不同产区酸枣仁中斯皮诺素、6′′′-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B的含量测定

目的研究和比较全国7大产区不同产地酸枣仁药材中2种黄酮和2种皂苷的含量,筛选优质药材来源。方法 2016年和2017年2个年度对7大产区进行调查和样品收集,共收集样品74份,使用UPLC-UV-ELSD检测斯皮诺素和6′′′-阿魏酰斯皮诺素2种黄酮,以及酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B2种皂苷的含量。结果 2016、2017年采集样品中酸枣仁样品中斯皮诺素的质量分数分别为0.052%～0.102%和0.049%～0.144%,6′′′-阿魏酰斯皮诺素质量分数分别为0.021%～0.072%和0.026%～0.088%,酸枣仁皂苷A的质量分数分别为0.016%～0.061%和0.033%～0.054%,酸枣仁皂苷B的质量分数分别为0.008%～0.046%和0.005%～0.046%。结论经相关性分析,7个大产区间各成分含量基本上没有显著差异,斯皮诺素含量较高的产地有山西临汾(包括大宁和吉县)、河北涉县、河北迁安、甘肃庆阳、陕西眉县、陕西合阳、辽宁建昌、天津蓟县,酸枣仁皂苷A含量高的产地为山东各地,以及河北内丘和陕西渭南。综合比较山东各地2类成分含量普遍都高且变化较小。相关性分析也显示2种黄酮含量具有较好的相关性,而2种皂苷含量的相关性较差。     

“抢青”采摘对酸枣仁质量的影响

目的:通过比较不同采收期,以及酸枣仁的种皮和种仁中指标性成分的含量,阐明"抢青"采收对于酸枣仁质量的影响。方法:采集了山西、河北、山东等4个酸枣仁主产地从8月下旬—11月上旬不同采摘时间的样品,以及分离出种仁和种皮,采用超高效液相紫外检测器串联蒸发光检测器(UPLC-UV-ELSD)法测定其中斯皮诺素、6-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和酸枣仁皂苷B的含量。结果:4个产地不同采收期采集样品的含量测定结果均显示随着酸枣果实成熟,黄酮类成分和皂苷类成分的含量逐渐增高,9月下旬—11上旬含量基本稳定。成熟期斯皮诺素的含量是8月下旬含量约3倍,各成分在种仁中含量显著高于种皮。结论:"抢青"采收严重影响酸枣仁药材中黄酮类和皂苷类含量,应严格控制酸枣仁的"抢青"采收。     

酸枣仁炮制前后与茯苓配比对酸枣仁皂苷A、斯皮诺素含量变化的影响

目的测定不同配比的酸枣仁、茯苓的酸枣仁皂苷A及斯皮诺素含量。方法采用《中国药典》规定的HPLC法对酸枣仁皂苷A及斯皮诺素进行测定。结果生枣仁组生枣仁茯苓比3:1,炒枣仁组配比为1:1,生炒各半组配比为3:1有效成分含量在相应各组中最高。结论生枣仁组配比为3:1,炒枣仁组配比为1:1,生炒各半组配比为3:1,此3个配比在相应组别中配比为最佳。     

天津产与市售野生酸枣仁的质量比较研究

目的对天津产酸枣仁Ziziphi Spinosae Semen进行质量分析评价研究,并与市售其他产地的酸枣仁进行比较分析。方法采用系统抽样结合区域分层抽样法采集天津4个区域12批酸枣野生样品,采用HPLC法测定其中的斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、白桦脂酸的量。结果天津产野生酸枣仁中斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、白桦脂酸量分别为0.810~1.925、0.695~1.708、0.201~0.390、0.651~0.789 mg/g;河北承德酸枣仁白桦脂酸量最高,达到1.654 mg/g。结论天津产野生酸枣仁质量较优,其中八仙山酸枣仁质量优势尤为突出,其他3个区域与市场流通的酸枣仁药材平均质量水平相当。     

酸枣仁黄酮HPLC指纹图谱建立及2种成分测定

目的建立酸枣仁Ziziphi spinosae Semen黄酮HPLC指纹图谱,并测定其中2种成分的含有量。方法以斯皮诺素为参照峰,建立10批样品的HPLC指纹图谱。酸枣仁黄酮甲醇提取物的分析采用Agilent TC-C_(18)色谱柱(4.6 mm×250 mm,5μm);流动相乙腈-0.1%醋酸,梯度洗脱;体积流量1 m L/min;柱温30℃;检测波长280 nm。结果 HPLC指纹图谱中有10个共有峰,并鉴定出其中8个(维采宁-Ⅱ、牡荆素葡萄糖苷、异斯皮诺素、斯皮诺素、6''-pyridyloylspinosin、6''-对羟基苯甲酰斯皮诺素、6''-阿魏酰斯皮诺素、6''-对香豆酰斯皮诺素)。斯皮诺素和6''-阿魏酰斯皮诺素分别在15.00~40.00μg和5.00~14.00μg范围内线性关系良好,平均加样回收率(RSD)分别为100.5%(1.6%)和100.4%(1.6%)。结论该方法准确、简单、可靠,可用于酸枣仁黄酮的质量控制。     

HPLC—ELSD法同时测定葱子药材三个皂苷类成分

目的：为葱子药材质量控制提供一种多成分同时在线检测的分析方法。方法：应用高效液相色谱蒸发光散射检测法（HPLC—ELSD）同时测定葱子药材中三个皂苷的含量。结果：皂苷A、B、C分别在73．4～1175．00μg／mL（r=0．9996）、96．25—1540．00μg／mL（r=0．9991）、110．00～1760．00μg／mL（r=0．9991）浓围内呈良好的线性关系;平均加样回收率分别为99．53％,99．08％,99．17％。结论：该方法分析时间短、专属性好、准确度高,可用于综合评价葱子药材的质量。     

基于多元统计分析和网络药理学的炒酸枣仁饮片质量标志物预测分析

目的基于多元统计分析和网络药理学分析预测炒酸枣仁饮片潜在的质量标志物(Q-Marker)。方法利用超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱质谱联用(ultra performance liquid chromatography-quadrupole-electrostatic field orbital trap mass spectrometry,UHPLC-Q-Orbitrap-MS)解析生、炒酸枣仁饮片的主要成分,运用多元统计分析结合VIP1和P0.05筛选出炮制前后潜在的差异化学成分。结合网络药理学筛选核心靶点构建"成分-靶点-通路"网络关系,预测炒酸枣仁潜在的Q-Marker,以潜在Q-Marker为指标对市售样品进行含量测定,验证Q-Marker的科学性。结果生、炒酸枣仁共鉴定54个化学成分,包括斯皮诺素、当药黄素等黄酮类成分,酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B等皂苷类成分,以及木兰花碱、乌药碱等生物碱类成分;结合多元统计分析共找到木兰花碱、6"'-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、白桦脂酸等28个差异性成分;经网络药理学分析筛选出包括17个差异成分的Q-Marker库,分别为酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、美洲茶酸、白桦脂酸、木兰花碱、乌药碱、去甲荷叶碱、巴婆碱、斯皮诺素、当药黄素、维采宁Ⅱ、6"'-对-香豆酰斯皮诺素、6"'-阿魏酰斯皮诺素、芹菜素、桦木酮酸、牡荆素、异牡荆素;结合课题组前期研究及市售样品测定结果,最终确定木兰花碱、乌药碱、斯皮诺素、6"'-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和B作为炒酸枣仁的Q-Marker。结论分析预测的Q-Marker为炒酸枣仁的整体质量控制及临床应用提供科学依据,同时也为其功效关联物质的研究及作用机制的阐释奠定基础。     

LC-MS/MS法测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素的含量

目的建立简单、快速、灵敏同时测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素的LC-MS/MS法。方法采用Phenomenex Gemini C1(850 mm×2.0 mm,5μm)色谱柱;流动相:甲醇-(5 mmol.L-1甲酸铵-0.1%甲酸缓冲液)梯度洗脱;流速为0.25 mL.min-1;柱温为40℃;质谱条件:采用负离子的模式,以MRM配对离子方式进行定量,酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素的选择检测离子质荷比分别为m/z 1251.9→1251.9,1089.9→1089.9和607.3→427.1。结果酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素分别在50～1000 ng.mL-1、25～500 ng.mL-1和12.5～500 ng.mL-1的浓度范围内,线性关系良好;酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素的最低检测限(LOQ)分别为5,2.5和0.5 ng.mL-1;平均回收率为99.35%～101.10%,RSD5.01%(n=9)。三批酸枣仁中酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素的含量分别为1.28～1.38 mg.g-1、1.02～1.11 mg.g-1和1.05～1.24 mg.g-1。结论该法专属性强、快速灵敏,可用于酸枣仁中酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素含量的测定。     

酸枣仁黄酮部位不同配伍的解郁安神作用及谱-效相关性分析

目的建立酸枣仁黄酮部位不同配伍的HPLC指纹图谱,研究其与解郁安神功效的谱效关系。方法采用Spearman分析、灰色关联度分析、多元回归分析方法将HPLC指纹图谱中各组分特征峰的峰面积与小鼠行为学指标数据相关联。结果酸枣仁黄酮部位HPLC指纹图谱中与药效有较强相关性的成分有5个,分别为维采宁-Ⅱ、牡荆素葡萄糖苷、斯皮诺素、6′″-阿魏酰斯皮诺素、6′″-对羟基苯甲酰斯皮诺素。结论通过谱-效相关性分析,推测出酸枣仁黄酮部位发挥抗抑郁、镇静催眠作用的有效成分,为酸枣仁有效成分筛选及质量控制方法的建立提供了依据。     

快速溶剂萃取-电雾式检测器同时测定酸枣仁中4种成分

目的建立一种快速溶剂萃取(ASE)-电雾式检测器(CAD)同时测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素、白桦脂酸的方法。方法采用正交试验对快速溶剂萃取系统的提取条件进行优化,并用电雾式检测器对酸枣仁中目标成分进行同时检测。色谱柱为Thermo Syncronis C_(18)(100 mm×3 mm,3μm),流动相为乙腈-水,体积流量为0.5 mL/min,柱温为40℃,Corona Ultra电雾式检测器,雾化温度35℃。结果优化了ASE参数,极大地提高了提取效率,通过1次进样,同时测定酸枣仁中酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素、白桦脂酸的量,线性关系良好,相关系数为0.998 3～0.999 6,加样回收率在98.46%～102.02%。结论该方法快速、简便、准确可靠,可用于酸枣仁药材的质量控制。     

HPLC-MS法同时测定百合枣仁袋泡茶中酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和斯皮诺素的含量

目的探究百合枣仁袋泡茶的制备工艺,建立简单、快速、灵敏同时测定百合枣仁袋泡茶中酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素的HPLC-MS方法。方法采用MRM多反应监测负离子模式,Welch Ultimate XB-C18(2.1 mm×50 mm,5μm)色谱柱,0.1%甲酸水-乙腈梯度洗脱,流速为0.60 mL/min,柱温30℃。结果酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素在5~1000 ng/mL的浓度范围内,线性关系良好;平均回收率为95.83%~100.02%,RSD值在3.0%~7.8%之间;10批百合枣仁袋泡茶的酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B、斯皮诺素含量分别为(102.92±2.60)μg/g、(49.81±1.12)μg/g和(205.28±5.95)μg/g,其RSD值分别为3.86%、2.25%和2.90%。结论该法专属性强、快速灵敏、操作简单快捷,可用于百合枣仁袋泡茶中酸枣仁皂苷A、B和斯皮诺素含量的测定。     

PLC-ELSD测定参芪扶正注射液中黄芪甲苷含量

目的：建立测定参芪扶正注射液中黄芪甲苷含量的HPLC—ELSD法。方法：采用RP—HPLC法，Discovery C18柱（250mm&;#215;4．6mm，5μm），以乙腈-水（36：64）为流动相，流速0．8mL&;#183;min^-1。ELSD参数：漂移管温度为100℃，N2流速为2．7L&;#183;min^-1。结果：在选择的色谱条件下黄芪甲苷与其他组分分离良好，进样量形在1．3-13μg范围内，log A与log W呈良好的线性关系（r=0．999），平均回收率为96．77％，RSD为3．52％。结论：HPLC—ELSD法可用于参芪扶正注射液中黄芪甲苷含量测定。     

酸枣仁及伪品滇枣仁的质量分析

目的:建立酸枣仁的多成分HPLC含量测定及HPLC指纹图谱分析方法,为鉴定酸枣仁的伪品滇枣仁提供可靠的科学方法。方法:采用Agilent TC-C18BDS(250 mm×4.6 mm,5μm)色谱柱;流动相为乙腈-水进行梯度洗脱;ELSD漂移管温度:110.5℃,气体流速:3.1 mL/min;流速:1.0 mL/min;柱温:30℃;进样量:20μL。结果:利用所建立的HPLC色谱分析方法,通过对27批商品酸枣仁中斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和白桦脂酸4种活性成分的含量分析,并结合指纹图谱分析可以得出:正品酸枣仁与伪品滇枣仁在有效成分含量及指纹图谱方面具有明显的鉴别特征,易于鉴别。结论:本法专属性强、重现性好,可用于酸枣仁的质量控制及伪品滇枣仁的鉴别。     

酸枣仁饮片汤剂质量评价研究

目的建立酸枣仁饮片汤剂质量评价方法。方法收集10批酸枣仁饮片,制备成饮片汤剂。以出膏率和指标成分含量为指标,优化提取工艺。采用HPLC-UV/ELSD技术,建立多维度酸枣仁饮片汤剂指纹图谱。以相似度及相对保留时间、相对峰面积RSD综合评价10批酸枣仁饮片汤剂的质量。建立LC-MS/MS同时测定乌药碱、木兰花碱、维采宁、斯皮诺素、当药黄素、山柰酚-3-O-芸香糖苷、6'-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A和B 9种指标成分含量的方法,并应用于酸枣仁饮片汤剂的质量评价。结果 10批酸枣仁饮片汤剂的平均出膏率为20.77%。在HPLC-UV 227、335 nm和HPLC-ELSD指纹图谱中分别标定了3、4、2个共有峰,不同检测波长下指纹图谱的相似度为0.942～0.988;相对保留时间和相对峰面积RSD均小于3%。9种指标成分在相应的浓度范围内线性关系良好,相关系数r均0.999 0;平均加样回收率为87.40%～110.42%,RSD均4.12%。10批酸枣仁饮片汤剂中9种指标性成分的质量分数分别为乌药碱0.25～0.27 mg/g、木兰花碱3.2～3.6mg/g、维采宁0.077～0.084 mg/g、斯皮诺素0.82～0.89 mg/g、当药黄素0.007 6～0.008 5 mg/g、山柰酚-3-O-芸香糖苷0.057～0.060 mg/g、6'-阿魏酰斯皮诺素0.32～0.35 mg/g、酸枣仁皂苷A 0.83～0.91 mg/g、酸枣仁皂苷B 0.095～0.110 mg/g。结论建立了稳定、可靠的酸枣仁饮片汤剂质量评价方法,为后续药动学和药效学实验提供稳定的物质基础,同时为含酸枣仁的成方制剂质量控制提供依据。     

HPLC法测定酸枣仁分散片中斯皮诺素含量

目的：建立测定酸枣仁分散片中斯皮诺素含量方法。方法：采用HPLC法,Venusil XBP-C18色谱柱（4.6mm×250mm,5μm）;以乙腈（A）-水（0.1%乙酸）（B）为流动相梯度洗脱;流速1.0mL·min^-1,柱温为25℃,检测波长为335nm。结果：斯皮诺素在3.36～32.36μg·g^-1（r=0.9992）范围内关系良好,平均加样回收率为99.23%（n=6）;RSD为1.51%。结论：该方法快速简便,精密度好,灵敏度高,可为酸枣仁分散片的质量评价提供参考。     

高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定加减玉女煎颗粒剂中菝葜皂苷元含量

目的采用高效液相色谱-蒸发光散射检测法（HPLC—ELSD）测定加减玉女煎颗粒剂中菝葜皂苷元含量。方法采用HPLC．ELSD法,色谱柱：ZORBAX Eclipse XDB．C18柱（150mm×4．6mm,5μm）;流动相：甲醇-水（95：5）;柱温：30℃;流速：1ml／min。结果菝葜皂苷元含量在1．08～5．4μg范围内呈良好的线性关系,相关系数r=0．9993,其性质稳定,重复性好,且阴性成分无干扰。结论菝葜皂苷元作为加减玉女煎颗粒剂的质控成分具有一定的可行性。     

多指标综合评价结合层次分析法优化酸枣仁炒制工艺

目的采用正交设计综合加权评分结合层次分析法优化酸枣仁的炒制工艺。方法采用单因素实验优化炒制时间和炒制温度,然后以酸枣仁炒制工艺中的关键因素炒制时间和炒制温度为因素,以斯皮诺素、6-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、白桦脂酸含有量进行综合加权评分为评价指标,结合层次分析法,优化酸枣仁的炒制工艺。结果最佳炒制工艺为炒制温度130～140℃,炒制时间60 s。同时发现10批不同产地酸枣仁炒制后,斯皮诺素、6-阿魏酰斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、白桦脂酸含有量均有所增加。结论该方法稳定可行,可用于炒制酸枣仁。     

HPLC-ELSD法测定三七中三七素的含量

目的测定五加科植物三七中水溶性成分三七素的含量。方法选用产自云南的三七药材采用HPLC-ELSD法测定三七素含量，并比较使用纯净水、50％Ep醇和70％甲醇超声提取三七素的含量。结果以50％甲醇为溶剂提取三七素含量最高。三七素单体能够很好的被分离出来，用HPLC—ELSD法测定出云南三七中三七素的平均含量为0．58％。结论HPLC—ELSD法专属性强，精密度和稳定性良好，可精确测定三七中三七素的含量。     

HPLC—ELSD法测定三七中三七素的含量

目的测定五加科植物三七中水溶性成分三七素的含量。方法选用产自云南的三七药材采用HPLC-ELSD法测定三七素含量，并比较使用纯净水、50％Ep醇和70％甲醇超声提取三七素的含量。结果以50％甲醇为溶剂提取三七素含量最高。三七素单体能够很好的被分离出来，用HPLC—ELSD法测定出云南三七中三七素的平均含量为0．58％。结论HPLC—ELSD法专属性强，精密度和稳定性良好，可精确测定三七中三七素的含量。     

UPLC 同时测定酸枣仁中4 种活性成分的含量

目的:建立UPLC同时测定酸枣仁中斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和白桦脂酸含量。方法:采用ACQUITY UPLC,HSS T3色谱柱(2.1 mm×100 mm,1.8μm),流动相为乙腈-0.03%磷酸水溶液,进行梯度洗脱,流速0.5 mL·min-1,波长204 nm,进行检测。结果:斯皮诺素、酸枣仁皂苷A、酸枣仁皂苷B和白桦脂酸的质量浓度与峰面积分别在29.70~594.0μg·mL-1,10.68~213.6μg·mL-1,6.175~123.5μg·mL-1,22.00~440.0μg·mL-1范围内呈良好的线性关系。平均加样回收率均在98.3%~99.4%之间,RSD均小于1.4%。结论:该方法快速、准确、简便,为全面控制酸枣仁质量提供依据。