菟丝子黄酮、雷公藤多苷对体外培养幼鼠生精细胞周期及凋亡的影响

目的通过观察含雷公藤多苷(GTW)、菟丝子黄酮药物血清对体外培养的大鼠睾丸生精细胞增殖、细胞周期及凋亡的影响,探讨菟丝子黄酮干预GTW所致生殖损伤的作用机制。方法体外培养大鼠睾丸生精细胞,将其分为空白组、9mg GTW组(多苷1号组)、9mg GTW+菟丝子黄酮组(黄酮1号组)、12mg GTW组(多苷2号组)、12mg GTW+菟丝子黄酮组(黄酮2号组),加不同含药血清,于培养24h、48h后,通过MTT法检测含药血清对生精细胞增殖的影响;采用流式细胞仪检测含药血清对生精细胞细胞周期及凋亡的影响。结果生精细胞增殖方面:血清作用24h、48h时,黄酮1号组OD值明显高于多苷1号组;黄酮2号组OD值高于多苷2号组;均具有明显统计学差异(P0.05)。生精细胞S期细胞百分比:黄酮2号组较多苷2号组明显降低(P0.05);而黄酮1号组与多苷1号组比较无统计学意义(P0.05)。生精细胞凋亡方面:黄酮1号组较多苷1号组明显降低(P0.05);而黄酮2号组与多苷2号组比较无统计学意义(P0.05)。结论GTW可使体外培养幼鼠生精细胞增殖能力下降,细胞凋亡增多。菟丝子黄酮可干预生精细胞的分裂周期,同时对生精细胞凋亡有明显的调控作用。     

基于高通量转录组测序的菟丝子黄酮改善雷公藤多苷片致大鼠生殖损伤的机制研究

雷公藤多苷片具有较好的抗炎和免疫调节活性,但其生殖损伤显著。课题组前期研究发现,菟丝子黄酮可通过对生精细胞周期、凋亡及相关蛋白表达的调节改善雷公藤多苷片导致的生精细胞损伤,但其基因层面的作用机制尚不清楚。该研究采用Illumina高通量测序平台对菟丝子黄酮和雷公藤多苷片干预后大鼠生精细胞进行转录组测序,筛选出差异表达基因,并进行差异基因的GO富集和KEGG通路分析,探讨菟丝子黄酮改善雷公藤多苷片所致生殖损伤的作用机制。结果发现,与空白组相比,雷公藤多苷片组筛选出794个上调基因和491个下调基因;与雷公藤多苷片组相比,菟丝子黄酮+雷公藤多苷片组筛选出440个上调基因和784个下调基因。其中,与生殖功能密切相关的基因为DNMT3L。GO功能和KEGG信号通路富集分析显示,上述差异基因主要富集在细胞、细胞过程、催化活性、结合、卵巢类固醇合成和甲状腺激素等功能和通路上。其中甲状腺激素信号通路为2个对比组共同富集通路。总之,菟丝子黄酮改善雷公藤多苷片所致雄性生殖损伤的作用机制与DNMT3L基因及甲状腺激素信号通路密切相关,发现的多种差异基因为菟丝子黄酮和雷公藤多苷片的配伍减毒增效机制研究提供了有价值的信息。     

菟丝子总黄酮对大鼠排卵障碍的治疗作用及其机制研究

目的 探讨菟丝子黄酮对排卵障碍大鼠的治疗作用.方法 将50只SD大鼠平均随机分为对照组、模型组、低剂量菟丝子黄酮组、高剂量菟丝子黄酮组以及阳性对照组,每组10只.采用羟基脲灌胃法制作排卵障碍动物模型,模型制作成功后,高剂量菟丝子黄酮组给予2 g/L菟丝子黄酮进行干预,低剂量菟丝子黄酮组给予1 g/L菟丝子黄酮进行干预,阳性对照组给予4.5 mg/kg克罗米芬,模型组及对照组均给予相同剂量生理盐水进行干预.均连续干预4周.观察并比较各组大鼠一般状况、动情周期、卵巢及子宫指数,并对卵巢组织学进行观察.结果 菟丝子黄酮可显著改善排卵障碍大鼠的一般状况,恢复大鼠动情周期,改善子宫及卵巢指数,且以高剂量菟丝子黄酮更为显著(P＜0.05);菟丝子黄酮对排卵障碍大鼠卵泡的生长发育具有促进作用,能够提高次级卵泡的数量.结论 菟丝子黄酮对排卵障碍具有显著的改善作用.     

基于微流控芯片的菟丝子黄酮对大鼠HSC-T6细胞凋亡影响研究

目的:构建一种集成有浓度梯度及微阀结构的微流控芯片,并利用该芯片探讨菟丝子黄酮对大鼠肝星状细胞株(HSC-T6)凋亡坏死的影响。方法:设计和构建一种集成有浓度梯度及微阀结构的微流控芯片,以大鼠HSC-T6细胞活力、形态等特征检验芯片的适用性;同时利用芯片探讨8种不同浓度菟丝子黄酮作用HSC-T6细胞24、48和72 h后的凋亡坏死情况。结果:细胞在芯片中生长状态良好,增殖活力强,存活率达到96%;菟丝子黄酮具有明显促细胞凋亡坏死作用,其作用细胞24 h、48 h及72 h后,细胞凋亡坏死率与空白组比较有显著差异(P0.05),且在一定浓度下,随着给药浓度的增加及作用时间的延长,呈现量-效和时-效关系。结论:该芯片重复性及适用性良好,可极大简化药效筛选中操作的复杂性,为中药新药药效评价提供一种新方法。     

补肾中药促排卵的研究进展

1 单味中药动物实验研究在单味中药提取物的动物实验中研究中发现,一些补肾中药具有促性激素样功能,能明显改善体内的激素水平,起到改善卵巢功能和促卵泡发育的作用.菟丝子属旋花科植物菟丝子的干燥成熟种子,具有温补肾阳的作用,其主要有效化学成分为菟丝子黄酮.研究发现菟丝子黄酮对HPO具有广泛的调节作用,对于心理应激大鼠,菟丝子黄酮能下调应激大鼠下丘脑神经递质β-EP,上调腺垂体黄体生成素（LH）水平[1].     

菟丝子黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤后细胞凋亡及Bcl-2、Bax、Caspase-3表达的影响

目的:观察菟丝子黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤细胞凋亡及相关基因表达的影响。方法:成年雄性SD大鼠80只,随机分为假手术组、模型组、菟丝子黄酮50 mg/kg、100 mg/kg剂量组、尼莫地平组(12 mg/kg),采用颈内动脉线栓法阻断大脑中动脉制备局灶性脑缺血再灌注模型,Longa法进行神经功能缺失症状评分,TUNEL法检测细胞凋亡,免疫组化法检测Bcl-2和Bax蛋白表达,计算Bcl-2/Bax值,Western Blot法检测Caspase-3蛋白表达。结果:与模型组比较,菟丝子黄酮治疗组大鼠神经功能评分明显降低,缺血侧大脑皮质细胞凋亡程度减轻,且均以100 mg/kg剂量组较为明显,免疫组化检测显示Bcl-2蛋白表达增加而Bax蛋白表达减少,Western blot检测显示Caspase-3蛋白表达明显减少。结论:菟丝子黄酮对大鼠脑缺血再灌注损伤具有一定的保护作用,其机制可能是通过下调Bax和Caspase-3,上调Bcl-2蛋白的表达来抑制细胞凋亡的发生。     

菟丝子黄酮对心理应激雌性大鼠下丘脑β-EP与腺垂体FSH、LH的影响

目的:探讨菟丝子黄酮调节卵巢内分泌功能的机理。方法:(1)菟丝子经溶剂提取,聚酰胺柱分离得总黄酮提取物;(2)采用声-光-电复合应激刺激造成大鼠心理应激;(3)观察菟丝子黄酮对心理应激大鼠下丘脑β-EP与腺垂体FSH、LH的影响及腺垂体形态学变化。结果:心理应激大鼠下丘脑β-EP水平明显升高,菟丝子黄酮明显降低心理应激大鼠下丘脑β-EP含量;提高腺垂体嗜碱性细胞数量及LH含量,但对腺垂体FSH含量没有明显影响。结论:下调心理应激大鼠下丘脑神经递质β-EP,上调腺垂体LH水平,可能是菟丝子黄酮调节下丘脑-垂体-卵巢轴功能的机理之一。     

党参黄酮提取部位对小肠上皮细胞迁移及多胺的影响

目的 观察党参黄酮提取部位对小肠上皮细胞（IEC-6）迁移及迁移过程细胞内多胺（精脒）含量的影响。方法 划痕法复制细胞迁移模型,观察在多胺合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸（DFMO）及钾通道抑制剂4-氨基吡啶（4-AP）负荷下,党参黄酮提取部位对细胞迁移的影响;柱前衍生-高效液相色谱法检测给予党参黄酮提取部位12 h和24 h后细胞内精脒的含量。结果 党参黄酮提取部位可促进IEC-6细胞迁移,逆转DFMO或4-AP所致细胞迁移抑制;党参黄酮提取部位给药12 h和24 h后可提高细胞内精脒含量。结论 党参黄酮提取部位促进细胞迁移的作用与影响多胺调控信号通路有关。     

大孔吸附树脂分离纯化菟丝子黄酮的研究

菟丝子别名黄丝、黄藤子、豆寄生,为旋花科菟丝子属植物菟丝子Cuscuta chinensis Lam.的干燥成熟种子,含有黄酮等多种生物活性物质。菟丝子黄酮的提取方法通常采用有机溶剂萃取法,但所得粗提物黄酮的量较低。为提高黄酮类化合物的质量分数,本实验选择大孔吸附树脂对菟丝子黄酮进行纯化,为吸附树脂分离纯化菟丝子中的黄酮类化合物提供实验依据。1仪器与材料SHZ-A水浴恒温振荡器,上海跃进医疗器械厂瑞士普利塞斯XT4200C型天平;721分光光度计,上海精密科学仪器有限公司。     

菟丝子及南方菟丝子的质量控制研究

目的:研究菟丝子及南方菟丝子的质量评价方法。方法:采用高效液相色谱法,考查菟丝子种间及不同寄主植物对四种黄酮化合物含量的影响。结果:不同寄主植物上的菟丝子及南方菟丝子中均含有槲皮素、山柰酚、异鼠李素、金丝桃苷等4种黄酮化合物。金丝桃苷含量较高,为2.790~6.502 mg/g;槲皮素、山柰酚、异鼠李素的含量范围分别是0.025~0.176 mg/g、0.001~0.213 mg/g及0.001~0.077 mg/g。结论:菟丝子中槲皮素及金丝桃苷的含量高于南方菟丝子;而南方菟丝子中,山柰酚及异鼠李素的含量高于菟丝子。四种黄酮化合物的含量与寄主植物有关。     

菟丝子黄酮成分对小鼠细胞因子的调节作用

目的：探讨中药菟丝子的免疫调节作用。方法：利用酶联检测仪检测其对ICR小鼠腹腔巨噬细胞释放肿瘤坏死因子（TNF）的影响。结果：中药菟丝子黄酮成分对TNF有明显的抑制作用。结论：对细胞因子的调节作用可能是中药菟丝子抗癌活性的作用机理。     

菟丝子总黄酮对大鼠流产模型母-胎界面Fas／FasL、PCNA、HB—EGF表达的影响

目的:观察菟丝子总黄酮对大鼠流产模型母-胎界面Fas/FasL、PCNA、HB-EGF表达的影响。方法:对溴隐亭致SD孕鼠流产模型,以菟丝子总黄酮高、低剂量为治疗组,达芙通为阳性对照组,于孕12 d处死各组大鼠,应用免疫组织化学方法检测胎盘和蜕膜Fas/FasL、PCNA、HB-EGF的表达。结果:菟丝子总黄酮高、低剂量组、达芙通及正常妊娠组蜕膜和胎盘PCNA表达显著高于模型组,蜕膜和胎盘Fas/FasL表达显著低于模型组,胎盘HB-EGF表达显著高于模型组,差异均有显著性,菟丝子总黄酮高、低剂量组与孕激素达芙通组比较,差异无显著性,各组蜕膜皆无HB-EGF表达。结论:菟丝子总黄酮可能通过调节滋养细胞的增殖与凋亡,使其恢复到正常妊娠状态而起到保胎的作用。     

菟丝子黄酮对应激大鼠卵巢内分泌的影响

目的 观察菟丝子黄酮对心理应激引起卵巢内分泌功能降低的调节作用。方法 采用声－光－电复合应激刺激制造大鼠卵巢内分泌功能降低模型，观察菟丝子黄酮对横型大鼠血清E2，P水平，肾上腺抗坏血酸含量以及垂体、卵巢、子宫重量的影响。结果 菟丝子黄酮明显提高模型大鼠血清E2，P水平，增加垂体、卵巢、子宫的重量，但对肾上腺抗坏血酸含量没有明显的影响。结论 菟丝子黄酮能够明显改善卵巢内分泌功能。     

菟丝子总黄酮对大鼠流产模型妊娠结局及胎盘、蜕膜形态学的影响

目的：探讨菟丝子总黄酮对大鼠流产模型妊娠结局及其胎盘、蜕膜形态学的影响。方法：对溴隐亭致SD孕鼠流产模型,设菟丝子总黄酮高、低剂量治疗组和达芙通阳性对照组,于孕12d处死各组大鼠,观察各组流产率、胎仔总数及胎仔平均数,并用光镜观察各组胎盘、蜕膜形态学的变化。结果：①模型组流产率显著升高,胎仔总数、平均胎仔数明显降低;菟丝子总黄酮高、低剂量组均可显著降低流产率,增加妊娠率,提高胎仔成活率及胚胎数量和质量,并呈现一定的量效关系,其作用与孕激素达芙通相似。②组织形态学：菟丝子总黄酮高、低剂量组与模型组比较,绒毛血窦面积明显增大,血管含量较丰富,管腔形态规则,同时还观察到血管合体细胞膜明显增多,着床部位蜕膜腺体较丰富。结论：菟丝子总黄酮可降低溴隐亭致SD孕鼠流产模型的流产率,并能逆转流产胎盘、蜕膜结构的病理改变,黄酮类有效部位可能是菟丝子补肾安胎的主要物质基础。     

菟丝子黄酮的研究近况

菟丝子黄酮在防治妇科内分泌疾病、男性性功能障碍、更年期综合征以及老年性心血管疾病、脂质代谢紊乱以及骨质疏松等疾病方面均有良好疗效,本文就菟丝子黄酮药理研究的近况进行综述。     

南方菟丝子黄酮类成分的研究

自南方菟丝子中分得6种黄酮成分,其中4种分别鉴定为山奈酚、槲皮素、紫云英甙及金丝桃甙。同正品菟丝子中的化学成分比较,菟丝子中主要含槲皮素及山奈酚甙类,南方菟丝子中主要含山奈酚及槲皮素甙类,提示黄酮类成分可以用于鉴别这两种菟丝子药材。     

七种菟丝子的薄层层析鉴别研究

<正> 菟丝子为常用中药,具补肾壮阳及明目等作用。中国药典(1990年版)收载的品种仅为菟丝子Cuscuta chinensis lam一种,但经我们研究发现,目前市场上流通的品种还有同属的多种菟丝子,其中形成商品的还有南方菟丝子C australis R Br、金灯藤C japonica choisy和欧洲菟丝子(C europaea linn),而以南方菟丝子为主流商品,鉴以使用较为混乱,又缺乏有效的鉴别方法,我们对七种菟丝子通过薄层分离黄酮等成分。在氨熏后显色,比较了层析图谱特征,结果较为满意。     

菟丝子含药血清对TNF-α诱导下人蜕膜细胞凋亡的影响

目的:通过菟丝子含药血清对肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导人体外培养蜕膜细胞凋亡的影响,以期从蜕膜细胞凋亡角度探讨菟丝子可能的安胎机制。方法:体外培养人蜕膜细胞,通过TNF-α诱导蜕膜细胞凋亡,菟丝子含药血清干预,MTT比色实验分析TNF-α及菟丝子含药血清作用后人蜕膜细胞活力,并用流式细胞术分析菟丝子含药血清对人蜕膜细胞凋亡的影响。结果:TNF-α作用后的人蜕膜细胞活性均低于空白对照组,随着TNF-α质量分数的增加,活性越来越小;10,50μg/L的TNF-α作用后,与空白对照组对比,差别有统计学意义(P0.05)。200 m L/L菟丝子含药血清干预后的人蜕膜细胞活性高于TNF-α凋亡模型组,差别有统计学意义(P0.05)。流式细胞术示菟丝子含药血清作用后的人蜕膜细胞凋亡率低于凋亡模型组,差别有统计学意义(P0.05)。结论:TNF-α能降低体外培养人蜕膜细胞活力,诱导细胞凋亡;菟丝子含药血清对TNF-α诱导培养的人蜕膜细胞凋亡有一定抑制作用。     

菟丝子黄酮干预去卵巢大鼠骨代谢研究

目的:观察菟丝子黄酮对骨质疏松症模型大鼠骨代谢和骨密度的影响。方法:去卵巢法建立骨质疏松症大鼠模型,对模型大鼠灌胃菟丝子黄酮,并设立假手术组、造模组、己烯雌酚组大鼠为对照,给药12周后处死大鼠,测定骨代谢指标s-Ca、s-P、u-Ca/Cr、u-P/Cr、BALP、uDPD/Cr和BMD水平。结果:造模组大鼠u-Ca/Cr、u-P/Cr、uDPD/Cr和BALP显著高于假手术组,而BMD值低于假手术组大鼠;菟丝子组大鼠与己烯雌酚组、假手术组大鼠的骨代谢指标s-Ca、s-P、u-Ca、u-P、BALP、uDPD/Cr和BMD值相近,而与模型组相比有显著性差异。结论:菟丝子黄酮能够显著抑制去卵巢大鼠的骨代谢增强,调整骨形成和骨吸收的关系,对去卵巢造成的骨质疏松有明显的防治作用。     

甘草黄酮提取物对小肠上皮细胞IEC-6迁移及多胺的影响

目的 观察甘草黄酮提取物对小肠隐窝上皮细胞IEC-6迁移及迁移过程细胞内多胺量的影响。方法 划痕法制备细胞迁移模型,观察在多胺合成抑制剂二氟甲基鸟氨酸（DFMO）及钾通道抑制剂4-氨基吡啶（4-AP）存在情况下,甘草黄酮提取物对细胞迁移的影响;柱前衍生-高效液相色谱法检测IEC-6细胞在正常及DFMO存在条件下,给予甘草黄酮提取物12、24 h后细胞内多胺（精脒）的量。结果 甘草黄酮提取物可逆转DFMO或4-AP所致IEC-6细胞迁移抑制;其给药12、24 h后可提高细胞内精脒的量,并逆转DFMO对多胺合成的抑制。结论 甘草黄酮提取物促进细胞迁移的作用与影响细胞内多胺调控信号通路有关。