脾虚内环境对诱导型肝癌小鼠胃组织中oatp2a1、oatp2b1、oatp4a1、oatp1b2表达的影响

目的:通过研究脾虚内环境下肝癌小鼠胃组织中有机阴离子转运家族(oatp2a1、oatp2b1、oatp4a1、oatp1b2)mRNA和蛋白的表达情况,探讨脾虚因素对肝癌的影响及其机制。方法:45只小鼠随机分成正常对照组、肝癌组和脾虚肝癌组,建立脾虚药物诱导肝癌小鼠模型,采用RT-qPCR和Western Blot的方法检测小鼠胃组织中oatp2a1、oatp4a1、oatp2b1、oatp1b2和肝癌组织中AFP的表达。结果:各组造模后小鼠胃组织Oatp家族的表达发生了变化,与肝癌组小鼠比较,脾虚肝癌组小鼠胃组织中的Oatp家族mRNA和蛋白表达明显降低(P0.05)。脾虚肝癌组小鼠癌组织的AFP表达较肝癌组小鼠癌组织明显升高(P0.05)。结论:脾虚因素能促进小鼠肝癌的发生和发展,其机制可能与脾虚内环境下胃组织中Oatp家族的异常表达有关,进一步提示脾虚湿浊转运障碍影响了肝癌的发生发展。     

脾虚大鼠有机阴离子转运肽Oatp2a1基因表达及意义探讨

目的:通过观察脾虚状下大鼠oatp2a1基因表达来探讨Oatp2a1在湿浊转运中的作用。方法:32只大鼠随机分为4组,分别为正常组(6只)、正常+AA大鼠模型组(6只)、脾虚大鼠模型组(10只)、脾虚+AA大鼠模型组(10只)。采用皮下注射利血平的方法造脾虚大鼠模型,造模成功后给予相应组别大鼠马兜铃酸灌胃3天,最后采用实时荧光定量PCR方法检测各组大鼠肺、肝、肾、胃、小肠、大肠等组织中Oatp2a1的基因表达情况。结果:Oatp2a1在上述6种脏器中都有不同程度的表达。肝组织中,脾虚组大鼠模型Oatp2a1的表达量较正常组明显升高(P=0.035,P<0.05);小肠组织中,脾虚组大鼠模型中Oatp2a1的表达较正常组明显下降(P=0.004,P<0.01)。在给予马兜铃酸刺激下,小肠组织中,正常+AA组大鼠模型Oatp2a1的表达较正常组明显下降(P=0.032,P<0.05)。结论:Oatp2a1可能是机体参与湿浊运化的物质基础之一,在脾虚状态下大鼠小肠、肝组织中Oatp2a1的表达变化提示小肠、肝等脏器在脾虚状态下的湿浊转运中可能发挥重要作用,脾主运化湿浊的功能,可能不仅包括胃肠道的功能在内,而且也可能包括一部分肝脏的功能,值得进一步研究。     

基于AA-I代谢中oatp2b1动态表达探讨脾虚证湿浊转运的机制

目的:通过观察脾虚大鼠马兜铃酸(Aristolochic acid-I,AA-I)的代谢与肺、肝、脾、胃、肾、小肠、大肠7种组织中有机阴离子转运肽oatp2b1基因及蛋白表达的关系探讨中医湿浊转运的内涵。方法:48只SD大鼠随机分为空白组、脾虚组、空白+AA-I组、脾虚+AA-I组。脾虚组及空白组分别做AAI药代动力学检测,并分别取肺、肝、脾、胃、肾、小肠、大肠组织;空白+AA-I组及脾虚+AA-I组予AA-I灌胃后5、60分钟两个时间点取上述组织,采用RT-PCR、Western blot及免疫组化的方法检测各组织中oatp2b1的基因及蛋白表达情况。结果:空白组与脾虚组AA-I血药浓度出现明显差异(P0.05)。oatp2b1 mRNA表达:脾虚组中脾组织表达量较空白组降低(P0.05);空白+AA-I组5分钟时与空白组比较各组织表达无差异,60分钟小肠组织表达量较空白组降低(P0.05);脾虚+AA-I组5分钟时胃、肝组织表达量较脾虚组降低(P0.05),60分钟时肾、大肠组织表达量较脾虚组升高(P0.05)。oatp2b1蛋白表达变化趋势同基因表达改变基本一致;oatp2b1蛋白分布:肝组织中肝血窦周边的肝细胞及巨噬细胞的细胞膜染色阳性,胃组织中消化腺的胞质染色阳性,肾组织中肾小管包膜及胞浆染色阳性,小肠组织消化腺中胞质及包膜染色阳性,大肠组织胞膜染色阳性。结论:AA-I代谢与肝、胃、肾、小肠、大肠组织oatp2b1表达相关,提示湿浊代谢以脾为枢纽,肝、胃、肾、大肠、小肠共同参与并发挥相应协调作用。     

基于AA-Ⅰ代谢中oatp2b1动态表达探讨脾虚证湿浊转运的机制

目的：通过观察脾虚大鼠马兜铃酸（Aristolochic acid-Ⅰ,AA-Ⅰ）的代谢与肺、肝、脾、胃、肾、小肠、大肠7种组织中有机阴离子转运肽oatp2b1基因及蛋白表达的关系探讨中医温浊转运的内涵.方法：48只SD大鼠随机分为空白组、脾虚组、空白＋AA-Ⅰ组、脾虚＋AA-Ⅰ组.脾虚组及空白组分别做AA-Ⅰ药代动力学检测,并分别取肺、肝、脾、胃、肾、小肠、大肠组织;空白＋AA-Ⅰ组及脾虚＋AA-Ⅰ组予AA-Ⅰ灌胃后5、60分钟两个时间点取上述组织,采用RT-PCR、Western blot及免疫组化的方法检测各组织中oatp2b1的基因及蛋白表达情况.结果：空白组与脾虚组AA-Ⅰ血药浓度出现明显差异（P＜0.05）.oatp2b1 mRNA表达：脾虚组中脾组织表达量较空白组降低（P＜0.05）;空白＋AA-Ⅰ组5分钟时与空白组比较各组织表达无差异,60分钟小肠组织表达量较空白组降低（P＜0.05）;脾虚＋AA-Ⅰ组5分钟时胃、肝组织表达量较脾虚组降低（P＜0.05）,60分钟时肾、大肠组织表达量较脾虚组升高（P＜0.05）.oatp2b1蛋白表达变化趋势同基因表达改变基本一致;oatp2b1蛋白分布：肝组织中肝血窦周边的肝细胞及巨噬细胞的细胞膜染色阳性,胃组织中消化腺的胞质染色阳性,肾组织中肾小管包膜及胞浆染色阳性,小肠组织消化腺中胞质及包膜染色阳性,大肠组织胞膜染色阳性.结论：AA-Ⅰ代谢与肝、胃、肾、小肠、大肠组织oatp2b1表达相关,提示湿浊代谢以脾为枢纽,肝、胃、肾、大肠、小肠共同参与并发挥相应协调作用.     

高脂及劳倦伤脾大鼠有机阴离子转运肽oatp2b1 mRNA及蛋白表达研究

目的观察脾虚状态下大鼠有机阴离子转运肽oatp2b1基因和蛋白表达,探讨oatp2b1在湿浊转运中的作用。方法24只大鼠随机分为正常组、高脂组、劳倦组,每组8只。造模成功后,每只大鼠取肺、脾、肝、肾、胃、小肠、大肠组织各1块。劳倦组单号日期采用特制束缚筒,每次3 h,双号日期令大鼠在冷水（10±1） ℃中游泳7 min,连续12周。模型组、正常组常规标准大鼠颗粒饲料喂养12周,高脂组大鼠以高脂饲料喂养12周,均自由饮食饮水。采用RT-PCR、Western Blot法检测肺、脾、肝、肾、胃、小肠、大肠组织oatp2b1 mRNA、蛋白表达。结果高脂组肾、肝oatp2b1 mRNA含量高于正常组及劳倦组（P<0.01, P<0.05）;正常组oatp2b1 mRNA表达量由高至低为肝>肺>脾>大肠>小肠>肾>胃;劳倦组oatp2b1 mRNA表达量由高至低为肝>肺>大肠>脾>肾>胃>小肠;高脂组oatp2b1 mRNA表达量由高至低为肝>肺>脾>小肠>肾>大肠>胃。肺组织oatp2b1蛋白表达量由高至低为劳倦组>正常组>高脂组（P>0.05）。脾组织oatp2b1蛋白表达由高至低为高脂组>正常组>劳倦组（P>0.05）;肾组织oatp2b1蛋白表达量由高至低为正常组>劳倦组>高脂组（P>0.05）;肝组织oatp2b1蛋白表达量由高至低为正常组>高脂组>劳倦组（P>0.05）;其中胃、大肠、小肠中oatp2b1蛋白表达量极低。正常组oatp2b1蛋白表达由高至低为肺>脾>肝,肾>胃、大肠、小肠;劳倦组oatp2b1蛋白表达由高至低为：肺>脾>肾>肝>胃、大肠、小肠;高脂组oatp2b1蛋白表达由高至低为：脾>肺>肾>肝>胃,大肠,小肠,差异无统计学意义（P>0.05）。结论肝、肾等脏器在脾失健运状态下的湿浊转运中可能发挥重要作用,oatp2b1是机体参与湿浊运化的物质基础之一。脾主运化湿浊的功能,可能不仅包括胃肠道的功能在内,而且也可能包括一部分肝脏及肾脏的功能。     

高脂及劳倦伤脾大鼠有机阴离子转运肽oatp2blmRNA及蛋白表达研究

目的观察脾虚状态下大鼠有机阴离子转运肽oatp2bl基因和蛋白表达,探讨oatp2bl在湿浊转运中的作用。方法24只大鼠随机分为正常组、高脂组、劳倦组,每组8只。造模成功后,每只大鼠取肺、脾、肝、肾、胃、小肠、大肠组织各1块。劳倦组单号日期采用特制束缚筒,每次3h,双号日期令大鼠在冷水（10±1）℃中游泳7min,连续12周。模型组、正常组常规标准大鼠颗粒饲料喂养12周,高脂组大鼠以高脂饲料喂养12周,均自由饮食饮水。采用RT．PCR、WesternBlot法检测肺、脾、肝、肾、胃、小肠、大肠组织oatp2b1mRNA、蛋白表达。结果高脂组肾、肝oatp2blmRNA含量高于正常组及劳倦组（P〈0．01,P〈0．05）;正常组oatp2blmRNA表达量由高至低为肝〉肺〉脾〉大肠〉小肠〉肾〉胃;劳倦组oatp2blmR-NA表达量由高至低为肝〉肺〉大肠〉脾〉肾〉胃〉小肠;高脂组oatp2blmRNA表达量由高至低为肝〉肺〉脾〉小肠〉肾〉大肠〉胃。肺组织oatp2bl蛋白表达量由高至低为劳倦组〉正常组〉高脂组（P〉0．05）。脾组织oatp2bl蛋白表达由高至低为高脂组〉正常组〉劳倦组（P〉0．05）;肾组织oatp2bl蛋白表达量由高至低为正常组〉劳倦组〉高脂组（P〉0．05）;肝组织oatp2bl蛋白表达量由高至低为正常组〉高脂组〉劳倦组（P〉0．05）;其中胃、大肠、小肠中oatp2bl蛋白表达量极低。正常组oatp2bl蛋白表达由高至低为肺〉脾〉肝,肾〉胃、大肠、小肠;劳倦组oatp2bl蛋白表达由高至低为：肺〉脾〉肾〉肝〉胃、大肠、小肠;高脂组oatp2b1蛋白表达由高至低为：脾〉肺〉肾〉肝〉胃,大肠,小肠,差异无统计学意义（P〉0．05）。结论肝、肾等脏器在脾失健运状态下的湿浊转运中可能发挥重要作用,oatp2bl是机体参与湿浊运化的物质基础之一。脾主运化湿浊的功能,可能不仅包括胃肠道的功能在内,而且也可能包括一部分肝脏及肾脏的功能。     

从脾虚大鼠AA-I的排泄与脏腑oatp2a1、oatp2b1的表达探讨脾肾关系

目的通过观察脾虚大鼠马兜铃酸(aristolochic acid,AA)代谢与肾、大肠、小肠组织中有机阴离子转运肽(organic anion transporting polypeptide,oatp)2a1、oatp2b1mRNA及蛋白表达的关系,探讨中医学脾肾之间的相互关系。方法 46只SD大鼠随机分为空白组(12只)、脾虚组(22只)、AA-I组(6只)、脾虚AA-I组(6只)。脾虚组及脾虚AA-I组采用利血平5 mg/(kg·d)皮下注射连续16天造模。空白组及脾虚组选取6只大鼠行颈动脉插管,并予AA-I灌胃后5、15、30、45、60 min颈动脉取血行AA-I药代动力学检测;脾虚组选10只大鼠行肾、大肠、小肠AA-I组织浓度测定;脾虚组及空白组各取6只分别予生理盐水灌胃,AA-I组、脾虚AA-I组予AA-I灌胃后60 min时间点取肾、大肠、小肠3种组织,采用RT-PCR及Western blot方法检测各组织中oatp2a1、oatp2b1m RNA及蛋白表达。结果与空白组比较,脾虚组大鼠灌胃后15、30、45、60 min时体内AA-I血浆浓度值明显升高,差异有统计学意义(P0.05)。脾虚组60 min时AA-I血浆浓度下降,肾及大肠组织浓度升高,小肠中组织浓度明显下降。空白组与脾虚组中上述3种组织oatp2a1、oatp2b1mRNA表达无差异;与空白组比较,AAI组小肠oatp2a1、oatp2b1mRNA表达降低,大肠oatp2a1mRNA表达降低(P0.05,P0.01);与脾虚组比较,脾虚AA-I组肾组织中oatp2a1、oatp2b1mRNA表达升高(P0.05),大肠组织oatp2b1m RNA表达升高(P0.05)。结论脾虚脾失运化状态下,AA-I代谢差异可能与肾、大肠、小肠组织oatp2a1、oatp2b1表达改变相关,并提示肾、大肠在脾虚状态下物质代谢中发挥重要协调作用,验证了中医脾肾相关理论。     

关于“肝之癌毒”理论的简述

肝癌的发生与"癌毒"关系密切,"癌毒"是特指可衍生恶性肿瘤的特殊毒邪,认为"肝之癌毒"为"正虚毒结",源于"肝郁脾虚",导致整体气血虚弱,局部瘀、滞、痰、湿,日久合而化热,熏蒸肝胆,血败肉腐,终成"肝之癌毒"。虽病在肝,实责之脾,肝癌以脾虚失健为起点,瘀血阻络为关键,癌毒胶结为症结,针对瘀、滞、痰、湿,合而化热、血败肉腐,而成"肝之癌毒",提出健脾利湿、舒肝解郁、行气化瘀、除痰清热治则,以期从中医的角度对肝癌的形成提出新的理论,为中医药治疗肝癌提供新的思路。     

从肝脾肾相关探讨原发性肝癌之癌毒传变

肝脾肾三脏紧密相关,在癌毒传变过程中起到关键作用。肝癌早期,癌毒形成,毒瘀互结,肝郁脾虚;肝癌中期,瘀毒胶结,致肝脾肾失调;肝癌晚期,癌毒弥漫,脾气败坏,肝肾亏虚,五脏受累,脏腑功能紊乱,预后极差。从肝脾肾相关探讨原发性肝癌发生发展中癌毒传变理论,并结合中医药对原发性肝癌的防治经验,立足于癌毒致虚的核心病机,探寻阻断与延缓肝癌癌毒传变的方法。     

肝癌辨证分型与基质降解的相关性研究

目的:探讨肝癌辨证分型与肝癌细胞基质降解的关系.方法:收集106例肝癌切除术后患者,分为肝郁脾虚型、气血瘀滞型、湿热蕴结型、肝肾阴虚型,采用免疫组化法检测癌灶、癌旁、远癌正常肝组织在不同辨证分型肝癌中基质金属蛋白酶(MMP2)、基质金属蛋白酶抑制剂(TMP2)及MMP2/TMP2值的差异;同时收集临床病理参数,分析基质降解与肝癌辨证分型、转移相关临床病理参数之间的关系.结果:各种辨证分型中癌灶内MMP2、TMP2表达与癌旁、远癌正常组织中有明显差别(P<0.05).癌灶内不同证型MMP2、TMP2、MMP2/TMP2表达:肝郁脾虚型和肝肾阴虚型MMP2蛋白表达高于气血瘀滞和湿热蕴结型,其中湿热蕴结型和肝肾阴虚型之间差异有显著性意义(P<0.05);TMP2在各种辨证分型中变化不大;肝郁脾虚型和肝肾阴虚型MMP2/TMP2明显高于气血瘀滞和湿热蕴结型(P<0.05),但肝郁脾虚型和肝肾阴虚型之间、气血瘀滞和湿热蕴结型之间差异无显著性意义.湿热蕴结型和肝肾阴虚型中癌栓发生率明显高于其它2型(P<0.05).肝功能随着辨证分型变化有明显演进趋势.结论:原发性肝癌的辨证分型与基质降解密切相关,肝郁脾虚型主要以MMP2升高,湿热蕴结型、气血瘀滞型MMP2、TMP2均升高,肝肾阴虚型则主要表现为MMP2/TMP2值升高;基质降解与门静脉癌栓有关,但与肝功能无关.     

健脾解毒方对脾虚肝癌大鼠生存的影响及与TCR、ERK1/2信号通路的关系

目的探讨健脾解毒方对脾虚肝癌大鼠生存的影响及与TCR、ERK1/2、p-ERK1/2的关系。方法 105只Wistar大鼠脾虚肝癌模型组,进行造模和干预。随机分为空白对照组(A组),肝癌模型组(B组),脾虚对照组(C组),脾虚肝癌模型组(D组),健脾解毒方低浓度E组、高浓度F组及胸腺五肽组(G组)。实验中记录动物的体质量、生存时间、肝癌大鼠濒死状态时恶液质积分并采集标本。Western blot方法检测大鼠肝组织、肝癌组织、T淋巴细胞中TCR蛋白表达,以及T淋巴细胞中ERK1/2、p-ERK1/2蛋白的表达。结果健脾解毒方高浓度组和胸腺五肽组大鼠终末期体质量、累积生存率高于脾虚肝癌模型组及肝癌模型组(P 0. 05),终末期恶液质积分则更低(P 0. 05)。健脾解毒方高浓度组大鼠肝组织、癌组织中TCR蛋白表达量,外周T淋巴细胞中TCR蛋白、ERK1/2蛋白、p-ERK1/2蛋白表达量均较脾虚肝癌模型组明显增加(P 0. 05)。结论高浓度健脾解毒方能延缓荷瘤鼠恶液质的发生和进展,明显延长荷瘤鼠生存时间,其作用可能与健脾解毒方上调TCR、ERK1/2及p-ERK1/2有关。     

胰高血糖素样肽-2对小鼠小肠黏膜作用及其受体在体内的分布

目的观察胰高血糖素样肽-2(GLP-2)对小鼠小肠黏膜的作用效果;检测胰高血糖素样肽-2受体(GLP-2R)在小鼠不同脏器的分布和表达。方法选用5~6周龄的雄性健康BALB/C小鼠,体质量17~20 g。随机分为3组,腹腔注射组9只,脑内注射组9只,对照组8只,分别给予相应处理,3 d后处死小鼠,做组织切片进行HE染色,观察小鼠小肠黏膜的组织学变化,用免疫组化方法检测GLP-2R在不同脏器的表达和分布。结果①小鼠经腹腔注射GLP-2后,小肠不同肠段黏膜的绒毛高度较对照组明显增加(P均0.05);脑内注射组的肠黏膜无明显形态学变化。②GLP-2R在小鼠胃、空肠、结肠、气管等部位均有表达,而食管、肝、肺、肾与膀胱显阴性。③腹腔注射组的GLP-2R表达较对照组显著下调(P0.05),而脑内注射组的GLP-2R表达无变化。结论 GLP-2能刺激小肠黏膜上皮增厚,增加小肠不同肠段黏膜的绒毛高度;小鼠的胃、空肠、结肠、气管均有GLP-2R的表达,食管、肝、肺、肾与膀胱无GLP-2R的表达。     

高脂及劳倦伤脾大鼠有机阴离子转运肽oatp4a1 mRNA及蛋白表达

目的 观察有机阴离子转运肽oatp4a1在脾虚模型大鼠各组织中的表达。探讨其在水液湿浊转运中的作用机制。方法 选取6只SPF级大鼠制备劳倦伤脾模型,另选取12只大鼠随机分为空白对照组(空白组)、高脂饮食组(高脂组),每组6只。劳倦伤脾模型组(劳倦组)单号日期采用特制束缚筒,每次3 h,双号日期令大鼠在冷水［(10±1)℃］中游泳7 min,连续2周。劳倦组、空白组常规标准大鼠颗粒饲料喂养12周,高脂组大鼠以高脂饲料喂养12周,均自由饮食饮水。采用RT-PCR和Western blot法检测肺、脾、肝、肾、胃、小肠、大肠组织oatp4a1 mRNA、蛋白表达。结果 劳倦组大鼠扎堆懒动,烂便,毛色粗糙, 饮食饮水量减少,体重下降(P<0.05),与临床脾虚证表现基本相符, 提示劳倦伤脾动物模型造模全部成功。高脂组大鼠第9周之后开始出现食欲不振,精神萎靡,嗜卧懒动,毛发疏松粗糙,晦暗无光泽等脾虚症状,形成痰湿证大鼠。与空白组比较,高脂组第9周平均体重升高(P<0.05)。oatp4a1 mRNA在肺、脾、肝、肾、胃、小肠、大肠7种脏器中都有表达;各组各组织oatp4a1 mRNA表达量比较,差异均无统计学意义(P>0.05);高脂组大鼠肺、肾oatp4a1 mRNA表达量均高于肝(P<0.05)。结论 oatp4a1可能是高脂伤脾大鼠机体参与湿浊转运的物质基础之一,其中肺、肾、大肠在湿浊转运中可能起着重要作用。     

健脾解毒中药延长肝癌裸鼠带瘤生存时间及对PTEN/FAK的影响

目的探讨健脾解毒方提高裸鼠人肝癌模型的"带瘤生存"作用和对PTEN、FAK的影响。方法 40只裸鼠随机分为4组,每组10只,其中3组制作裸鼠人肝癌模型,分别给予健脾解毒方、生理盐水、替加氟(FT-207)灌胃,每天1次,持续71 d;第4组不造模作空白对照,每天给予生理盐水。实验过程中记录裸鼠生存时间和体质量,免疫组化SP法检测各组肝组织和癌组织PTEN、黏附斑激酶(FAK)的表达,IPP6.0分析平均光密度。结果生存分析表明健脾解毒方组裸鼠累积生存率显著高于其余各组(P<0.05或0.01);健脾解毒方组体质量减轻率显著低于其余各组(P<0.05或0.01);累积生存率和体质量减轻率FT-207组最差(P均<0.05);各组肿瘤体积比较无显著性差异(P均>0.05);PTEN在肝组织中的表达水平(平均光密度)显著高于癌组织(P<0.01);肝癌模型肝组织中PTEN表达水平明显低于空白组(P<0.05或0.01);FT-207组肝组织和癌组织中PTEN表达水平明显低于健脾解毒方组和生理盐水组(P<0.05或0.01);FAK在各组肝组织中的表达水平显著高于癌组织(P<0.01);健脾解毒方组肝组织中FAK表达水平显著高于其余各组(P均<0.01),癌组织中FAK表达水平显著低于其余各组(P均<0.01)。结论健脾解毒方能延长荷瘤鼠的带瘤生存时间,延缓体质量下降,其作用可能与健脾解毒方能良性调节PTEN、FAK的表达有关。     

原发性肝癌外周血免疫抑制细胞表达与中医辨证关系

目的：探讨肝癌患者外周血免疫抑制细胞表达与中医辨证关系。方法：收集237例HBV相关原发性肝癌患者的临床资料,分析肝癌不同证型与MDSC 表达差异。留取外周静脉血检测MDSC（CD33/CDl4/HLA—DR-/low/CDllb）在单个核细胞中的表达,辅助性T细胞（Th1,Th2）以及白细胞介素（IL-12,IL-4）检测。结果：气滞血瘀证MDSC（24.21%）明显高于肝郁脾虚证（5.54%）差异具有显著性（Χ2 = 11.544,P < 0.05）。肝癌进展期湿瘀互结证MDSC（21.03%）表达高于肝肾阴虚证（5.10%）,差异具有显著性（Χ2 = 8.223,P < 0.005）;肝郁脾虚Th2表达高于气滞血瘀组,组间比较具有显著性差异(t = 10.341,P < 0.05)。湿瘀互结Th2表达高于肝肾阴虚组,组间比较具有显著性差异(t = 16.307,P < 0.01);肝郁脾虚组IL-4（76.57 ± 5.01)高于气滞血瘀组（121.70 ±6.22）;组间比较具有显著性差异（t = 21.414,P < 0.05）。肝肾阴虚组IL-4（375.12 ± 5.31）高于湿瘀互结（115.46 ±4.15）组间比较具有显著性差异（t = 12.455,P < 0.05））。结论：MDSC通过调节Th2、IL-4参与肿瘤增殖,侵袭,转移,与中医辨证分型密切相关。     

癌毒清颗粒对肝癌模型小鼠HIF-1α、VEGF、bFGF的影响

目的:研究癌毒清颗粒(AG)对肝癌(HCC)模型小鼠HIF-1α、VEGF、b FGF的影响,探讨AG抗HCC的作用机制。方法:昆明小鼠50只,腋下接种H22肝癌细胞,建立肝癌异位移植瘤模型。于接种24h后,将动物随机分为模型组,AG高、中、低剂量组,氟尿嘧啶组。AG各组给予AG灌胃,氟尿嘧啶组腹腔注射氟尿嘧啶。给药12d后,摘取眼球采血,剥取瘤组织,称取瘤重,瘤组织进行病理组织学检查;ELISA法检测小鼠血清中HIF-1α、VEGF、bFGF的水平。结果:H22肝癌小鼠异位移植瘤模型中,各组体重变化无统计学意义(P0.05)。AG高、中、低剂量组抑瘤率分别为50.91%,35.25%,20.10%,氟尿嘧啶组为43.99%,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05),其中AG高剂量组抑瘤效果最佳。与模型组比较,各组小鼠血清HIF-1α、VEGF、b FGF浓度均下降,差异有统计学意义(P0.05)。病理组织显示,AG三组肝癌细胞大小不等,肝癌细胞密度减少,肝癌细胞排列较分散,间质新生血管分布较少,肿瘤细胞坏死数量较多,细胞核着色欠均匀。结论:癌毒清颗粒能遏制H22肝癌小鼠异位移植瘤的生长,遏制程度和药物的剂量有关。癌毒清颗粒抗癌作用机制之一可能是通过下调缺氧微环境中血管生成促进因子VEGF、HIF-α、bFGF的表达,遏制肝癌移植瘤微血管生成。     

柴胡皂苷D对阿霉素治疗小鼠肝癌的靶向导引作用

目的探讨柴胡皂苷D对阿霉素治疗小鼠肝癌可能的靶向导引作用。方法以小鼠肝癌H₂₂实体瘤模型评价柴胡皂苷D与阿霉素单独或联合对荷瘤小鼠的治疗效果。噻唑蓝(methyl thiazolyl tetrazolium,MTT)检测细胞增殖情况,激光全息系统分析细胞大小,2′,7′-二氯荧光黄双乙酸盐(2′,7′-dichlorodi-hydrofluoresceindiacetate,DCFH-DA)检测细胞活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平,线粒体示踪绿检测细胞线粒体功能,吖啶橙(acridine orange,AO)染色检测细胞自噬情况,Western blotting印迹法检测细胞有机阴离子转运多肽(organic aniontransporting polypeptide 1B1,Oatp1b1)的表达情况。结果0.5~16μg/m L柴胡皂苷D不影响H₂₂细胞增殖,但能增加H₂₂细胞体积,促进细胞摄取阿霉素,增强阿霉素的细胞增殖抑制作用。柴胡皂苷D能降低H₂₂细胞ROS水平,促进细胞线粒体功能和细胞自噬,增加细胞Oatp1b1的表达。柴胡皂苷D在20 mg/kg对小鼠肝癌H₂₂皮下实体瘤生长无影响,增加瘤组织阿霉素摄取,提高阿霉素对肝肿瘤的治疗效果。柴胡皂苷D可改善瘤组织细胞外基质沉积,降低转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)水平和血管通透性。结论柴胡皂苷D对阿霉素治疗小鼠肝癌有靶向导引作用,其机制是促进细胞自噬及线粒体功能,继而促进Oatp1b1表达,减少细胞外基质沉积。     

补精气化瘀毒方对小鼠移植性肝癌HepS的抑制作用及其机理研究

目的:探讨补精气化瘀毒方对小鼠移植性肝癌HepS的抑制作用及其机理.方法:采用小鼠移植性肝癌HepS实验动物模型,设对照组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)组、补精气化瘀毒方高中低3个剂量组,各组连续给药7d,于末次给药24h后处死小鼠,称体重,摘瘤称重,计算抑瘤率,并对小鼠脾指数、胸腺指数、癌细胞bcl-2/bax表达、癌病理进行观察.结果:补精气化瘀毒方在连续7d 120mg/kg、60mg/kg、30mg/kg的剂量下对小鼠移植性肝癌HepS的抑制率可分别达68.38%、58.08%、46.32%;补精气化瘀毒方可提高荷瘤小鼠的脾指数、胸腺指数,可使荷瘤小鼠肝癌组织中bcl-2表达水平降低,bax表达水平升高.结论:补精气化瘀毒方对小鼠移植性肝癌HepS具有显著的抑制作用,其作用机理可能与其调控bcl-2/bax基因表达,诱导癌细胞凋亡有关.     

消癥软肝方对H22肝癌小鼠CyclinD1和p16表达的影响

目的探讨消癥软肝方防治肝癌的作用机制及其对肝癌小鼠免疫器官的保护作用。方法癌株传代法建立H22肝癌小鼠模型,将40只成功造模的肝癌小鼠随机分为模型组、消癥软肝方(中药)组、5-氟尿嘧啶(5-Fu)(西药)组、消癥软肝方联合5-Fu治疗(联合)组,每组10只,采用灌胃给药和/或腹腔注射给药的方式,每天给药1次,连续给药10d。处死小鼠后分别计算抑瘤率、免疫器官指数,免疫组化法检测瘤体细胞周期蛋白D1(CyclinD1)、p16蛋白(p16 Pr)的表达。结果联合组小鼠的抑瘤率高于其他组,差异有统计学意义(P0.05);中药组小鼠的器官指数明显高于其他组,差异有统计学意义(P0.01);与其他各组相比,联合用药组肿瘤组织cyclinD1的表达最少,差异有统计学意义(P0.05),p16的表达最多,差异有统计学意义(P0.01)。结论 (1)消癥软肝方的抗肿瘤作用可能与下调肿瘤组织cyclinD1的表达,上调p16的表达有关。(2)消癥软肝方能够减轻5-Fu化疗引起的小鼠免疫器官的损伤。     

麻杏石甘汤对流感病毒肺部感染模型肺、结肠组织MCP-1蛋白表达水平的影响

目的:从流感病毒肺部感染模型肺、结肠组织单核细胞趋化因子(MCP)-1蛋白表达水平,探讨流行性感冒"肺病及肠"的分子机制与麻杏石甘汤的干预作用。方法:经鼻腔接种建立流感病毒小鼠肺部感染模型。实验设正常组、模型组、麻杏石甘汤组和奥司他韦组。经灌胃给药或生理盐水3,7 d后,常规法检测小鼠体质量、肺指数、肺组织和结肠组织病理变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)和免疫组化法检测小鼠肺、结肠组织MCP-1蛋白表达水平。结果:(1)与正常组比较,模型组肺指数显著升高(P0.01),给药3,7 d的麻杏石甘汤组肺指数显著下降(P0.01)。(2)与正常组比较,模型组肺组织、结肠组织炎症充血严重,给药3,7 d的麻杏石甘汤组肺、结肠组织炎症明显减轻。(3)与正常组比较,模型组肺组织中MCP-1蛋白表达水平显著升高(P0.01),给药3,7 d的麻杏石甘汤组MCP-1蛋白表达水平显著下降(P0.01),Western blot和免疫组化法检测结果趋势一致。(4)与正常组比较,免疫组化法检测结果中的模型组结肠组织中MCP-1蛋白表达水平显著升高(P0.05),给药3,7 d的麻杏石甘汤组MCP-1表达水平没有明显差异;(5)麻杏石甘汤对流感病毒肺部感染模型肺指数抑制作用与其对肺、结肠组织MCP-1的蛋白表达水平的调节作用呈正相关。结论:流感病毒肺部感染模型伴有严重的肠组织病理损伤以及肺、肠组织中MCP-1的蛋白表达水平的上升,麻杏石甘汤可能通过调节MCP-1蛋白表达水平而实现抗流感病毒作用。