大麻中非成瘾性成分大麻二酚及其类似物的研究概况

大麻作为一种古老的栽培植物,很早就有相关的记载.药理研究表明,大麻中的主要活性成分是大麻素类化合物(cannabinoids),目前已知天然大麻素有70种,其中四氢大麻酚(THC)、大麻二酚(CBD)是大麻中的主要化学成分.虽然THC被认为是其最重要的活性成分,具有神经活性,可用于治疗癌症引起的呕吐,但THC具有致幻作用,这也成为许多国家禁种大麻的唯一原因.与THC不同的是,CBD是大麻中的非成瘾性成分,能阻碍THC对人体神经系统影响,并具有抗痉挛、抗风湿性关节炎、抗焦虑等药理活性.近年来,人们对大麻二酚类化合物以及其与大麻受体CB1和CB2相互作用的研究成为新的研究热点,为此,就CBD及其类似物的研究概况进行综述.     

药用大麻活性成分、产品开发及育种研究进展

大麻是一种传统的经济作物，有着数千年的使用历史，可作药用，也可用于食品和纺织领域。随着药用活性成分的研究深入，大麻引起了国内外医药界广泛关注。目前全球已有55个国家将医用大麻合法化，我国云南和黑龙江两省可以合法种植和加工工业大麻。但工业大麻的大麻二酚（CBD）含量低，不利于后续开发与研究。笔者以陈士林团队定义的药用大麻[四氢大麻酚（THC）质量分数<0.3%,CBD含量高，主要用于提取CBD的大麻]作为研究对象，从药用大麻的活性成分、CBD分离纯化技术、大麻素类相关产品开发与应用、育种方法 4个方面展开综述。通过梳理，建议后续研究应重视挖掘CBD合成基因，通过基因编辑技术进化大麻的分子育种，开发绿色提取工艺，发现更多活性成分，并通过合成生物学与无细胞体系高产CBD，以期为药用大麻在国内的开发与应用提供参考。     

非精神活性药用大麻的应用及开发

非精神活性药用大麻即四氢大麻酚(THC)质量分数0. 3%且大麻二酚(CBD)含量高(原则上应 2. 0%),主要用于药用的大麻植物。大麻的药用性历史悠久,笔者基于大麻的本草考证以及国际药用历史,阐述了大麻素类化合物特别是CBD在开发抗癫痫药品、精神疾病药品、镇痛抗炎药品及抗肿瘤药品上的应用,并对其在食品、保健品、化妆品等领域的应用情况进行总结。基于目前高CBD含量药用大麻的新品种匮乏、基础研究薄弱等问题,建议应加强CBD等有效成分的基础研究,推动药用大麻五类新药及保健品等的开发,通过挖掘药用大麻遗传信息,建立其综合鉴定体系并加快高CBD含量新品种选育,保障药用大麻的安全性及有效性,促进药用大麻产业的可持续发展。     

082 应用内部简单重复序列(ISSR)扩增的大麻DNA指纹图谱

利用HPLC方法可将3种不同的大麻样品分成四氢大麻酚类(THC)和大麻二酚类(CBD)2种化学类型，但有2种样品不能区分同属CBD型。本次利用ISSR指纹图谱进行鉴别。     

药用大麻种质资源分类与研究策略

当前我国将大麻分为工业大麻和医用大麻2类进行管理。工业大麻[四氢大麻酚(tetrahydrocannabinol,THC)0. 3%)]用于获取纤维和种子,医用大麻(THC0. 3%)严禁种植和使用。近年来,大麻非精神活性类成分大麻二酚(cannabidiol,CBD)的作用机制和新药研发取得了突破性进展,基于CBD的各种大麻新产品开发成为了国际热点,而我国在该领域的研究几乎空白。种质资源管理分类方式的滞后是主要原因之一。明确药用大麻种质资源的概念和研究策略,是我国大麻资源战略发展的关键一步。该文系统分析了大麻的药用历史、大麻种质资源研究的重要成果,首次提出了药用大麻的学术定义和大麻种质资源管理三级分类体系,即医用大麻(THC0. 3%)、药用大麻(THC0. 3%,CBD含量高)和工业大麻(THC0. 3%,用于获取纤维和种子,CBD含量低)。在总结了药用大麻种质和遗传信息研究进展的基础上,该文提出了药用大麻四大研究策略——阐明遗传机制提高单株CBD含量、性别控制提高雌性植株比例、植物工厂实现周年连续种植、异源表达突破CBD合成局限。     

汉麻酚类活性物质生物合成调控的研究进展

汉麻Cannabis sativa是典型的一年生且雌雄异株的开花植物,是大麻素的主要来源,具有多种精神活性和药理作用,由于对人类疾病的治疗潜力而被广泛关注。除了具有精神活性的主要成分四氢大麻酚（tetrahydrocannabinol,THC）外,还含有非精神活性的酚类化合物如大麻二酚（cannabidiol,CBD）,作为抗肿瘤的候选药物具有很高的价值。然而在已知的600多种大麻素中,大多数含量较低,由于其在医学、日化和工业方面具有广泛的用途,迫切需要应用新的生物技术提高大麻素的生物合成。大麻素的异源生物合成可以实现低成本且快速的生产,各种组织培养方法,如微繁殖、细胞悬浮培养、毛状根培养和农杆菌介导的基因转化方法在汉麻育种、新性状开发及规模化繁殖方面具有潜在的应用价值。综述了汉麻酚类化合物药理学、合成积累规律及其生物合成最新进展,重点探讨了大麻组织培养方面重要的成果,以期为汉麻酚类物质生物合成及其利用提供科学依据和参考。     

外源H2O2处理对药用大麻中大麻素含量的影响

目的 通过外源活性氧调节大麻的次生代谢,提高大麻二酚（CBD）含量,为优质药用大麻生产提供新的技术。方法 在大麻始果期采摘大麻植株顶端苞片,分别采用清水和20、200、2000 μmol·L^–1过氧化氢（H₂O₂）对大麻苞片进行喷洒处理,连续4 d分析大麻体内活性氧含量、抗氧化酶活性、大麻素生物合成途径关键基因表达量及大麻素类成分含量的变化规律。结果 外源H₂O₂使大麻苞片中的H₂O₂、O₂^·–及丙二醛（MDA）含量均有所提升。20 μmol·L^–1 H₂O₂处理使大麻超氧化物歧化酶（SOD）、过氧化氢酶（CAT）活力提升最大,在处理第1~2天达到峰值。过氧化物酶（POD）在H₂O₂处理第3天达到峰值。外源H₂O₂能够明显提升聚酮合酶、四氢大麻酚酸合成酶、大麻二酚酸合成酶的基因表达量。20 μmol·L^–1 H₂O₂处理第1天大麻苞片中CBD含量比对照组提高了72.9%。结论 外源活性氧能够诱导出植物的逆境生理状态,20 μmol·L^–1 H₂O₂处理能够极显著提高大麻CBD含量。     

GW的大麻气雾剂即将上市

随着4项Ⅲ期临床试验的结束,GW 的大麻类药物——含四氢大麻酚(THC)和大麻二酚(CBD)的大麻提取物舌下喷雾剂将于今年上市。这4项Ⅲ期临床试验是2002年4月开始的,参试的各种病人共约350人。进一步研究了 THC+CBD 对多发硬化症(MS)、脊髓损伤者和疼痛的作用,同时也考查了对癌症疼痛、睡眠障碍和臂丛损伤的作     

大麻中大麻素类化学成分及其分析方法研究进展

大麻Cannabis sativa又名线麻、白麻、胡麻、野麻和火麻，为大麻科大麻属一年生草本植物，是我国传统经济作物，应用涉及医药、食品和化妆品等多个领域。大麻素类成分是大麻的主要活性成分，具有镇痛、抗炎、抗氧化、镇静、抗呕吐等功效。根据化合物结构特点，对大麻中已报道的121个大麻素类成分进行了总结归纳，并在此基础上按分离技术对大麻素类成分的常用分析方法进行了综述，旨在为大麻资源的质量控制以及大麻的深入研究提供参考依据。     

四氢大麻酚THC抑制肝癌细胞Bel-7402增殖和诱导其凋亡的研究

目的探讨激活大麻受体对肝癌细胞增殖凋亡的作用,并对其机制进行初步研究。方法将细胞分成对照组,不同剂量大麻受体激动剂delta-tetrahydrocannabinol(THC)处理组。MTT法测定THC对Bel-7402细胞增殖的影响;DNA梯度电泳法和流式细胞技术检测分析各组细胞凋亡情况;Western blot法检测大麻受体CB1、CB2、Caspase-3和c-myc的表达水平,分光光度法检测细胞的活性。结果 Bel-7402细胞中大麻受体CB1、CB2较L02正常肝细胞明显增强。THC能抑制Bel-7402细胞增殖,诱导Bel-7402细胞凋亡,上述效应具有浓度依赖性。THC能抑制Bel-7402细胞中c-myc的表达,诱导Bel-7402细胞中的Caspase蛋白表达和活性。结论大麻受体激动剂THC能抑制肝癌细胞增殖,诱导肝癌细胞凋亡,并与caspase和c-myc蛋白表达相关。     

连翘对豚鼠离体回肠运动的影响

目的:观察连翘对豚鼠离体肠管运动的影响,以期探讨其止呕作用的机制。方法:以呕吐相关受体激动剂为工具药,利用离体恒温浴槽,观察连翘对豚鼠离体回肠收缩的影响。结果:连翘能够抑制离体肠管的自发活动,表现为收缩张力降低,并呈剂量依赖性关系。乙酰胆碱(acetylcholine,Ach)、组织胺(histamine,His)、五羟色胺(5-hydroxytryptamine,5-HT)能够兴奋肠管,使张力升高、振幅变大,连翘高(10 g·L-1)、中(5 g·L-1)、低(2 g·L-1)剂量均能抑制以上3种工具药所致肠管收缩,降低其收缩张力和振幅,但对频率无明显影响。多巴胺(dopamine,DA)能够抑制肠管收缩,表现为张力降低、振幅变小,连翘高剂量和中剂量能够拮抗DA的肠管松弛作用,使张力升高、振幅变大;连翘低剂量能够进一步使张力降低,但使振幅增大。结论:连翘可以抑制豚鼠回肠运动,其机制可能是通过阻断肠平滑肌上的M受体、H1受体、5-HT受体和D2受体,也可能是对肠管的直接抑制作用,其止呕机制尚待进一步深入研究。     

四逆散含药血清对大鼠皮层神经元GABAA受体介导Cl-电流的影响

目的:研究四逆散改善失眠作用的机制.方法:四逆散浸膏按21.7 g·kg-1·d-1给SD大鼠连续灌胃7d,腹主动脉取血,分离血清,按10％比例加进原代培养SD大鼠皮层神经元培养基,37℃孵育3h,应用全细胞膜片钳方法,记录四逆散含药血清对原代培养大鼠皮层神经元γ-氨基丁酸A型受体(GABAA)介导的氯离子(Cl-)电流的影响.结果:给予0.3,3,30,300 μmol· L-1γ-氨基丁酸刺激,经10％四逆散含药血清作用3h的皮层神经元,γ-氨基丁酸浓度-效应曲线左移,半效激活浓度降低(P=0.05),氯离子电流的最大峰值(P＜0.05)、快速衰减时间常数(τ2,P ＜0.05)和慢速衰减时间常数(τ1,P＜0.05)明显增大.结论:四逆散作用于皮层神经元的γ-氨基丁酸A型受体,调节其介导的氯离子电流,可能是其改善失眠作用的机制之一.     

糖胃安对四氧嘧啶糖尿病胃轻瘫模型大鼠5-羟色胺2A受体的影响

目的:观察糖胃安对四氧嘧啶糖尿病胃轻瘫模型大鼠5-羟色胺_2A(5-HT_2A)受体的影响并探讨其作用机制。方法:以四氧嘧啶加200%熟地黄浓煎液造成四氧嘧啶糖尿病胃轻瘫模型大鼠,将40只该模型大鼠随机分为4组:糖胃安高剂量组在用格列齐特片20mg·kg^-1的基础上,给予糖胃安31.75g·kg^-1灌胃;糖胃安低剂量组在用格列齐特片20mg·kg^-1的基础上,给予糖胃安15.88g·kg^-1灌胃;阳性对照药吗叮啉组在用格列齐特20mg·kg^-1的基础上,联合吗丁啉3.75mg·kg^-1配合灌胃;模型对照组给予等量蒸馏水。另取10只正常大鼠作为正常对照组。本实验采用免疫组化方法观察中药糖胃安对该模型大鼠受体的影响。结果:糖胃安不仅能降低糖尿病胃轻瘫模型大鼠血糖,还可以明显改善大鼠胃肠5-羟色胺_2A受体水平。与用药前相比,有显著性差异(P<0.01),与对照组相比,也有显著性差异(P<0.05)。结论:5-HT_2A受体含量的增高是糖尿病胃轻瘫的重要原因之一,糖胃安能够明显改善5-HT_2A受体水平,有显著的降低血糖、改善患者症状的作用。     

小半夏汤对豚鼠离体肠管运动的影响

目的: 观察小半夏汤对豚鼠离体肠管收缩的影响,初步探讨其止吐的作用机制。 方法: 利用离体浴槽,观察小半夏汤[(生药,下同) 0, 0.1, 0.25, 0.5, 1, 2.5, 5, 10, 20, 40 g·L^-1]对豚鼠离体肠管自主收缩平均张力、振幅和频率的影响;以呕吐相关受体激动剂乙酰胆碱(Ach)、组胺(His)、五羟色胺(5-HT)、多巴胺(DA)为工具药,观察小半夏汤0, 2, 5, 10 g·L^-1对各工具药致豚鼠离体肠管收缩平均张力、振幅、频率和最大张力的影响。 结果: 小半夏汤能剂量依赖性地抑制豚鼠离体肠管自主收缩,降低其收缩平均张力、振幅和频率(与空白对照组相比,P<0.05或P<0.01);先加Ach,His,5-HT再加小半夏汤2,5,10 g·L^-1或小半夏汤2,5,10 g·L^-1预处理均能明显抑制3种工具药所致肠管收缩,减少肠管收缩平均张力、振幅、频率和最大张力(分别与给小半夏汤前和不给小半夏汤相比,P<0.05或P<0.01);小半夏汤能够增大DA致肠管收缩平均张力、振幅和频率(分别与给小半夏汤前和不给小半夏汤相比,P<0.05或P<0.01),但对肠管收缩最小张力无明显影响。 结论: 小半夏汤能够抑制豚鼠离体肠管自主收缩,其作用机制可能是通过阻断M受体、H₁受体、5-HT受体和D₂受体等呕吐相关受体而介导,或直接作用于肠平滑肌而起作用,其止呕机制有待进一步研究。     

阿魏酸钠联合人参皂苷Rg1镇痛作用及其机制

目的:观察阿魏酸钠(SF)联合人参皂苷Rg1(Rg1)镇痛作用并探讨其作用机制。方法:采用小鼠和大鼠两种动物,将动物分为SF低、中、高剂量组(2.5,5,10 mg·kg-1),Rg1低、中、高剂量组(5,10,20 mg·kg-1),复方(SF和Rg1联合用药)低、中、高剂量组(2.5+5,5+10,10+20)mg·kg-1并设置对照组,ig给药5 d后采用小鼠热板法,小鼠醋酸扭体法,大鼠福尔马林法观察SF和Rg1单用及联合应用的镇痛作用;采用全细胞膜片钳技术观察SF和Rg1单用及联合应用对瞬时感受器电位香草酸亚型1(TRPV1)的影响。结果:55℃热板,0.6%醋酸溶液0.02 mL·g-1,5%福尔马林溶液0.1 mL可致动物出现明显疼痛反应,SF中、高剂量组,Rg1高剂量组,复方低、中、高剂量组对3种疼痛模型均有较好的镇痛作用(P<0.05,P<0.01),且复方效果明显优于SF或Rg1单用(P<0.05,P<0.01);1μmol·L-1辣椒素(CAP)可激活TRPV1产生特异性内向电流,SF,Rg1及复方组对该电流均具有一定的抑制作用,且复方组抑制作用强于SF和Rg1组(P<0.05,P<0.01)。SF,Rg1,复方的IC50及95%置信区间分别为32.4(27.5~38.7),82.6(71.0~98.4),30.6(20.2~41.0)mg·L-1,等效应曲线图显示,SF和Rg1对CAP诱导的TRPV1电流的抑制具有协同效应。结论:SF和Rg1合用具有较好的镇痛作用,对TRPV1的协同抑制作用可能是其机制之一。     

四逆散冻干粉对睡眠剥夺果蝇头部5-HT含量和5-HT_(1A)受体表达的影响

目的:探讨四逆散冻干粉改善果蝇睡眠作用的机制。方法:收集12 h内羽化未交配的野生型Canton S品系黑腹果蝇,小气流CO2麻醉,雌雄分开,雌雄分别随机分为空白对照组、睡眠剥夺模型组和给药组,每组30只果蝇,利用ELISA法分别测定各组果蝇头部的5-HT的含量。利用实时定量PCR法,测定各组果蝇头部5-HT1A受体的表达差异。结果:四逆散冻干粉分别能提高雌性与雄性果蝇头部5-HT的含量,与模型组相比具有极显著性差异(P0.01)。四逆散冻干粉还能增加果蝇头部5-HT1A受体的表达量。结论:四逆散冻干粉改善果蝇睡眠的作用机制与增加果蝇头部5-HT含量和促进果蝇头部5-HT1A受体表达有关。     

舒郁胶囊对抑郁情绪模型大鼠海马和下丘脑内5-羟色胺3B受体分布与表达的影响

目的:检测抑郁情绪模型大鼠海马、下丘脑内5-羟色胺3B受体(5-HT3BR)蛋白分布、表达的变化,初步探讨舒郁胶囊对抑郁情绪的干预机制。方法:筛选大鼠进入实验,分为正常组、模型组、舒郁胶囊组(0.4 g.kg-1)、氟西汀组(0.002 g.kg-1),采用慢性温和性刺激法(chronic mild stress,CMS)制备抑郁情绪大鼠模型,以造模前后体重及糖水偏好值评价模型,采用免疫荧光技术检测大鼠海马和下丘脑内5-HT3B R的表达分布,以平均荧光强度(MFI)为指标对各组大鼠海马和下丘脑内5-HT3BR进行定量。结果:与正常组大鼠相比,模型组大鼠体重显著减轻(P<0.01),糖水摄入量也显著减少(P<0.01),5-HT3BR蛋白在海马和下丘脑中的表达水平显著升高(P<0.01);与模型组相比,舒郁胶囊组和氟西汀组大鼠体重增长显著(P<0.01),糖水摄入量显著增加(P<0.01),5-HT3BR蛋白在海马和下丘脑中的表达水平明显降低(P<0.01),但两组之间没有显著性差异。结论:5-HT3BR表达水平的上调可能与抑郁情绪的产生关系密切;舒郁胶囊可对抑郁情绪模型大鼠海马、下丘脑5-HT3BR表达水平的变化起到纠正作用。     

化风丹中As2S2及As2O3的含量测定

目的:建立化风丹中不溶性砷盐和可溶性砷盐的含量测定方法,为该制剂的质量控制提供参考。方法:采用滴定法和紫外分光光度法分别测定18批化风丹中二硫化二砷和三氧化二砷的含量。结果:建立的二硫化二砷含量测定方法重复性好,平均加样回收率97.61%,RSD 2.0%。三氧化二砷在4~16μg与吸光度线性关系良好,平均回收率97.77%,RSD2.1%。18批化风丹中二硫化二砷质量分数0.012~0.021 3 g·g-1,平均质量分数0.018 4 g·g-1,差异系数13.3%;三氧化二砷质量分数75.24~124.55μg·g-1,平均质量分数92.99μg·g-1,差异系数15.3%。结论:建立的含量测定方法简单、准确,为化风丹质量标准提升提供实验依据。不同批次化风丹中二硫化二砷和三氧化二砷含量差异较大。     

The aqueous crude extract of Montanoa frutescens produces anxiolytic-like effects similarly to diazepam in Wistar rats: Involvement of GABAA receptor

Ethnopharmacological relevance

Cihuapatli is the Nahuatl name assigned to some medicinal plants grouped in the genus Montanoa, where Montanoa frutescens (Family: Asteraceae, Tribe: Heliantheae) is included. The crude extract from these plants has been used for centuries in the Mexican traditional medicine as a remedy for reproductive impairments and mood disorders. Experimental studies have systematically corroborated the traditional use of cihuapatli on reproductive impairments and sexual motivation, however, the effect on mood and “nervous” disorders, remains to be explored.

Materials and methods

The anxiolytic-like effect of aqueous crude extract of M. frutescens (25, 50 and 75 mg/kg) was investigated in male Wistar rats evaluated in the elevated plus-maze and compared with several doses of diazepam (1, 2 and 4 mg/kg) as a reference anxiolytic drug. Picrotoxin (1 mg/kg), a noncompetitive antagonist of the GABA_A receptor, was used in experimental procedures to evaluate if this receptor could be involved in the anxiolytic-like effects produced by M. frutescens. To discard hypoactivity, hyperactivity, or no changes associated with treatments, which could interfere with the behavioral activity in the elevated plus-maze, rats were subjected to the open field test.

Results

M. frutescens at 50 mg/kg showed anxiolytic-like activity similarly to 2 mg/kg of diazepam, without disrupts in general motor activity. The anxiolytic-like effect of M. frutescens detected in the elevated plus-maze was blocked by picrotoxin, indicating that GABA_A receptors are involved in the modulation of this effect.

Conclusions

The results corroborate the use of M. frutescens in folk Mexican ethnomedicine as a potential anxiolytic agent and suggest that this effect is mediated by the GABA_A receptors. Additionally, some sedative effects with high doses of M. frutescens were detected in the present study.     

不同产地雄黄及其炮制品中二硫化二砷和可溶性砷含量比较

目的:比较研究不同产地雄黄及其炮制品中主成分As2S2及可溶性砷盐As2O3的含量差异。方法:采用2010年版《中国药典》雄黄项下的滴定法测定不同产地雄黄及其炮制品中As2S2的含量,采用AFS-230E型原子荧光光度计检测上述样品中可溶性砷盐As2O3含量。结果:不同产地的雄黄及其炮制品中As2S2,As2O3含量存在显著差异。雄黄炮制后,炮制品中As2S2含量均提高,As2O3含量均明显降低。除吉林和江苏2个产地的的雄黄及其炮制品中As2S2含量<90.0%,其余样品均符合药典规定;且雄黄炮制品中As2O3含量均能控制在1.7 mg.g-1以下。结论:研究结果可为指导雄黄临床合理用药提供参考依据。