青黛对溃疡性结肠炎大鼠结肠组织TGF-β/Smad信号通路相关因子表达的影响

目的观察青黛对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠组织TGF-β/Smad信号通路相关因子表达的影响,探讨其治疗UC的作用机制。方法40只SD大鼠随机分为正常组、模型组、青黛组和美沙拉嗪组。除正常组外,其余3组自由饮用5%葡聚糖硫酸钠溶液7d建立UC大鼠模型,正常组饮用蒸馏水。造模结束后青黛组和美沙拉嗪组分别予相应药物灌肠,连续7 d。采用疾病活动指数和结肠长度评价大鼠结肠组织炎症程度,HE染色观察大鼠结肠组织形态,Western blot检测结肠组织转化生长因子-β(TGF-β)、Smad2、Smad3、p-Smad2/3蛋白表达,RT-PCR检测结肠组织TGF-β、Smad2、Smad3、Snail mRNA表达。结果与正常组比较,模型组大鼠疾病活动指数升高(P<0.01),结肠长度缩短(P<0.01),结肠黏膜上皮破损伴充血水肿,腺体排列紊乱,黏膜及黏膜下层有大量炎性细胞浸润,结肠组织TGF-β和p-Smad2/3蛋白表达降低(P<0.01),TGF-β、Smad3、Snailm RNA表达降低(P<0.05);与模型组比较,青黛组和美沙拉嗪组大鼠疾病活动指数降低(P<0.05,P<0.01),结肠组织损伤明显改善,腺体排列较整齐,炎性细胞浸润明显减少,青黛组大鼠结肠组织TGF-β、Smad2、Smad3、p-Smad2/3蛋白表达升高(P<0.05),TGF-β、Smad3、Snailm RNA表达升高(P<0.05)。结论青黛可有效改善UC大鼠一般状况及结肠组织病理损伤,其缓解UC大鼠炎症反应和促进黏膜修复的作用机制可能与调控TGF-β/Smad信号通路有关。     

益气活血化痰法对酒精性肝纤维化大鼠转化生长因子-β1/Smads信号通路的影响

目的探讨益气活血化痰法对大鼠酒精性肝纤维化的影响及机制。方法将120只SD大鼠随机分成对照组、模型组、秋水仙碱组、小剂量中药组、中剂量中药组、大剂量中药组各20只。除对照组外,其余各组大鼠均用56°酒精灌胃[15ml/(kg.d)-1]致肝纤维化。同时,各小、中、大剂量中药组分别以10g/(kg.d)-1、20g/(kg.d)-1、40g/(kg.d)-1益气活血化痰法中药组方灌胃,秋水仙碱组以秋水仙碱灌胃[2mg/(kg.d)-1],模型组予等量生理盐水灌胃。6个月后处死取肝,采用HE染色考察各组大鼠肝脏的纤维化程度,免疫组化法检测肝组织转化生长因子-β1(TGF-β1)蛋白表达,用RT-PCR法检测各组大鼠肝组织中TGFβ-1和Smads3、Smads4、Smads7的核酸水平表达。结果不同剂量中药组及秋水仙碱组的纤维化分期均与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01);与模型组比较,各中药组及秋水仙碱组的TGFβ-1蛋白表达均显著降低(P<0.01),且大剂量中药组较秋水仙碱组TGFβ-1蛋白显著降低(P<0.01);不同剂量与治疗后TGF-β1、Smad3、Smad4、Smad7各核酸分子的表达水平均有相关性。结论益气活血化痰法能下调酒精性肝纤维化大鼠TGFβ-1、Smad3、Smad4 mRNA表达水平并上调smad7 mRNA表达水平,干预了Smads信号通路的表达。     

芍药苷通过抑制TGF-β1/Smad3通路对急性心肌梗死后心室重塑的作用研究

目的 基于抑制转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3通路探讨芍药苷对急性心肌梗死后心室重塑的影响.方法 将40只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、曲美他嗪组和芍药苷高、低剂量组,每组8只.除假手术组外,其余各组通过结扎大鼠冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死大鼠模型.曲美他嗪组大鼠灌胃10 mg/(kg·d)曲美他...     

宣肺化痰活血法对哮喘大鼠气道重塑及TGF-β_1/Smad信号通路的影响

目的:观察宣肺化痰活血法对哮喘大鼠气道重塑和TGF-β1/Smad信号通路的影响。方法:将72只SPF级SD大鼠随机分为A组(空白组)、B组(模型组)、C组(中药高剂量组)、D组(中药中剂量组)、E组(中药低剂量组)、F组(地塞米松组),每组12只。以卵清蛋白(OVA)致敏和激发建立哮喘气道重塑大鼠模型,A组不造模。除B组外,C、D、E组每次激发前半小时分别给予高、中、低剂量宣肺活血化痰中药灌胃,F组给予地塞米松灌胃,连续8周。大鼠肺组织HE染色评定肺组织病理形态学改变,免疫组化法检测肺组织TGF-β1、Smad3、Smad7蛋白表达,荧光定量PCR检测TGF-β1、Smad3、Smad7mRNA相对表达。结果:与B组相比,C、D组TGF-β1、Smad3的蛋白和mRNA的表达都明显减少(P<0.05),C、D组Smad7的蛋白和mRNA的表达明显增加(P<0.05)。结论:宣肺化痰活血法可改善哮喘大鼠气道重塑,其机制可能与通过调节TGF-β1/Smad信号通路有关。     

TGF-β1/Smad信号通路在腺嘌呤导致的肾纤维化大鼠肾脏组织中的作用与意义

目的:探讨肾组织中TGF-β1/Smad信号通路在腺嘌呤导致的肾纤维化模型损伤过程中的变化与意义。方法:将23只SD大鼠随机分为正常组10只和模型组13只,采用腺嘌呤制备肾纤维化大鼠模型;采用RT-PCR检测两组大鼠TGF-β1mRNA的表达,ELISA法检测Smad2、Smad3、Smad7蛋白表达,免疫组化法检测a-SMA蛋白表达。结果:模型组较正常组TGF-β1mRNA表达增强,Smad2、Smad3水平升高,Smad7水平下降,差异均具有统计学意义(P0.01)。结论:腺嘌呤导致的大鼠肾纤维化与TGF-β1/Smad信号通路密切相关,通过调节TGF-β1/Smad信号通路,对抑制肾纤维化的发生发展有重大意义。     

软肝颗粒对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1/Smads信号通路的影响

目的：探讨软肝颗粒对肝纤维化大鼠转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smads 信号通路的影响。方法105只Wistar大鼠,按随机数字表法随机分为正常对照组,模型组,秋水仙碱组,大黄?虫丸组,软肝颗粒高、中、低剂量组,每组15只。采用四氯化碳和高胆固醇饮食诱导肝纤维化。模型制作后,软肝颗粒低、中、高剂量组分别灌胃软肝颗粒混悬液3.600、7.200、14.400 g/(kg?d);大黄?虫丸组灌胃大黄?虫丸混悬液0.180 g/(kg?d);秋水仙碱组灌胃秋水仙碱混悬液0.108 mg/(kg?d);正常对照组和模型组以等体积蒸馏水灌胃。均连续灌胃8周。采用免疫组化染色法检测肝组织TGF-β1、Smad3、Smad7表达,运用 RT-PCR 技术检测肝组织 TGF-β1、Smad3、Smad7 mRNA 表达。结果与正常对照组比较,模型组TGF-β1[(2.59±0.99)比(0.43±0.21)]、Smad3[(2.56±0.67)比(0.41±0.18)]蛋白及 TGF-β1 mRNA[(2.25±0.21)比(0.71±0.09)]、Smad3 mRNA[(2.34±0.03)比(0.78±0.12)]表达显著升高（P均＜0.01）。与模型组比较,软肝颗粒高剂量组TGF-β1[(1.12±0.27)比(2.59±0.99)]、Smad3蛋白[(1.05±0.34)比(2.56±0.67)]表达下降,Smad7蛋白表达[(2.33±0.62)比(0.36±0.18)]升高（P＜0.01）,TGF-β1 mRNA[(1.09±0.11)比(2.25±0.21)]、Smad3 mRNA[(1.10±0.02)比(2.34±0.03)]表达下降,Smad7 mRNA[(1.18±0.13)比(0.38±0.11)]表达升高（P＜0.05）。结论软肝颗粒可通过下调TGF-β1、Smad3,上调Smad7调节肝纤维化大鼠TGF-β1/Smads信号通路。     

基于TGF-β_1/Smads信号通路研究胆通颗粒对胆汁淤积性肝纤维化的影响

目的基于TGF-β_1/Smads信号通路探讨胆通颗粒对胆汁淤积性早期肝纤维化大鼠的抗肝纤维化作用。方法将80只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、消炎利胆片组、胆通颗粒组,每组20只。除空白组大鼠外,其余组大鼠均采用胆总管结扎方法进行胆汁淤积性早期肝纤维化模型建立。末次造模后第1天开始,模型组大鼠灌胃生理盐水,消炎利胆片组大鼠灌胃消炎利胆片(研磨成粉,175 mg/kg,温水融化),胆通颗粒组大鼠灌胃胆通颗粒(200 mg/kg,温水融化),均1 mL/100 g。分别于灌胃1,5,10 d后,每组随机处死6只大鼠,应用ELISA法检测各组大鼠血清TGF-β_1水平,Western Blot法检测肝脏组织中Smad2、Smad3蛋白表达水平。结果灌胃1,5,10 d后,模型组、消炎利胆片组、胆通颗粒组大鼠血清TGF-β_1水平及肝脏组织中Smad2、Smad3蛋白相对表达水平均明显高于空白组(P均0.05);灌胃5,10 d后,消炎利胆片组、胆通颗粒组大鼠血清TGF-β_1水平及肝脏组织中Smad2、Smad3蛋白相对表达水平均明显低于模型组(P均0.05);胆通颗粒组灌胃10 d后血清TGF-β_1水平及灌胃5,10 d后肝脏组织中Smad3蛋白相对表达水平均明显低于消炎利胆片组(P均0.05)。结论胆通颗粒能够通过降低TGF-β_1水平及抑制Smad2、Smad3蛋白表达,从而阻断TGF-β_1/Smads信号通路来实现抗胆汁淤积性早期肝纤维化的作用。     

参蛤益肺胶囊调控慢性阻塞性肺疾病大鼠TGF-β1/Smad信号通路的研究

目的:观察参蛤益肺胶囊对慢性阻塞性肺疾病(chronic obstructive pulmonary diseases,COPD)大鼠模型TGF-β1/Smad信号通路的影响。方法:随机取10只大鼠为空白组,另40只大鼠为造模组,采用烟熏联合肺炎克雷伯氏杆菌感染的方法建立COPD稳定期大鼠模型。将造模成功的38只大鼠按照雌雄各半的原则随机分为模型组8只、参蛤益肺胶囊低剂量组10只、参蛤益肺胶囊高剂量组10只及茶碱组10只,空白组、模型组以蒸馏水灌胃,各给药组则灌以相应药物。检测各组大鼠血清TGF-β1水平,气道组织中TGF-β1、Smad2、Smad3、Smad7的基因表达及TGF-β1、Smad3、Smad7的蛋白表达。结果:实验12周结束后,茶碱组、参蛤益肺胶囊高剂量组血清TGF-β1含量低于参蛤益肺胶囊低剂量组(P 0. 05)。茶碱组、参蛤益肺胶囊高剂量组TGF-β1、Smad3的基因表达低于参蛤益肺胶囊低剂量组(P 0. 05);参蛤益肺胶囊高剂量组TGF-β1、Smad3的蛋白表达低于参蛤益肺胶囊低剂量组、茶碱组(P 0. 05),模型组Smad7的基因及蛋白表达低于其余各组(P 0. 05),茶碱组、参蛤益肺胶囊高剂量组Smad7的基因表达高于参蛤益肺胶囊低剂量组(P 0. 05)。实验18周结束后,茶碱组、参蛤益肺胶囊低剂量组、参蛤益肺胶囊高剂量组血清TGF-β1含量比较,差异无统计学意义(P 0. 05)。模型组Smad7的基因及蛋白表达低于其余各组,参蛤益肺胶囊高剂量组Smad7蛋白表达低于茶碱组(P 0. 05)。结论:参蛤益肺胶囊对TGF-β1/Smads信号通路有调控作用,可减少TGF-β1、Smad2、Smad3的表达,增加Smad7的基因表达,减轻气道重塑的程度,延缓COPD疾病发展,参蛤益肺胶囊常规高剂量在抑制Smad2表达方面疗效更佳。     

蒙花散对糖尿病大鼠坐骨神经传导速度及TGF-β/Smad信号通路的影响

目的:探讨蒙花散对糖尿病大鼠周围神经功能的作用及对TGF-β/Smad信号通路的影响。方法:采用链脲佐菌素(STZ)诱导建立SD大鼠糖尿病周围神经病变模型,随机分为模型组、二甲双胍阳性对照组及蒙花散低、中、高剂量组,每组10只,另选10只健康大鼠作为正常对照组。蒙花散低、中、高剂量组分别灌胃蒙花散0.5、1、2g/kg,二甲双胍组大鼠灌胃给予二甲双胍0.15 g/kg,正常对照组和模型组大鼠给予等体积纯净水,各组大鼠均连续给药4 w。用肌电图仪测定右侧坐骨神经运动神经传导速度(MNCV)和感觉神经传导速度(SNCV)。分离坐骨神经,分别采用RT-PCR和Western blot法测定TGF-β1、TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ及Smad3 mRNA和蛋白表达。结果:蒙花散中、高剂量组大鼠坐骨神经MNCV和SNCV均较模型组大鼠显著升高,TGF-β1、TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad3mRNA及蛋白均较模型组大鼠显著降低(P0.01),且其作用具有剂量依赖性。结论:蒙花散可改善糖尿病大鼠周围神经功能,其机制可能与干预TGF-β/Smad信号通路有关。     

基于TGF-β1/Smad3信号通路探讨血竭含药血清对皮肤成纤维细胞的影响

目的:探讨血竭含药血清对皮肤成纤维细胞TGF-β1/Smad3信号通路的影响。方法:将大鼠随机分为血竭高、中、低剂量含药血清组和正常对照组,每组6只。用药组分别以0.2、0.1、0.05 g·kg-1·d-1的血竭灌胃,正常对照组给予生理盐水,7 d后取血制备含药血清。组织块法培养大鼠成纤维细胞,检测血竭含药血清对成纤维细胞增殖活性、TGF-β1分泌水平以及TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ、Smad3和p-Smad3蛋白表达的影响。结果:与正常对照组比较,血竭各剂量含药血清能显著提高成纤维细胞的增殖活性和TGF-βRⅠ、TGF-βRⅡ及p-Smad3蛋白的表达(P<0.05或P<0.01);中、高剂量含药血清组TGF-β1水平、Smad3、和Smad3蛋白磷酸化水平明显上升(P<0.05或P<0.01)。结论:血竭对创伤的修复作用可能与其调节TGF-β1/Smad3信号转导通路有关。     

芦根多糖对免疫性肝纤维化大鼠TGF-β/Smads信号通路的影响

目的：观察芦根多糖抗免疫性肝纤维化作用及对TGF-β/Smads信号通路的影响。方法：采用猪血清腹腔注射复制大鼠肝纤维化模型,以芦根多糖大剂量（420mg/kg）、中剂量（210mg/kg）、小剂量（105mg/kg）连续灌胃9周。放射性免疫学方法检测血清透明质酸（HA）、层粘蛋白（LN）、IV型胶原（CIV）的水平;取部分肝脏用HE染色观察肝脏病理形态学变化;ELISA法测定肝组织中转化生长因子-β1（TGF-β1）表达;免疫组织化学方法检测Smad3和Smad7蛋白的表达。结果：芦根多糖各剂量可降低模型大鼠血清HA、LN、CIV水平;减低模型大鼠肝组织TGF-β1和Smad3蛋白的表达,并增强Smad7蛋白的表达。结论：芦根多糖可抑制肝纤维化的形成,其作用机制可能与影响TGF-β/Smads信号通路有关。     

芍药汤通过cAMP/PKA/CREB信号通路调控溃疡性结肠炎水液代谢及肠上皮通透性的作用机制

目的：基于“大肠主津”理论探讨环磷酸腺苷/蛋白激酶A/环磷酸腺苷反应成分结合蛋白(cAMP/PKA/CREB)信号通路在溃疡性结肠炎(UC)水液代谢及肠上皮通透性中的作用及芍药汤的干预机制。方法：将60只雄性SD大鼠分为空白组、模型组、美沙拉嗪组(0.42 g·kg^-1)、芍药汤低、中、高剂量组(11.1、22.2、44.4 g·kg^-1),每组10只。采用复合病因造模法建立UC湿热内蕴证大鼠模型,空白组和模型组分别给予生理盐水灌胃,美沙拉嗪组给予美沙拉嗪灌胃,芍药汤低、中、高剂量给予对应剂量的芍药汤灌胃,灌胃周期为14 d。观察各组大鼠腹泻评分及粪便含水率变化,采用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血浆二胺氧化酶(DAO)、D-乳酸含量,免疫组化法检测各组大鼠结肠组织中水通道蛋白(AQP)8、AQP4及肠黏膜通透性相关蛋白ZO-1、Occludin的蛋白表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测结肠组织中cAMP、PKA、CREB蛋白表达。结果：与空白组比较,模型组大鼠腹泻评分及粪便含水率显著增高(P<0.01),血浆...     

基于TGF-β1/Smad3通路和AGEs/RAGE分子研究丹蛭降糖胶囊干预糖尿病大鼠心肌纤维化的作用

目的从转化生长因子-β1(TGF-β1)/Smad3信号通路和晚期糖基化终末产物(AGEs)/AGEs受体(RAGE)分子水平研究丹蛭降糖胶囊干预糖尿病大鼠心肌纤维化的作用及其机制。方法采用高糖高脂饮食联合腹腔注射小剂量链脲佐菌素(STZ)方法建立2型糖尿病大鼠模型,饲养6周后将造模成功30只大鼠随机分为二甲双胍组、丹蛭降糖组、模型组各10只,另取10只健康大鼠作为空白组。二甲双胍组给予二甲双胍150 mg/kg灌胃,丹蛭降糖组给予丹蛭降糖胶囊540 mg/kg灌胃,模型组和空白组给予等容量蒸馏水灌胃。连续灌胃8周后,麻醉状态下取材。采用HE染色法观察心肌组织病理学变化;用ELISA法检测左心室AGEs、结缔组织生长因子(CTGF)和RAGE的表达水平;Western blot法和实时荧光定量PCR法检测心肌组织中TGF-β1及其信号蛋白Smad3蛋白和基因表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠光镜下心肌纤维走行较为紊乱,部分溶解、断裂,胞核位置不一,细胞间界限不清,间质出现纤维细胞增生。与模型组比较,二甲双胍组和丹蛭降糖组光镜下心肌细胞的病变明显减轻,左心室AGEs、RAGE、CTGF表达水平及TGF-β1、Smad3、p-Smad3蛋白和基因表达水平均明显降低(P均<0.05),且丹蛭降糖组各指标水平均明显低于二甲双胍组(P均<0.05)。结论丹蛭降糖胶囊可能通过抑制心肌TGF-β1/Smad3信号通路和AGEs/RAGE分子表达,延缓糖尿病大鼠心肌纤维化,发挥心肌保护作用。     

基于TGF-β1/Smad 通路探讨红花黄色素对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的保护作用

目的观察红花黄色素对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠的保护作用及其对转化生长因子β1（TGF-β1）/ Smad 信号通路的影响。方法采用腺嘌呤（250 mg·kg-1）灌胃建立肾纤维化大鼠模型。将SD 大鼠随机分为对照 组、模型组、氯沙坦组（9 mg·kg-1）及红花黄色素低、高剂量组（9、18 mg·kg-1）,每组10 只,灌胃给药,每天 1 次,连续30 d。检测大鼠血清肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）含量;采用HE 和Masson 染色法观察大鼠肾脏组织病 理学变化;采用RT-qPCR 法检测大鼠肾组织中TGF-β1、Smad4 及Smad7 mRNA 表达情况;采用免疫组化法 及Western Blot 法检测大鼠肾组织中TGF-β1、Smad4 及Smad7 蛋白表达情况。结果与对照组比较,模型组 大鼠血清Cr、BUN 含量显著升高（P＜0.01）;大鼠肾脏组织中TGF-β1 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜ 0.05）,Smad7 mRNA 及蛋白表达水平明显下降（P＜0.05）。与模型组比较,各给药组大鼠血清Cr、BUN 水平明 显降低（P＜0.05,P＜0.01）;各给药组大鼠肾脏组织中TGF-β1 mRNA 及蛋白表达水平明显降低（P＜0.05）, Smad7 mRNA 及蛋白表达水平明显升高（P＜0.05）。各组大鼠肾脏组织中Smad4 mRNA 及蛋白表达水平无明显 变化（P > 0.05）。结论红花黄色素对腺嘌呤致肾间质纤维化大鼠具有保护作用,其机制可能与抑制TGF-β1/ Smad 信号通路有关。     

补肾调经方对PCOS模型大鼠性激素、卵巢形态及TGF-β_1/smad通路的影响

目的探讨补肾调经方对多囊卵巢综合征(PCOS)模型大鼠性激素、卵巢形态及转化生长因子-β_1(TGF-β_1)/smad通路的影响。方法将60只雌性SD大鼠随机分为空白组、模型组、补肾调经方低剂量组、补肾调经方中剂量组、补肾调经方高剂量组与炔雌醇环丙孕酮组,每组10只。除空白组外,其余组大鼠采用丙酸睾酮+注射用绒促性素建立PCOS模型。造模成功后,补肾调经方低、中、高剂量组给予0.264 g/(kg·d)、0.528 g/(kg·d)、1.056 g/(kg·d)的补肾调经方溶液灌胃,炔雌醇环丙孕酮组给予临床剂量1倍的炔雌醇环丙孕酮溶液灌胃,空白组、模型组给予等体积蒸馏水灌胃,均1次/d,连续12 d。末次灌胃结束后次日,采用放射免疫法测定各组大鼠血清黄体生成激素(LH)、睾酮(T)、促卵泡成熟激素(FSH)、雌二醇(E_2)水平;光镜下观察各组大鼠卵巢组织形态学变化,并计算卵泡数目;蛋白免疫印迹法检测各组大鼠卵巢组织中TGF-β_1、Smad3、Smad4和Smad 7蛋白表达情况。结果与模型组比较,补肾调经方中、高剂量组与炔雌醇环丙孕酮组大鼠血清LH、T水平及卵巢组织中Smad 7蛋白表达量均明显降低,血清FSH、E_2水平及卵巢组织中TGF-β_1、Smad3、Smad4蛋白表达量均明显升高,卵巢质量减轻,卵泡数目减少,差异均有统计学意义(P均0.05);与炔雌醇环丙孕酮组比较,补肾调经方高剂量组大鼠血清LH、T水平及卵巢组织中Smad 7蛋白表达量更低,血清FSH、E_2水平及卵巢组织中TGF-β_1、Smad3、Smad4蛋白表达量更高,卵巢质量更轻,卵泡数目更少,差异均有统计学意义(P均0.05)。补肾调经方各剂量组与炔雌醇环丙孕酮组大鼠卵巢病理性改变均呈不同程度改善,以补肾调经方高剂量组改善最为明显。结论补肾调经方可有效调节PCOS大鼠性激素分泌,促进卵泡发育和排卵,能够改善卵巢形态,机制可能与调控TGF-β_1/Smad信号通路的激活有关。     

基于ERK/TGF-β1/Smad4信号通路探讨章氏接骨丹含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化调控的影响

目的 基于ERK/TGF-β1/Smad4信号通路探讨章氏接骨丹含药血清对大鼠骨髓间充质干细胞成骨分化调控的影响。方法 取3月龄SPF级雌雄各半SD大鼠40只，随机分为药物组与蒸馏水组各20只，药物组按2.7 mL/（kg·d）灌服生药量浓度为1.554 g/mL接骨丹药液，蒸馏水组以等剂量蒸馏水灌胃，2组每日早晚各灌胃1次，灌胃7 d后取大鼠腹主动脉血制备接骨丹含药血清和空白血清。取2月龄SD大鼠双侧股骨和胫骨的骨髓液培养传代至第4代制备骨髓间充质干细胞模型，随机分为空白组、模型组、接骨丹组、抑制剂组，选用细胞外调节蛋白激酶（ERK）抑制剂对ERK通路进行抑制。空白组采用10%空白血清+α-MEM培养液进行培养；模型组采用10%空白血清+α-MEM培养液+ERK抑制剂进行培养；接骨丹组采用10%接骨丹含药血清+α-MEM培养液进行培养；抑制剂组采用10%接骨丹含药血清+α-MEM培养液+ERK抑制剂进行培养。4组均培养9 d后分别检测4组碱性磷酸酶（ALP）浓度，采用免疫荧光法测定Ⅰ型胶原（COLI）表达水平，采用qPCR法检测COLI、转化生长因子-β1(TGF-β1)、Smad4...     

平喘汤”通过调控TGF-β1/Smad信号通路抑制哮喘大鼠气道重塑机制研究

目的:基于转化生长因子-β1(TGF-β 1)/Smad通路探讨效方"平喘汤"抑制哮喘大鼠气道重塑的作用机制。方法:36只SD大鼠随机分为正常组、模型组、地塞米松组(0.001g/kg)及平喘汤低、中、高剂量(5.3g/kg、10.6g/kg、21.2g/kg)组,每组6只。除正常组外,其余各组大鼠采用卵清白蛋白(OVA)致敏和激发制备哮喘大鼠模型。注射OVA致敏后,于OVA溶液雾化激发的同时各给药组灌胃给予相应的药物,模型组与正常组予等量生理盐水灌胃,雾化激发与给药均每日1次,连续3周。采集各组3只大鼠支气管肺泡灌洗液(BALF),采用酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测BALF中TGF-β 1含量。取各组另3只大鼠肺组织,右肺组织苏木素-伊红(HE)染色后观察肺组织病理形态学变化,马松(Masson)染色后观察胶原纤维情况,免疫组化染色法检测肺组织TGF-β 1、Smad2和Smad3蛋白表达;左肺组织采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测TGF-β 1、Smad2和Smad3蛋白表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠BALF中TGF-β 1含量、肺组织中TGF-β 1、Smad2和Smad3蛋白表达水平均显著升高(P<0.001),肺组织炎性细胞浸润、胶原纤维沉积明显。与模型组比较,各给药组大鼠BALF中TGF-β 1含量均显著降低(P<0.001),其中地塞米松组和平喘汤高剂量组大鼠BALF中TGF-β 1含量显著低于平喘汤中剂量组、低剂量组(P<0.001),且2组间比较差异无统计学意义(P>0.05),平喘汤中剂量组大鼠BALF中TGF-β 1含量显著低于低剂量组(P<0.001)。与模型组比较,各治疗组大鼠肺组织损伤、炎性细胞浸润、胶原纤维沉积情况均有不同程度的减轻,其中以地塞米松组和平喘汤高剂量组改善最为明显。与模型组比较,地塞米松组与平喘汤高、中剂量组大鼠肺组织TGF-β 1、Smad2、Smad3蛋白表达显著降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001),其中地塞米松组改善最为明显(P<0.05,P<0.01,P<0.001),平喘汤高剂量组改善显著优于中、低剂量组(P<0.05,P<0.01,P<0.001),中剂量组改善显著优于低剂量组(P<0.05,P<0.001)。结论:平喘汤可能通过调控TGF-β 1/Smad信号通路,下调TGF-β 1、Smad2和Smad3表达,从而抑制哮喘大鼠的气道重塑,且其作用呈现明显的剂量依赖性。     

四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 探讨四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎（UC）模型大鼠结肠组织磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路相关基因mRNA和蛋白以及血清中细胞因子白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-10（IL-10）表达水平的影响。方法 将120只SPF级Wistar大鼠在SPF级实验室适应性喂养7 d后分为空白组和造模组,造模组大鼠采用二硝基苯磺酸盐（DNBS）/乙醇溶液灌肠+皮下注射氢化可的松+番泻叶灌胃法建立脾肾阳虚型UC大鼠模型。将成功建立模型的大鼠随机分为5组,分别为模型组,美沙拉嗪（0.36 g·kg^-1）组,四神丸高、中、低剂量（3.2,1.6,0.8 g·kg^-1）组,灌胃体积均为10 mL·kg^-1,模型组和空白组灌服等体积蒸馏水,1次/d,连续21 d。每日观察大鼠一般情况,并记录小鼠体质量、粪便性状及隐血情况进行疾病活动指数（DAI）评分。取大鼠结肠组织,观察大体形态及结肠损伤情况,进行结肠黏膜损伤指数（CMDI）评分。采用苏木素-伊红（HE）染色观察各组大鼠结肠组织病理改变,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测结肠组织PI3K,Akt,mTOR mRNA的表达水平,酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清IL-1β,IL-10的含量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织PI3K,磷酸化（p-）PI3K,Akt,p-Akt,mTOR,p-mTOR蛋白的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠一般生存状况相对较差,DAI评分,CMDI评分显著升高（P<0.01）;大鼠病理切片见肠黏膜部分消失,腺体消失,有大量的炎性细胞浸润,聚集于黏膜层和基层;PI3K,Akt,mTOR mRNA表达水平显著升高（P<0.01）;IL-1β含量显著升高,IL-10含量显著降低（P<0.01）;p-PI3K,p-Akt,p-mTOR蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,四神丸高、中剂量组及美沙拉嗪组大鼠DAI评分明显下降（P<0.05）;四神丸高、中、低剂量组及美沙拉嗪组大鼠CMDI评分显著降低（P<0.01）;大鼠病理切片显示各给药组炎性细胞减少,黏膜层结构不同程度的恢复正常,美沙拉嗪组和四神丸中剂量组效果最好,黏膜结构接近空白组;四神丸高、中剂量组及美沙拉嗪组大鼠PI3K,Akt,mTOR mRNA及四神丸低剂量组Akt mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,四神丸低剂量组PI3K,mTOR mRNA的表达水平虽有降低,但差异无统计学意义;四神丸高、中剂量组及美沙拉嗪组IL-1β含量明显降低,IL-10含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,四神丸低剂量组IL-1β含量降低,IL-10含量升高,但差异无统计学意义;四神丸高、中、低剂量组及美沙拉嗪组p-PI3K,p-Akt,p-mTOR蛋白表达水平均有不同程度下降（P<0.05,P<0.01）。结论 四神丸具有改善脾肾阳虚型UC模型大鼠的一般情况和肠黏膜损伤的作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

益肾化瘀方对单侧输尿管结扎大鼠转化生长因子β1、Smad7信号蛋白表达的影响

目的探讨益肾化瘀方抗肾间质纤维化的可能作用机制。方法 108只SD大鼠随机分为假手术组、模型组、缬沙坦组和益肾化瘀方高、中、低剂量组,每组18只。除假手术组外其余大鼠采用单侧输尿管结扎方法建立肾间质纤维化模型,造模次日益肾化瘀方高、中、低剂量组分别予益肾化瘀方浓缩液32、16、8 g/(kg·d)灌胃,缬沙坦组予缬沙坦溶液13.3 mg/(kg·d)灌胃,假手术组、模型组予生理盐水20 ml/(kg·d)灌胃,各组均连续灌胃28天。分别于造模后第7、14、28天观察大鼠肾组织病理改变,计算肾间质纤维化面积,检测大鼠肾组织中转化生长因子β1(TGF-β1)、Smad7信号蛋白的表达。结果模型组大鼠出现肾间质炎细胞浸润和梭形核细胞增生,伴局灶性肾间质纤维化,各治疗组肾脏病理表现均有不同程度的减轻,其中益肾化瘀方高剂量组病理改变与缬沙坦组相当。与同时间点假手术组比较,其余各组大鼠肾间质纤维化面积、TGF-β1升高,Smad7信号蛋白减少(P0.01);与同时间点模型组比较,除益肾化瘀方低剂量组外,其余各治疗组大鼠肾间质纤维化面积、TGF-β1降低,Smad7信号蛋白增加(P0.05或P0.01),并且以益肾化瘀方高剂量组和缬沙坦组改善最明显(P0.05)。结论益肾化瘀方可能通过抑制大鼠肾组织中TGF-β1的高表达,上调Smad7的表达,从而减轻肾间质纤维化。