蛭倍煎对大鼠肾小管间质纤维化TGF-β1表达及细胞外基质的影响

目的:探讨蛭倍煎(水蛭、五倍子)抑制肾纤维化的作用及可能机理。方法:采用大鼠单侧输尿管(UUO)梗阻术诱导肾间质纤维化动物模型,然后随机分为假手术组(A)、模型组(B)、中药组(C)、西药组(D)。中、西药组灌胃2周后,用免疫组化的方法比较各组肾组织中TGF-β1、FN、CoⅢ的表达水平。Masson染色观察肾小管间质纤维化的程度。结果:模型组、中、西药组与假手术组比较,TGF-β1、FN、CoⅢ的表达水平明显增加(P<0.05);中、西药组与模型组比较,表达水平明显减少(P<0.05),中、西药两组间表达水平无显著差异(P>0.05)。Masson染色结果与FN一致。结论:蛭倍煎通过降低转化生长因子β1的活性和减少细胞外基质的异常沉积来改善肾间质纤维化。     

黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响

目的:动态观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾小管上皮细胞转分化的影响,初步探讨其抗纤维化分子作用机制.方法:SD大鼠随机分为假手术组(Sham)、UUO组和UUO AM治疗组(AM组).在造模后7、14天处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化方法检测肾组织中α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤连蛋白(FN)和胶原Ⅰ(col Ⅰ)表达.用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠α-SMA mRNA表达量.用Westemblot检测大鼠α-SMA蛋白表达量.结果:与假手术组相比,UUO术后大鼠肾脏病理损害进行性加重,α-SMA、FN和col Ⅰ表达显著增高(P<0.05);AM治疗后可明显减轻UUO大鼠肾组织的肾小管损伤及肾间质纤维化,使UUO大鼠肾组织中高表达的α-SMA、FN和col Ⅰ明显降低(P<0.05).结论:黄芪可能通过抑制肾小管上皮细胞转分化,减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化.     

清化固肾排毒颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠COL4及FN影响

目的:探讨清化固肾排毒方对肾间质纤维化大鼠的Ⅳ型胶原(COL4)及纤维连接蛋白(FN)的影响,从而为其对肾间质纤维化提供防治依据。方法:将大鼠随机分为6组:假手术组、模型组、洛丁新组,及清化固肾排毒方高、中、低剂量组,每组9只,建立大鼠UUO模型,通过Masson染色观察肾间质纤维化程度,免疫组织化学染色观察COL4及FN在肾间质的阳性染色表达。结果:与假手术组比较,各造模组胶原纤维蓝染部分明显增多、肾纤维化程度显著增加。与模型组相比,清化固肾排毒方(中药)各组和洛丁新组肾纤维化程度缓解,COL4及FN阳性表达显著下降(P0.05)。结论:清化固肾排毒颗粒可能通过下调COL4、FN改善肾功能,从而达到改善肾纤维化的作用。     

芪蛭真武汤改善单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化及其机制

目的:探讨芪蛭真武汤对单侧输尿管结扎(UUO)大鼠肾间质纤维化的影响,及对转化生长因子-β_1(TGF-β_1)/Smads和氧化应激反应的作用。方法:将30只雄性SD大鼠,随机分为假手术组、模型组、芪蛭真武汤高剂量组、芪蛭真武汤低剂量组、厄贝沙坦组(n=6)。模型组及各治疗组行左侧输尿管结扎,假手术组不结扎输尿管,仅分离输尿管后关闭腹腔。术后1 d开始灌胃给药,假手术组、模型组予无菌蒸馏水10 mL·kg~(-1),芪蛭真武汤高剂量组予芪蛭真武汤22.2 g·kg~(-1),低剂量组予芪蛭真武汤11.1 g·kg~(-1),厄贝沙坦组予厄贝沙坦片0.02 g·kg~(-1)。各组大鼠分别于术后14 d取材,取材前收集24 h尿液,检测24 h尿蛋白定量(24 h-Upr);收集血清用以检测肌酐(SCr),尿素氮(BUN);取结扎侧肾组织行苏木素-伊红(HE)染色、马松(Masson)染色,光镜下观察其病理改变;免疫组化法(IHC)检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA),Ⅰ型胶原蛋白(Col-Ⅰ)和纤维连接蛋白(FN)的表达;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TGF-β_1,Smad3,p-Smad3,非吞噬细胞氧化酶Ⅳ(NOX4)的表达。结果:与假手术组比较,模型组SCr,BUN,胶原容积分数(CVF),24 h-Upr均增高(P0.05,P0.01),模型组α-SMA,Col-Ⅰ,FN,TGF-β_1,p-Smad3,NOX4蛋白的表达均较高(P0.05);与模型组比较,芪蛭真武汤高剂量组和厄贝沙坦组的SCr,BUN,CVF,芪蛭真武汤高剂量组的24 h-Upr均较低(P0.05);各中药治疗组α-SMA,Col-Ⅰ,FN,TGF-β_1,Smad3,p-Smad3,NOX4的表达均较少(P0.05)。结论:芪蛭真武汤能够减少UUO大鼠的尿蛋白,保护肾脏功能,抑制肾间质纤维化的发生、发展;其机制可能与抑制TGF-β_1/Smads信号通路和氧化应激反应有关。     

银杏叶对大鼠肾脏中组织型转谷氨酰胺酶的表达及干预作用

目的:探讨组织型转谷氨酰胺酶(tTG)在单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质中的表达及银杏叶(GBE)对其表达的影响.方法:采用左侧输尿管结扎术复制肾间质纤维化模型,将雄性Wistar大鼠随机分为假手术组、模型组、贝那普利(15 mg·kg~(-1))治疗组及银杏叶(300 mg·kg~(-1))治疗组.术后第14天处死各组大鼠,取左肾进行HE和Masson染色,观察肾间质纤维化病变;免疫组化法检测肾间质中纤维连接蛋白(FN)和tTG的表达;RT-PcR检测tTG mRNA表达.结果:模型组FN和tTG的表达明显高于假手术组(P<0.01);贝那普利组和银杏叶组治疗后二者显著低于模型组(P<0.05).结论:贝那普利及银杏叶制剂可能通过下调tTG而减轻肾间质纤维化.     

肾衰Ⅱ号方对慢性肾衰竭大鼠有氧糖酵解及肾间质纤维化的影响

目的观察肾衰Ⅱ号方对慢性肾衰竭大鼠有氧糖酵解及肾间质纤维化的影响,探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法体内实验以5/6(A/I)手术构建慢性肾衰竭大鼠模型,随机分为假手术组、模型组、中药组、西药组,进行相应干预8周后,取肾组织行PAS染色观察肾脏病理变化,Western blot检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达,免疫组化检测α-SMA、己糖激酶(HK)2蛋白定位,紫外法检测肾组织HK活性,比色法检测肾组织乳酸、丙酮酸浓度;体外实验以白细胞介素(IL)-1β刺激大鼠肾成纤维细胞NRK-49F构建NRK-49F增殖活化模型,细胞分为空白组、IL-1β组、IL-1β+肾衰Ⅱ号方低剂量组(200μg/mL)、IL-1β+肾衰Ⅱ号方高剂量组(400μg/mL)、IL-1β+2-脱氧-D-葡萄糖组(10 mmol/L),Western blot检测NRK-49F细胞α-SMA、增殖细胞核抗原(PCNA)、纤维连接蛋白(FN)、HK2蛋白表达,比色法检测细胞培养基乳酸浓度,葡萄糖氧化酶法检测细胞培养基葡萄糖浓度,免疫荧光检测HK2蛋白表达。结果体内实验:与假手术组比较,模型组PAS染色提示肾间质糖原含量增加,肾小球、肾小管形态异常;α-SMA蛋白表达明显升高(P0.01),肾组织乳酸浓度、乳酸/丙酮酸、HK活性、HK2蛋白表达均明显升高(P0.01)。与模型组比较,中药组和西药组肾组织病理变化改善,α-SMA蛋白表达、乳酸浓度、乳酸/丙酮酸、HK活性、HK2蛋白表达均明显降低(P0.05,P0.01)。体外实验:与空白组比较,IL-1β组NRK-49F细胞FN、α-SMA、PCNA、HK2蛋白表达明显升高(P0.05,P0.01);细胞培养基p H值、葡萄糖浓度明显降低(P0.05),乳酸浓度明显升高(P0.01);与IL-1β组比较,各干预组NRK-49F细胞FN、α-SMA、PCNA、HK2蛋白表达明显降低(P0.05,P0.01);细胞培养基p H值、葡萄糖浓度升高(P0.05,P0.01),乳酸浓度明显降低(P0.01)。结论肾衰Ⅱ号方可通过抑制NRK-49F细胞有氧糖酵解反应,从而阻止成纤维细胞增殖活化,实现其抗肾间质纤维化的作用。     

生、熟地黄缓解肾间质纤维化的作用及其机制研究

目的:探讨生地黄和熟地黄对单侧输尿管梗阻模型(UUO)大鼠肾间质纤维化的作用及其机制。方法:雄性SD大鼠随机分为生地黄水煎液组、熟地黄水煎液组、模型对照组、假手术组,每组5只。生地黄水煎液组、熟地黄水煎液组分别按生地黄、熟地黄剂量1.6 g/(kg·d)灌胃给药14 d,测定血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)。HE染色、Masson染色观察肾脏组织病理学变化,免疫印迹检测TGF-β1、α-SMA和Collagen-Ⅰ的表达。结果:与模型组比较,各给药组大鼠Scr、BUN值显著降低(P0.05);肾小球玻璃样病变减轻,肾小管囊性扩张和空泡变性程度缓解,胶原沉积减少,肾间质纤维化程度明显改善;TGF-β1、α-SMA和Collagen-Ⅰ表达显著降低(P0.05)。与熟地黄水煎液组比较,生地黄水煎液组的Scr、BUN值较低,胶原沉积较少,肾间质纤维化改善较明显,α-SMA表达显著减少(P0.05)。结论:生地黄和熟地黄均能缓解肾间质纤维化,以生地黄作用较强,其作用机制可能与下调TGF-β1、α-SMA和Collagen-Ⅰ的表达有关。     

活血祛瘀方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质细胞外基质的调节

目的:通过研究中药复方活血祛瘀方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、纤维连接蛋白(FN)、纤溶酶原激活物抑制剂-1(PAI-1)及肝细胞生长因子(HGF)表达的影响,探讨其对细胞外基质(ECM)的调节机制。方法:建立大鼠UUO模型,48只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、代文组、活血祛瘀方组,于治疗4周后取梗阻侧肾组织,免疫组织化学染色观察α-SMA、FN、PAI-1及HGF的阳性染色表达,并进行半定量分析。结果:与假手术组相比,模型组大鼠α-SMA、FN、PAI-1阳性表达显著升高(P<0.01)。与模型组相比,活血祛瘀方组肾间质α-SMA、FN及PAI-1阳性表达显著下调(P<0.01),而HGF阳性表达则显著上调(P<0.01)。结论:活血祛瘀方可抑制肾组织α-SMA、FN及PAI-1过度表达,诱导HGF高表达,从而减少ECM的过度聚集,这可能是活血祛瘀方抗肾间质纤维化的作用机制之一。     

复肾颗粒对肾间质纤维化大鼠肾脏TRAF6表达的影响

目的:观察复肾颗粒对单侧输尿管结扎致肾间质纤维化模型大鼠的肾脏保护作用,探讨其机制。方法:将60只雄性Wi st ar大鼠行单侧输尿管结扎术,分为模型组、假手术组、贝那普利组[10 mg/(kg·d)]、复肾颗粒1组[7.5 g/(kg·d)]、复肾颗粒2组[15 g/(kg·d)]、复肾颗粒3组[30 g/(kg·d)]。各组于灌胃给药及灌胃生理盐水14天后处死大鼠,收集大鼠血清进行血肌酐(Scr)、尿素氯(BUN)检测;取结扎侧肾脏,进行HE和Masson染色,观察肾小管间质纤维化程度,RT-PCR和West er n bl ot法检测肾组织TRAF6和α-SMA的表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠血清中Scr和BUN含量均增加(P0.01),肾小管损伤程度较重(P0.05),肾组织TRAF6和α-SMA表达明显增多(P0.05);与模型组比较,不同剂量复肾颗粒作用后大鼠血清中Scr和BUN含量均下降(P0.05),肾小管损伤程度有所缓解(P0.05),肾组织内TRAF6和α-SMA表达降低(P0.05),随着药物剂量的增加,各指标程度加重。结论:复肾颗粒可明显减轻肾间质炎症细胞浸润及间质纤维化,延缓肾功能损害,复肾颗粒对单侧输尿管结扎大鼠肾小管间质纤维化有保护作用,其机制可能与抑制TRAF6和α-SMA表达有关。     

加味真武汤对肾间质纤维化大鼠TGF-β及FN表达的影响

目的: 探讨加味真武汤对肾间质纤维化大鼠转化生长因子(TGF-β)及纤维连接蛋白(FN)表达的影响。 方法: 大鼠随机分为假手术组、模型组及治疗组,采用单侧输尿管梗阻(UUO)模型,术后7,14,21 d分别处死大鼠,测定肾脏指数、血肌酐(Cr)、尿素氮(BUN);肾组织HE及Masson染色,观察肾脏病变;免疫组化法比较各组TGF-β及FN的表达。 结果: 术后随时间的延长,模型组和治疗组大鼠可见明显的肾间质纤维化改变,肾间质TGF-β,FN的表达明显高于假手术组(P<0.05)。治疗组大鼠肾间质纤维化程度及TGF-β,FN的表达均低于模型组(P<0.05)。 结论: 加味真武汤可降低UUO模型大鼠血Cr,BUN水平,抑制TGF-β表达,减少FN形成,对肾间质纤维化有积极的治疗意义。     

益气活血降浊复方对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织TGF-β_1、α-SMA、HGF的影响

目的:研究益气活血降浊复方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾组织TGF-β1、α-SMA、HGF蛋白及其mRNA表达的影响,探讨本方抑制肾间质纤维化的作用机制。方法:132只雄性SD大鼠以单侧输尿管结扎术建立肾间质纤维化动物模型,造模成功后大鼠随机分为正常组,假手术组,模型组,西药组,益气活血降浊复方大、中、小剂量组。益气活血降浊复方大剂量组给药34.6g/kg,中剂量组17.3g/kg,小剂量组8.6g/kg灌胃给药,模型组和假手术组、正常组灌入相应0.9%氯化钠溶液,西药组灌胃福辛普利钠10g/kg,1次/d。采用免疫组化方法检测肾组织中TGF-β1、α-SMA、HGF蛋白表达,采用Real-time PCR方法检测TGF-β1、α-SMA、HGF mRNA表达。结果:与正常组、假手术组相比,模型组大鼠第1、2、3周肾间质中TGF-β1、α-SMA蛋白表达明显增多(P0.01),益气活血降浊复方大、中、小剂量组及西药组正常组、假手术组在各个时间点TGF-β1、α-SMA蛋白表达有所增加,但与模型组比较显著降低(P0.01)。正常组肾小管上皮细胞胞浆中HGF呈弱阳性表达,随着梗阻时间的延长模型组HGF蛋白表达逐渐减少,益气活血降浊复方大、中、小剂量组与模型组相比,HGF蛋白阳性表达显著增加(P0.01)。与正常组、假手术组相比,造模后第3周模型组肾组织TGF-β1、α-SMA基因高表达(P0.05,P0.01),益气活血降浊复方大、小剂量组和福辛普利钠组与模型组比较TGF-β1、α-SMA基因低表达(P0.05)。造模后第1周,正常组、假手术组HGF基因低表达,益气活血降浊复方大、中、小剂量组与模型组比较HGF基因高表达(P0.05)。结论:益气活血降浊复方可以促进内源性HGF蛋白和基因的生成,使肾组织α-SMA基因、TGF-β1基因表达降低,抑制肾间质纤维化的发展。     

益肾解毒汤对UUO实验性大鼠肾功能及CTGF、α-SMA蛋白表达的影响

目的:探讨益肾解毒汤对UUO实验性大鼠肾血清肌酐、血清尿素氮及血清CTGF、α-SMA的影响。方法:采用单侧输尿管结扎术(UUO)建立大鼠肾纤维化模型。90只Wistar大鼠分为假手术组、模型组、益肾解毒汤低、中、高剂量组及贝那普利组。在7天、14天、21天不同时间点,观察实验大鼠治疗前后肾功能变化情况;采用免疫组化二步法检测肾组织中CTGF、α-SMA蛋白表达水平。结果:益肾解毒汤各治疗组大鼠血肌酐、血尿素氮水平均有所降低,与模型组比较有显著性差异(P0.05);益肾解毒汤高剂量组能减少肾间质中CTGF、α-SMA的过度表达,效果明显,与贝那普利组比较有显著性差异(P0.05)。结论:益肾解毒汤能下调肾间质组织CTGF、α-SMA蛋白表达水平,保护肾功能,对UUO模型大鼠肾间质纤维化进程有显著的干预作用。     

益气通阳方对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质纤维化的影响

目的观察益气通阳方对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾间质纤维化及TGF-β1/Smad7信号通路的影响,探讨其可能的作用机制。方法将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、中药组和西药组各10只。除假手术组外,其余各组建立UUO模型。西药组予依那普利溶液0.18mg/mL灌胃,中药组予益气通阳方浓缩液1.188g/mL灌胃,假手术组和模型组予等量生理盐水灌胃,每日1次。14d后心脏取血检测大鼠血清肌酐(SCr)和尿素氮(BUN)水平,处死大鼠取其肾组织行HE和Masson染色,免疫组化检测肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和纤维连接蛋白(FN)的表达,Western blot和RT-PCR分别检测Smad7蛋白和m RNA的表达。结果与假手术组比较,模型组大鼠血清SCr、BUN明显升高(P0.01),病理改变明显,TGF-β1、FN蛋白表达明显升高(P0.01),Smad7蛋白和m RNA表达明显降低(P0.01);与模型组比较,中药组和西药组大鼠血清SCr、BUN明显降低(P0.05),病理改变减轻,TGF-β1、FN蛋白表达明显降低(P0.05),Smad7蛋白和m RNA表达明显升高(P0.05)。结论益气通阳方可能通过上调Smad7表达,抑制UUO大鼠肾组织TGF-β1的高表达,进而延缓肾间质纤维化进展。     

肾络通对肾间质纤维化模型小鼠肾小管上皮细胞表型转化的影响

目的探讨肾络通治疗肾间质纤维化的可能作用机制。方法纯系C57BL/6J野生小鼠(WT)及肾上腺髓质素基因敲除杂合子小鼠(AMKO)随机分为假手术组、模型组、依普利酮组及肾络通组,每组5只。除假手术组外,其余各组结扎左侧输尿管复制肾间质纤维化小鼠模型。依普利酮组给予依普利酮100 mg/(kg·d)加入饲料喂养,肾络通组给予肾络通溶液26 g/(kg·d)灌胃,假手术组和模型组给予蒸馏水0.3 ml灌胃,共10天。HE、Masson染色观察各组小鼠梗阻侧肾组织病理改变;免疫组化法及Western Blot法检测肾组织α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、肾上腺髓质素(ADM)的表达;检测血肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)水平。结果 WT及AMKO小鼠各组血Scr和BUN含量比较差异均无统计学意义(P0.05)。肾脏病理结果显示,模型组肾小管扩张、上皮细胞坏死,肾间质大量炎性细胞浸润,胶原组织沉积显著增多,依普利酮组和肾络通组可明显抑制间质炎性细胞浸润及胶原沉积。与本鼠种假手术组比较,WT模型组和AMKO模型组α-SMA、TGF-β1表达明显升高,而ADM表达明显降低(P0.01)。与本鼠种模型组比较,依普利酮组和肾络通组α-SMA、TGF-β1表达明显降低,而ADM表达明显升高(P0.05或P0.01)。两鼠种之间比较,AMKO假手术组、模型组、依普利酮组、肾络通组ADM表达均低于相应的WT小鼠组(P0.05或P0.01)。结论肾络通可能通过上调ADM表达,降低α-SMA、TGF-β1表达,从而抑制肾小管上皮细胞表型转化,减轻了肾脏病理损伤。     

通腑泄浊汤对肾间质纤维化大鼠α-SMA、LN、ColⅢ表达的影响

目的:研究通腑泄浊汤(黄芪、大黄、石菖蒲、牵牛子、附子、人参、白术、丹参、王不留行、橘皮)对肾间质纤维化大鼠α-SMA、LN、ColⅢ表达的影响,探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法:采用单侧输尿管梗阻(UUO)诱导大鼠肾间质纤维化的动物模型,以依那普利为阳性对照,将大鼠随机分为假手术组,模型组,依那普利组,通腑泄浊汤高剂量组,中剂量组,低剂量组。术后第12天处死大鼠,收集血清测定肌酐、尿素氮水平、免疫组化半定量检测各组大鼠肾间质α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅲ型胶原(ColⅢ)、层连接蛋白(LN)的表达。肾组织用HE、VG染色评定肾小管间质损伤及胶原沉积程度。结果:模型组α-SMA、LN、ColⅢ表达、BUN、Scr及肾小管间质损伤指数、胶原沉积程度高于假手术组(P<0.01),通腑泄浊汤与依那普利组比较α-SMA、LN、ColⅢ、BUN、Scr的表达均明显降低(P<0.05),肾小管间质损伤指数及胶原纤维沉积减轻。结论:通腑泄浊汤可能是通过下调α-SMA、LN、ColⅢ的表达而减轻肾间质纤维化。     

清化固肾排毒颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织TGF-β1和α-SMA表达的影响

目的:观察清化固肾排毒颗粒对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织转化生长因子-β1(TGF-β1)和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达的影响,探讨其抗肾纤维化的作用机制。方法:72只SPF级SD大鼠随机分为假手术组、模型组、洛丁新组及清化固肾排毒颗粒组,除假手术组外,其余各组大鼠均采用单侧输尿管结扎手术方法 (UUO)建立肾纤维化梗阻大鼠模型,术后各组分别予相应药物或生理盐水灌胃,每天1次。第7、14、21天,各组大鼠禁食不禁水1天,处死,取肾组织做病理检测,HE染色观察其病理变化,免疫组织化学染色检测TGF-β1和α-SMA在肾间质的阳性染色表达。结果:与假手术组比较,干预第7、14、21天,模型组、洛丁新组、清化固肾排毒颗粒组大鼠肾小管间质损伤指数显著增加,肾组织TGF-β1和α-SMA的表达均明显升高,差异均有统计学意义(P0.05)。与模型组比较,干预第7、14、21天,洛丁新组和清化固肾排毒颗粒组大鼠肾小管间质损伤指数明显减轻,肾组织TGF-β1和α-SMA的表达均明显降低,差异均有统计学意义(P0.05)。结论:清化固肾排毒颗粒可能通过下调TGF-β1和α-SMA的表达来抑制上皮细胞间充质转化和细胞外基质的过度积聚,实现改善肾间质纤维化的作用。     

扶正化瘀方抗大鼠肾间质纤维化的作用

目的观察扶正化瘀方抗氯化汞(HgCl_2)诱导的大鼠肾间质纤维化病变的作用,并初步探讨其作用机制。方法将大鼠随机分为正常组、模型组、扶正化瘀方(FZHY)组及维生素E(VitE)组,模型组用HgCl_2 8 mg/kg灌胃9周,FZHY组(4.6 g/kg)和VitE组(100 mg/kg)分别给予相应的药物干预。检测肾功能情况(Cr和BUN),盐酸水解法检测肾组织羟脯氨酸(Hyp)含量,HE染色、Masson染色和六胺银(PASM)染色观察肾组织病理形态,Western blot观察Ⅰ型胶原(ColⅠ)、纤维连接蛋白(FN)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)的表达。结果与模型组比较,FZHY组及VitE组大鼠肾体比(双肾质量/体重)明显下降(P0.05)、肾组织Hyp含量明显下降(P0.05),血清Cr和BUN含量明显下降(P0.01),肾脏纤维化程度明显减轻。其中FZHY组比VitE组轻。FZHY组和VitE组肾组织ColⅠ和FN表达均较模型组减弱(ColⅠ,P0.05;FN,P0.01)。FZHY组α-SMA表达较模型组减弱(P0.01),VitE组则无明显变化(P0.05)。结论FZHY可改善HgCl_2诱导模型大鼠的肾功能损伤,减少细胞外基质沉积,减轻肾间质纤维化病变,其作用机制与抑制肌成纤维细胞活化有关。     

姜黄素与依那普利对大鼠肾小管上皮细胞转分化影响的对比研究

目的探讨姜黄素对单侧输尿管梗阻(UUO)大鼠肾小管上皮细胞转分化的作用。方法采用UUO致肾间质纤维化大鼠模型。将大鼠随机分为假手术组、模型组、姜黄素组、依那普利组。从造模后第2天起,姜黄素组、依那普利组分别给予100mg/(kg·d)姜黄素、10mg/(kg·d)依那普利腹腔注射。术后第4周,处死各组大鼠,用HE、Masson染色评定肾小管间质纤维化程度;用免疫组化方法检测肾组织内转化生长因子β1(TGF-β1)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、波形蛋白(Vimentin)的表达部位及蛋白表达水平。结果与假手术组相比,模型组大鼠血清尿素氮水平显著增加(P<0.01),肾间质纤维组织相对面积显著扩大(P<0.01),肾组织内TGF-β1、α-SMA、Vimentin表达均显著上调(P<0.01)。姜黄素或依那普利干预后,上述上调指标都被显著抑制(P<0.05或0.01)。两种药物之间比较,作用无显著性差异(P>0.05)。结论姜黄素及依那普利可能通过抑制UUO大鼠肾小管上皮细胞转分化而减轻肾间质纤维化。     

黄芪对单侧输尿管梗阻大鼠肾组织结缔组织生长因子表达的影响

目的:动态观察黄芪(AM)对单侧输尿管梗阻(UUO)所致大鼠肾小管间质纤维化的拮抗作用及对结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,初步探讨其可能的分子作用机制.方法:SD大鼠随机分为假手术(Sham)、UUO组和UUO AM治疗组(AM组).在造模后第7、14 d处死动物,观察肾脏病理改变.采用免疫组化方法检测肾组织中CTGF和α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达.用实时荧光定量RT-PCR检测大鼠CTGF mRNA和α-SMA mRNA表达量.用Western blot检测大鼠CTGF蛋白表达量.结果:与假手术组相比,各时间点的UUO大鼠肾脏病理损害进行性加重,CTGF和α-SMA mRNA和蛋白表达随梗阻时间延长逐渐增高;黄芪治疗后可明显减轻UUO大鼠肾组织的肾小管损伤及肾间质纤维化,使UUO大鼠肾组织中高表达的CTGF和α-SMA降低(P<0.05).结论:黄芪可能从核酸和蛋白水平抑制CTGF的表达,抑制肾小管上皮细胞转分化,减轻和改善UUO大鼠肾间质纤维化.     

补肾健脾活血解毒煎剂对单侧输尿管梗阻大鼠TGF-β1及α-SMA表达的影响

目的:研究补肾健脾活血解毒煎剂对单侧输尿管梗阻大鼠肾间质α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达的影响,探讨其抗肾间质纤维化的作用机制。方法:建立大鼠单侧输尿管梗阻(UUO)模型,50只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、代文组、补肾健脾活血解毒煎剂低、中剂量组,于造模4周后腹主动脉采血检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN),收集24 h尿液检测N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(N-acetyl-β-D-glucosaminidase,NAG)、β2-微球蛋白(β2-microglobulin,β2-MG),取梗阻侧肾组织,HE、Mason染色观察肾小管间质病变,免疫组织化学染色观察α-SMA、TGF-β1在肾间质的阳性染色表达,并进行半定量分析。结果:与假手术组比较,模型组大鼠Scr、BUN、尿NAG、β2-MG水平以及α-SMA、TGF-β1阳性表达显著升高(P0.01);与模型组比较,补肾健脾活血解毒煎剂低、中剂量组大鼠Scr、BUN水平降低,尿NAG、β2-MG排泄减少(P0.05或P0.01),与代文组相当;补肾健脾活血解毒煎剂低、中剂量组和代文组α-SMA、TGF-β1阳性表达均显著下调(P0.01)。结论:补肾健脾活血解毒煎剂可能通过改善肾小球、肾小管功能,抑制α-SMA、TGF-β1的表达,从而抑制肾小管上皮细胞间充质转分化,达到改善肾间质纤维化的作用。