抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状态细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的：从细胞分子学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制。方法：抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC，以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原，并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量；半定量法RT－PCR法和检测Ⅰ型胶原，间质胶原酶（MMPI）的mRNA表达。结果：抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组（P＜0．01）；能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达（P＜0．01），且能促进MMP1的mRNA表达（P＜0．01）。结论：抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达，从而可达到抑制胶原合成，促进胶原降解，这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

抗纤软肝冲剂药物血清对肝星状细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的 :从细胞分子学水平探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机制。方法 :抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC ,以生理盐水和秋水仙碱为对照。ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原 ,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量 ;半定量法RT -PCR法检测Ⅰ型胶原、间质胶原酶 (MMP1)的mRNA表达。结果 :抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组 (P <0 .0 1) ;能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达 (P <0 .0 1) ,且能促进MMP1的mRNA表达 (P <0 .0 1)。结论 :抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达 ,从而可达到抑制胶原合成 ,促进胶原降解 ,这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

抗纤软肝中剂药物血清对肝星状细胞胶原代谢及其相关基因表达的影响

目的从细胞分子学水平探讨抗纤软肝中剂抗肝纤维化的作用机制.方法抗纤软肝中剂药物血清温育传一代HSC,以生理盐水和秋水仙碱为对照.ELISA测定细胞上清Ⅰ型胶原,并测定细胞层总蛋白以校正胶原含量;半定量法RT-PCR法检测Ⅰ型胶原、间质胶原酶(MMP1)的mRNA表达.结果抗纤软肝冲剂组细胞上清中的Ⅰ型胶原含量明显低于其它两组(P＜0.01);能明显抑制细胞的Ⅰ型胶原mRNA表达(P＜0.01),且能促进MMP1的mRNA表达(P＜0.01).结论抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC的胶原基因表达和促进间质胶原酶基因表达,从而可达到抑制胶原合成,促进胶原降解,这可能是抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的细胞分子学机制之一.     

抗纤软肝颗粒对肝纤维化大鼠肝脏MMP-1mRNA及TIMP-1mRNA表达的影响

目的观察抗纤软肝颗粒对实验性肝纤维化大鼠肝脏基质金属蛋白酶-1(MMP-1)、金属蛋白酶组织抑制因子-1(TIMP-1)的影响,探讨其防治肝纤维化的作用.方法采用250mL/L四氯化碳给大鼠皮下注射制备肝纤维化模型,并同时给与秋水仙碱及抗纤软肝颗粒小、大剂量治疗,免疫组织化学法检测肝组织Ⅰ、ⅢⅡ型胶原,原位杂交的方法检测MMP-lmRNA、TIMP-1mRNA.结果抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达(P＜0.05),抑制TIMP-1的表达(P＜0.01),促进Ⅰ、Ⅲ型胶原的降解(P＜0.01).结论抗纤软肝颗粒能促进MMP-1的表达,抑制TIMP-1的表达,促进胶原的降解,产生抗肝纤维化的作用.     

抗纤复方药物血清对HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶及其组织抑制因子-1基因表达的影响

目的：探讨抗纤复方药物血清对肝星形细胞(HSC)L190细胞(HSC—L190)I型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制因子(TIMP—1)基因表达的影响。方法：以0．5、2．0、4．0g／kg等不同剂量抗纤复方灌胃大鼠,制备药物血清,作用于HSC—L190细胞48h,应用Northern印迹杂交的方法,检测I型、Ⅳ型前胶原、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及膜型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)及其组织抑制因子(TIMP-1)基因的表达,并用酶图法检测基质金属蛋白酶-2的活性：结果：(1)抗纤复方不同浓度药物血清能抑制HSC—L190细胞I型、Ⅳ型前胶原及其组织抑制因子TIMP-1的基因表达(P<0．05或P<0．01);(2)能增加膜型基质金属蛋白酶基因表达(P<0．01);(3)对基质金属蛋白酶-2基因表达及活性无影响(P>0．05)。结论：(1)抗纤复方具有抗肝纤维化作用;(2)抗纤复方抑制HSC-LI90细胞TIMP-1基因表达水平,促进胶原降解,可能是抗肝纤维化的作用机制之一。     

消痰化瘀抗纤方药物血清对肝星状细胞增殖及胶原降解基因表达的影响

目的:观察消痰化瘀抗纤方(简称抗纤方)药物血清对肝星状细胞(HSC)增殖,Ⅰ型胶原含量及相关基因表达水平的影响,探讨该方抗肝纤维化的细胞分子学机制。方法:正常大鼠血清和药物血清干预HSC-T6细胞24h,MTT法检测抗纤方药物血清对HSC增殖,ELISA法测定细胞上清液Ⅰ型胶原含量变化,RT-PCR法检测细胞中金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)和基质金属蛋白酶-1(MMP-1)的mRNA表达量。结果:抗纤方高(13.5倍)、中(4.5倍)、低(1.5倍)剂量组药物血清能明显抑制HSC增殖(P<0.05),且增殖抑制率与剂量呈正相关;对上清液中Ⅰ型胶原含量影响,随药物剂量增加明显降低(P<0.05);能明显抑制TIMP-1mRNA表达(P<0.05),促进MMP-1mRNA表达(P<0.05)。结论:抗纤方药物血清能抑制HSC增殖,减少Ⅰ型胶原含量,抑制TIMP-1表达,促进MMP-1表达,具有抗肝纤维化作用。     

抗纤软肝冲剂对肝星状细胞自分泌转化生长因子β1的影响

目的：从细胞分子水平研究抗纤软肝冲剂对肝星状细胞(HSC)表达转化生长因子β1(TGF-β1)的影 响。方法：抗纤软肝冲剂药物血清温育传一代HSC,以生理盐水和秋水仙碱为对照。免疫细胞化学分析TGF-β1 的 蛋白合成；半定量RT-PCR 法检测TGF-β1 的mRNA 表达量。结果：抗纤软肝冲剂能明显抑制HSC 的自分泌TGF-β1 及其mRNA 表达(P<0.01)。结论：抗纤软肝冲剂能抑制HSC 的TGF-β1 的基因和蛋白表达,阻断其自分泌放大活化 效应,这可能是该方抗肝纤维化的细胞分子学机制之一。     

抗纤复方药物血清对HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶及其组织抑制因子-1基因表达的影响

目的:探讨抗纤复方药物血清对肝星形细胞(HSC)LI90细胞(HSC-LI90)Ⅰ型、Ⅳ型前胶原和基质金属蛋白酶(MMPs)及其组织抑制因子(TIMP-1)基因表达的影响.方法:以0.5、2.0、4.0g/kg等不同剂量抗纤复方灌胃大鼠,制备药物血清,作用于HSC-LI90细胞48h,应用Northern印迹杂交的方法,检测Ⅰ型、Ⅳ型前胶原、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)及膜型基质金属蛋白酶(MT1-MMP)及其组织抑制因子(TIMP-1)基因的表达,并用酶图法检测基质金属蛋白酶-2的活性.结果:(1)抗纤复方不同浓度药物血清能抑制HSC-LI90细胞Ⅰ型、Ⅳ型前胶原及其组织抑制因子TIMP-1的基因表达(P＜0.05或P＜0.01);(2)能增加膜型基质金属蛋白酶基因表达(P＜0.01);(3)对基质金属蛋白酶-2基因表达及活性无影响(P＞0.05).结论:(1)抗纤复方具有抗肝纤维化作用;(2)抗纤复方抑制HSC-LI90细胞TIMP-1基因表达水平,促进胶原降解,可能是抗肝纤维化的作用机制之一.     

抗纤软肝冲剂药物血清对激活肝星状细胞表达Ⅰ型前胶原及TGF—β1mRNA的影响

目的：探讨抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的作用机理。方法：分离正常大鼠肝星状细胞,并传代培养。用抗纤软肝冲剂给正常大鼠灌胃,制备药物血清,温育培养细胞72h,提取细胞总RNA,RT-PCR法分析Ⅰ型前胶原、TGF-β1mRNA的表达。结果：抗纤软肝冲剂药物血清能显著抑制肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-β1mRNA的表达。结论：抗纤软肝冲剂抗肝纤维化的机理之一是调控肝星状细胞的Ⅰ型前胶原及TGF-βmRNA的表达。     

抗纤软肝颗粒对肝星状细胞增殖与凋亡的影响

目的:研究抗纤软肝颗粒(KXR)对肝星状细胞增殖、凋亡及凋亡相关蛋白的影响.方法:传代培养的大鼠肝星状细胞系HSC-T6与中药复方抗纤软肝颗粒(终浓度为5mg/ml、2.5mg/ml、1.25mg/ml)及药物血清(5%、10%、20%)共同培养48小时后,应用MTT法测定细胞增殖,TUNEL法及流式细胞仪测定细胞凋亡、免疫组化检测凋亡相关蛋白Bcl-2/Bax.结果:抗纤软肝颗粒无论是药物还是含药血清,均能显著抑制HSC-T6增殖,并使细胞周期阻滞于S期,在安全浓度范围内,5mg/ml组和10%药物血清组作用最强(P＜0.01); 并可诱导HSC凋亡, 且凋亡抑制分子Bcl-2表达下调, 促凋亡分子Bax表达增强(P＜0.01).结论:抗纤软肝颗粒抗肝纤维化的作用机制可能在于抑制肝星状细胞增殖,并通过下调Bcl-2/Bax比率,促进HSC凋亡.     

肝癌患者中医辨证分型与肝癌细胞体外化疗药物敏感性的关系

目的:观察不同中医辨证分型肝癌患者肝癌细胞体外化疗药物敏感性.方法:选取60例肝癌切除标本,利用MTT法测定不同证型肝癌患者对6种常用化疗药物的体外敏感性.结果:脾气虚组、肝气郁结组、瘀血阻络组之间各药敏感性有逐步下降趋势,但无统计学意义;各药在肝瘀脾虚阻络组敏感性明显下降.结论:不同中医辨证分型肝癌患者对化疗药物的敏感性存在一定差异,中西医结合个体化治疗肝癌,就是要根据具体患者药敏实验结果结合辨证论治设计治疗方案.     

养心康对心功能不全动物模型的血流动力学研究

目的：建立心功能不全的动物模型,探讨养心康在血流动力学方面的作用及其作用机理。方法：通过增加腹主动脉压力负荷而建立心功能不全的兔模型,以高、低两种不同剂量的养心康治疗20d,以心宝作为药物对照,并设立模型对照和空白对照,观察各组模型血流动力学指标及血液中一氧化氮水平在治疗前后的变化。结果：大剂量养心康能明显降低心衰模型的心率、收缩压、左室舒张末压（LVEDP）,心室等容收缩期中室内压上升的最大速率（＋dp/dtmax)及心室等容舒张期中室内压下降的最大速率（－dp/dtmax),且呈剂量依赖性,与心室对照组比具有显著性差异。结论：养心康能剂量依赖性地改善心衰模型的血流动力学指标,延缓心衰的进程,其作用可能与一氧化氮的降低有关。     

黄芪多糖对有核细胞分泌造血细胞因子的影响

目的 研究注射用黄芪多糖对分离的人外周血单个核细胞(PBMC)分泌造血细胞因子的影响，以支持黄芪多糖的造血活性。方法 取正常人浓缩白细胞，分离出人PBMC单细胞悬液，进行细胞培养，采用酶联免疫吸附方法(EUSA)，测定上清液中的粒细胞集落刺激因子(G—CSF)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(CM—CSF)等造血细胞因子。结果 注射用黄芪多糖能刺激人PBMC产生大量的G—CSF和CM—CSF，表现出明显的量效关系和时效关系。结论 注射用黄芪多糖在体外能刺激人PBMC产生G—CSF和CM—CSF造血细胞因子，且呈明显的量效关系和时效关系，提示其有升高白细胞的作用，展示其临床应用前景。     

肌生注射液保存离体心脏的实验研究

目的 观察肌生注射液保存离体心脏的效果。方法 在改良的Euro-collins液(mEC液)中添加肌生注射液，采用小鼠Langendorff离体心脏灌注模型，分别用mEC液和含肌生注射液的mEC液简单冷保存小民心脏3h、7．5h、8．5h。观察保存3h的心功能、冠脉流量(CF)及心肌含水量；保存7．5h、8．5h后的心脏复活率、CF、心肌含水量及心脏复跳需时。结果 保存3h再灌注20min、30min、40min，肌生注射液的3个剂量组的心功能、CF均好于mEC液组，大剂量组最明显。大、中剂量组的心肌含水量显著低于mEC液组(P＜0．01)。保存7．5h的心脏复活率高于mEC液组，心肌含水量明显低于mEC液组(P＜0．05)。保存8．5h的心脏复活率显著高于mEC液组(P＜0．01)。结论 肌生注射液能提高心脏保存效果，延长心脏保存时间。     

生脉成骨方对内毒素致血管内皮细胞损伤的保护作用研究

目的 探讨生脉成骨方对内毒素致血管内皮细胞(EC)损伤的影响。方法 从兔主动脉取材进行EC培养，分别用内毒素和生脉成骨方含药血清对培养的EC进行处理，通过光镜、电镜及MTT法观察EC形态结构及功能的变化。结果 内毒素对EC能产生病理性损伤，而生脉成骨方含药血清组细胞形态基本正常；MTT法结果提示，内毒素对EC的增殖具有抑制作用，减弱其功能活性；而生脉成骨方含药血清能增加EC的代谢活性，促进其增殖。结论 生脉成骨方对内毒素导致的EC损伤有保护作用。     

雄风胶囊壮阳作用的实验研究

初步探讨了雄风胶囊的壮阳作用。实验证明：本品能明显提高大鼠的交配能力；提高去势大鼠阴茎对外部刺激的兴奋性；初步证明其具有促进蛋白质合成代谢作用（同化激素作用）。     

醒脑饮溶血栓作用观察

醒脑饮按相当于推荐临床剂量（ＡＣＤ）５、１０、２０倍，分别给大鼠灌胃（ｉｇ），阳性药对照组ｉｇ相当于１０倍ＡＣＤ的脑血康，连续给药７天，第７天给药后２ｈ，测优球蛋白溶解时间（ＥＬＴ），纤维蛋白降解产物（ＦＤＰ），动静脉旁路血栓。还一次性给药测Ｃｈａｎｄｌｅｒ氏体外血栓、体外血浆凝块溶解时间。结果体外血浆凝块溶解时间，ＦＤＰ在给药组之间，给药组与对照之间无明显差异；与对照组相比，中、大剂量组及阳性药对照组的Ｃｈａｎｄｌｅｒ氏体外血栓的长度、干重、湿重，动静脉旁路血栓于、湿重及ＥＬＴ统计上有显著性差异。且大剂量组的作用优于小剂量组。结果表明，醒脑饮能增加纤溶系统的活性，其体外试验和体内给药都有溶血栓作用，且大、中、小剂量组显现出明显的量效关系。     

参娥补天饮的补肾壮阳作用实验研究

用果蝇性活力试验、小鼠抗应激试验、小鼠“阳虚”模型壮阳试验、对幼年小鼠性腺发育的影响及对大鼠肾上腺内维生素 C 含量的影响等实验,对“参蛾补天饮”的补肾壮阳作用进行评价,并用传统方剂“龟龄集”作对照比较,认识到“参蛾补天饮”具有显著的补肾壮阳作用,值得进一步开发研究成为临床治疗“阳虚”证的新中药制剂。     

益气养阴解毒方对肺癌患者血清血管内皮生长因子及免疫功能的影响

目的：观察益气养阴解毒方对非小细胞肺癌（NSCLC）患者血清血管内皮生长因子（VEGF）及免疫功能的影响。方法：51例NSCLC患者，随机分为中药组、化疗组和化疗＋中药组，观察各组疗效以及临床证候、体力状况、免疫指标、血清VEGF变化情况。结果：中药组和化疗＋中药组治疗后肿瘤稳定率均高于化疗组，但差异无显著性，临床症状、体力状况改善均明显优于化疗组（均P〈0．05）。中药＋化疗组能明显提高白细胞介素2水平，下调可溶性白细胞介索2受体（SIL-2）水平（均P〈0＋01），且疗效明显优于化疗组（P〈0．05）；中药组能显著提高T细胞总数，下调SIL-2水平（P〈0．05或P〈0．01）。中药＋化疗组治疗后血清VEGF水平明显下降（P〈0．01）。结论：益气养阴解毒方治疗NSCLC，有缩小稳定瘤灶，提高免疫功能和生存质量，降低血清VEGF水平的作用。     

二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化中医方证研究

目的：探讨二甲基亚硝胺（DMN）大鼠肝纤维化的中医方证。方法：腹腔注射法制备DMN大鼠肝纤维化模型，分别采用5首不同功效的经典方治疗两周，观察各组大鼠肝组织病理学、羟脯氨酸（Hyp）含量及肝功能变化。结果：造模4周后大鼠形成典型小结节性肝硬化，6周后模型组大鼠肝组织损伤较4周时有所缓解。与6周模型组相比，茵陈蒿汤组大鼠肝组织病理变化、Hyp含量及肝功能均显著改善（P〈0．05或P〈0．01）；黄芪汤组大鼠肝组织病理变化、Hyp古量亦显著改善（P〈0．05或P〈0．01）。结论：茵陈蒿汤、黄芪汤能够有效逆转DMN大鼠肝纤维化，成型期DMN肝纤维化大鼠的主要中医方证为湿热、瘀热内蕴兼气虚。