中药龟甲HPLC指纹图谱研究

目的:建立中药龟甲的HPLC指纹图谱,以达到鉴别龟甲与其混伪品的目的。方法:收集不同产地的龟甲及其混伪品21批,按上下甲进行分类,共42个样品。通过盐酸水解、脱磷、脱钙等前处理,以6-氨基喹啉基-N-羟基琥珀酰亚胺基-氨基甲酸酯(AQC)进行衍生化反应,采用C18色谱柱(3. 9 mm×150 mm,3μm),柱温37℃,以乙腈,水,缓冲盐为流动相进行梯度洗脱,流速1. 00 m L/min,检测波长248 nm。采用"中药指纹图谱相似度评价系统"(《中华人民共和国药典》2012版)对正品龟甲上甲与下甲、正品与常见混伪品进行相似度分析。结果:所建立的指纹图谱具有较好的精密度、重现性和稳定性。正品龟甲的上下甲相似度为0. 932～0. 995。正品与混伪品的相似度在0. 90以下者占90. 91%。结论:正品上、下甲的HPLC图谱差异较小,正品与混伪品差异较明显。所建立的HPLC指纹图谱可用于龟甲的质量评价。     

基于COI条形码序列的龟甲及其混伪品的DNA分子鉴定

目的:用准确、简便的鉴定方法鉴别中药材龟甲及其混伪品,以保正药材的质量及其临床疗效.方法:对龟甲及其混伪品的原动物COI序列进行研究,利用MEGA 4.0等软件进行遗传距离等分析,并构建乌龟及其混伪品的NJ树.结果:乌龟种内COI序列变异很小,种间存在较多的变异位点,种间的遗传距离显著大于种内的遗传距离.由所构建的系统聚类树图可以看出,同一物种的不同样品能聚在一起,支持率较高,且与其混伪品能够很明显地区分开.结论:基于COI序列的DNA条形码技术可以很好的鉴定龟甲的正品来源及其混伪品,为该药材的准确鉴定提供了有效的分子遗传标记方法,具有一定的参考价值.     

龟甲药用历史与研究进展

正龟甲始载《神农本草经》,列为上品,为龟科动物乌龟Chinemys reevesi(iGray)的背甲及腹甲~([1])。当前临床调剂仍习用其背甲,少用腹甲,且龟甲正品中常混入混淆品,对市场监管和临床使用带来诸多困难。针对当前龟甲药材市场、研究进展及临床应用情况,本文对龟甲药用历史、鉴别与质量评价及质量控制研究进展进行概述,以促进龟甲的可持续发展和合理应用。     

基于COI基因的龟甲及其混伪品的DNA条形码研究

目的:利用COI基因对乌龟及常见混伪品进行分子鉴定,探讨快速、准确鉴定龟甲及其混伪品的方法.方法:在全国范围内收集龟甲的正品及其混伪品8种,共22份样品,提取DNA,得到其COI序列.用Contig Express,Dnaman,Edit Sequence,Mega 5等软件进行变异位点分析,并构建正品龟甲其混伪品的N-J树.结果:龟甲的正品来源乌龟与其混伪品种间存在较多变异位点.由所构建的系统聚类树图可以看出,同属聚在一起,且各物种又形成相对独立的支.结论:基于COI序列的DNA条形码技术可以很好地鉴定龟甲及其混伪品.     

基于差异蛋白质鉴别僵蚕及其新型伪品

目的通过总蛋白含量、可溶性蛋白含量差异以及应用SDS-PAGE蛋白质电泳寻找差异蛋白质来鉴别僵蚕与伪品黑死蚕、空心僵蚕。方法采用SDS-PAGE法对僵蚕真品与伪品差异蛋白条带进行鉴别。结果发现僵蚕总蛋白含量不低于60.00%,可溶性蛋白含量不低于4.29%,伪品远低于上述指标,可作为僵蚕质量评价的检查项指标,辅助鉴别僵蚕与其伪品;僵蚕特有差异蛋白质(SP)的有无和含量差异,可有效鉴别上述两种新型伪品。结论本研究初步建立基于差异蛋白质的僵蚕真伪鉴别新方法,为下一步完善僵蚕质量标准,以及僵蚕的质量控制提供科学的依据。     

鸦胆子与混伪品的鉴别

目的:辨别鸦胆子及其多种混伪品的性状特征。方法:从鸦胆子与其多种混伪品的植物来源、药材性状进行比较鉴别。结果:正品与混伪品形态与性状结构,质地与气味等均具显著差异。结论:正品与混伪品在植物来源、药材性状、功用主治方面有明显不同,不能作鸦胆子使用。     

燕窝鉴别中的蛋白质电泳研究

目的：探讨SDS-PAGE和等电聚焦电泳应用于燕窝蛋白分离及燕窝鉴定中的可行性。方法：提取印尼燕窝、怀集燕窝及常作为伪品的明胶、银耳、猪皮的蛋白质,进行SDS-PAGE和等电聚焦电泳研究。结果：印尼燕窝与怀集燕窝在SDS-PAGE图谱上可见明显差异,而明胶、银耳和猪皮等伪品可见特征性蛋白条带。燕窝蛋白经等电聚焦电泳可见清晰的蛋白条带,且主要集中于酸性端。结论：SDS-PAGE和等电聚焦电泳均可获得燕窝蛋白质的特征性电泳图谱,用于鉴别不同品种燕窝及掺伪燕窝是可行的。     

基于双向位点特异性PCR的金银花真伪鉴别方法研究

目的:筛选获得金银花真伪鉴别SNP位点并建立双向位点特异性PCR方法,用于鉴别金银花和其常见伪品以及两者的混杂品.方法:通过对GenBank收录的忍冬属植物叶绿体trnL-trnF序列进行对比分析,获得金银花真伪鉴别SNP位点;并依据该SNP位点设计特异性引物,对84份金银花基原植物及其市售饮片、伪品进行双向位点特异性PCR扩增,并根据真伪品的特异性条带进行金银花药材鉴别.结果:退火温度为61℃时,正品均出现468 bp的条带,红腺忍冬、华南忍冬、灰毡毛忍冬、黄褐毛忍冬、水忍冬、金银忍冬、郁香忍冬、新疆忍冬、繁果忍冬等9个伪品均出现324 bp的条带,在正品DNA中掺入5％以上伪品时同时出现正品和伪品条带.结论:双向位点特异性PCR可以鉴别金银花真伪品及两者的混杂样品.     

燕窝鉴别中的蛋白质电泳研究

目的：探讨SDS-PAGE和等电聚焦电泳应用于燕窝蛋白分离及燕窝鉴定中的可行性。方法：提取印尼燕窝、怀集燕窝及常作为伪品的明胶、银耳、猪皮的蛋白质，进行SDS-PAGE和等电聚焦电泳研究。结果：印尼燕窝与怀集燕窝在SDS-PAGE图谱上可见明显差异，而明胶、银耳和猪皮等伪品可见特征性蛋白条带。燕窝蛋白经等电聚焦电泳可见清晰的蛋白条带，且主要集中于酸性端。结论：SDS-PAGE和等电聚焦电泳均可获得燕窝蛋白质的特征性电泳图谱，用于鉴别不同品种燕窝及掺伪燕窝是可行的。     

龟甲的特异性PCR及高分辨率熔解曲线技术鉴别方法研究

目的:建立高效、稳定的龟甲Testudinis Carapax et Plastrum DNA鉴别方法。方法:利用龟甲的特异性聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)鉴别方法和高分辨率熔解曲线(HRM)鉴别方法,根据龟甲及其混伪品COI序列差异,寻找特异性单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)位点设计鉴别引物,并对PCR反应条件进行优化;并使用通用引物扩增COI区域,产物直接进行HRM分析。结果:当退火温度为60℃,循环次数为35,使用设计的龟甲特异性鉴别引物GJ-360.F/R进行PCR扩增,经扩增均获得约360 bp特异性鉴别条带,混伪品皆无条带;使用通用引物RonM-tl和Vl-tl进行PCR扩增,产物使用HRM分析,龟甲药材在模板DNA质量浓度为3.5～87.9 ng·μL~(-1)、引物浓度为0.2μmol·L~(-1)、镁离子浓度为2.0 mmol·L~(-1)的条件下,龟甲药材标准熔解曲线为双峰,其T_m均值分别为(83.15±0.76)、(87.53±0.69)℃。结论:特异性PCR和HRM均可作为一种快速准确鉴别龟甲正伪品的鉴定方法。     

不同产地山羊角凝胶电泳指纹图谱及其混伪品鉴别研究

目的:研究建立不同产地山羊角药材的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)的指纹图谱以及与混伪品的鉴别方法。方法:采用SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法对山羊角及其伪品的蛋白成分进行分析比较。结果:不同产地山羊角电泳图谱相似,有5个共有带峰,可作为山羊角的专属条带。结论:该方法简单易行、灵敏度高,可为山羊角的产地鉴别及与伪品的鉴别提供参考。     

龟甲的真伪鉴别

龟甲为常用中药 ,具有滋阴潜阳、益肾强骨、养血补心等作用 ,药典收载的龟甲其来源为乌龟一种 ,该种药材供不应求 ,在验收龟甲时发现了以数种其它的龟充之 ,现将正品与几种非正品——马来闭壳龟、黄缘闭壳龟、黄喉水龟、印度棱背龟从外观性状鉴别如下 :1　正品龟甲为龟科动物乌龟 Chinemys reevesii (Gray)的背甲及腹甲。1 .1　背甲 :本品呈椭圆形拱状 ,边缘整齐 ,前端略凹入 ,后端圆 ,前窄后宽 ,背棱 3条 ,其正中的一条隆起较明显。长 9～ 1 6cm,宽 6～ 1 2 cm,高 3～ 6cm。外表面棕色 ,颈盾一枚 ,缘盾左右各 1 1枚 ,类长方形 ,第 1 1缘盾…     

山慈菇及其伪品的蛋白质电泳鉴别

目的:建立山慈菇与其伪品的蛋白质电泳鉴别方法.方法:采用聚丙烯酰胺凝胶电泳技术,对山慈菇正品和伪品丽江山慈菇、金果榄、白芨、山兰进行鉴别分析.结果: 山慈菇蛋白谱图有3条特征性谱带,与其伪品蛋白谱图具有明显的差异.结论:蛋白质凝胶电泳是鉴别山慈菇与其伪品的一种科学、简便、快捷的方法.     

特异性PCR鉴别蜈蚣及其混伪品

目的:蜈蚣是我国传统的中药材,具有良好的药用价值。目前市场上蜈蚣的混伪品日益增多,临床用药的安全性和有效性难以保证。该研究建立了一种蜈蚣基原物种的特异性聚合酶链式反应(PCR)方法,以准确、简便的鉴别蜈蚣及其常见混伪品。方法:通过比较蜈蚣及其混伪品基原物种的COI基因序列差异,根据变异位点设计蜈蚣正品少棘巨蜈蚣的特异性鉴别引物WG-500.F和WG-500.R,采集蜈蚣原动物样本及药材样本,优化反应体系并对此方法进行耐受性和适用性的考察和验证。结果:少棘巨蜈蚣原动物样本及蜈蚣正品药材使用设计的蜈蚣鉴别引物经PCR扩增和凝胶电泳后出约500 bp的单一明亮条带,其他混伪品如多棘蜈蚣、模棘蜈蚣、哈氏蜈蚣、海南蜈蚣等均无条带出现。结论:PCR鉴别方法可准确鉴别蜈蚣原动物和药材的真伪,具有高度特异性,为中药材蜈蚣的真伪鉴别提供了良好的科学依据。该方法具有简单、直观等特点,有利于广泛的普及与应用,在中药材鉴定方面有着广阔的应用前景。     

基于DSS标记特异性PCR鉴别冷背药材木槿皮基原植物及其混伪品

目的 冷背药材作为宝贵的药材资源，但因其本身的特殊性和复杂性，导致其鉴别成为中药鉴定中的难题，因此亟需建立冷背药材的鉴别方法。该研究利用DNA特征序列（DSS）标记，建立一种冷背药材木槿皮基原植物木槿及其混伪品的特异性聚合酶链式反应（PCR）鉴别方法。方法 基于叶绿体基因组序列分析获得木槿皮的候选DSS标记，使用DNA测序手段对DSS标记进行验证，基于得到的可靠DSS标记设计木槿皮基原植物特异性鉴别引物，对PCR反应条件进行优化，并进行耐受性和适用性的考察。结果 将扩增产物的测序结果与DSS比对后得到了1个可用于鉴定木槿的DSS标记，揭示了木槿正混伪品的区别特征，根据DSS标记设计出一对木槿正品特异性鉴别引物，使用该引物进行PCR扩增和凝胶电泳后木槿均出现约270 bp的单一明亮条带，而其4种混伪品均无此条带。结论 该研究得到的1个DSS标记可用于木槿的真伪鉴定，基于此DSS标记设计的特异性鉴别引物可准确、简便的鉴别木槿皮的基原植物及其混伪品，为木槿正伪品的分子鉴定提供了新的方法与思路。     

中药饮片茯苓及其混伪品的鉴别

目的 对中药饮片茯苓与其混伪品进行鉴别.方法 通过性状、显微、薄层色谱法等方法进行综合鉴别.结果 薄层色谱法:正品茯苓与对照药材薄层鉴别分别显2个相同颜色的荧光宽点,混伪品显4个荧光斑点,且有2个荧光斑点位置不一致.结论 中药饮片茯苓及其混伪品的鉴别,可通过性状鉴别、显微鉴别与薄层色谱法进行检识.     

茯苓饮片及其混伪品的鉴别分析

目的探讨中药茯苓饮片正品与其混伪品的临床鉴别效果。方法运用茯苓特征、薄层色谱法和显微鉴别等多种方面对茯苓正品和其混伪品进行全面鉴别。结果茯苓饮片正品在色谱上有2个荧光斑点,且颜色相同;而对照的茯苓药材在色谱上也有2个荧光斑点,颜色一致;茯苓饮片混伪品在色谱上则有4个荧光斑点。结论鉴别中药茯苓饮片正品与茯苓饮片混伪品时,可采用特征、薄层色谱法和显微等方式进行,效果显著,值得推广使用。     

基于COI条形码序列的金钱白花蛇及其混伪品的DNA分子鉴定

目的:利用COI序列对金钱白花蛇及其常见混伪品进行DNA条形码鉴别,考察其可行性.方法:对金钱白花蛇及其混伪品共4个种11份样品的COI条形码序列进行研究,分析药材正品来源的种内变异,与混伪品的种间变异,以及系统树中物种的聚类情况.结果:银环蛇COI序列种内变异较小,最大K-2P距离为0.0185,与混伪品的种间序列差...     

全蝎DNA条形码分子鉴定研究

目的:本研究通过COI序列对全蝎及其混伪品进行DNA条形码鉴别,为全蝎药材分子鉴定提供科学依据。方法:通过野外采集东亚钳蝎正品,对采集样品形态学鉴定、DNA提取、PCR扩增COI序列,测序建立东亚钳蝎的正品COI数据库,通过比对确定东亚钳蝎正品和伪品的DNA条形码。结果:实验共获取310份东亚钳蝎样本。通过序列分析,确定东亚钳蝎COI序列长度为658 bp。采用MEGA 6.0软件对东亚钳蝎样品及混伪品进行序列比对,构建邻接(NJ)树。结果表明东亚钳蝎COI序列扩增成功,与混伪品COI序列明显区分。结论:本研究运用COI条形码序列可准确鉴定全蝎的基原动物及其混伪品,为后续全蝎药材的分子鉴定提供了新的可行性方法。     

龟板及其伪品的鉴别

龟板及其伪品的鉴别华西医科大学附属第一医院（６１００４１）饶凡关键词龟板，鉴别世界上龟科已知有３２属，１２０种，我国有８属，１７种。但我国药典仅收载了乌龟一种龟的腹甲和背甲入药，将腹甲和背甲统称为龟甲。由于长期用药习惯，商品中以乌龟的腹甲使用较多，习...