正常组织中Nestin及Ki67的表达,分析并比较正常卵巢组织及不同病理类型、FIGO分期、残余肿瘤直径的卵巢组织中Nestin及Ki67的表达情况.结果 ①卵巢上皮性癌标本中Nestin和Ki67阳性表达率（38.5％、76.7％）明显高于正常卵巢组织（5.0％、15.0％）,两者相比,差异均有统计学意义（均P＜0.05）.②组织分化程度高级别的卵巢癌组织中Nestin及Ki67阳性表达率明显高于低级别者（P＜ 0.05）;FIGO分期越高、残余肿瘤直径越大,Nestin、Ki67阳性表达率越高（均P＜0.05）.③Nestin与Ki67在卵巢癌中的表达无明显相关性（r=0.176,P=0.13）.结论 Nestin与Ki67的表达与卵巢癌的发生、发展有密切关系,对Nestin与Ki67的检测可用于判断卵巢上皮性肿瘤的恶性程度及其预后.     

Nestin、Wnt1和β-catenin在小鼠SVZa-RMS-OB通路的表达

目的:研究Nestin、Wnt1和β-catenin在小鼠SVZa-RMS-OB通路的表达情况. 方法:取P0昆明小鼠全脑组织,冰冻切片,切片厚度为20μm,行免疫荧光双标检测Nestin和Wnt1在小鼠SVZa-RMS-OB通路的表达情况,行免疫荧光单标检测β-catenin小鼠SVZa-RMS-OB通路的表达情况. 结果:Nestin在SVZa表达最高,在OB表达最低,在RMS表达介于SVZa和OB之间;Wnt1在OB表达最高,在RMS表达最低,在SVZa的表达介于OB和RMS之间;β-catenin在SVZa表达最高,在OB表达最低,在RMS表达介于SVZa和OB之间. 结论:随着SVZa神经干细胞从SVZa向OB迁移,Nestin和β-catenin表达逐渐减低;Wnt1在迁移终点OB高表达,在RMS迁移途中表达最低;Nestin、Wnt1和β-catenin在小鼠SVZa-RMS-OB通路的不同表达可能与SVZa神经干细胞增殖、分化有关.     

VEGF-C在慢性疼痛所致认知功能障碍中的作用

目的 研究慢性疼痛时VEGF-C水平变化,并探究其在慢性疼痛所致的认知功能障碍中的作用.方法 随机将60只8周龄的SD大鼠分为两组,对照组不做任何处理,实验组构建慢性疼痛认知功能障碍模型,Morris水迷宫法评估所有大鼠实验前后的学习记忆功能,ELISA法检测血清VEGF-C浓度、Western Blot检测大鼠海马体的GFAP、Nestin、NeuN蛋白在脑组织中的表达;体外分离原代星形胶质细胞以及神经干细胞,根据是否转染VEGF-C重组载体,将细胞分为敲减组、过表达组和空载组,检测组3细胞对其共培养神经干细胞的分化以及轴突发育以及神经干细胞周期的影响,Western Blot检测各组GFAP、Nestin、NeuN的表达水平.结果 Morris水迷宫实验结果显示,与对照组相比,实验组大鼠出现认知功能障碍;血清VEGF-C浓度较对照组有减少;Western Blot显示实验组GFAP表达升高、Nestin、NeuN表达均降低;细胞实验中,在敲减组降低星形胶质细胞中VEGF-C的分泌水平后,共培养的神经干细胞分化以及轴突发育均减慢,细胞分裂减缓.Western Blot检测结果显示,敲减组GFAP表达升高、Nestin、NeuN表达降低,过表达组趋势与之相反.以上差异均有统计学意义(P<0.05).结论 慢性疼痛模型大鼠VEGF-C分泌减少,而降低星形胶质细胞的VEGF-C表达可影响神经干细胞的分化和轴突发育,神经干细胞周期延长,这可能是导致慢性疼痛引发的认知功能障碍的重要原因.     

神经中间丝蛋白Nestin在胎肝中的表达

目的 采用免疫组织化学方法标记不同发育时期人胚胎肝干细胞中巢蛋白(Nestin)的表达，探讨肝干细胞新的表面标志蛋白。方法 取材不同发育时期胎儿肝脏，固定并制成石蜡切片，ABC法标记神经前体细胞的特异性表面标记Nestin在胎肝干细胞中的表达。结果 汇管区周边界板处卵圆样干细胞表达Nestin阳性，Nestin阳性细胞呈单层紧密排列成管，呈鞘样包绕着早期汇管区，部分包绕着初级汇管区，随着次级汇管区的成熟，Nestin阳性卵圆样干细胞逐渐局限于赫令管周围；此外胚胎发育不同时期可见Nestin阳性单个核样细胞散布在肝实质内。结论 肝脏内有Nestin表达阳性的干细胞存在，其功能、来源需要进一步深入研究。     

神经中间丝蛋白Nestin在胎肝中的表达

目的 采用免疫组织化学方法标记不同发育时期人胚胎肝干细胞中巢蛋白(Nestin)的表达,探讨肝干细胞新的表面标志蛋白。方法 取材不同发育时期胎儿肝脏,固定并制成石蜡切片,ABC法标记神经前体细胞的特异性表面标记Nestin在胎肝干细胞中的表达。结果 汇管区周边界板处卵圆样干细胞表达Nestin阳性,Nestin阳性细胞呈单层紧密排列成管,呈鞘样包绕着早期汇管区,部分包绕着初级汇管区,随着次级汇管区的成熟,Nestin阳性卵圆样干细胞逐渐局限于赫令管周围;此外胚胎发育不同时期可见Nestin阳性单个核样细胞散布在肝实质内。结论 肝脏内有Nestin表达阳性的干细胞存在,其功能、来源需要进一步深入研究。     

局灶性脑缺血再灌注大鼠Nestin的表达

目的了解局灶性脑缺血再灌注大鼠脑组织中Nestin的表达特点。方法采用改良的线栓法制备大脑中动脉阻塞(MCAO)2h后不同再灌注时间段(6h、12h、24h、72h、7d、14d)的大鼠局灶性脑缺血模型,应用免疫组织化学技术检测Nestin的表达。结果脑缺血再灌注后6h,Nestin 表达即有增加,至3d时Nestin 表达显著增强,Brdu /Nestin 细胞也已明显可见,至7d时Nestin 表达、Brdu /Nestin 细胞数目均达顶峰,至再灌注14dNestin 表达及Brdu /Nestin 细胞数目均已明显回落。结论脑缺血可引发大鼠Nestin的表达上调,并可诱导神经干细胞增殖。     

干细胞相关基因Nestin在胃神经内分泌肿瘤中的表达及临床意义

目的 研究干细胞相关基因Nestin在胃神经内分泌肿瘤中的表达,分析其与肿瘤生物学特点及患者生存时间的关系。 方法 应用组织芯片及免疫组织化学法,检测91例胃神经内分泌肿瘤标本及正常组织中Nestin的表达,并结合胃神经内分泌肿瘤不同病理亚型、临床病理参数和患者预后进行分析。 结果 91例中,27例(29.67%)胃神经内分泌癌表达Nestin,而胃神经内分泌瘤及正常胃黏膜组织均不表达Nestin。Nestin表达与胃神经内分泌癌患者的性别、肿瘤浸润深度、脉管侵犯及TNM分期有显著相关性。Kaplan-Meier曲线显示,Nestin阳性表达的胃神经内分泌癌患者生存率显著低于阴性表达组。 结论 Nestin在胃神经内分泌肿瘤不同的病理亚型间差别表达,Nestin的表达可能促进了胃神经内分泌癌的发生发展,并可能作为胃神经内分泌癌的干细胞标记物用于判断预后。     

成人脂肪基质细胞体外诱导星形胶质细胞的形态学和超微结构研究

目的 研究成人脂肪基质细胞(ADSC)诱导分化前、后细胞的生物学特性和超微结构特征.方法 体外分离、培养ADSC,应用化学诱导剂对其进行诱导,倒置显微镜下观察ADSC及其诱导分化细胞的形态;免疫细胞化学检测神经巢蛋白(Nestin)、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)的表达情况;Real-time PCR检测ADSC诱导分化前、后Nestin、GFAP基因mRNA的表达情况;透射电镜观察诱导分化细胞的超微结构.结果 体外培养的ADSC形态类似成纤维细胞,可在体外稳定扩增10代以上.诱导分化的细胞具有星形胶质细胞的超微结构特征;Nestin在细胞质中呈阳性表达,GFAP在细胞质及细胞核中均呈阳性表达.两种蛋白的阳性表达率在诱导14d时达到高峰分别为:Nestin(14.4 ±3.6)%,GFAP(87.3±5.3)%,此后两种蛋白的阳性表达率保持不变.Nestin及GFAP基因mRNA在诱导前及诱导后(1 d、7d、14d、20d)各时间点均有表达,且mRNA的平均相对浓度随着诱导时间的延长逐渐增高,Nestin在诱导后14d达到最高水平,GFAP在诱导后20d达到最高水平(P<0.05).结论 成人脂肪基质细胞的胞质中具有神经干细胞标志物Nestin的基因遗传物质,可将其诱导分化为具有成熟星形胶质细胞超微结构及GFAP蛋白、基因表达的细胞.     

Nestin在EAE大鼠脑中的表达及意义

目的研究神经干细胞标记蛋白——神经巢蛋白（Nestin）在实验性变态反应性脑脊髓炎（Experimental allergic encephalomyelitis，EAE）大鼠脑中的表达及意义。方法以豚鼠脑脊髓匀浆加完全福氏佐剂作为抗原，给予Wistar大鼠四足皮内注射，建立EAE模型。应用免疫组织化学技术检测EAE大鼠脑中Nestin的表达，与对照组比较，并做成组f检验分析其表达是否具有统计学意义。结果Nestin在EAE大鼠脑室管膜下区和皮质中表达增多，与正常对照组比较有显著性差异（P〈0.01）。结论Nestin表达显著性增强，表明神经干细胞在EAE大鼠脑中有增殖，增殖的神经干细胞可以为神经系统的结构和功能修复提供一定的物质基础。     

BMSCs移植联合电针治疗对脑出血大鼠巢蛋白表达的影响

目的 探讨骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）移植联合电针（electroacupuncture,Ea）治疗对脑出血大鼠脑内巢蛋白（Nestin）表达的影响.方法 取健康SD大鼠110只,随机分为正常组、假手术组、生理盐水组、电针组、BMSCs移植组和BMSCs移植联合电针治疗组.通过向SD大鼠尾壳核注射Ⅰ型胶原酶和肝素制备脑出血模型,并通过BMSCs移植和电针刺激进行治疗,采用免疫组织化学法观察大鼠脑内Nestin的表达.结果 正常组、假手术组、生理盐水组Nestin均有少量表达,三组之间无明显差异.相同时相点电针组、BMSCs组、BMSCs-Ea组Nestin表达依次升高,均高于生理盐水组（P〈0.01）;各治疗组出血侧较正常侧高（P〈0.01）;在正常侧,同一时相点各治疗组高于对照生理盐水组（P〈0.01）.结论 BMSCs移植联合电针治疗脑出血大鼠可上调大鼠脑内Nestin的表达,从而有助于神经组织的修复.     

CD10、Nestin蛋白在皮肤附属器肿瘤组织中的表达及意义

目的:探讨白细胞分化抗原簇10(CD10)、巢蛋白(Nestin)在皮肤附属器肿瘤组织中的表达及意义。方法:收集2018年1-12月本院收治的40例皮肤附属器肿瘤患者的肿瘤组织标本,另选择5例乳腺癌根治手术切除标本中远离肿瘤的皮肤为正常皮肤对照。免疫组织化学标记CD10、Nestin蛋白,观察各例肿瘤CD10、Nestin蛋白的表达情况、阳性细胞的类型和分布。结果:汗腺肿瘤、毛分化肿瘤及皮脂腺肿瘤中的CD10蛋白表达情况比较,差异有统计学意义(P=0.000),但Nestin蛋白的表达情况比较差异无统计学意义(P=0.277)。CD10在正常皮肤的皮脂腺、汗腺周围的肌上皮细胞呈阳性表达,在小汗腺和大汗腺上皮呈阴性;Nestin在正常皮肤的皮脂腺外围基底样细胞、汗腺分泌部上皮细胞呈弱阳性表达,在分化的皮脂细胞呈阴性,肌上皮细胞阳性表达。多数类型汗腺肿瘤CD10阴性,部分病例显示瘤细胞胞质内CD10阳性表达。汗管瘤的Nestin为阴性;螺旋腺瘤肌上皮部分Nestin阳性。透明细胞汗腺瘤腺腔样结构腔膜缘细胞显示Nestin颗粒状阳性。乳头状汗腺腺瘤肌上皮细胞Nestin阳性。多数类型毛分化肿瘤表达CD10及Nestin:毛母细胞瘤间质细胞CD10阳性表达,Nestun弱阳性;毛母质瘤瘤细胞CD10阳性,Nestin阳性;毛囊瘤瘤细胞CD10阳性,角化细胞Nestin阳性。皮脂腺瘤和皮脂腺癌的CD10多呈阳性表达,各例皮脂腺瘤和皮脂腺癌的Nestin表达类似,多显示为阴性或呈弱阳性表达,部分病例显示个别瘤细胞胞质内颗粒状阳性表达。结论:CD10是毛分化、皮脂腺分化皮肤附属器肿瘤的特异性标记物,干细胞标记物Nestin在这些肿瘤的表达方式可以作为肿瘤成分分化特点的参考。     

超声三维斑点追踪及面积应变技术在冠心病室壁运动异常检测中的价值

【摘要】目的检测垂体腺瘤组织中干细胞标志物的表达情况,培养并初步鉴定垂体瘤干细胞。方法提取42例液氮冻存的垂体腺瘤组织标本中的总RNA,通过RT-PCR方法检测瘤组织中Nestin的表达情况;通过免疫荧光法检测无血清条件下培养的垂体瘤细胞球中干细胞标志物(Nestin、Sox2)的表达情况。结果 42例肿瘤组织标本中,Nestin mRMA阳性表达37例;无血清培养条件富集培养的悬浮细胞球中均可通过免疫荧光法检测出Nestin、Sox2的表达。结论垂体腺瘤组织中存在干细胞标志物的表达,通过无血清培养亦可培养出垂体瘤干细胞。 国家自然科学基金项目(No.81072077)     

人脑胶质瘤中巢蛋白、基质金属蛋白酶-9蛋白的表达及临床意义

目的探讨人脑胶质瘤中脑肿瘤干细胞标记物巢蛋白（Nestin）和基质金属蛋白酶-9（MMP-9）蛋白的表达及临床意义。方法采用免疫组织化学方法检测66例不同级别胶质瘤组织标本及8例正常脑组织标本中Nestin．MMP-9蛋白表达。结果人脑胶质瘤标本中Nestin、MMP-9蛋白表达明显升高;Nestin、MMP-9蛋白总的阳性细胞表达率随着胶质瘤病理级别的增加而增高（P〈0．01）;人脑胶质瘤中Nestin蛋白的阳性细胞表达率和MMP-9蛋白阳性细胞表达率成正相关（P〈0．01）。结论人脑胶质瘤中Nestin、MMP-9蛋白的表达与脑胶质瘤的恶性程度密切相关;可能在脑胶质瘤的侵袭性生长、复发和转移过程中起协同作用。     

乳腺癌中Nestin与CD133的表达与上皮间质转化的关系

目的 探讨乳腺癌中巢蛋白(Nestin)与CD133的表达与上皮间质转化(EMT)的关系.方法 收集复旦大学附属中山医院青浦分院2010年1月至2013年6月67例乳腺癌病理标本,使用免疫组织化学染色,观察Nestin、CD133与E-cadherin在乳腺癌中的表达.结果 Nestin的总体阳性率为73.13%(49/67),CD133的总体阳性率为40.30%(27/67).Nestin在三阴性乳腺癌和非三阴性乳腺癌中的阳性率分别为90.48%(19/21)和65.22%(30/46),差异无统计学意义(P>0.05),而CD133的分别为71.43%(15/21)和26.09%(12/46),差异有统计学意义(P<0.01).Nestin和CD133在E-cadherin阴性组中的阳性率为95.83%(23/24)和58.33%(14/24),高于在E-cadherin阳性组中的60.47%(26/43)和30.23%(13/43),差异均有显著统计学意义(P<0.01).结论 Nestin能够用以特异性检测乳腺癌干细胞的表达,CD133能够用以特异性检测三阴性乳腺癌中干细胞的表达,乳腺癌组织表达干细胞标记可能与肿瘤细胞发生EMT有关.     

Oct-4和Nestin在肺癌中共表达的临床意义

目的研究Oct-4和Nestin共表达在肺癌中的临床意义。方法收集320例确诊肺癌患者的肿瘤组织标本,采用PCR和免疫组织化学法检测肿瘤干细胞和非肿瘤干细胞中干细胞相关基因的表达差异。结果体外实验显示,与非肿瘤干细胞相比,肿瘤干细胞,尤其是高表达Oct-4和Nestin的肿瘤干细胞致瘤性明显增强。更重要的是,320例中的42例（13.13%）肿瘤组织呈Oct-4和Nestin表达阳性。单因素分析和多因素分析提示,Oct-4和Nestin的表达与起病年龄、淋巴结转移情况密切相关（P〈0.05）。结论 Oct-4和Nestin在肺癌的发展中起到重要的调节作用,Oct-4和Nestin或许可作为判断肺癌预后的重要指标。     

SDF-1基因修饰的真皮多能干细胞移植修复脊髓损伤

目的 探索基质源性因子-1(SDF-1)基因修饰的真皮多能干细胞(dMSCs)移植后可否启动Nestin阳性细胞修复脊髓损伤(SCI).方法 采用贴壁法分离培养大鼠dMSCs,并将pAdEasy腺病毒表达载体系统构建的Adv-SDF-1加入至dMSCs共同培养,获得表达SDF-1的dMSCs.用改良Allen重物打击法将36只大鼠制作SCI并均分为3组,在SCI处用显微注射的方法每组分别加入表达SDF-1的dMSCs、dMSCs、生理盐水.伤后3、7 d检测损伤处脊髓神经干细胞功能状况,采用BBB评分法评价大鼠的神经功能恢复情况.结果 Adv-SDF-1感染的dMSCs SDF-1表达增加,将SDF-1修饰的dMSCs移植后还可明显增加室管膜Nestin阳性细胞数量(P＜0.05),并迁移至SCI部位,BBB评分显示SDF-1修饰的dMSCs移植后评分更高(P＜0.05).结论 SDF-1基因修饰的dMSCs移植后可启动脊髓Nestin阳性细朐参与损伤修复,更好地促进神经功能恢复.     

NMDA受体亚单位NR2B特异性拮抗剂Ro25-6981对缺血再灌注大鼠SVZ区神经干细胞增殖的影响研究

目的:探讨NMDA受体亚单位NR2B特异性拮抗剂Ro25-6981对缺血再灌注大鼠脑室下区(SVZ)神经干细胞增殖的影响。方法:选取7d年龄新生SD大鼠并指作为缺血再灌注模型。采取随机数字表法均分为正常对照组、特异性拮抗剂组以及缺血再灌注组。统计各组间SVZ区Nestin表达量,同时记录BrdU阳性细胞数的上升下降情况。结果:12h,缺血再灌注组SVZ区Nestin阳性细胞的平均吸光度明显升高,与特异性拮抗剂组相比有明显差异(P0.05)。24h等时间点特异性拮抗剂组与缺血再灌注组Nestin阳性细胞的平均吸光度明显变化较为一致。72h,缺血再灌注组BrdU阳性细胞数明显多于正常对照组以及特异性拮抗剂组,对比差异有统计学意义(P0.05)。结论:Ro 25-6981能够降低缺血再灌注大鼠SVZ区Nestin表达量及BrdU阳性细胞数,表明其可调控神经干细胞增殖的表达,值得临床关注。