地黄饮子对AD细胞模型抗氧能力影响的实验研究

目的：观察地黄饮子对AD细胞模型抗氧能力影响。方法：通过建立β淀粉样蛋白诱导PC12细胞损伤的AD细胞模型,采用脑脊液药理学方法,观察地黄饮子对PC12细胞培养液中CAT、GSH-Px、SOD、MDA含量的影响,探讨地黄饮子对AD细胞模型抗氧能力的作用。结果：地黄饮子能提高PC12细胞培养液中SOD、CAT、GSH-Px的活性,降低培养液中MDA的含量。结论：地黄饮子通过提高AD细胞模型的抗氧化能力,对Aβ所致PC12细胞损伤起到较好的保护作用。     

地黄饮子对老年性痴呆神经保护作用的实验研究

目的:研究地黄饮子对老年性痴呆神经保护作用及其机制.方法:通过细胞免疫法检测各组PC12细胞ChAT、tau的表达.结果:Aβ25-35损伤模型组PC12细胞中ChAT表达明显低于空白组(P<0.01),而加入地黄饮子脑脊液后可提高ChAT的表达(P<0.05或P<0.01),中药组与安理申组比较无显著性差异(P>0.05 ) ; A(325-35损伤模型组PC12细胞中tau表达明显高于空白组(P＜0.01),而加入地黄饮子脑脊液后,可剂量依赖性降低tau的表达(P<0.01),且中高组、中中组疗效较好,与安理申组比较有显著性差异(P<0.01或P<0.05).结论:地黄饮子能明显提高Aβ25-35损伤时PC12细胞ChAT的表达,能抑制细胞微管相关蛋白tau的表达,起到神经保护的作用,从而达到防治AD的目的.     

含地黄饮子脑脊液对PC-12细胞氧化应激的影响

目的 通过建立Aβ损伤的PC12细胞模型,分析含地黄饮子脑脊液对PC-12细胞氧化应激的影响.方法 将PC12细胞离体培养,待细胞进入对数生长期后吸弃培养液,分别加入空白培养液10％、正常脑脊液10％、含安理申脑脊液10％、含地黄饮子脑脊液5％、含地黄饮子脑脊液10％、含地黄饮子脑脊液20％,并加培养液补至等量,即成为:空白组、模型组、安理申组、地黄饮子低剂量组、地黄饮子中剂量组、地黄饮子高剂量组,37℃孵育2h.除空白组外各组均加入4μl经老化处理终浓度为10μ mol/L的Aβ25-35,建立AD细胞模型,空白组则加入4μl空白培养液,继续37℃孵育24h.然后收集培养液,离心细胞.检测各组PC12细胞培养液中MDA、SOD、CAT、GSH-Px的含量.结果 地黄饮子能降低Aβ25-35损伤PC-12细胞培养液中的MDA含量,提高PC-12细胞培养液中SOD的活性、提高CAT、GSH-Px的含量即抗氧化酶活性,提高自由基清除能力,减少自由基对PC-12细胞的损伤.结论 含地黄饮子脑脊液可能通过改善Aβ25-35损伤的PC-12细胞状态,减轻脂质过氧化反应,提高降低的抗氧化酶活性,清除自由基,从而起到保护细胞的作用.     

地黄饮子含药脑脊液对Aβ25-35诱导的PC12细胞损伤后生存状态和活力的保护作用

目的:探讨古方地黄饮子对β淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致PC12细胞损伤后生存状态和活力的保护作用。方法:把离体培养的进入对数生长期的PC12细胞分为6组:空白对照组、模型对照组、VitE脑脊液组、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量组。待24h细胞贴壁后吸去培养液,分别加入空白培养液、正常脑脊液、VitE脑脊液、中药脑脊液低、中、高剂量,加培养液补至等量,37℃孵育2h。然后除空白组之外的各组加入经老化处理的Aβ25-35(终浓度为10μmol/L),建立AD细胞模型。空白组加入等量的培养液,继续孵育24h后收集培养液,对培养液进行MTT法和LDH法检测细胞生存活力。结果:地黄饮子能升高MTT代谢率,降低LDH释放。结论:地黄饮子能改善Aβ25-35损伤后的PC12细胞生存状态,提高细胞生存活力。     

地黄饮子含药脑脊液对受损PC12细胞β-淀粉样前体蛋白mRNA表达的干预

目的：探讨地黄饮子含药脑脊液对β-淀粉样蛋白（Aβ25-35）所致PC12细胞损伤的β-淀粉样前体蛋白（APP）mRNA的表达及地黄饮子对其的干预作用。方法：运用中药脑脊液药理学方法把PC12细胞分为空白组,模型组,西药对照组,地黄饮子脑脊液低,中,高剂量组6组,分别加入正常培养液,正常脑脊液及含药脑脊液,应用实时定量PCR法检测受损PC12细胞β-淀粉样前体蛋白mRNA表达（用2-ΔΔC t表示,Ct为阈循环值,ΔΔCt=ΔCt各干预组-ΔCt空白组,ΔCt=CtAPP-CtGAPDH）。结果：地黄饮子能明显降低PC12细胞受β-淀粉样蛋白刺激时APP的过度反应,降低APP mRNA的表达,与模型组比较,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论：地黄饮子脑脊液可以抑制β-淀粉样蛋白损伤对PC12细胞的损伤。     

地黄饮子含药脑脊液对Aβ25-35诱导PC12细胞损伤即早基因c-fos和c-jan表达的影响

目的 探讨古方地黄饮子对β淀粉酶Aβ25-35所致PC12细胞损伤时即早基因c-fos和c-jun表达的调控作用.方法 把离体培养的进入对数生长期的PC12细胞分为空白组、模型组、VitE脑脊液对照组、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量组,待24h细胞贴壁后吸去培养液,6组分别加入正常培养液、正常脑脊液、VitE脑脊液、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量,加培养液补至等量,37℃孵育2h.然后除正常组加入等量培养液外,其他各组加入经老化处理的Aβ25～35(终浓度为10μmol/L),继续孵育24h,然后离心收集细胞,提取总RNA.应用RT-PCR二步法和琼脂糖凝胶电泳方法测定c-fos和c-jun基因的表达.结果 地黄饮子能下调c-fos和c-jun基因的表达,并呈一定的剂量依赖性.结论 地黄饮子脑脊液能明显降低PC12细胞受Aβ25～35刺激时即早基因c-fos和c-jun的过度反应,说明地黄饮子能提高PC12细胞对外界不良刺激的应激性.     

地黄饮子含药脑脊液对受损PC12细胞钙离子内流的影响

目的:探讨古方地黄饮子含药脑脊液对β-淀粉样蛋白(Aβ25-35)所致PC12细胞损伤的保护作用.方法:依据中药脑脊液药理学的方法,把PC12细胞分为空白组,模型组,西药对照组,地黄饮子脑脊液低、中、高剂量组六组,分别加入正常培养液、正常脑脊液以及含药脑脊液中,孵育后,加入钙离子荧光剂flou-3/AM负载后,于激光共聚焦显微镜下观察钙离子在细胞内的含量.结果:含有脑脊液各组加入Aβ25-35后虽然荧光强度升高,但荧光强度达到峰值的平均强度与模型组比较明显降低,差异有统计学意义(P<0.01),而且中、高剂量组与西药对照组比较,荧光强度降低,差异有统计学意义(P<0.05).结论:地黄饮子脑脊液可以降低Aβ引起的钙离子内流.     

地黄饮子含药脑脊液对Aβ25—35诱导PC12细胞损伤即早基因c—fos和c—jun表达的影响

目的探讨古方地黄饮子对β淀粉酶Aβ25~35所致PC12细胞损伤时即早基因c-fos和c-jun表达的调控作用。方法把离体培养的进入对数生长期的PC12细胞分为空白组、模型组、VitE脑脊液对照组、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量组,待24 h细胞贴壁后吸去培养液,6组分别加入正常培养液、正常脑脊液、VitE脑脊液、地黄饮子脑脊液低、中、高剂量,加培养液补至等量,37℃孵育2 h。然后除正常组加入等量培养液外,其他各组加入经老化处理的Aβ25~35(终浓度为10μmol/L),继续孵育24 h,然后离心收集细胞,提取总RNA。应用RT-PCR二步法和琼脂糖凝胶电泳方法测定c-fos和c-jun基因的表达。结果地黄饮子能下调c-fos和c-jun基因的表达,并呈一定的剂量依赖性。结论地黄饮子脑脊液能明显降低PC12细胞受Aβ25~35刺激时即早基因c-fos和c-jun的过度反应,说明地黄饮子能提高PC12细胞对外界不良刺激的应激性。     

地黄饮子含药脑脊液对 AD 细胞模型影响的差异蛋白质组学研究

目的：基于差异蛋白质组学研究地黄饮子对 AD 细胞模型的影响。方法：将离体培养的 PC12细胞分为3组,空白对照组、模型对照组和中药地黄饮子组。模型组和中药组分别给予10％空白脑脊液和地黄饮子含药脑脊液,用经孵育老化的 Aβ25-35造成 PC12细胞损伤的 AD 模型,培养箱孵育24h后,收集细胞,提取蛋白质。根据蛋白质等电点和相对分子量不同,应用双向凝胶电泳技术分离组内差异蛋白质,胶内酶切差异明显的蛋白质点并鉴定。结果：在凝胶图像的蛋白点中,同空白组比较,模型组上调的蛋白点有6个,与模型组比较,中药组上调的蛋白有7个。结论：地黄饮子对 AD 细胞模型的蛋白质点表达的调控,提示地黄饮子在 AD 发病早期可能是通过调控细胞中相关的蛋白质点起动对损伤细胞的保护作用。     

葛根素对Aβ25-35诱导PC12细胞凋亡的影响

目的：应用Aβ25-35孵育PC12细胞株制作细胞损伤模型,以研究葛根素对模型细胞凋亡的影响。方法：用Aβ25-35和葛根素对PC12细胞进行处理,MTT法检测干预后不同时间点的细胞活性,电镜观察细胞形态的改变,异硫氰酸荧光素（FITC）标记的AnnexinⅤ及碘化丙锭（PI）双染流式细胞技术检测各组细胞的凋亡率,以确认药物的保护作用。结果：PC12细胞经过Aβ25-35处理后,细胞生存率下降,且呈现时间依赖性。电镜观察显示Aβ25-35可导致PC12细胞凋亡,使用葛根素后,模型细胞凋亡情况明显改善。流式细胞技术显示Aβ25-35损伤模型组凋亡率明显升高,使用葛根素后,细胞凋亡率下降,具有显著性差异（P〈0.05）。结论：葛根素可拮抗Aβ25-35诱导的PC12细胞凋亡,具有一定的神经细胞保护功能。     

Aβ海马注射对大鼠学习记忆影响及加减地黄饮子的干预作用

目的:观察加减地黄饮子对β-淀粉样蛋白1-40(Aβ-1-40)诱导的AD模型大鼠学习记忆障碍的改善作用及对胆碱乙酰化转移酶(choline acetyltransferase,ChAT)表达的影响。方法:采用大鼠海马立体定向注射凝聚态Aβ-1-40诱导老年性痴呆(Alzheimer's disease,AD)动物模型。采用Morris水迷宫测试大鼠寻找平台所需时间和通过原平台次数评价大鼠学习记忆能力及加减地黄饮子的干预作用。采用免疫组织化学染色法和计算机图像分析技术测定海马区ChAT表达。结果:模型组大鼠在定位航行试验中寻找隐匿平台平均逃避潜伏期较正常组显著延长,空间探索试验中跨越原平台位置次数明显减少(P<0.01),加减地黄饮子组平均逃避潜伏期较模型组显著缩短,跨越原平台位置次数明显增加(P<0.01),但多奈哌齐组和加减地黄饮子组比较差异无显著性(P>0.05)。免疫组化实验结果显示,与假手术组比较,模型组大鼠海马区ChAT蛋白表达下降(P<0.01)。与模型组比较,加减地黄饮子组ChAT蛋白表达升高(P<0.01)。结论:加减地黄饮子对AD模型大鼠的学习记忆功能减退具有改善作用,可能与增强海马神经元ChAT表达,进而使Ach的合成增加有关。     

千层塔合剂对AD模型大鼠学习记忆能力及细胞凋亡的影响

探讨千层塔合剂治疗AD的作用机理,为中医和地方特色药物治疗AD提供实验依据和临床指导。方法:采用腹腔注射D-gal6周致亚急性衰老模型,合并双侧海马区注射Aβ25-35复制AD模型;给予药物或生理盐水灌胃4周后,用Morris水迷宫法测试大鼠学习记忆能力,流式细胞仪观察脑神经细胞凋亡情况。结果:千层塔合剂对AD模型大鼠的学习记忆功能有明显的改善作用(P<0.01);并能降低Aβ毒性所致的脑神经细胞凋亡(P<0.01)。结论:千层塔合剂能够显著改善AD大鼠学习记忆能力,抑制细胞凋亡。     

肺抑宁Ⅰ号对Lewis肺癌小鼠免疫功能影响的实验研究

目的：探讨肺抑宁I号对Lewis肺癌小鼠的免疫作用机制。方法：以肺抑宁I号治疗Lewis肺癌小鼠,观察其生存状态,测定脾指数、T淋巴细胞增殖活性。结果：肺抑宁I号能改善Lewis肺癌小鼠一般状况,5min自主活动及站立次数增加;脾指数降低并趋向正常;T淋巴细胞增殖活性增强。结论：肺抑宁I号可提高Lewis肺癌小鼠的免疫功能。     

当归含药血清对阿尔兹海默病细胞模型损伤的保护作用

目的:观察当归含药血清对Aβ25-35与H2O2分别诱导的阿尔兹海默病(AD)细胞模型的抗氧化能力的影响,探讨当归防治AD的作用及机制。方法:用Aβ25-35与H2O2分别诱导PC12细胞损伤,以不同浓度当归含药血清对抗干预,以MTT比色法观测当归含药血清对两种AD细胞模型增殖的保护作用,以比色法检测当归含药血清对AD细胞模型培养液中乳酸脱氢酶(LDH)、总超氧物歧化酶(T-SOD)、丙二醛(MDA)含量的影响,分析当归治疗AD机制。结果:10%当归含药血清对损伤的PC12细胞的存活率有明显提高作用,可显著降低细胞模型培养液中LDH活力、MDA含量,提高T-SOD活力(P<0.05)。讨论:当归含药血清对H2O2及Aβ25-35损伤的PC12细胞有保护作用,机制与当归阿魏酸提高细胞抗氧化能力有关。     

麻黄连翘赤小豆汤对慢性肾小球肾炎血清及尿液TGF-β1的影响

目的：研究麻黄连翘赤小豆汤治疗慢性肾小球肾炎后血清及尿液TGF-β1的变化水平,阐述麻黄连翘赤小豆汤的作用机制。方法：将50例慢性肾炎患者随机分为2组,治疗组25例采用麻黄连翘赤小豆汤治疗,对照组25例服用雷公藤多苷治疗,疗程2个月。结果：治疗组患者血清及尿液TGF-β1浓度下降优于对照组（P＜0.05）。结论：麻黄连翘赤小豆汤能有效改善慢性肾小球肾炎患者系膜增生程度及间质炎症。     

慢性肾功能衰竭肾阳虚型大鼠肾组织细胞糖皮质激素受体、细胞白介素-1β及肿瘤坏死因子-α的变化

目的研究肾阳虚型慢性肾功能衰竭（CRF）大鼠肾组织细胞糖皮质激素受体（GR）及白介素-1（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等炎性因子的变化,探讨CRF肾阳虚证的证候学基础。方法采用腺嘌呤灌胃复制肾阳虚型CRF模型,并设正常组、模型组（腺嘌呤每日200 mg/kg）、济生肾气丸组（腺嘌呤每日200 mg/kg＋济生肾气丸每日40 g/kg）、保肾康组（腺嘌呤每日200 mg/kg＋保肾康每日33.3 mg/kg）,保肾康为对照组。实验全过程24 d,第1～12日每日灌胃1次,第12日后隔日灌胃1次。实验结束,用酶联免疫吸附法测定肾组织IL-1β、INF-α及GR的水平。结果模型组大鼠肾组织细胞IL-1β、INF-α水平明显升高,GR水平明显降低。济生肾气丸组、保肾康组与模型组比较IL-1β、INF-α水平显著降低,GR水平显著升高。济生肾气丸组同保肾康组比较IL-1β、INF-α明显降低,GR水平明显升高。结论 IL-1β、INF-α及GR与CRF肾阳虚证密切相关;济生肾气丸能降低IL-1β、TNF-a水平,并能提高GR的活性。     

生地黄连液对四氧嘧啶小鼠影响的实验研究

观察生地黄连水煎液对四氧嘧啶小鼠空腹血糖、血清胰岛素、胰腺组织形态等指标的影响。以四氧嘧啶腹腔注射方法模拟糖尿病小鼠 ,并测量空腹血糖、血清胰岛素。结果 ,生地黄连水煎液可明显降低四氧嘧啶小鼠的空腹血糖值(P<0 .0 5 ) ;增加血清胰岛素的分泌量 (P<0 .0 5 ) ;改善胰岛素细胞的形态结构。生地黄连水煎液可显著降低四氧嘧啶小鼠的空腹血糖 ,增加血清胰岛素的分泌 ,并能修复胰岛内分泌细胞。     

盐酸川芎嗪对谷氨酸损伤PC12细胞的保护作用

目的:探讨盐酸川芎嗪对谷氨酸诱导PC12细胞损伤的保护作用。方法:以谷氨酸损伤的PC12细胞为模型,用噻唑蓝(MTT)法检测细胞存活状况,测定细胞培养上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的活性来反映细胞损伤程度。结果:用谷氨酸(25mmol/L)和PC12细胞共同孵育24h后,细胞活性明显下降,不同浓度的盐酸川芎嗪(19.5、39.0、78.0μg/mL)预处理1h后可明显提高谷氨酸诱导的PC12细胞还原MTT的能力,抑制该细胞LDH的释放。结论:盐酸川芎嗪能明显减轻PC12细胞的谷氨酸损伤,对神经细胞的损伤有一定的保护作用。     

清心开窍方对Aβ25-35所致大鼠原代神经元细胞损伤的保护作用

目的：了解清心开窍方对Aβ25-35所致大鼠原代神经细胞损伤的保护作用及其机制。方法：制备17d胎龄大鼠胚胎皮层神经细胞,分为正常对照组、模型组、清心开窍方低、中、高剂量组（6.25、12.5、25 mg·mL-1）。支持培养7 d,除正常组、模型组外,用不同剂量清心开窍方预处理24 h后,连同模型组和终浓度10 umol·L-1的Aβ25-35共同培养,造成神经细胞损伤模型。作用24 h后,以MTT值、培养液乳酸脱氢酶（LDH）水平作为细胞的损伤指标,以线粒体膜电位改变作为凋亡早期指标。结果：清心开窍方可以明显减少LDH漏出,增加MTT值,使低线粒体膜电位细胞的比例减少,抑制细胞凋亡,与模型组比较差异显著（P〈0.05）。结论：清心开窍方对Aβ25-35损伤的大鼠原代神经细胞具有保护作用,其机制可能与清心开窍方干预Aβ25-35诱导的细胞线粒体膜电位下降有关。