黄芪散有效部位群对Ⅱ型糖尿病大鼠肝脏AMPK/SREBP-1c通路的影响

目的观察黄芪散有效部位群(HQS)对Ⅱ型糖尿病(T2DM)大鼠肝脏单磷酸腺苷活化蛋白激酶/固醇调控元件结合蛋白-1c(AMPK/SREBP-1c)通路的影响。方法采用低剂量链脲佐菌素(STZ)腹腔注射联合高脂饲料喂养建立T2DM大鼠模型,造模同时给予HQS(2.4 g·kg~(-1))灌胃给药,连续16周。测定大鼠血浆总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、游离脂肪酸(NEFA)及肝脏TC、TG含量;HE、油红O染色法观察肝脏病理变化;Western Blot法检测肝组织中AMPK(Thr172)、乙酰辅酶A羧化酶1(ACC1)(Ser79)、SREBP-1c(Ser372)、胰岛素受体底物-2(IRS-2)(Ser731)、蛋白激酶B(Akt)(Ser473)磷酸化蛋白以及AMPKα、SREBP-1c核蛋白(nSREBP-1c)、ACC1、脂肪酸合成酶(FAS)、IRS-2、Akt蛋白的表达;qPCR法检测肝组织中SREBP-1c、ACC1、FAS、硬脂酰辅酶A去饱和酶(SCD1)、IRS-2、Akt mRNA的表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血浆TC、TG、NEFA及肝脏TC、TG水平均显著升高(P 0.05);肝组织存在明显的脂肪变性;p-SREBP-1c、IRS-2蛋白的表达和p-AMPK/AMPKα、p-ACC1/ACC1、p-Akt/Akt比值显著降低(P 0.05,P 0.01),AMPKα、n SREBP-1c、ACC1、FAS蛋白表达和p-IRS-2/IRS-2比值显著升高(P 0.05,P 0.01);SREBP-1c、ACC1、FAS、SCD1 mRNA表达水平明显上调(P 0.05,P 0.01),IRS-2、Akt mRNA表达下降(P 0.05)。与模型组比较,HQS组大鼠血浆TC、TG、NEFA及肝脏TC、TG水平显著降低(P 0.05);肝组织脂肪变性明显减轻;p-SREBP-1c、IRS-2蛋白表达和p-AMPK/AMPKα、p-ACC1/ACC1、p-Akt/Akt比值显著升高(P 0.05,P 0.01),nSREBP-1c、ACC1、FAS蛋白表达和p-IRS-2/IRS-2比值显著降低(P 0.05,P 0.01);SREBP-1c、ACC1、FAS、SCD1 mRNA表达水平明显下调(P 0.05),IRS-2 mRNA表达显著上调(P 0.05)。结论 HQS可能通过调节AMPK/SREBP-1c通路,减少脂质合成,改善T2DM大鼠肝脏胰岛素抵抗。     

降脂理肝汤对体外诱导的非酒精性脂肪肝细胞模型SREBP-1c通路的影响

目的:观察降脂理肝汤对油酸诱导的HepG2细胞中固醇调节元件结合蛋白1c(sterol regulatory element binding protein-1c,SREBP-1c)通路相关蛋白表达的影响,探讨降脂理肝汤治疗非酒精性脂肪肝的可能机制。方法:采用油酸诱导HepG2细胞建立非酒精性脂肪肝细胞模型,降脂理肝汤4 mg/ml和阿托伐他汀0.005 mg/ml干预后,利用油红O染色定性定量检测细胞内脂质蓄积情况;试剂盒检测细胞内TG、TC和FFA水平;Western bolt观察和分析细胞p-SREBP-1c、SREBP-1c、FAS、ACC1和SCD1蛋白表达的变化。结果:油酸诱导的HepG2细胞脂质蓄积明显;细胞内TG、TC和FFA含量明显升高,细胞p-SREBP-1c蛋白表达水平显著下调,SREBP-1c、FAS、ACC1和SCD1蛋白表达水平显著上调。降脂理肝汤和阿托伐他汀干预显著降低油酸诱导的HepG2细胞TG、TC和FFA含量。细胞SREBP-1c、FAS、ACC1和SCD1蛋白表达显著下调;此外,降脂理肝汤干预显著减少油酸诱导的HepG2细胞脂质蓄积,显著上调细胞p-SREBP-1c蛋白表达水平。结论:降脂理肝汤可能通过抑制SREBP-1c通路干预NAFLD。     

电针对高脂诱导胰岛素抵抗大鼠肝脏固醇调节元件结合蛋白-1c、脂肪酸合成酶的影响

目的:观察电针对胰岛素抵抗(IR)大鼠肝组织固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(FAS)的影响,探讨电针治疗IR的作用机制。方法:将40只雄性SD大鼠随机选取8只作为空白组,其余通过高脂饮食诱导IR模型,选取24只造模成功的大鼠按随机区组原则分为模型组(8只)、西药组(8只)和电针组(8只)。西药组以吡格列酮(10mg/kg)灌胃,电针组取双侧"丰隆""三阴交"穴电针治疗,1次/日,连续2周。观察各组大鼠葡萄糖输注率(GIR)、空腹血糖(FBG)、血清胰岛素(FINS)、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)、游离脂肪酸(FFA)、甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL)、高密度脂蛋白(HDL),蛋白免疫印迹法检测肝组织SREBP-1c、FAS蛋白的表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠GIR显著降低(P0.01),HOMA-IR显著升高(P0.01),FBG、FINS、FFA、TG、TC、LDL含量显著升高(P0.01),HDL含量显著降低(P0.01),SREBP-1c、FAS蛋白表达水平显著升高(P0.01)。与模型组比较,电针组、西药组大鼠GIR显著升高(P0.01),HOMA-IR显著降低(P0.01),FBG、FINS、FFA、TG、TC、LDL含量显著降低(P0.05,P0.01),HDL含量显著升高(P0.01),SREBP-1c、FAS蛋白表达水平显著降低(P0.01)。结论:电针可明显改善IR大鼠的脂质代谢紊乱,其作用机制可能与电针降低肝组织SREBP-1c、FAS的表达,由此下调脂肪酸合成相关酶的活性,使肝组织内合成TG、TC减少,改善肝组织IR有关。     

6-姜烯酚通过抑制SCD1表达改善db/db小鼠肝脏脂肪变性的研究

目的探讨6-姜烯酚对db/db小鼠肝脏脂质代谢的影响及机制。方法将24只db/db小鼠随机分为模型组、6-姜烯酚低剂量组(10 mg·kg^-1)和6-姜烯酚高剂量组(40 mg·kg^-1),每组8只,雌雄各半;另取8只BKS小鼠(雌雄各半)作为正常对照组;灌胃给药,每日1次,连续21 d。采用酶法检测肝脏组织甘油三酯(TG)含量;采用油红O染色法检测肝脏组织脂质沉积情况;采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qPCR)法检测碳水化合物反应元件结合蛋白(ChREBP)、固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c)、脂肪酸合酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、二酰基甘油酰基转移酶2(DGAT2)、硬脂酰辅酶A去饱和酶1(SCD1)、酰基辅酶A氧化酶(ACOX)及肉碱棕榈酰基转移酶1a(CPT1a)的mRNA表达;采用Western Blot法和免疫荧光染色法检测肝脏组织SCD1蛋白的表达情况。结果与正常对照组比较,模型组小鼠肝脏组织的TG含量和油红O染色面积以及SREBP-1c、ACC、FAS、DGAT2、SCD1 mRNA表达显著上调(P<0.05,P<0.01),ACOX、CPT1a mRNA表达显著下调(P<0.05)。与模型组比较,6-姜烯酚高剂量组的小鼠肝脏组织TG含量和油红O染色面积明显减少(P<0.01),SCD1在mRNA水平和蛋白水平的表达均显著下调(P<0.05,P<0.01),与免疫荧光染色法检测结果一致。结论6-姜烯酚能够改善db/db小鼠的肝脏脂质沉积,其机制可能与下调SCD1的表达有关。     

牛樟芝滴丸对大鼠非酒精性脂肪肝相关基因表达的影响

目的:研究牛樟芝滴丸对大鼠非酒精性脂肪肝(NAFLD)相关基因表达的影响。方法:SD大鼠48只,随机分成6组:正常对照组,模型组,水飞蓟素组(20 mg·kg-1),牛樟芝滴丸高、中、低剂量组(320、160、80 mg·kg-1),造模成功后给药6周。实验结束后,分别测定大鼠肝组织脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)、固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)的mRNA和蛋白表达。结果:与模型组比较,牛樟芝滴丸低剂量组SREBP-1c mRNA和蛋白表达以及FAS蛋白表达显著降低(P 0. 05,P 0. 01),但FAS mRNA表达无显著差异; PPAR-α蛋白表达显著升高(P 0. 01),PPAR-αmRNA表达与ACC mRNA和蛋白表达均无统计学意义;中、高剂量组SREBP-1c、FAS mRNA和蛋白表达均显著降低(P 0. 05,P 0. 01),而PPAR-α、ACC mRNA和蛋白表达均显著升高(P 0. 01)。结论:牛樟芝滴丸对大鼠NAFLD的相关基因表达具有明显的影响。     

消痰化瘀中药对NAFLD大鼠SREBP 1c/FAS/ACCmRNA表达的影响

目的观察消痰化瘀中药对非酒精性脂肪肝病(NAFLD)大鼠肝脏SREBP-1c、FAS和ACCmRNA表达的影响,探讨其治疗NAFLD的作用机制。方法将SPF级60只SD大鼠随机分正常组、模型组、阳性药(东宝肝泰)组以及消痰化瘀中药高、中、低剂量组,通过高脂饲料喂养复制NAFLD大鼠模型,造模同时给予相应药物治疗,8周后观察各组大鼠血清TC、TG、FFA、ALT、AST和肝组织中TC、TG、FFA的活性或含量改变,观察肝脏SREBP-1c、FAS和ACCmRNA的表达变化以及肝组织病理形态学改变。结果与模型组比较,消瘀化痰中药高、中、低剂量组血中TG、TC、FFA、ALT、AST和肝组织中TG、TC、FFA的活性或含量明显降低(P 0.05),肝脏SREBP-1c、FAS和ACCmRNA的表达水平明显下调(P0.05)。结论调控SREBP-1c、FAS和ACC基因的过度表达,抑制脂质合成,促进脂肪酸氧化,减少肝脏脂质沉积,可能是消痰化瘀中药防治NAFLD的作用机理之一。     

橙皮苷改善肥胖小鼠糖脂代谢的机制研究

该研究阐明橙皮苷对高脂饮食诱导的肥胖小鼠糖脂代谢紊乱的干预机制。40只雄性C57小鼠,根据饮食随机分为对照组、肥胖组、橙皮苷低剂量组及高剂量组,每组各10只。喂养16周后检测各组小鼠体重、肝指数、内脏脂肪指数,评价糖代谢状况(葡萄糖糖耐量、血糖、胰岛素水平及HOMA-IR)及血脂情况;Real-time PCR法检测肝脏胰岛素信号通路(IR,IRS1,Glut2,Glut4)、脂代谢途径(SREBP-1c,FAS,ACC,PPARα)关键基因及AMPK表达水平。经过16周喂养,肥胖组小鼠明显肥胖,体脂沉积显著(P0.01),葡萄糖耐量降低(P0.05)。血糖、血脂、胰岛素水平及HOMA-IR指数均高于对照组(P0.05)。橙皮苷干预后,无论低剂量组还是高剂量组小鼠体重、血糖、血脂均较肥胖组明显降低(P0.05),血清胰岛素水平及HOMA-IR亦显著下降(P0.05)。其中大剂量组获益明显(P0.05)。橙皮苷能够上调AMPK mRNA(P0.05),继而影响胰岛素信号通路中IR,IRS1,Glut2/4的mRNA表达(P0.05),同时降低脂代谢相关基因(SREBP-1c,FAS,ACC)的表达(P0.05),并升高PPARαmRNA水平(P0.05)。大剂量组变化尤为明显(P0.05)。橙皮苷降低了肥胖、高血糖、高血脂,缓解了胰岛素抵抗,这一作用可能与其活化AMPK继而调控胰岛素信号通路及脂质代谢信号通路等密切相关。     

沙苑子苷A对L02细胞脂肪变性模型的降脂作用和机制探讨

目的建立人正常肝细胞株(L02)脂肪变体外模型,探讨沙苑子苷A对脂肪变性肝细胞的降脂作用及相关机制。方法采用1 mmol/L的游离脂肪酸FFA(油酸∶棕榈酸为2∶1)诱导24小时建立L02细胞脂肪变模型,然后分为空白组对照组、模型组、沙苑子苷A低、中、高剂量组(25、50、100μM),按照试剂盒检测甘油三酯(triglyceride, TG)、胆固醇(cholesterol, TC)、谷丙转氨酶(glutamic pyruvic transaminase,ALT)、谷草转氨酶(glutamic oxaloacetic transaminase,AST)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)的水平,Elisa法检测白介素6(interleukin-6,IL-6)、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)的水平,qPCR检测固醇调节元件结合蛋白-1c(sterol regulatory element-binding protein 1C,SREBP-1c)、脂肪酸合成酶(fatty acid synthase, FAS)、过氧化物酶体增殖物激活受体α(peroxisome proliferator activated receptorα,PPARα)、肉毒碱棕榈酰基转移酶1A(carnitine Palmitoyltransferase 1A,CPT-1A) mRNA的表达,Western blot检测SREBP-1c、FAS、PPARα、CPT-1A蛋白的表达。结果与模型组比较,沙苑子苷A预处理能显著降低细胞TG、TC、ALT、AST、LDH、MDA的含量(P0.05,P0.01),显著升高SOD活性(P0.01),显著降低IL-6、TNF-α的水平(P0.01);同时,与模型组比较,沙苑子苷A预处理能显著降低肝细胞SREBP-1c、FAS mRNA和蛋白的表达量(P0.01),显著增加肝细胞PPARα、CPT-1A mRNA和蛋白的表达量(P0.01)。结论 FFA成功诱导了L02细胞的脂肪变性,沙苑子苷A对脂肪变的肝细胞具有良好的降脂和保肝作用,其降脂机制可能是通过抑制肝细胞SREBP-1c的表达,降低TG合成途径中限速酶FAS水平,降低TG合成速度;同时上调PPARα蛋白表达,提高脂肪酸β氧化途径中CPT-1A水平,加速脂肪酸的β氧化,减少TG合成,从两方面共同作用从而达到降脂和保肝效果。     

五味子乙素对NAFLD细胞模型肝脂质堆积、内质网应激信号通路蛋白及脂肪酸合成相关基因表达的影响

目的观察五味子乙素(Sch B)对非酒精性脂肪肝(NAFLD)肝脂质堆积、内质网应激信号通路蛋白及脂肪酸合成相关基因表达的影响,探讨其降脂作用机制。方法培养正常人L02细胞株,加入游离脂肪酸的混合物(油酸∶软脂酸=2∶1),培养24 h诱导肝脂肪变性,建立NAFLD细胞模型。给予不同浓度SchB干预细胞模型,流式细胞术检测脂肪堆积,检测三酰甘油(TG)含量,Western blot检测内质网应激信号通路相关蛋白Bip、PERK、p-PERK、p-eIF2α、SREBP-1的表达,RT-PCR检测脂肪酸合成相关基因硬脂酰CoA去饱和酶(SCD)、甘油-3-磷酸酰基转移酶(GPAT)、乙酰CoA羧化酶(ACC)、脂肪酸合成酶(FAS)的表达。结果体外实验成功建立L02细胞脂肪堆积模型。与模型组比较,SchB组脂质堆积显著降低(P0.05),且SchB可剂量依赖性降低TG水平,差异有统计学意义(P0.05,P0.01);模型组较对照组Bip、SREBP-1、p-PERK、p-eIF2α蛋白和ACC、FAS、GPAT基因表达均上调,SCD基因表达下调;与模型组比较,SchB各浓度组内质网应激信号通路蛋白和ACC、FAS、GPAT基因表达均明显下调,SCD基因表达明显上调,差异有统计学意义(P0.05,P0.01)。结论 SchB可能通过抑制内质网应激信号通路蛋白的表达,进而影响脂肪合成相关基因表达,从而降低肝脏TG的堆积。     

甘草主要成分改善L6大鼠成肌细胞胰岛素抵抗的机制

目的:确定甘草主要化学成分是否通过调节L6大鼠成肌细胞内糖原合成、糖酵解途径和脂肪酸合成改善胰岛素抵抗。方法:利用0.05 mmol·L^-1棕榈酸(PA)孵育9 h诱导L6大鼠成肌细胞建立胰岛素抵抗(IR)细胞模型;实验设正常组,模型组,甘草酸(GA,25μmol·L^-1)组,18β-甘草次酸(18β-GA,25μmol·L^-1)组,异甘草素(ILG,25μmol·L^-1)组和异甘草苷(ILQ,25μmol·L^-1)组;葡萄糖试剂盒检测细胞培养液上清葡萄糖含量;糖原检测试剂盒测定肌糖原含量;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c),脂肪酸合成酶(FAS)和糖原合成酶激酶3β(GSK3β)的蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测糖酵解关键酶的mRNA水平。结果:与正常组比较,模型组IR-L6大鼠成肌细胞中葡萄糖消耗率显著下调(P<0.01),细胞中的糖原含量减少(P<0.05),SREBP-1c和FAS蛋白表达减少(P<0.05,P<0.01),磷酸果糖激酶1(PFK1),丙酮酸激酶(PK)和己糖激酶(HK)mRNA水平下调(P<0.05),GSK3β蛋白表达增加(P<0.05);与模型组比较,各给药组GA,18β-GA和ILG可以明显增加IR-L6大鼠成肌细胞中糖原含量(P<0.05,P<0.01),GA,18β-GA和ILQ则明显增加SREBP-1c蛋白表达(P<0.05,P<0.01),而GA,18β-GA,ILG和ILQ可明显增加FAS的蛋白表达(P<0.05,P<0.01)以及PFK1,PK和HK mRNA表达(P<0.05,P<0.01),但下调GSK3β蛋白表达(P<0.05)。结论:甘草主要成分通过促进糖酵解和糖原合成发挥降糖作用,并且可通过调节脂肪酸合成改善胰岛素抵抗。     

Reduction of lipid accumulation in HepG2 cells by luteolin is associated with activation of AMPK and mitigation of oxidative stress

The present study was carried out to investigate the lipid-lowering effect of luteolin by using a cell model of steatosis induced by palmitate. Incubation of HepG2 cells with palmitate markedly increased lipid accumulation (Oil Red O staining), the genes involved in lipogenesis, including fatty acid synthase (FAS) and its upstream regulator sterol regulatory element binding protein 1c (SREBP-1c), and reactive oxygen species (ROS) production. Luteolin enhanced the phosphorylation of AMP-activated protein kinase α (AMPKα) and its primary downstream targeting enzyme, acetyl-CoA carboxylase (ACC), up-regulated gene expression of carnitine palmitoyl transferase 1 (CPT-1), which is the rate-limiting enzyme in mitochondrial fatty acid β-oxidation, and down-regulated SREBP-1c and FAS mRNA levels in the absence and presence of palmitate. In addition, luteolin significantly decreased ROS production and ameliorated lipid accumulation in HepG2 cells caused by palmitate. Furthermore, intracellular triglyceride (TG) measurement indicated that the luteolin-mediated reduction of enhanced TG caused by palmitate was blocked by pretreatment with the AMPK inhibitor, compound C. The results suggested that the lipid-lowering effect of luteolin might be partially mediated by the up-regulation of CPT-1 and down-regulation of SREBP-1c and FAS gene expression, possibly by activation of the AMPK signaling pathway, and partially might be through its antioxidative actions.     

消脂汤对非酒精性脂肪性肝病模型大鼠治疗的作用及机制

目的:观察消脂汤对非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)模型大鼠的治疗作用,并探讨其机制。方法:62只雄性SPF级SD大鼠,随机分为造模组(51只)和正常组(11只)。采用高脂饮食法复制大鼠NAFLD模型,造模成功后随机均匀分为模型组、非诺贝特组(0.05 g·kg-1·d-1)、消脂汤高、中、低剂量组(42.5,21.5,10.6 g·kg-1·d-1)。消脂汤组和非诺贝特组灌喂相应药物,正常组和模型组灌喂等体积生理盐水。4周后处死动物,全自动生化仪检测空腹血糖(FBG)、总胆固醇(TG)、甘油三酯(TC)、丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸转氨酶(AST)、谷氨酰胺转肽酶(GGT)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、游离脂肪酸(FFA),放射免疫法检测胰岛素(INS),计算胰岛素抵抗指数(HOMAR-IR),HE染色观察肝脏病理变化。RT-PCR方法检测肝组织固醇调节元件结合蛋白(SREBP-1c)mRNA的表达水平;Western blot方法检测肝组织SREBP-1c的蛋白表达水平。结果:与正常组比较,模型组血脂,肝脂,FFA,FINS,HOMAR-IR,MDA,SREBP-1c mRNA及蛋白表达显著升高(P<0.05或P<0.01);SOD含量显著下降(P<0.01)。与模型组比较,各治疗组血脂,肝功,肝脂,FFA,FINS,HOMAR-IR,MDA,SREBP-1c mRNA及蛋白表达水平显著降低(P<0.05或P<0.01),以消脂汤高剂量组尤为显著(P<0.01);SOD含量显著升高(P<0.05或P<0.01)。结论:消脂汤能显著改善NAFLD的胰岛素抵抗和氧化应激,减轻肝脏脂肪蓄积和炎症反应,下调SREBP-1c mRNA和蛋白表达是其减轻肝脏脂肪蓄积的可能机制之一。     

Effects of Soothing Liver and Invigorating Spleen Recipe on Lipid Metabolism Disorders in Kupffer Cells of NAFLD Rats by LXRα/SREBP-1c Signal Pathway

Objective To investigate the mechanism of lipid metabolism disorders in Kupffer cells(KCs) of non-alcoholic fatty liver disease(NAFLD) rats mediated by LXRα-SREBP-1c pathway and the interference of soothing liver and invigorating spleen recipe(SLISR) on it. Methods SD male rats were randomly divided into five groups: normal, model,soothing liver recipe(SLR), invigorating spleen recipe(ISR), and soothing liver and invigorating spleen recipe(SLISR) groups. The rats in treatment groups wereadministered for 8 weeks. The liver tissue was stained with HE and oil red O. The levels of hepatic lipid and blood lipid were measured by biochemical analyzer. KCs were isolated from the livers of rats to evaluate the expression of LXRα, SREBP-1C, and FAS mRNA by real-time fluorescence quantitative PCR tests; LXRα, SREBP-1C, and FAS proteins were measured by Western blotting. Results The HE and oil red O staining results showed that the model rats successfully reproduced typical pathogenetic and histopathological features of NAFLD. The levels of hepatic lipid and blood lipid in the model rats were dramatically increased. Compared with the model group, the values of hepatic lipid and blood lipid in the treatment groups were significantly ameliorated(P 0.05, 0.01). The yields of purified KCs from each rat were 2×107-3×107. The viability ofKCs was higher than 95%, with the purity over 90.18%. Compared with the model group, the expression of LXRα, SREBP-1C, and FAS mRNA and proteins was decreased in all treatment groups, especially in the SLR group(P 0.05). Conclusion SLISR may protect liver against injury included by lipid metabolism disorders in KCs through LXRα/SREBP-1c signaling pathway, which may be an important mechanism for the preventionand treatment of NAFLD.     

黄芪散对高糖作用下成骨细胞相关功能的影响

目的:观察黄芪散含药血清对高糖条件下成骨细胞功能的影响及与糖尿病性骨质疏松发病机制相关基因的影响,探讨黄芪散(HQS)对糖尿病性骨质疏松症的疗效机制。方法:选用健康清洁级5周龄Wistar大鼠10只,随机分为正常组和药物组。制备黄芪散含药血清和空白血清,选用健康清洁级新生大鼠乳鼠4只,体外以酶消化法分离培养新生乳鼠颅骨成骨细胞(Ob),行细胞计数(CCK-8)法测定高糖条件下(25.5 mmol·L~(-1))5%,10%,20%,30%含药血清对细胞增殖的影响,选取增殖活性最佳血清浓度,采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)和蛋白免疫印迹(Western blot)法检测黄芪散对成骨功能相关基因骨桥蛋白(OPN),骨钙素(OC),碱性磷酸酶(ALP)和胰腺-骨骼相关基因骨保护素(OPG),叉头转录因子1(Fox O1)表达的影响。结果:10%和30%血清浓度组细胞增殖较空白组有明显升高(P0.05);20%血清浓度组较空白组有显著升高(P0.01)。与空白组比较,5%浓度条件下,OPN,OPG mRNA表达明显下调(P0.05);10%浓度条件下,OC,ALP,OPN mRNA表达明显上调(P0.05,P0.01);OPG,Fox O1 mRNA较空白组表达显著下调(P0.01)。20%浓度和10%浓度条件差异性一致,OPN,OPG,Fox O1 mRNA影响趋势较10%浓度药物血清组更明显。20%浓度血清条件下,与空白组比较,OC和OPN蛋白表达显著上调(P0.01),OPG蛋白表达显著下调(P0.01)。结论:黄芪散对糖尿病性骨质疏松的疗效机制可能与其促进高糖作用下成骨细胞增殖作用有关,与下调胰腺-骨骼相关基因OPG,Fox O1表达有关。     

雷公藤红素对非酒精性脂肪肝L02细胞内质网应激的影响及机制

目的:通过雷公藤红素干预非酒精性脂肪肝L02细胞模型来探讨雷公藤红素调节肝L02细胞脂质代谢紊乱及非酒精性脂肪肝L02细胞内质网应激的相关机制。方法:将肝L02细胞分为空白组,模型组,雷公藤红素低剂量组(0. 5 mg·L~(-1)),雷公藤红素高剂量组(1 mg·L~(-1))和辛伐他汀组(SIM,6 mg·L~(-1))进行培养。检测肝L02细胞内胆固醇(TC)和甘油三酯(TG)含量变化;用油红O染色观察肝L02细胞脂质沉积情况;逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和蛋白免疫印迹法(Western blot)分别检测各组肝L02细胞中内质网应激(ERS)相关信号分子活化转录因子6(ATF6),葡萄糖调节蛋白78(GRP78),肌醇需求酶1(IRE1),固醇调节元件结合蛋白裂解激活蛋白(SCAP),固醇调节元件结合蛋白1c(SREBP-1c)和固醇调节元件结合蛋白-2(SREBP-2)的mRNA转录以及蛋白表达水平。结果:非酒精性脂肪肝病(NAFLD)组肝L02细胞中TC及TG含量均高于空白组(P 0. 05),雷公藤红素低、高剂量组及SIM 6 mg·L~(-1)组肝L02细胞中TC及TG含量较NAFLD组均有不同程度减少(P 0. 05)。油红O染色显示NAFLD组肝L02细胞内含有大量红染脂质颗粒沉积,而雷公藤红素低、高剂量组及SIM 6 mg·L~(-1)组红染脂质颗粒较NAFLD组均有不同程度减少。RT-PCR和Western blot结果显示,NAFLD组肝L02细胞内ERS相关信号分子ATF6,GRP78,IRE1,SCAP,SREBP-1c和SREBP-2的mRNA转录和蛋白表达水平均高于空白组(P 0. 05);雷公藤红素低、高剂量组和SIM 6 mg·L~(-1)组肝L02细胞内ATF6,GRP78,IRE1,SCAP,SREBP-1c和SREBP-2的mRNA转录及蛋白表达水平均低于NAFLD组(P 0. 05)。而雷公藤红素高剂量组与SIM 6 mg·L~(-1)组间肝L02细胞内ATF6,GRP78,IRE1,SCAP,SREBP-1c和SREBP-2 mRNA转录及蛋白表达水平差异不具有统计学意义。结论:雷公藤红素可通过下调肝L02细胞ERS时相关信号分子ATF6,GRP78,IRE1,SCAP,SREBP-1c和SREBP-2的表达来减轻肝L02细胞脂质代谢紊乱,从而改善NAFLD。     

三黄活络方对早期糖尿病肾病大鼠血糖,肾功能,SREBP-1c,SREBP-2c的影响

目的:观察三黄活络方对早期糖尿病肾病大鼠血糖,肾功能,固醇调节元件结合蛋白-1c(SREBP-1c),SREBP-2c的影响。方法:采用链脲佐菌素诱导的方法建立大鼠糖尿病模型,将糖尿病模型成功的大鼠随机分为模型组、阳性药组及三黄活络方低、中、高剂量组,其它组行切除大鼠右侧肾脏术后ig,阳性药组给予1.3 mg·kg-1盐酸贝那普利,三黄活络方低剂量组、中剂量组和高剂量组均给予中药颗粒,剂量分别为5,15,30 g·kg-1。正常组和模型组均ig给予蒸馏水,所有组均连续ig 8周。观察大鼠血糖(GLU),糖化血红蛋白(Hb A1c),血尿素氮(BUN),肌酐(SCr),尿蛋白(Pro),SREBP-lc,SREBP-2c的水平。结果:与正常组比较,模型组的GLU和Hb A1c均显著性升高(P0.01),阳性药组、各三黄活络组的GLU和Hb A1c也均显著性升高(P0.01);与模型组比较,阳性药组、各三黄活络组的GLU均降低(P0.01),阳性药组、中、高剂量组的Hb A1c均降低(P0.01),低剂量组的Hb A1c降低(P0.05)。与正常组比较,模型组的SCr,BUN,Pro,SREBP-1c及SREBP-2c均显著性升高(P0.01),阳性药组和各三黄活络组的SCr,BUN,Pro,SREBP-1c及SREBP-2c也均显著性升高(P0.01)。与模型组对比,阳性药组、各三黄活络组的SCr,BUN,Pro,SREBP-1c及SREBP-2c均较低(P0.01)。与阳性药组对比,低剂量组的SCr,BUN,Pro,SREBP-1c及SREBP-2c均较高(P0.01),中剂量组的的SCr,BUN,Pro,SREBP-1c及SREBP-2c均较高(P0.05)。结论:三黄活络方能改善糖尿病肾病大鼠SCr,BUN,Pro,SREBP-1c及SREBP-2c水平,对糖尿病肾病大鼠肾损伤有一定的保护作用。     

Hypolipogenic effects of Icariside E4 via phosphorylation of AMPK and inhibition of MID1IP1 in HepG2 cells

Though icariside E4 (IE4) is known to have anti-noceptive, anti-oxidant, anti-Alzheimer and anti-inflammatory effects, there was no evidence on the effect of IE4 on lipid metabolism so far. Hence, the hypolipogenic mechanism of IE4 was investigated in HepG2 hepatocellular carcinoma cells (HCCs) in association with MID1 Interacting Protein 1(MID1IP1) and AMPK signaling. Here, IE4 did not show any toxicity in HepG2 cells, but reduced lipid accumulation in HepG2 cells by Oil Red O staining. MID1IP1 depletion decreased the expression of SREBP-1c and fatty acid synthase (FASN) and induced phosphorylation of ACC in HepG2 cells. Indeed, IE4 activated phosphorylation of AMPK and ACC and inhibited the expression of MID1IP1 in HepG2 cells. Furthermore, IE4 suppressed the expression of SREBP-1c, liver X receptor-α (LXR), and FASN for de novo lipogenesis in HepG2 cells. Interestingly, AMPK inhibitor compound C reversed the ability of IE4 to reduce MID1IP1, SREBP-1c, and FASN and activate phosphorylation of AMPK/ACC in HepG2 cells, indicating the important role of AMPK/ACC signaling in IE4-induced hypolipogenic effect. Taken together, these findings suggest that IE4 has hypolipogenic potential in HepG2 cells via activation of AMPK and inhibition of MID1IP1 as a potent candidate for treatment of fatty liver disease.     

丹参素对高脂血症大鼠脂代谢调节机制研究

目的:探讨丹参素对高脂血症大鼠脂代谢的影响。方法:选用清洁级雄性SD大鼠60只,随机选取12只为基础对照组,饲以普通饲料,其余大鼠饲以高脂饲料,造模成功后随机分为高脂对照组和注射低、中、高(10,20,40 mg·kg-1·d-1)剂量丹参素溶液(溶解于生理盐水)的试验组,2个对照组腹腔注射等体积生理盐水,每天腹腔注射1次,连续30 d。检测血清TG,TC,HDL-C及LDL-C含量及肝脏ACC1,FAS,HMGR,CPT-I的mRNA表达水平。结果:注射丹参素后,大鼠血清中TG,TC,LDL-C含量降低,肝脏FAS和HMGR的mRNA表达水平显著降低。结论:丹参素通过降低TC含量,抑制LDL-C水平,及时清扫多余的胆固醇,有效调节高脂血症大鼠血脂水平;通过降低FAS mRNA表达减少脂肪酸的合成,抑制HMGR mRNA表达来减少内源性胆固醇的合成。