龙葵碱对荷瘤小鼠红细胞免疫功能的影响

目的探讨龙葵碱对S180及H22荷瘤小鼠红细胞免疫功能的作用。方法观察S180荷瘤小鼠和H22荷瘤小鼠的红细胞免疫黏附肿瘤细胞能力,采用DPH荧光探针,用荧光偏振法测定荧光偏振度(P),并计算膜的微黏度(η)研究红细胞膜脂流动性(LFU)。结果龙葵碱能升高S180和H22荷瘤小鼠的红细胞黏附肿瘤细胞的花环率,提高两种荷瘤小鼠的红细胞膜的流动性。结论龙葵碱可能是通过提高两种荷瘤小鼠的红细胞膜的流动性,从而恢复荷瘤小鼠红细胞免疫功能进而达到抗肿瘤作用。     

姜黄素对H_(22)小鼠红细胞膜流动性和膜蛋白含量的影响研究

目的:研究姜黄素对H22小鼠红细胞膜流动性和膜蛋白含量的影响。方法:通过DPH标记的萤光偏振法测定姜黄素对红细胞膜的流动性的影响;采用Lowry法测定姜黄素对红细胞膜蛋白含量的影响。结果:姜黄素能显著提高H22小鼠的红细胞膜流动性和膜蛋白含量。结论:姜黄素可通过提高荷瘤小鼠红细胞膜蛋白含量,提高红细胞膜流动性,从而恢复荷瘤小鼠红细胞免疫功能进而达到免疫抗肿瘤目的。     

龙葵碱对H22荷瘤小鼠细胞膜流动性和膜蛋白水平的影响

目的观察龙葵碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性和膜蛋白水平的影响。方法采用荧光探针DPH标记法测定肿瘤细胞膜流动性，考马斯亮蓝法测定肿瘤细胞膜蛋白水平。结果龙葵碱可显著降低H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性，降低H22小鼠肿瘤细胞膜蛋白水平。结论龙葵碱是通过影响肿瘤细胞膜的流动性和肿瘤细胞膜上的蛋白水平恢复细胞的正常生理活性而达到抗肿瘤作用。     

龙葵碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜唾液酸和封闭度的影响

目的研究龙葵碱对H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜唾液酸(SA)水平和封闭度的影响。方法建立H22荷瘤小鼠模型,荷瘤小鼠分别sc生理盐水、环磷酰胺、龙葵碱(9.375、18.75、37.5mg/kg)。采用比色法测定H22小鼠肿瘤细胞膜SA水平和封闭度。结果龙葵碱可剂量依赖性地降低荷瘤小鼠肿瘤细胞膜SA水平和肿瘤细胞膜封闭度。结论龙葵碱通过降低H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜SA水平和肿瘤细胞膜封闭度起抗肿瘤作用。     

海藻多糖对肿瘤细胞膜流动性的影响

目的 研究海藻多糖的抗肿瘤作用机制。方法 采用荧光探针DPH法，观察海藻多糖对S180和H22小鼠细胞膜流动性的影响。结果 海藻多糖可升高S180荷瘤小鼠肿瘤细胞的膜流动性，降低H22荷瘤小鼠肿瘤细胞膜流动性。结论 海藻多糖可恢复肿瘤细胞膜流动性至正常细胞膜流动性而达到抗肿瘤的作用。     

青龙衣不同提取部位的抗肿瘤作用研究

目的 观察青龙衣不同提取部位的抗肿瘤作用。方法 制备S180和H22荷瘤小鼠模型，青龙衣不同提取部位ip给药，观察其对S180小鼠的抑瘤作用及对胸腺、脾脏器官指数的影响，对S180和H22荷瘤小鼠癌细胞膜和红细胞膜表面唾液酸(SA)含量的影响。结果 青龙衣冷、热醇提取部位对S180荷瘤小鼠均有明显的抑瘤作用，并呈良好的剂量效应关系；对H22荷瘤小鼠可延长生存期；冷、热醇提取部位能显著降低S180和H22小鼠肿瘤细胞膜表面SA含量，同时显著提高荷瘤小鼠红细胞膜表面SA含量。结论 青龙衣冷、热醇提取部位具有抗肿瘤作用。     

海嘧啶对FC,H22荷瘤小鼠红细胞膜功能的影响

 目的研究海嘧啶对荷瘤小鼠红细胞膜功能的影响。方法采用DPH荧光探针标记的方法测定红细胞膜的流动性,聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定红细胞膜蛋白的含量,用比色法测定红细胞膜表面唾液酸含量和膜封闭度。结果海嘧啶能够降低荷瘤小鼠红细胞膜的流动性,降低荷瘤小鼠膜蛋白的含量,升高荷瘤小鼠红细胞膜唾液酸含量,提高红细胞膜重新封闭的能力。结论海嘧啶通过改善和恢复荷瘤小鼠红细胞膜功能,改善机体的免疫功能而达到抗肿瘤的作用。     

龙葵多糖对红细胞CR1数量及S180A和H22荷瘤小鼠机体红细胞免疫力的影响

 目的 研究龙葵多糖对S₁₈₀及H₂₂荷瘤小鼠红细胞补体受体1（CR1）数量及活性的影响,探讨龙葵多糖抗肿瘤作用的红细胞免疫机制。方法 采用体内移植S₁₈₀和H₂₂肿瘤细胞株造模的方法,评价龙葵多糖的体内抗肿瘤疗效;红细胞免疫花环实验检测红细胞免疫黏附肿瘤细胞的能力;CR1单克隆抗体标记,流式细胞术检测荷瘤小鼠红细胞CR1数量;酵母多糖免疫黏附荷瘤小鼠红细胞的能力评价荷瘤小鼠红细胞CR1受体的活性;比色法测定荷瘤小鼠红细胞膜唾液酸含量。结果 龙葵多糖能够抑制S₁₈₀荷瘤小鼠实体瘤生长,延长H₂₂荷瘤小鼠生存时间;提高荷瘤小鼠红细胞免疫花环率（DTER）;增加荷瘤小鼠红细胞CR1受体的数量和活性;增加荷瘤小鼠红细胞膜唾液酸含量。结论 龙葵多糖通过提高荷瘤小鼠红细胞膜上唾液酸含量,进而提高CR1的活性和数量,改善和提高荷瘤小鼠红细胞免疫黏附能力,发挥抗肿瘤的作用。     

扶正抑瘤颗粒对荷瘤小鼠红细胞膜CD35和CD44s的影响

目的:观察扶正抑瘤颗粒(FYK)对荷瘤小鼠红细胞免疫功能的作用。方法:FYK灌服给予荷瘤小鼠(H22),观察生命延长率,检测红细胞天然免疫活性和红细胞膜CD35和CD44s数量。结果:FYK可使荷瘤小鼠生命延长率增加,红细胞天然免疫活性得到改善,CD35和CD44s数量增加。结论:FYK有一定的红细胞免疫调节作用。     

紫草多糖对S_(180)荷瘤小鼠红细胞膜流动性与带3蛋白的影响

目的:观察紫草多糖对S180荷瘤小鼠瘤重、红细胞膜流动性和带3蛋白含量的影响。方法:采用荧光探针DPH标记法测定红细胞膜的荧光偏振度P,计算微黏度(η)与膜脂流动性(LFU);电泳法测定红细胞膜带3蛋白含量。结果:紫草多糖中剂量组抑瘤率达43.05%;且各剂量组对红细胞膜膜脂流动性、带3蛋白均有影响,以中剂量组效果最佳,与对照组相比P<0.01,P<0.05。结论:紫草多糖通过影响荷瘤小鼠红细胞膜流动性和带3蛋白恢复红细胞的正常功能发挥其抗肿瘤作用。     

白头翁总皂苷碱水解产物通过线粒体通路促进肝癌细胞凋亡研究

目的研究白头翁总皂苷碱水解产物(PAHS)抗肝癌作用及其相关机制。方法采用MTT法检测PAHS对于人肝癌细胞SMMC-7721增殖的影响,并用Giemsa染色法观察细胞形态;采用Hoechst 33258染色法以及流式细胞术检测PAHS对细胞凋亡、细胞周期及线粒体膜电位的影响;采用Western blotting检测凋亡相关蛋白Cytochrome C、Caspase-3、cleaved Caspase-3和Bcl-2的表达。采用ICR小鼠腋下sc肝癌细胞H22建立体内肝癌模型,测定肿瘤生长抑制率,并通过HE染色和透射电镜观察组织形态。结果体外结果显示,PAHS能够以剂量和时间依赖的方式抑制SMMC-7721细胞的增殖,能够将肿瘤细胞的生长周期阻滞在S期,降低线粒体膜电位。PAHS可以上调Cytochrome C、cleaved Caspase-3的表达和下调Bcl-2、Caspase-3的表达。体内实验结果显示,PAHS(50、100、200 mg/kg)可以抑制小鼠肝癌细胞的生长,具有剂量依赖性。组织学观察显示PAHS组的小鼠肿瘤组织均有大面积坏死及凋亡细胞的出现。结论 PAHS可通过诱导细胞凋亡发挥抗肝癌作用,其作用机制与线粒体凋亡途径有关。     

白芥子挥发油对小鼠肝癌H22移植性肿瘤的抑制作用及其机制研究

目的 探讨白芥子挥发油对肝癌H₂₂移植性肿瘤的抑制作用及其机制。方法 建立小鼠肝癌H₂₂移植性肿瘤模型。造模24 h后小鼠分成5组：模型组,环磷酰胺（25 mg/kg）阳性对照组,白芥子挥发油低、中、高剂量（20、40、80 mg/kg）组,采用腹腔给药或原位注射给药,观察白芥子挥发油对H₂₂荷瘤小鼠肿瘤质量、生存期的影响;HE染色法以及吖啶橙（AO）染色观察肿瘤细胞形态的变化;免疫组化法检测肿瘤细胞凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达。结果 白芥子挥发油显著延长H₂₂荷瘤小鼠生存期并抑制肿瘤生长（P＜0.01）;上调Bax的表达、下调Bcl-2的表达。白芥子挥发油对H₂₂细胞的抑制作用呈良好的剂量相关性,但高剂量组毒副作用明显。结论 白芥子挥发油能够抑制H₂₂荷瘤小鼠肿瘤细胞的生长,其机制可能与上调Bax的表达、下调Bcl-2的表达,进而诱导细胞凋亡有关。     

川楝子配伍对一贯煎抑制荷H22小鼠肝癌细胞增殖的影响＊

目的 对比研究一贯煎，一贯煎去川楝子，川楝子对荷H22小鼠肝癌细胞增殖及凋亡相关蛋白B淋巴细胞瘤-2（B-celllymphoma/Leukemia-2，Bcl-2）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）、细胞色素C（Cyt-c）、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3（Caspase-3）蛋白表达的影响。方法 小鼠随机分为模型组，环磷酰胺（cyclophosphamide， CTX）组（50 mg·kg^-1），一贯煎组（23 g·kg^-1），一贯煎去川楝子组（21 g·kg^-1），川楝子组（0.1 g·kg^-1）。雄性KM小鼠每组10只右侧腋下皮下注射H22细胞构建肝癌荷瘤模型，CTX组造模后腹腔注射给药，隔日一次，共7次，余组造模前后14天均灌胃给药，统计各组瘤重。原位末端标记法（TUNEL）检测肿瘤细胞凋亡；蛋白免疫印记法（Western blot）检测Bax、Bcl-2、Cyt-c、Caspase-3蛋白表达。结果 与模型组比较，CTX组，一贯煎组，一贯煎去川楝子组，川楝子组瘤重均降低（P<0.01），肝癌细胞凋亡率均升高（P<0.01），Bax、Caspase-3和Cyt-c蛋白表达均升高（P<0.05或P<0.01），CTX组、一贯煎组Bcl-2蛋白表达降低（P<0.01）；与一贯煎组比较，一贯煎去川楝子组、川楝子组瘤重、Bcl-2蛋白表达升高（P<0.05），肝癌细胞凋亡率和Bax、Caspase-3蛋白表达降低（P<0.05或P<0.01）；与一贯煎去川楝子组比较，川楝子组肝癌细胞凋亡率，Cyt-c、Caspase-3蛋白表达均升高（P<0.01），Bcl-2蛋白表达降低（P<0.01）。结论 一贯煎中川楝子配伍能明显增强该方抑制肝癌细胞增殖的功效，其机理可能与升高Bax、Caspase-3和Cyt-c蛋白表达，降低Bcl-2蛋白表达，进而促进肝癌细胞凋亡有关。     

半枝莲多糖对S180荷瘤小鼠红细胞功能的影响

目的: 探讨半枝莲多糖增强荷瘤小鼠红细胞膜流动性及其红细胞免疫调节机制。 方法: 健康雄性小鼠48只,按体重随机分为正常对照组、模型对照组、黄芪多糖对照组(100 mg·kg^-1)、半枝莲多糖低、中、高剂量组(50,100,200 mg·kg^-1)。用荧光分光光度计检测荷瘤小鼠红细胞膜流动性;用紫外分光光度计检测红细胞膜Ca²⁺,Mg²⁺-ATP酶活力、唾液酸(SA)含量、抗氧化酶系的活力。 结果: 与模型对照组比较,半枝莲多糖各剂量组可明显提高S180荷瘤小鼠红细胞膜流动性(P<0.01,P<0.05),可明显提高红细胞膜Ca²⁺,Mg²⁺-ATP酶活力(P<0.01,P<0.05)、及抗氧化酶系的活力(P<0.01,P<0.05);低、中剂量组可增加红细胞膜表面唾液酸含量(P<0.01)。 结论: 半枝莲多糖可能通过改善S180荷瘤小鼠红细胞膜的功能状态,提高膜的流动性,增强红细胞的免疫功能,从而发挥其抗肿瘤作用。     

地锦草水提液对移植性肝癌的抑制作用及对凋亡蛋白表达的影响

目的: 研究地锦草对移植性肝癌H22小鼠的抑制作用及对凋亡相关蛋白Bcl-2,Bax和Caspase-3表达的影响。 方法: 复制小鼠移植性肝癌模型后,随机分为模型组、地锦草组和环磷酰胺组。地锦草低、中、高剂量组分别以66,132,264 mg·kg^-1 ig,环磷酰胺组1 mg·kg^-1 iv 1次,模型组和环磷酰胺组灌服同体积的蒸馏水,14 d后处死小鼠,剥离瘤组织,称肿瘤质量;比色分析法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量;免疫组化法观察肿瘤组织Bcl-2,Bax和Caspase-3蛋白表达。 结果: 与模型组比较,地锦草治疗后肿瘤质量明显减轻(P<0.05);地锦草各剂量组与环磷酰胺组小鼠血清SOD均升高(P<0.05,P<0.01),血清MDA含量均下降(P<0.05,P<0.01);地锦草高、中剂量组及环磷酰胺组降低Bcl-2蛋白表达,同时提高Bax,Caspase-3蛋白表达(P<0.05),降低Bcl-2/Bax。 结论: 地锦草抗肿瘤机制可能是通过增强抗氧化防御系统抑制肿瘤细胞的生长,纠正机体凋亡蛋白与抗凋亡蛋白失衡,激活Caspase-3酶活性而诱导肿瘤细胞凋亡。     

忍冬藤提取物诱导骨肉瘤细胞凋亡的作用及机制研究

目的研究忍冬藤Lonicerajaponica提取物对骨肉瘤细胞增殖和凋亡的作用及机制。方法采用超高效液相色谱-飞行时间质谱联用技术(UPLC-Q-TOF/MS)表征忍冬藤提取物的化学成分;采用MTT法检测忍冬藤提取物对人骨肉瘤细胞HOS、143B以及人肾皮质近曲小管上皮细胞HK-2存活率的影响;采用荧光显微镜观察忍冬藤提取物对HOS、143B细胞凋亡的影响;采用Annexin V/PI双染法检测忍冬藤提取物对HOS细胞凋亡的影响;采用JC-1染色法检测忍冬藤提取物对HOS细胞线粒体膜电位的影响;采用Westernblotting法检测忍冬藤提取物对HOS细胞B细胞淋巴瘤2相关X蛋白(bcl-2associated X,Bax)、B细胞淋巴瘤2(B cell lymphoma-2,Bcl-2)、活化的半胱氨酸蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、活化的多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(cleavedpolyADP-ribosepolymerases,cleavedPARP)、cleavedCaspase-9和细胞色素C(cytochrome-c,Cyt-C)蛋白表达的影响。结果忍冬藤提取物中鉴定出有机酸类、三萜皂苷类、黄酮类、环烯醚萜类和氨基酸类5种类型的36种化学成分。忍冬藤提取物抑制HOS和143B细胞存活率,显著诱导HOS细胞凋亡(P0.01),Caspase-3抑制剂Z-VAD-FMK显著抑制忍冬藤提取物诱导的HOS细胞凋亡(P0.05、0.01);忍冬藤提取物显著提高HOS细胞Caspase-3活性(P0.01),显著改变HOS细胞线粒体膜电位(P0.05、0.01),显著上调HOS细胞Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9、Cyt-C和Bax/Bcl-2蛋白表达水平(P0.05、0.01),显著下调Bcl-2蛋白表达水平(P0.05、0.01)。结论忍冬藤提取物能够抑制骨肉瘤细胞增殖,并通过线粒体凋亡途径诱导细胞凋亡,其机制可能与下调Bcl-2蛋白表达,上调Bax、cleaved Caspase-3、cleaved PARP、cleaved Caspase-9和Cyt-C蛋白表达,激活Caspase级联反应有关。     

癌痛平胶囊抑制肿瘤转移及其作用机制探讨

目的:观察癌痛平胶囊对H22荷瘤小鼠肿瘤生长转移的抑制作用,探讨其作用机制。方法:ICR小鼠接种H22肝癌细胞株,建立H22荷瘤小鼠模型。将H22荷瘤小鼠随机分为模型组、顺铂组、癌痛平高、低剂量组,模型组每日ig等容积生理盐水,癌痛平高、低剂量组每日ig癌痛平(36,18 g·kg~(-1)),顺铂组每日ip顺铂(2 mg·kg~(-1))。各组连续给药7 d,处死荷瘤小鼠,剥离瘤体称重,按公式计算抑瘤率。采用免疫组化检测肿瘤组织中血管内皮生长因子(VEGF)蛋白表达,使用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)以及免疫印迹法(Western blot)检测肿瘤组织中C-X-C趋化因子配体12(CXCL12)及C-X-C趋化因子受体4(CXCR4)基因以及蛋白表达的改变。结果:癌痛平高、低剂量显著抑制小鼠H22荷瘤小鼠肿瘤的生长,癌痛平高剂量显著降低肿瘤组织中VEGF蛋白表达,并抑制CXCL12和受体CXCR4的基因及蛋白表达(P0.01)。结论:癌痛平胶囊对H22荷瘤小鼠肿瘤生长转移具有一定的抑制作用,其作用机制可能是通过降低肿瘤组织VEGF蛋白表达以及干预CXCL12/CXCR4生物轴抑制肿瘤转移。     

白附子混悬液对荷瘤小鼠p16、bcl-2的表达及端粒酶活性的相关性研究

[目的]探讨白附子混悬液(SGTR)对荷瘤小鼠端粒酶活性的调节及对p16、bcl-2的相关表达的研究。[方法]采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测小鼠血清中端粒酶浓度;用免疫组织化学方法测定H22肿瘤组织中p16和bcl-2蛋白的表达情况来推断SGTR对肿瘤细胞凋亡机制的作用。[结果]SGTR可上调p16蛋白表达水平,差异有统计学意义(P<0.01);下调bcl-2蛋白的表达水平(P<0.01),抑制H22荷瘤小鼠体内端粒酶活性(P<0.01)。[结论]SGTR通过抑制端粒酶活性、下调凋亡基因bcl-2的表达及上调抑癌基因p16的表达从而促进肿瘤细胞凋亡来达到抗肿瘤的作用。     

羊栖菜多糖对S180荷瘤小鼠红细胞相关生化功能影响的研究

 目的分析羊栖菜多糖对S₁₈₀荷瘤小鼠红细胞相关生化功能影响的研究。方法建立肿瘤动物模型,分高、中、低剂量腹腔给予羊栖菜多糖7 d,采集红细胞,制备红细胞悬液,运用激光共聚焦扫描技术测定荷瘤小鼠红细胞内[Ca²⁺]的变化;运用相关试剂盒测定红细胞膜表面唾液酸含量和Na⁺,K⁺-ATPase及Ca²⁺,Mg²⁺-ATPase活性的变化;用流式细胞仪分析红细胞膜电位水平的变化;采用高效毛细管电泳法测定红细胞电泳合淌度的变化。结果羊栖菜多糖能降低荷瘤小鼠红细胞内[Ca²⁺],升高膜表面唾液酸的含量,增强膜表面Na⁺,K⁺-ATPase及Ca²⁺,Mg²⁺-ATPase的活性,提高红细胞膜电位水平,提高红细胞的电泳合淌度。结论羊栖菜多糖可调节或恢复S₁₈₀荷瘤小鼠红细胞多种生理生化功能。     

从PI3K/Akt/p53通路探讨藤茶总黄酮抗肝癌的作用机制

目的:研究藤茶总黄酮(TF)对肝癌裸鼠移植瘤的抑制作用,预测其作用机制可能与调控细胞凋亡肌醇磷脂-3-激酶/蛋白激酶B/p53(PI3K/Akt/p53)通路的相关因子有关。方法:建立BEL-7404肝癌裸鼠移植瘤模型,实验分为模型组,5-氟尿嘧啶(5-FU,1.0 g·L~(-1))组及TF高、中、低质量浓度(30,15,7.5 g·L~(-1))组,给药干预2周后处死裸鼠,剥离出瘤组织,根据瘤重和瘤体积计算抑瘤率(IR)及相对肿瘤增殖率(T/C);采用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测PI3K/Akt/p53中相关基因胞内PI3K,Akt1,p53,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase-3),B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2),Bcl-2相关X蛋白(Bax)mRNA表达;采用免疫组化检测相关蛋白PI3K,Akt1,p53,Caspase-3,Bcl-2,Bax蛋白的表达。结果:TF高、中、低质量浓度组IR分别为53.26%,35.94%,26.74%,T/C分别为59.74%,69.66%,84.82%;逆转录聚合本科链式反应(RT-PCR)表明,与模型组比较,TF 30 g·L~(-1)能明显下调PI3K,Akt1,Bcl-2 mRNA表达,显著上调抑癌基因p53,Capsase-3,Bax mRNA表达;免疫组化表明,与模型组比较,TF 30,15 g·L~(-1)均明显下调PI3K,Akt1,Bcl-2蛋白的表达,显著上调p53,Capsase-3,Bax蛋白的表达。结论:TF有明显的体内抗肝癌活性,其机制可能与上调p53,Caspase-3的表达,激活细胞凋亡PI3K/Akt/p53通路,从而抑制Bcl-2,提高Bax的表达,促进肝癌细胞凋亡有关。