可表达EB病毒核抗原的鼻咽癌/淋巴瘤细胞杂交株

EB病毒作为鼻咽癌的病原因子之一,有充分的血清流行病学证据,在鼻咽癌组织中亦可检出EB病毒DNA和EB病毒核抗原(EBNA),但在以往从鼻咽癌组织建立的传代细胞系内未检出任何EB病毒标记。我们用细胞融合方法,建立了低分化鼻咽癌上皮细胞/淋巴瘤细胞的杂交株,能表达EBNA,对探讨EB病毒引起上皮细胞恶变的机制有一定意义。现简要报道如下: 一、材料和方法用作细胞融合的两个亲代细胞株分别为:(1)低分化鼻咽癌上皮细胞株CNE_2的     

核酸重组和标记新方法的建立及在EB病毒核酸研究中的应用

鼻咽癌病毒病因的研究是在大量血清流行病学的基础上,建立分子生物学手段检查癌上皮细胞中的EB病毒基因,用以阐明鼻咽癌与EB病毒的关系:(1)除人的B淋巴细胞外,在其他类型的细胞中EB病毒均不能复制,带EB病毒的淋巴母细胞株也只产生极少的病毒颗粒;(2)从病毒感染的细胞中制备病毒核酸,不可避免地会污染少量细胞DNA,而直接影响了反应的特异性,因此迫切需要用基因工程手段制备EB病毒核酸;(3)直接研究癌组织中的EB病毒核酸,需要更敏感而有效的探针,以用于原位核酸杂交技     

鼻咽癌中EB病毒潜伏膜蛋白1启动子的突变

 【目的】 检测EB病毒潜伏膜蛋白1 (LMP1) 远端启动子L1-TR在鼻咽癌(NPC)组织中的突变情况并探讨突变对启动子活性的影响。【方法】 用聚合酶链反应(PCR)方法分别扩增出B95.8细胞和新鲜鼻咽癌组织细胞中EB病毒(EBV)的L1-TR片段,并测序比较其核苷酸序列的差异。构建含原型和突变型L1-TR启动子的荧光素酶报告质粒并分别转染HaCat细胞、B95.8细胞和C666-1细胞,比较两种启动子的活性。【结果】 和B95.8原型比较,鼻咽癌组织中的EB病毒L1-TR启动子区域有多处缺失。插入和点突变,且启动子活性明显降低(P < 0.05)。【结论】 鼻咽癌组织中LMP1启动子 L1-TR的活性与B95.8原型相比明显降低,这在EB病毒的免疫逃避机制中可能有一定的意义。     

EB病毒IgA滴度在鼻咽癌诊断的敏感性和特异性

目的评价EB病毒壳抗原IgA抗体(VCA-IgA)和EB病毒早期抗原IgA抗体(EA-IgA)滴度在鼻咽癌(NPC)筛查及鼻咽癌诊断上的敏感性和特异性。方法应用免疫酶法对5196例鼻咽癌病人EBV VCA-IgA和EBV EA-IgA抗体滴度的检测,评价其敏感性和特异性。结果在检测5196例NPC标本中,EB病毒VCA-IgA滴度<1∶5者69例,>1∶5以上5127例,鼻咽癌诊断的敏感性和特异性分别为94%和80%,EB病毒EA-IgA滴度>1∶5的敏感性和特异性分别为63%和97%。结论虽然EB病毒VCA-IgA抗体滴度作为鼻咽癌诊断有较高的敏感性,但在鼻咽癌的流行病学筛查中不能作为单独的诊断方法,必须结合临床确诊。     

EB病毒LMP1与细胞信号转导

EB病毒(Epstein-Barr virus，EBV)是Epstein和Barr于1964年最先从非洲恶性淋巴瘤组织培养中发现的一种病毒，在分类学上将EBV归人疱疹病毒γ亚科嗜淋巴细胞病毒属的DNA病毒。全球广泛分布，据估计全球约有90％以上人群感染过EBV。已证明EB病毒能引起人类传染性单核细胞增多症(IM)，Burkitt’S淋巴瘤(BL)、鼻咽癌(NPC)、移植后淋巴瘤、何杰金氏病(HD)及外周T细胞淋巴瘤(PTL)等多种疾病。     

EB病毒和鼻咽癌

鼻咽癌 (NPC)是中国南部高发肿瘤。EB病毒与NPC密切相关 ,表现在NPC患者血清通常含高滴度抗EBVIgA及EBV的核心抗原抗体。应用PCR在NPC组织和外周血液可检测到EBV及相应基因。本文就EBV与NPC的关系 ,与NPC相关的EBV的生物学特性和进展 ,EB病毒和细胞增殖分化方面的信号转导关系作一综述。     

EB病毒对体外培养的人鼻咽上皮细胞感染途经的研究

用异硫氰酸荧光素(FITC)标记EB病毒(EBV)感染体外培养的人胚鼻咽上皮和鼻咽癌细胞株(CNE-1和CNE-2),对照为EBV受体阳性的Raji和Ramos细胞。在荧光显微镜下发现FITC-EBV 可与Raji和Ramos细胞结合,如事先经未标记的EBV处理则与 FITC-EBV 结合的阳性细胞数明显下降。贴壁生长的鼻咽上皮细胞不能与FITC-EBV 结合,而刮落的鼻咽上皮细胞则能与FITC-EBV 结合,结果提示鼻咽上皮细胞质膜微细损伤可能成为EBV 直接进入细胞的门户,受损的鼻咽癌细胞更易为EBV 侵入。     

EB病毒与侵袭性乳腺癌有关

一个多国科学家小组提示,EB病毒(EBV)可能与乳腺癌的发生有关。研究人员报道说,他们在100例侵袭性乳腺癌患者的51个肿瘤组织活检标本中查出了EBV,但在30个对照标本中仅查出3个标本有EB病毒。此外,病毒阳性肿瘤与EBV阴性肿瘤相比更有可能属于较高组织学等级,亦更可能缺乏类固醇激素受体和更有可能来自患有3个以上肿瘤阳性淋巴结的病人。     

高浓度EB病毒感染人永生化上皮细胞Hacat系

目的探讨EB病毒感染上皮细胞的机制。方法大规模培养绒猴淋巴细胞B958系,从中提取并浓缩EB病毒,用胎儿脐带血淋巴细胞滴定后,以高浓度EB病毒感染人永生化上皮细胞Hacat系。提取Hacat细胞基因组DNA,PCR扩增EB病毒基因组特异性核酸序列BamHIw片断,Southernblotting及原位杂交验证感染结果。结果PCR、Southerblotting及原位杂交结果证实高浓度EB病毒能够感染Hacat细胞,但是感染率非常低。结论EBV对上皮细胞存在CR2或多聚IgA受体介导之外的未知感染途径。     

广州地区鼻咽癌EB病毒LMP1基因N端XhoI酶切位点的丢失

目的：检测广州地区鼻咽癌组织EB病毒LMP1基因N-末端区Xho Ⅰ酶切位点的丢失，探讨LMP1基因变异在鼻咽癌发生发展中的作用。方法：收集中山大学肿瘤防治中心鼻咽癌新鲜活检标本63例以及EB病毒健康携带者外周血单个核细胞10例。采用QLAamp DNA Mini Kit和qlaAMP DNA Blood Mini Kit分别抽取组织和外周血单个核细胞的DNA，应用巢式PCR扩增EB病毒LMP1基因的N-末端区，并用Xho Ⅰ对扩增产物进行酶切。采用四色荧光末端终止法对扩增产物进行序列分析。结果：10例健康携带者外周血单个核细胞的EB病毒LMP1基因N-末端区均未见Xho Ⅰ酶切位点的丢失。63例鼻咽癌组织中有50例(79％)出现Xho Ⅰ酶切位点的丢失(Xho Ⅰ--loss)，4例(6％)为Xho Ⅰ酶切住点部分丢失，只有9例(14％)未见Xho Ⅰ酶切住点的丢失(wt--Xho Ⅰ)。除了Xho Ⅰ酶切住点的丢失(nt：169423～169428；GAGCTC→GA[T] CTC)外，还发现4个错义点突变。结论：广州地区EB病毒健康携带者外周血单个核细胞所携带的EB病毒LMP1基因为wt--Xho Ⅰ，而在鼻咽癌组织中主要为Xho Ⅰ—loss。因此，我们认为EB病毒LMP1基因N-末端区Xho Ⅰ酶切住点的丢失和其他的错义点突变可能是在鼻咽癌的发生发展过程中产生的。     

EB病毒DNA在正常全鼻咽组织及鼻咽癌中的表现

作者应用原位核酸杂交技术，采用ＥＢ病毒ＢａｍＨＩ－Ｗ片段为探针，检测了湘南地区正常鼻咽粘膜、鼻咽低分化鳞癌和未分化癌，高分化和中分化鳞癌，颈淋巴结转移性低分化鳞癌，颈淋巴结其它部位转移癌及鼻咽临近区恶性肿瘤标本。ＥＢＶＤＮＡ阳性例数分别为０／１０个，２４／２６个，２／７个，６／６个，０／４个和４／２４个。同时，对上述病例进行血清ＥＢ病毒壳抗原免疫球蛋白Ａ抗体检测，低分化鳞癌和未分化癌阳性例数为２３／２６个，与ＥＢＶＤＮＡ检测结果一致，经统计学处理，两者具相关性。实验结果表明：（１）湘南地区鼻咽癌的发生中ＥＢＶ感染起非常重要作用，ＥＢ病毒与鼻咽低分化鳞癌及未分化癌关系密切。（２）血清ＥＢＶ壳抗原ＩｇＡ抗体检测可作为对鼻咽癌早期诊断的有效监测指标。（３）在颈部原发灶不明的转移癌中有ＥＢＶＤＮＡ片段的检出，对确定鼻咽癌的诊断具有一定的价值。     

ANTICOMPLEMENT IMMUNOENZYMATIC METHOD OF DETECTING EPSTEIN-BARR NUCLEAR ANTIGEN IN NASO- PHARYNGEAL CARCINOMA CELLS AND NORMAL EPI- THELIAL CELLS

Exfoliated cells collected by negative pres- sure suction from the nasopharynx of patients with poorly differentiat.ed and undifferentiated cell carcinoma and of suspect nasopharyngeal {:arcinoma (NPC) patients were examined for Epstein-Barr nuclear antigen (EBNA) by anti- complement immunoenzymatic method (ACIE). All 79 NPC patients had EBNA-positive carcino- ma cells, while the positive rate of cytologic and histologic examination was only 87.3To and 91.1"z. No EBNA was found in tumor cells from pa- tients with head and neck malignant and benign tumors other than NPC, nor was it found in nasopharyngeal epithelial cells of dead fet.uses. 6 persons with EBNA-positive cells detected by this method, with no carcinoma detected by cytology or histology, were reexamined regularly. Carcinoma cells were detected from l week to 3 months later in 4. This shows that this ACIE method is specific and sensitive and can be used for early NPC detection, especially in combina- tion with serologic detection of Epstein-Barr virus (EBV) antibody. Besides finding EBNA in nasopharyngeal carcinoma cells, it can also be found in normal ciliated columnar epithelial cells and hyperplas- tic cells of the nasopharynx.     

Epstein-Barr virus infection in nasopharyngeal lymphoid hyperplasia

Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　ＴｏｄｅｔｅｃｔｗｈｅｔｈｅｒＥｐｓｔｅｉｎＢａｒｒｖｉｒｕｓ（ＥＢＶ）ｈａｒｂｏｒｓｉｎｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｌｙｍｐｈｏｉｄｈｙｐｅｒｐｌａｓｉａ（ＮＰＬＨ）ｗｈｉｃｈｉｓｆｒｅｑｕｅｎｔｌｙｔｏｂｅｓｅｅｎｉｎＧｕａｎｇｚｈｏｕ,ａｈｉｇｈｉｎｃｉｄｅｎｃｅａｒｅａｏｆｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＮＰＣ）,ａｎｄｔｏｅｘｐｌｏｒｅｔｈｅｒｅｌａｔｉｏｎｂｅｔｗｅｅｎＮＰＬＨａｎｄｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔｏｆＮＰＣＭｅｔｈｏｄｓ　Ｔｗｅｎｔｙ…     

CD25+细胞在鼻咽癌中的表达及与EBV的关系

目的探讨CD25^＋细胞在鼻咽癌组织中的表达情况及EB病毒感染对CD25表达的影响。方法用免疫组织化学方法检测CD25^＋细胞在鼻咽癌组织和鼻咽慢性炎症组织中的表达情况。并用组织原位杂交技术检测EB病毒对其表达的影响。对照组选取鼻咽慢性炎症组织。结果CD25^＋淋巴细胞在鼻咽癌组织中比在鼻咽慢性炎症组织中的表达明显升高．差异具有显著性意义（P〈0．001），且在未分化癌中表达高于角化型癌和非角化型癌（P〈0．05）。原位杂交显示EB病毒与CD25^＋淋巴细胞高表达有关。结论CD25^＋淋巴细胞在鼻咽癌组织中表达高于慢性炎症组织，EB病毒感染与CD25^＋淋巴细胞表达间存在相关性。     

鼻咽癌患者血清EB病毒DNA片段的检出及临床意义

目的：探讨鼻咽癌患者血清Epstein-Barr病毒(EBV)DNA片段检出率及其和EBV衣壳抗原IgA类抗体(VCA／IgA)的关系。方法：聚合酶链反应(PCB)加限制性内切酶酶切技术检测疱疹病毒的DNA，酶免疫组化技术检测EBV VCA／IgA抗体。结果：33例鼻咽癌患者中，抗体阳性率88％，DNA阳性率55％；对照组120例，仅1例检出EBV DNA片段。鼻咽癌患者中EBV DNA片段的检出率显著性高于对照组，但EBVDNA片段的检出率低于EBV VCA／IgA抗体的检出率。结论：进一步证实EBV与鼻咽癌有密切关系；EBV DNA片段及EBV VCA／IgA抗体检测，有利于鼻咽癌的辅助诊断。     

cDNA representational difference analysis of differentially expressed cDNA sequences in human nasopharyngeal carcinoma

ＯｂｊｅｃｔｉｖｅＴｏｓｅａｒｃｈｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌｙｅｘｐｒｅｓｓｅｄｓｅｑｕｅｎｃｅｓｃｏｒｅｌａｔｅｄｗｉｔｈｐａｔｈｏｇｅｎｅｓｉｓｏｆｈｕｍａｎｎａｓｏｐｈａｒｙｎｇｅａｌｃａｒｃｉｎｏｍａ（ＮＰＣ）,ｉｎｃｌｕｄｉｎｇｔｈｅｃａｎｄｉ...     

EBV全基因组基因芯片构建与初步验证

目的:鼻咽癌(nasopharyngeal carcinoma,NPC)高发于中国南方,是一种恶性度较高的肿瘤,与EB病毒关系非常密切。本研究利用前期已经设计和克隆好的EB病毒(EBV)已知和预计的编码基因作为cDNA探针,用于研制EBV微阵列。利用能高产EBV病毒颗粒的B95-8细胞作为检测对象,观测基因芯片检测的效果,已确定是否将来用于临床检测。方法:87个EBV基因探针通过一对设计于载体多克隆两端的引物进行PCR扩增。产物纯化后,探针被打印在Corning玻片上。通过与Cy3标记的B95-8细胞cDNA进行杂交反应,检测B95-8细胞内EBV基因表达。RT-PCR验证检测。结果:利用构建的EBV芯片,成功地在B95-8细胞中检测到了几乎所有的EBV潜伏基因的表达,随后RT-PCR验证了该结果。结论:我们成功地构建了EBV微阵列,且设计的EBV探针检测是有效的。但EBV微阵列是否可以用于鼻咽癌标本的检测还有待进一步证实。     

病毒感染与北方低发区鼻咽癌发生关系的初探

目的 了解ＥＢ病毒、人乳头瘤病毒１６／１８型及人巨细胞病毒与北方低发区鼻咽癌病因的关系。方法 采用ＰＣＲ技术检测３７例石蜡包埋的鼻咽癌组织及２０例鼻咽慢性增生组织中３种病毒的特异性基因片段。结果 ＥＢ病毒基因阳性检出率为８３．７８％,其中Ａ型７５．６８％,Ｂ型８．１０％,无复合感染,两型比较有显著差异;ＨＰＶ－１６型基因检出率为８．１０％;但ＨＰＶ－１８型及ＨＣＭＶ基因均未检出。对照组中３种病毒的     

EB病毒原位杂交的表达与鼻咽癌组织学类型的关系

为探讨ＥＢ病毒原位杂交的表达与鼻咽癌各组织学类型的关系，用ＥＢ病毒原位杂交方法对ＮＰＣ６９例、ＮＰＣ淋巴结转移１１例、非ＮＰＣ淋巴结转移性鳞状细胞癌１０例进行研究，结果：角化型鳞状细胞癌１２例全部阴性，非角化型鳞状细胞癌５４例全部阳性，腺癌３ 例阴性。