马兜铃酸I致大鼠肾损伤后血清miRNA差异表达的研究

目的筛选马兜铃酸I(AAI)致大鼠肾损伤后血清中差异表达的微小RNA(micro RNA,miRNAs),为阐明miRNAs调控马兜铃酸肾病的机制研究提供靶标并奠定研究基础。方法 SD雄性大鼠随机分为对照组及AAI(2.25 mg/kg)组,连续ip给药14 d造成肾损伤模型后,对大鼠肾脏进行HE染色观察肾损伤程度。利用miRNAs芯片技术寻找AAI组及对照组大鼠血清中差异表达的miRNAs,预测靶基因,采用实时定量PCR(qRT-PCR)验证芯片结果的可靠性,并对部分结果进行信号通路分析。结果 HE染色显示AAI组大鼠肾脏出现不同程度的病变;miRNAs芯片结果显示有5个miRNAs(miR-10a-3p、miR-207、miR-3594-3p、miR-874-3p、miR-9a-3p)表达明显上调,无明显下调的miRNAs,并预测Rhebl1、Usp10等16种基因为差异表达的miRNAs靶基因;qRT-PCR验证结果与芯片结果基本一致;信号通路分析结果显示MAPK信号通路等相关性较大。结论芯片分析得到的差异表达的miRNAs可能与AAI致肾毒性机制相关,为进一步深入研究特定miRNAs的调控机制提供新的靶点,并为后期生物信息学层次的研究提供有效依据。     

白花蛇舌草对大肠癌耐药细胞microRNAs表达的影响

目的:探讨白花蛇舌草(Hedyotic Diffusa Wilid,HDW)对大肠癌5-FU耐药细胞miRNAs表达的调控作用,进一步揭示其逆转大肠癌多药耐药(Multidrug Resistance,MDR)作用机制。方法:通过体外培养HCT-8/5-FU细胞,经HDW处理,采用MTT检测细胞活力、倒置显微镜观察细胞形态、microRNA(miRNA)表达谱芯片分析、QPCR验证差异miRNA表达、GO及Pathway分析预测差异miRNA调控的信号通路。结果:HDW可显著抑制大肠癌HCT-8/5-FU耐药细胞的活力,降低细胞密度;HDW调控57个miRNA差异表达,其中上调23个,下调34个;QPCR验证HDW上调miR-92b-5p、miR-1247-3p、miR-4800-5p的表达,下调miR-4454、miR-4443、miR-483-5p的表达;信号通路预测显示HDW可调控PI3K/Akt、TGF-β/Smad、MAPK、P53、Wnt、JAK-STAT等多条与细胞耐药、迁移、侵袭、增殖、凋亡有关的信号通路。结论:HDW对大肠癌5-FU耐药细胞HCT-8/5-FU具有显著的抑制作用,通过调控miRNAs表达是其逆转大肠癌耐药的作用机制之一。     

化痰散结方含药血清作用胃癌细胞系MGC803后差异表达miRNAs筛选及生物信息学分析

目的:筛选化痰散结方含药血清处理胃癌细胞系MGC803后差异表达的微小RNA(miRNAs),并进行生物信息学分析。方法:应用"下一代"测序技术(即高通量测序技术)对MGC803细胞和化痰散结方含药血清处理后的MGC803细胞进行miRNAs差异表达谱分析;结合文献报道确定4个与肿瘤相关的miRNAs,对其进行靶基因预测及信号转导通路的分析。结果:经化痰散结方含药血清处理后,miR-424～3p和miR-494～3p的表达水平明显上调,miR-33b-3p和miR-27a-5p的表达水平明显下调;生物信息学方法分析结果显示miR-424～3p、miR-494～3p、miR-27a-5p和miR-33b-3p及其靶基因参与细胞迁移、细胞周期和凋亡等通路。结论:化痰散结方含药血清可能通过调控miR-27a-5p、miR-33b-3p、miR-424～3p、和miR-494～3p的表达抑制胃癌的发生发展。     

养心通脉有效部位方干预AMI大鼠BMSCs miRNA组学分析

目的:通过筛选差异表达miRNAs,预测和探究养心通脉方有效部位方(active principle region of Yangxing Tongmai formula,apr-YTF)诱导骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)心肌样分化的分子机制。方法:提取急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)血瘀证大鼠BMSCs并培养,使用apr-YTF含药血清诱导,以阴性对照血清做对照,提取细胞总RNAs,使用表达谱芯片检测细胞miRNAs的表达,并进行聚类分析。运用生物信息学方法预测差异miRNA调控的靶基因和功能分析。结果:芯片探测出共有26个差异miRNAs,其中8个上调,18个下调,经筛选和预测共100个靶基因参与了19种生物过程,11种细胞成分,10种分子作用。轴突导向通路,癌症转录误调节通路,AMPK信号通路被富集。rno-miR-93-5p,rno-miR-204-5p,rno-miR-128-3p为网络调控中心,其中rno-miR-204-5p下调更显著。结论:养心通脉有效部位方干预大鼠骨髓间充质干细胞心肌样分化的机制可能与rno-miR-204-5p,rno-miR-93-5p,轴突导向通路相关性较高。     

中西医联合治疗对晚期NSCLC miRNA表达谱的影响

目的对中西医联合治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)获益血清miRNA表达谱进行初步研究,探讨晚期NSCLC疗效监测和预测分子标记物。方法选取5例接受中西医联合治疗且疗效获益的晚期NSCLC患者(简称治疗组)和3例晚期NSCLC初治患者(简称肺癌组)及3名健康体检者(简称对照组),采集血清标本并用Trizol法提取总RNA,运用Exiqon公司microRNA PCR ARRAY芯片技术筛选检测肺癌组血清与对照组血清中差异miRNA表达谱、治疗组血清与肺癌组血清差异miRNA表达谱,基于聚类分析及对比分析,进一步得到中西医联合治疗晚期NSCLC获益miRNA表达谱。结果经microRNA PCR ARRAY检测和数据分析处理后,肺癌组与对照组共筛选出42个差异在2倍以上的miRNAs,其中29个为上调的miRNAs,13个为下调的miRNAs;且miR-10b-5p、miR-21-5p、miR-182-5p、miR-361-3p、miR-382-5p差异有统计学意义(P0.05)。治疗组与肺癌组筛选出45个差异在2倍以上的miRNAs,其中12个上调的miRNAs,33个下调的miRNAs;miR-137-3p、miR-182-5p、miR-376a-3p、miR-382-5p、miR-409-3p、miR-10a-5p、miR-21-5p、miR-29a-3p、miR-141-3p、miR-150-5p、miR-200c-3p、miR-342-3p、miR-365a-3p、miR-375、miR-502-3p 15个miRNAs差异有统计学意义(P0.05)。治疗组与肺癌组差异倍数2倍,与对照组差异倍数≤2倍的血清miRNA共筛选出22个,其中7个为上调miRNAs,15个为下调miRNAs;miR-127-3p、miR-182-5p、miR-382-5p、miR-409-3p、miR-10a-5p、miR-21-5p、miR-141-3p、miR-342-3p 8个miRNAs差异有统计学意义(P0.05)。结论包括miR-21-5p、miR-182-5p、miR-382-5p在内的差异miRNAs有望成为中西医联合治疗晚期NSCLC疗效监测和预测分子标记物;为中西医联合治疗晚期NSCLC个体化治疗提供参考。     

慢性乙型病毒性肝炎肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者尿液中microRNAs的表达研究

目的研究慢性乙型病毒性肝炎(慢乙肝)肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者尿液中microRNAs(miRNAs)的表达差异,探索不同证候的特征性miRNAs,为慢乙肝辨证分型提供生物学标志物和客观化依据。方法收集慢乙肝肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者(各53例)及健康者(24例)的尿液标本,采用miRNAs表达谱芯片技术检测miRNAs表达谱,分析差异表达的miRNAs;采用实时定量RT-PCR(RT-qPCR)技术检测慢乙肝肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者尿液中部分差异表达的miRNAs相对表达量;进行miRNAs潜在靶基因的预测、GO和pathway分析。结果①miRNAs表达谱芯片检测结果显示,与肝郁脾虚证比较,慢乙肝肝胆湿热证患者有21条miRNAs呈高表达,1条miRNA呈低表达(差异倍数1.5,P0.05)。②RT-qPCR结果显示,与肝郁脾虚证比较,慢乙肝肝胆湿热证患者尿液中miR-483-3p和miR-4700-3p呈显著高表达(P0.05),miR-4745-5p呈显著低表达(P0.05);与健康者比较,慢乙肝肝胆湿热、肝郁脾虚证患者尿液中miR-483-3p呈低表达(P0.05)、miR-4745-5p呈高表达(P0.05),慢乙肝肝郁脾虚证患者尿液中miR-4700-3p呈低表达(P0.05)。③miR-483-3p、miR-4700-3p和miR-4745-5p的联合ROC曲线AUC为0.810 6,对于鉴别肝胆湿热证和肝郁脾虚证患者具有一定的诊断价值。④生物信息学方法显示,证候差异表达miRNAs所调控的潜在靶基因,GO大都与生物学调控、代谢过程、多细胞有机体的发展、应激反应和细胞增殖等相关,pathway大都与翻译后蛋白质修饰、TGF-β信号通路、TGF-β家庭成员的信号、TGF-β受体复合物的信号传导等通路有关。结论慢乙肝肝胆湿热、肝郁脾虚证患者尿液中存在差异表达的miRNAs,miR-483-3p、miR-4700-3p和miR-4745-5p或许为慢乙肝肝胆湿热、肝郁脾虚证的潜在标志性分子,这些miRNAs可能分别通过调控其相应的靶基因而影响证候的发生发展。     

基于miRNA组学探讨慈菇消脂方调控TGF-β1诱导LX2细胞活化的作用机制北大核心CSCD

目的:运用生物信息学方法筛选慈菇消脂方干预人肝星状LX2细胞中差异表达微小RNA(micro RNA,miRNA),并进一步探讨差异miRNA对活化LX2细胞刺猬(Hedgehog, Hh)信号通路的影响及慈菇消脂方含药血清的干预机制。方法:CCK-8法检测不同浓度含药血清,不同时间处理对细胞活性影响,筛选最佳作用时间和作用浓度。6%慈菇消脂方含药血清干预LX2细胞72 h,以空白血清组作为正常对照,进行总RNA提取、RNA质检、文库构建,使用测序平台为illumina HiSeqTM2500进行高通量测序,以P<0.05的标准筛选差异miRNA,利用miRanda和RNAhybrid两个软件进行miRNA靶基因预测,得到miRNA和靶基因间的对应关系。对差异miRNA靶基因分别进行Gene Ontology和KEGG富集分析,筛选Hh信号通路差异表达miRNA。转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导建立LX2细胞活化模型。试验随机分为正常对照组、模型对照组、6%慈菇消脂方含药血清组、环靶明脂组、微小RNA-199a-5p(miR-199a-5p)过表达组及其阴性对照组。CCK-8法检测细胞增殖情况;Q-PCR和Western-blot技术检测细胞中miR-199a-5p、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Ⅰ型-胶原(Col-I)及Hh信号通路相关蛋白表达,以此探究miR-199a-5p对活化LX2细胞Hh信号通路的影响及慈菇消脂方含药血清的干预机制。结果:与正常对照组比较,模型对照组细胞活力显著升高(P<0.01),miR-199a-5p表达上调(P<0.01),Sonic刺猬信号通路(Sonic Hedgehog, Shh)、脑胶质瘤相关癌基因1(Glioma related oncogene homology-1,Gli-1)、Gli-2、Col-I、α-SMA蛋白及mRNA表达显著上调(P<0.01);与模型对照组比较,6%慈菇消脂方含药血清组细胞活力显著降低(P<0.01),miR-199a-5p表达显著下调(P<0.01),Gli2、α-SMA蛋白表达显著下调(P<0.05)。结论:慈菇消脂方含药血清可以抑制TGF-β1诱导的LX2细胞活化,其机制可能通过下调miR-199a-5p进而抑制Hh信号通路蛋白表达发挥作用。     

黑树莓花青素靶向调控miR-338-5p/SIRT1相关信号通路对结直肠癌的化学预防作用

目的研究miR-338-5p/SIRT1相关信号通路在黑树莓花青素化学预防结直肠癌中的作用。方法小鼠分为健康对照组,氧化偶氮甲烷(AOM)/葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的炎症相关性结直肠癌小鼠模型组,AOM/DSS诱导联合黑树莓花青素处理组。利用miRNA基因芯片筛选差异表达miRNAs,选定miR-338-5p,采用RT-q PCR确认miR-338-5p在小鼠结肠组织及在人结直肠癌细胞株Caco-2、Lo Vo、HCT-116、HT29、SW480中的mRNA表达,生物信息学软件预测miR-338-5p和SIRT1靶向调节关系。Western blotting检测小鼠结肠组织中SIRT1蛋白及其下游mTOR等信号通路相关蛋白表达。结果miRNA基因芯片分析发现,与常规饮食的模型小鼠相比,喂食添加黑树莓花青素的模型小鼠结直肠肿瘤组织中miR-338-5p表达量显著减少,进一步研究几种结肠癌细胞系,确认了miR-338-5p表达趋势;黑树莓花青素处理结直肠癌细胞,miR-338-5p的表达能够显著降低。生物信息学预测miR-338-5p和SIRT1存在靶向调节关系。机制研究发现黑树莓花青素可以促进肠上皮细胞SIRT1蛋白的表达,并对其下游m TOR等相关信号通路分子蛋白水平具有调控作用。结论黑树莓花青素可能通过靶向调控miR-338-5p/SIRT1相关信号通路而发挥对结直肠癌的化学预防作用,进而为结直肠癌提供新的化学预防策略。     

白细胞介素-7对巨噬细胞分化形成破骨细胞的影响

目的:白细胞介素-7(IL-7)在类风湿关节炎骨破坏过程中具有重要作用,然而IL-7的具体作用方式不明确,因此本研究分析了IL-7对破骨细胞分化形成的作用及相关分子机制。方法:用M-CSF,M-CSF+RANKL及IL-7分别诱导RAW264.7巨噬细胞分化形成破骨细胞,通过抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色评价IL-7对破骨细胞分化形成的影响。然后使用JAK信号通路抑制剂(AG490),AKT信号通路抑制剂(LY294002)和JNK信号通路抑制剂(SP600125),采用RT-PCR和ELISA分别检测IL-7对破骨细胞骨溶性相关活性基因和蛋白分泌的影响。最后使用蛋白印迹检测探讨IL-7促进破骨细胞分化形成的相关分子机制。结果:IL-7在核因子κB配体(RANKL)不存在的情况下能够显著增加破骨细胞的数量。IL-7能够显著诱导破骨细胞溶骨相关活性成分包括基质金属蛋白酶-9(MMP9)、组织蛋白酶(CathK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、降钙素受体(CTR)的基因表达和蛋白分泌,JAK(AG490)和JNK(SP600125)信号通路抑制剂能显著抑制IL-7诱导的上述基因表达和蛋白分泌。IL-7显著诱导JAK,AKT及JNK信号通路信号蛋白的活化。结论:IL-7能不依赖于RANKL诱导破骨细胞的分化形成,其作用可能是通过活化JAK和JNK信号通路实现的。     

袁氏生脉成骨片对激素干预后大鼠成骨细胞的差异表达miRNA的实验研究

目的:成骨细胞和骨细胞凋亡学说是激素性股骨头坏死的机制之一,袁氏生脉成骨片已被证实在临床治疗激素性股骨头坏死有一定疗效,但两者具体作用机制有待深入,实验研究袁氏生脉成骨片对激素干预后大鼠成骨细胞的差异表达miRNA,预测其靶基因以推测作用机制。方法:取乳鼠(大鼠)的成骨细胞进行培养、传代,将第三代成骨细胞分为空白组,激素组,中药组;分别提取总RNA并进行质检;采用RNA标记与芯片杂交,采集数据及标准化,找出三组间的差异表达miRNA并对其表达谱进行分析。利用miranda、microcosm、mirdb 3个靶点预测软件对最明显的miR-672-5p进行靶基因预测。结果:和空白组相比,激素组中倍数>2.0倍的miRNA共有6个(4个miRNA表达上调,2个miRNA表达下调);和空白组相比,中药组中倍数>2.0倍miRNA共有63个(19个miRNA表达上调,44个miRNA表达下调);和激素组相比,中药组中倍数>2.0倍的miRNA共有56个(11个miRNA表达上调,45个miRNA表达下调)。在激素组与空白组对照中上调,在中药组与激素组对照中相对应下降的倍数>2.0倍的miRNA共4个(miR-672-5p、miR-3559-3p、miR-98-3p、miR-92a-1-5p),并预测出Angptl4、Ccdc51、RGD1306991、Ssbp3作为miR-672-5p的靶基因。结论:袁氏生脉成骨片对激素干预后大鼠成骨细胞的miRNA表达发生了明显变化,以miR-672-5p最为显著。这表明了它有可能参与了成骨细胞的凋亡,为袁氏生脉成骨片治疗激素性股骨头坏死提供理论依据。     

消癌解毒方对H22瘤荷小鼠 miRNAs表达谱的影响

目的通过对H22荷瘤小鼠肿瘤组织微小核糖核酸(miRNAs)表达谱的检测,探讨消癌解毒方抗肝癌的作用机制。方法将50只H22荷瘤小鼠随机分为模型组,消癌解毒方低剂量组、中剂量组、高剂量组和顺铂组,每组10只。应用病理组织学技术,检测各组H22荷瘤小鼠肿瘤组织光镜下的差异表现。应用miRNA芯片技术,检测各组H22荷瘤小鼠肿瘤组织差异表达miRNAs。应用统计学方法分析,找出与消癌解毒方作用机制相关的差异miRNAs。结果病理组织学检查结果显示,随着消癌解毒方剂量的增加,病理性核分裂像减少,癌细胞减小,抗癌效果增强。根据miRNA芯片的分析结果,消癌解毒方对H22瘤荷小鼠肿瘤组织内一些特异miRNAs如miR-1298-5p、miR-874-3p、miR-721、miR-298-5 p、miR-551 b-5 p、miR-346-5 p、miR-105表达显著上调;miR-24-3 p、miR-3963、miR-127-3 p、miR-434-5 p、miR-1187、miR-468-3 p、miR-221-5 p、miR-6695-5 p表达显著下调。结论消癌解毒方可能通过调控多种miRNAs的表达来发挥其抗肿瘤的作用。     

健脾补肺化痰方对小儿支气管哮喘缓解期肺功能的影响

目的 研究党参水提物对衰老模型小鼠肝组织microRNA（miRNA）表达谱的影响,探究中药党参抗衰老的分子机制。方法 将100只昆明种小鼠,随机分为正常对照组,D-半乳糖致衰老模型组,低中高党参剂量干预组。连续造模42天,随时监测模型小鼠的一般症状和体重变化;并在造模结束后检测各组小鼠血清谷丙转氨酶（ALT）和碱性磷酸酶（ALP）的值变化;利用Affymetrix miRNA 4.0 微阵列芯片筛选了D-半乳糖致小鼠衰老和高剂量党参干预衰老过程中差异表达的的miRNA,利用生物信息学工具对芯片结果进行了聚类及信号通路分析。结果 与正常小鼠比较,衰老模型小鼠血清ALT和ALP值显著升高（P＜0.05）, 与衰老模型比较,党参干预组小鼠血清ALT和ALP值有下降趋势,其中高剂量干预组ALP下降较显著（P＜0.05）;芯片聚类分析显示衰老组的miRNA表达谱与正常组和高剂量党参干预组明显分开,而高剂量党参干预组和正常对照组的miRNA表达谱聚在一起;D-半乳糖致衰老和党参抗衰老相关的差异表达miRNA主要都属于7个miRNA基因簇（miR-466a/b cluster、miR-297a cluster、miR-145a cluster、miR-486 cluster、miR-299a cluster、miR-127 cluster和miR-134 cluster）;生物信息学分析显示致衰老过程中差异表达miRNA的靶基因功能显著富集于29条信号通路（P＜0.01）,党参干预过程中差异表达miRNA的靶基因,参与调控的信号通路有67（P＜0.01）。结论 miRNA的靶向调控作用在D-半乳糖致衰老及党参抗衰老过程中发挥着重要作用。     

党参水提物对D-半乳糖致衰老小鼠肝组织microRNA表达谱的影响

目的研究党参水提物对衰老模型小鼠肝组织micro RNA(miRNA)表达谱的影响,探究中药党参抗衰老的分子机制。方法将100只昆明种小鼠,随机分为正常对照组,D-半乳糖致衰老模型组,低、中、高党参剂量干预组。连续造模42 d,随时监测模型小鼠的一般症状和体质量变化;并在造模结束后检测各组小鼠血清谷丙转氨酶(ALT)和碱性磷酸酶(ALP)的值变化;利用Affymetrix miRNA 4.0微阵列芯片筛选了D-半乳糖致小鼠衰老和高剂量党参干预衰老过程中差异表达的miRNA,利用生物信息学工具对芯片结果进行聚类及信号通路分析。结果与正常对照组小鼠比较,衰老模型组小鼠血清ALT和ALP值显著升高(P0.05);与衰老模型组比较,党参干预组小鼠血清ALT和ALP值有下降趋势,其中高剂量干预组ALP下降较显著(P0.05);芯片聚类分析显示衰老模型组的miRNA表达谱与正常对照组和高剂量党参干预组明显分开,而高剂量党参干预组和正常对照组的miRNA表达谱聚在一起;D-半乳糖致衰老和党参抗衰老相关的差异表达miRNA主要都属于7个miRNA基因簇(miR-466a/b cluster、miR-297a cluster、miR-145a cluster、miR-486 cluster、miR-299a cluster、miR-127 cluster和miR-134 cluster);生物信息学分析显示致衰老过程中差异表达miRNA的靶基因功能显著富集于29条信号通路(P0.01),党参干预过程中差异表达miRNA的靶基因,参与调控的信号通路有67个(P0.01)。结论 miRNA的靶向调控作用在D-半乳糖致衰老及党参抗衰老过程中发挥着重要作用。     

葱白提取物对大鼠心梗后室性心律失常疗效评价及miRs表达的影响

目的:探讨葱白提取物对心肌梗死大鼠室性心律失常的疗效及对miRNA表达的影响。方法:将60只大鼠随机分为4组,每组15只,分为假手术组、空白模型组、葱白提取物组和胺碘酮片组。后3组结扎前降支建立心梗模型,随机选取10对葱白提取物组和非葱白提取物治疗,治疗4周后评价疗效,随后处死大鼠,分离心肌细胞,用miRNA芯片筛选出上调最明显的miR-21及下调最明显的miR-15b-5p样本作为后续验证对象,QRT-PCR进一步验证上述可逆性差异性表达的miRNAs。结果:与空白模型比较,葱白提取物组和胺碘酮片组均可延长室性心律失常发生时间,减少持续时间和发生率(P 0. 01),miRNAs芯片筛选出葱白提取物处理组大鼠心肌细胞中可逆性恢复的67个具有显著表达差异的miRNAs(FC 1. 5,P 0. 05)。在qRT-PCR对15组样本的验证中,与未使用葱白提取物的对照组相比,葱白提取物组大鼠心肌细胞中miR-15b-5p表达均显著减少(p 0. 05),miR-21表达均显著增加(p 0. 05)。结论:葱白提取物可通过影响大鼠模型心梗后室性心律失常的发生类型、发生及持续时间、发生率和ST段抬高程度进而改善心梗后室性心律失常的发生发展,作用机制主要与调节miR-15b-5p及miR-21的表达有关。     

骨保护素基因多态性的研究进展

骨质疏松症是指单位体积内骨量减少,骨组织的显微结构异常,使骨的强度降低、脆性增加,易于发生骨折的一种代谢性骨病。目前已经证实,成骨细胞在骨吸收刺激因子作用下,需要通过特定的信号转导通路将骨吸收信号传递给破骨细胞,以调节破骨细胞的生成及其功能[1]。骨保护素系统(Osteoprote-geri n,OPG)是近年来发现的在破骨细胞分化过程中的一个重要信号传导通路,OPG的主要功能是抑制破骨细胞的分化,抑制成熟破骨细胞的骨吸收活性并诱导其凋亡。Kwan[2]用鼠单克隆细胞测试OPG作用时,证实OPG在破骨细胞样细胞的骨吸收中起强大的抑制作用。…     

从ERα/RANK通路探讨淫羊藿苷抑制破骨细胞分化作用

目的:通过检测淫羊藿苷对破骨细胞诱导分化过程中雌激素受体α(estrogen receptorα,ERα),核转录因子-κB受体(receptor activator of nuclear factor-κB,RANK)mRNA表达的影响,探讨淫羊藿苷抑制破骨细胞分化作用机制。方法:50μg·L~(-1)核因子κB受体活化因子配体(receptor activator of nuclear factor-κB ligand,RANKL)体外诱导RAW264.7细胞分化成破骨细胞,利用抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色和骨吸收陷窝对破骨细胞进行鉴定。用不同浓度的淫羊藿苷(1×10-5,1×10-6,1×10-7mol·L~(-1))分别处理5 d和9 d后,进行TRAP染色和骨吸收陷窝分析,处理6 d后,利用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9),组织蛋白酶K(cathepsin-K,CK),TRAP,ERα,RANK mRNA表达水平,用雌激素受体阻断剂ICI182780阻断雌激素受体通路验证淫羊藿苷对ERα/RANK通路的调节作用。结果:与RANKL诱导组比较,淫羊藿苷可以显著抑制破骨细胞形成数量和骨吸收陷窝数(P0.05,P0.01),同时显著下调破骨细胞MMP-9,CK,TRAP,RANK mRNA表达水平(P0.05,P0.01),上调ERαmRNA表达水平(P0.05)。ICI182780可抑制淫羊藿苷上调破骨细胞的ERαmRNA表达水平和下调RANK mRNA表达水平的作用(P0.05)。结论:淫羊藿苷能抑制RANKL诱导RAW264.7向破骨细胞分化和骨吸收活性,该作用可能通过上调破骨细胞的ERαmRNA表达进而下调RANK mRNA表达实现的。     

肾阳虚证患者外周血差异表达microRNAs筛选及功能预测

目的利用microRNA(miRNA)芯片筛选肾阳虚证差异表达的miRNAs。方法选择肾阳虚证患者14例作为肾阳虚证组,健康对照者14例作为正常对照组,分别抽取2组受检者外周静脉血5 m L,提取总RNA分离miRNA,应用miRCURYTM LNA Array(v.18.0)(Exiqon)芯片技术筛选2组间差异表达的miRNAs并进行分析,应用Gene ontology(GO)分析差异miRNA生物功能。结果共筛选出48条有统计学意义的差异表达miRNAs,其中29条表达上调,19条表达下调,这些差异miRNAs主要参与了免疫、信号通路、蛋白翻译合成等调节。结论肾阳虚证患者和健康对照者存在差异表达的miRNAs。     

柚皮苷对破骨细胞分化的影响

目的: 探讨骨碎补单体成分柚皮苷对小鼠单核细胞RAW264.7诱导分化为破骨细胞的影响. 方法: 通过100 μg·L^-1核因子κB受体活化因子配基(RANKL)诱导RAW264.7细胞株分化为成熟破骨细胞,经TRAP特异性染色和骨吸收陷窝对破骨细胞进行鉴定.采用MTT法筛选抑制破骨细胞最强的浓度.在诱导过程中,采用筛选后含柚皮苷的培养基,诱导5 d后,通过TRAP阳性细胞计数和骨吸收面积分析来观察柚皮苷对破骨细胞的形成和骨吸收功能情况;流式细胞术检测柚皮苷对破骨细胞增殖的影响,RT-PCR检测柚皮苷对破骨细胞分化过程中核因子κB 受体活化因子(RANK)、抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)、基质金属蛋白酶 9(MMP-9)、活化T细胞核因子1(NFATc1)与C-fos mRNA表达的影响. 结果: 采用100 μg·L^-1的RANKL可成功诱导成熟的、有功能的破骨细胞.柚皮苷可以抑制破骨细胞的分化和骨吸收功能;抑制破骨细胞的增殖活性;柚皮苷可明显下调破骨细胞分化过程中的RANK,TRAP,MMP-9,NFATc1 mRNA的表达,上调C-fos mRNA表达. 结论: 柚皮苷可抑制破骨细胞分化、增殖和骨吸收功能,其机制可能是通过抑制破骨细胞分化过程中特异性基因表达实现的.     

不同发展速度慢阻肺患者miRNA分子标志物的筛选与验证＊

目的 本项研究采用高通量测序技术，筛选发展“快”“慢”慢阻肺［慢性阻塞性肺疾病（Chronic Obstructive Pulmonary Disease，COPD），简称慢阻肺］患者差异表达miRNA，验证其可能的生物学标志物及潜在治疗靶点。方法 收集新疆医科大学第四临床附属医院呼吸科2018年1月至2019年12月诊断明确慢阻肺稳定期患者240例，选取发展“快”组5例，发展“慢”组5例，正常组4例，健康对照组5例，健康人对照组5例。抽取受试者外周血，提取总DNA，进行miRNA高通量测序，运用生物信息学分析筛选不同发展速度慢阻肺患者各组间存在的差异性显著性miRNA、并进行GO和KEGG通路分析。候选的miRNA采用实时荧光定量PCR法在本地扩大样本的慢阻肺患者60例中进行验证。结果 与健康对照相比，COPD发展“快”患者中发现35个差异表达的miRNAs，COPD发展“慢”患者中发现16个差异表达的miRNAs，COPD发展正常患者中发现7个差异表达的miRNAs。根据差异miRNA生物信息学分析结合参考文献选择miR-4433a-5p、miR-1246、miR-1290进行qRT-PCR验证，结果显示miR-4433a-5p在COPD不同发展速度患者中显著升高，miR-1246、miR-1290在COPD不同发展速度患者中显著降低。结论 miR-4433a-5p、miR-1246、miR-1290可作为COPD疾病预测的标志物和治疗的潜在靶点。     

丹苘软胶囊干预大鼠非酒精性脂肪肝细胞模型基因芯片的组学分析

目的:通过筛选mRNA(Clariom~(TM) S Assay)芯片及miRNA芯片的显著差异性基因,预测microRNA相关靶基因,探究丹苘软胶囊改善肝细胞脂肪代谢的调控机制。方法:提取丹苘软胶囊灌胃SD大鼠的含药血清,并对BRL大鼠肝细胞取对数生长期细胞进行实验,以阴性对照血清做对照,提取细胞总RNAs,采用Clariom S表达谱芯片及microRNA芯片检测细胞mRNA及miRNA的表达水平。运用生物信息学方法预测miRNA的靶基因,对脂肪代谢相关基因进行富集分析和通路分析。结果:经筛选和预测得到5629个预测靶基因参与20种生物学过程,7种细胞成分,有20种分子作用,神经营养素信号通路、丙型肝炎、PI3K-Akt信号通路被富集;rno-miR-26b-5p、rno-miR-129b-5p、rno-miR-21b-5p为调控网络中心;IPA数据库共检出31个与实验有关的脂肪代谢基因。结论:丹苘软胶囊在治疗非酒精性脂肪肝(nonalcoholic fatty liver disease,NAFLD)的机制可能与rno-miR-26b-5p、rno-miR-129b-5p、rno-miR-21b-5p,神经营养素信号通路、丙型肝炎、PI3K-Akt信号通路相关性较高。