四神丸对腹泻型肠易激综合征大鼠脊髓Ghrelin、GHSR表达的影响

目的观察四神丸对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠脊髓中胃促生长素(Ghrelin)及其受体GHSR表达的影响。方法将SPF级SD大鼠先随机分为正常组和造模组,造模组采用番泻叶灌胃加避水应激法制备脾肾阳虚型IBS-D大鼠模型,待模型复制成功后再将造模组随机分为模型组、得舒特组和四神丸高、中、低剂量组;灌胃14 d后,免疫组化法检测脊髓组织Ghrelin、GHSR的阳性表达,RT-PCR法检测脊髓中Ghrelin、GHSR的mRNA表达。结果模型组脊髓中Ghrelin、GHSR阳性细胞数增多、m RNA表达升高,与正常组比较,差异均有统计学意义(P 0.01);四神丸高、中剂量组脊髓Ghrelin、GHSR的阳性细胞数减少、mRNA表达降低,与模型组比较,差异有统计学意义(P 0.05或P 0.01);且四神丸高剂量组对脊髓Ghrelin、GHSR阳性细胞数表达的影响优于其低剂量组(P 0.05)。结论四神丸对IBS-D模型大鼠的作用可能与降低脊髓中Ghrelin、GHSR的表达有关。     

四神丸对溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织Toll样受体2、4表达的影响

目的观察四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)大鼠结肠组织Toll样受体(TLR)-2、TLR-4基因及蛋白表达的影响,探讨其治疗脾肾阳虚型溃疡性结肠炎的作用机制。方法采用氢化可的松注射液腹腔注射+番泻叶灌胃+三硝基苯磺酸/乙醇灌肠法建立脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠模型。将90只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组及四神丸高、中、低剂量组,各给药组给予相应药物干预。RT-q PCR检测大鼠结肠组织TLR-2、TLR-4 m RNA表达,Western blot检测大鼠结肠组织TLR-2、TLR-4蛋白表达,并测定血清超氧化物歧化酶(SOD)活性及丙二醛(MDA)含量。结果与空白组比较,模型组大鼠血清SOD活性明显降低、MDA含量明显升高(P0.01),结肠组织TLR-2、TLR-4基因及蛋白表达明显增强(P0.05);与模型组比较,各给药组大鼠血清SOD活性明显升高、MDA含量明显降低(P0.05,P0.01),结肠组织TLR-2、TLR-4基因及蛋白表达明显降低(P0.05,P0.01)。结论四神丸可能通过改善结肠组织氧自由基的代谢,调控肠上皮免疫系统,达到治疗UC的目的。     

四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠血清TGFβ1、IL-6及结肠组织TLR-4 mRNA表达的影响

目的:观察四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠中血清转化生长因子β1(TGFβ1)、白介素6(IL-6)及结肠组织中Toll样受体4(TLR-4)mRNA含量的变化,探讨四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎的作用机制。方法:采用番泻叶灌胃+氢化可的松注射液腹腔注射+2、4、6-三硝基苯磺酸(TNBS)/乙醇法灌肠建立脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠模型。将60只wistar大鼠随机分为空白组、模型组、四神丸组及柳氮磺嘧啶(SASP)组,经药物干预后分别采用酶联免疫法检测各组大鼠血清中的TGFβ1、IL-6含量及半定量反转录-聚合酶链反应检测各组大鼠结肠组织中的TLR-4 mRNA含量。结果:与空白组比较,模型组大鼠中TGFβ1含量降低(P0.05),IL-6含量升高(P0.05);与模型组比较,各治疗组大鼠中TGFβ1含量升高(P0.05),IL-6含量降低(P0.05)。与空白组比较,模型组大鼠结肠组织TLR-4 mRNA表达显著增强(P0.05);各治疗组TLR-4 mRNA表达减弱(P0.05)。结论:四神丸能够通过下调IL-6和升高TGFβ1的表达,降低结肠组织中TLR-4 mRNA的含量,抑制炎症反应,调节肠上皮免疫系统,恢复肠粘膜微环境的免疫稳态,达到治疗UC的目的。     

四神丸对溃疡性结肠炎模型大鼠Toll样受体2、白细胞介素-1β和白细胞介素-4的影响

目的观察四神丸对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠组织Toll样受体2(TLR2)基因表达及血清白细胞介素(IL)-1β、IL-4含量的影响,探讨其治疗UC的作用机制。方法采用复合方法制作脾肾阳虚型UC大鼠模型。实验大鼠分为空白组、模型组、阳性药组、四神丸组,阳性药组予柳氮磺吡啶肠溶片水溶液0.5 g/kg灌胃,四神丸组予四神丸26 g/kg灌胃,每日1次,共21 d。肉眼观察结肠组织损伤情况,并检测大鼠结肠组织TLR2基因表达及血清IL-1β、IL-4的含量。结果与空白组比较,模型组大鼠结肠黏膜肉眼观察有显著炎症、充血、溃疡形成(P0.01),模型组大鼠结肠组织TLR2基因表达与血清IL-1β含量升高(P0.05),IL-4含量降低(P0.01);与模型组比较,四神丸组大鼠结肠组织TLR2基因表达和血清IL-1β含量均降低(P0.05,P0.01),IL-4含量升高(P0.05)。结论四神丸治疗UC机制可能与调节肠道免疫细胞因子、抑制TLR2信号避免其过度激活有关。     

四神丸及其拆方对脾肾阳虚泄泻大鼠Leptin、CCK、IP3的影响

目的:探讨四神丸及其拆方(去补骨脂)对脾肾阳虚泄泻大鼠瘦素(Leptin)、胆囊收缩素(CCK)和三磷酸肌醇(IP3)的影响。方法:将50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、得舒特组、四神丸组及四神丸拆方组各10只;采用灌服大黄水煎液和肌内注射氢化可的松的方法复制脾肾阳虚泄泻大鼠模型,灌胃14 d后观察各组大鼠的一般状态,检测血清中Leptin、CCK和胃窦、十二指肠组织中IP3含量变化。结果:模型组大鼠的体质量、血清Leptin、CCK含量均低于正常组,胃肠组织IP3含量高于正常组,差异均有统计学意义(P0.01)。给药后四神丸组、四神丸拆方组和得舒特组体质量、血清Leptin、CCK含量均高于模型组,IP3均低于模型组,差异均有统计学意义(P0.05或P0.01)。四神丸组的体质量高于得舒特组和四神丸拆方组,血清CCK含量高于得舒特组,十二指肠IP3含量低于四神丸拆方组,差异均有统计学意义(P0.05);四神丸拆方组胃肠组织中IP3含量高于得舒特组(P0.05)。结论:四神丸和四神丸拆方可增加脾肾阳虚泄泻大鼠血清Leptin、CCK含量,降低胃肠中IP3含量;四神丸及其拆方对脾肾阳虚泄泻大鼠的作用可能与调节Leptin、CCK、IP3水平有关。     

四神丸对腹泻型肠易激综合征大鼠5-HT信号通路表达的影响

目的 通过研究四神丸对腹泻型肠易激综合征（IBS-D）模型大鼠5-羟色胺（5-HT）信号通路表达的影响,进一步揭示其治疗IBS-D的内脏敏感机制。方法 SD大鼠32只,随机分为正常组、模型组、四神丸组和得舒特组,采用番泻叶灌胃联合避水应激法制备IBS-D大鼠模型,给药14 d后进行Bristol粪便性状量表评分,依据腹壁撤退反射评定内脏疼痛阈值,ELISA法检测血清5-HT、SERT含量,免疫组化法检测结肠组织5-HT的阳性表达,Western blotting法检测结肠组织5-HT4R的蛋白表达。结果 与正常组比较,模型组大鼠Bristol粪便性状量表评分升高,内脏疼痛阈值降低,血清中5-HT含量增加、SERT含量减少,结肠组织中5-HT的阳性表达升高、5-HT 4R的蛋白表达降低（P <0.05或P <0.01）;与模型组比较,四神丸组大鼠Bristol粪便性状量表评分降低、内脏疼痛阈值升高,血清5-HT含量减少、SERT含量增加,结肠组织5-HT的阳性表达降低、5-HT4R的蛋白表达升高（P <0.05或P <0.01）,且对5-HT、5-HT4R表达的影...     

四神丸对脾肾阳虚泄泻大鼠十二指肠IP_3、CaM、MLCK的影响

目的探讨四神丸对脾肾阳虚泄泻模型大鼠十二指肠组织三磷酸肌醇(IP3)、钙调素(Ca M)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的影响。方法将72只SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组、得舒特组、四神丸高、中、低剂量组,每组12只。除正常组外,其余各组均采用灌服腺嘌呤和番泻叶水煎剂复制脾肾阳虚型泄泻大鼠模型。连续给药14d后,采用ELISA法检测十二指肠组织中IP3的含量,Western Blot、免疫组织化学法分别检测十二指肠中Ca M和MLCK的蛋白表达。结果模型组大鼠十二指肠组织匀浆中IP3含量及十二指肠中Ca M、MLCK蛋白表达均明显增高,与正常组比较差异有显著性(P0.01)。与模型组比较,四神丸高、中剂量组和得舒特组IP3含量降低(P0.05或P0.01),四神丸各剂量组和得舒特组Ca M、MLCK蛋白表达下降(P0.05或P0.01);且四神丸高剂量组优于低剂量组(P0.05),而四神丸中剂量组上述指标改变与得舒特组比较差异不显著(P0.05)。结论四神丸对脾肾阳虚泄泻模型大鼠的作用机制可能与调节十二指肠IP3-Ca M-MLCK信号途径指标有关。     

四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠Th1/Th2免疫平衡的影响

目的:观察四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠Th1/Th2免疫平衡的影响。方法:将90只大鼠随机分为空白组、模型组、对照组、四神丸高剂量组、四神丸中剂量组和四神丸低剂量组,每组各15只。除空白组外,其余各组制备脾肾阳虚证溃疡性结肠炎大鼠模型。造模成功后,空白组则以等体积生理盐水灌胃,对照组以柳氮磺胺嘧啶水溶液0. 5 g·kg-1灌胃,四神丸低剂量组以四神丸药液13 g·kg-1灌胃,四神丸中剂量组以四神丸药液26g·kg-1灌胃,四神丸高剂量组以四神丸药液52 g·kg-1灌胃,模型组灌服等体积生理盐水,共21 d。采用酶联免疫法检测大鼠血清白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)水平,并计算IL-1β/IL-4;取胸腺组织称质量并计算大鼠胸腺指数; HE染色观察大鼠结肠损伤情况,用免疫组织化学法检测结肠黏膜IL-13的表达。结果:与空白组比较,模型组胸腺指数明显较低,差异具有统计学意义(P 0. 05);与模型组比较,四神丸中剂量组、四神丸高剂量组胸腺指数高于对照组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与空白组比较,模型组和对照组大鼠血清IL-1β含量、IL-1β/IL-4比值显著增高,IL-4含量均降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与模型组比较,四神丸中剂量组、四神丸高剂量组大鼠IL-1β含量、IL-1β/IL-4比值显著降低,其中以四神丸中剂量组降低明显; IL-4含量显著升高,其中以四神丸中剂量组升高明显,差异有统计学意义(P 0. 05)。与空白组比较,模型组大鼠血清IL-13含量降低,差异具有统计学意义(P 0. 05);与模型组比较,四神丸中剂量组、四神丸高剂量组大鼠结肠组织IL-13蛋白表达增高,其中以四神丸高剂量组表达升高显著,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论:四神丸可提高UC大鼠机体免疫功能,抑制炎症反应,其作用机制可能与调节Th1/Th2免疫平衡有关。     

四神丸对脾肾阳虚泄泻大鼠胃肠运动及Ghrelin的影响

目的:观察四神丸对脾肾阳虚型泄泻模型大鼠胃肠运动及Ghrelin的影响。方法:将72只SPF级SD大鼠随机分为正常组、模型组、得舒特、四神丸高、中、低剂量组,每组12只。除正常组外,其余各组均采用灌服腺嘌呤和番泻叶水煎剂复制脾肾阳虚型泄泻大鼠模型。给药14 d后观察各组大鼠一般状态、腹泻指数、胃肠运动及血清Ghrelin含量变化。结果:模型组大鼠一般状态虽有所改善但腹泻仍持续存在,且胃残留率、小肠推进率及血清Ghrelin含量与正常组比较均有显著性差异(P0.01)。四神丸各剂量组、得舒特组上述指标均较模型组有所改善(P0.05或P0.01)。且四神丸高剂量组胃内残留率和小肠推进率明显优于其他各给药组(P0.05),四神丸高剂量组血清Ghrelin含量明显优于中、低剂量组(P0.05)。而四神丸中、低剂量组的胃内残留率和小肠推进率、以及高、中剂量组血清Ghrelin含量与得舒特组比较差异均不显著(P0.05)。结论:四神丸能有效缓解脾肾阳虚泄泻大鼠症状,以高剂量组效果为佳,其作用机制可能与调节胃肠运动及血清Ghrelin水平有关。     

肠祺饮对肝郁脾虚腹泻型肠易激综合征大鼠脑肠肽的影响

目的观察中药肠祺饮对肝郁脾虚腹泻型肠易激综合征(IBS-D)大鼠部分脑肠肽的调控作用。方法 SPF级雄性Wistar大鼠72只,分为正常组、模型组、得舒特组和肠祺饮组,每组18只。除正常组外,其余3组均采用慢性束缚应激与灌服番泻叶煎剂相结合的方法建立具有肝郁脾虚证表现的IBS-D大鼠模型,分别给予0.9%Na Cl溶液、得舒特、肠祺饮水煎剂。观察大鼠血清5-羟色胺(5-HT)和下丘脑、结肠组织中P物质(SP)、血管活性肠肽(VIP)mRNA表达量变化。结果肠祺饮能够降低血清5-HT含量,并减少下丘脑和结肠SP mRNA、VIP mRNA表达(P0.05)。结论肠祺饮可能通过降低血清5-HT含量和减少下丘脑与结肠中SP mRNA、VIP mRNA表达,调节肝郁脾虚IBS-D大鼠脑-肠轴功能紊乱。     

四神丸对脾肾阳虚泄泻大鼠胃窦组织Ghrelin-CaM-MLCK信号通路的影响

目的观察四神丸对脾肾阳虚型泄泻模型大鼠胃窦组织Ghrelin-Ca M-MLCK信号通路的影响,探讨其作用机制。方法采用灌服腺嘌呤和番泻叶水煎剂制作脾肾阳虚型泄泻大鼠模型。将72只SD大鼠随机分为正常组、模型组、阳性药组和四神丸高、中、低剂量组,每组12只。各给药组给予相应药物灌胃,连续14 d,免疫组化和Western blot分别检测胃窦组织脑肠肽胃促生长素(Ghrelin)及其受体(GHSR)、钙调素(Ca M)、肌球蛋白轻链激酶(MLCK)的蛋白表达。结果模型组大鼠胃窦组织Ghrelin、GHSR、Ca M和MLCK蛋白表达均较正常组明显升高(P0.01);各给药组上述指标蛋白表达均明显低于模型组(P0.05,P0.01),且以四神丸高剂量组最为明显。结论四神丸对脾肾阳虚泄泻模型大鼠的作用可能与调节Ghrelin-Ca M-MLCK信号通路指标的蛋白表达有关。     

四神丸对溃疡性结肠炎大鼠结肠黏膜细胞间黏附分子-1基因和蛋白表达的影响

目的观察四神丸对溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜细胞间黏附分子-1(ICAM-1)mRNA和蛋白表达的影响,并探讨其作用机制。方法40只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、四神丸组及柳氨磺吡啶(SASP)组,除空白组外,其余各组大鼠均以TNBS/乙醇灌肠法制备UC大鼠模型,四神丸组给予四神丸浸膏剂5 g/kg灌胃,SASP组SASP 0.3 g/kg灌胃,灌胃体积均为10 mL/kg,空白组、模型组灌服等体积生理盐水,持续3周。肉眼观察结肠大体形态损伤并进行评分,采用RT-PCR和免疫组化法检测ICAM-1基因和蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠结肠组织黏膜层肉眼观察可见炎症和溃疡形成。模型组大鼠结肠组织ICAM-1基因和蛋白的表达量上调(P＜0.01);与模型组比较,四神丸组ICAM-1基因和蛋白表达量下调,差异有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01)。结论四神丸可能通过下调ICAM-1 mRNA和ICAM-1蛋白的表达量,抑制炎症细胞浸润,阻止并减轻结肠组织损伤,起到治疗UC的作用。     

参苓白术散对脾虚湿困型UC大鼠结肠组织IL-6、IL-10及c-fos基因蛋白表达的影响

目的探讨参苓白术散对脾虚湿困溃疡性结肠炎(UC)大鼠结肠黏膜白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素10(IL-10)及c-fos基因蛋白表达的影响。方法受试大鼠按随机数字表法分为空白组和造模组,造模组采用综合法复制脾虚湿困型UC动物模型。造模3周并评价造模成功后将UC大鼠分为模型组、参苓白术散高、中、低剂量组和阳性对照组(美沙拉嗪组)。空白组和模型组大鼠每日给予容积为10 ml·kg-1蒸馏水灌胃,参苓白术散大、中、小剂量组分别给予24,12,6 g·kg-1·d-1参苓白术散药剂灌胃,阳性对照组给予0.2g·kg-1·d-1美沙拉嗪颗粒灌胃,持续治疗21 d后,分别对各组大鼠肠黏膜IL-6、IL-10含量进行检测,并采用蛋白免疫印迹法检测结肠组织c-fos基因及蛋白表达。结果与空白组比较,模型组大鼠一般生存状况较差,结肠组织中IL-6含量显著升高,IL-10含量降低(P0.05),c-fos基因和蛋白表达水平显著升高(P0.05);与模型组比较,参苓白术散组大鼠一般生存状况明显改善,结肠组织中IL-6含量显著降低(P0.05)而IL-10含量升高(P0.05),c-fos基因和蛋白表达水平显著降低(P0.05),且以参苓白术散高剂量作用显著。结论参苓白术散具有改善脾虚湿困型UC大鼠一般生存状况,调节结肠组织Th1/Th2细胞因子平衡分泌及下调c-fos基因蛋白表达的作用。     

四神丸对IBS-D大鼠肠道屏障影响的实验研究

目的:通过研究四神丸及其拆方二神丸和五味子散对腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)大鼠相关细胞因子的含量和肠黏膜屏障标志性蛋白表达情况的影响,探讨其治疗腹泻型肠易激综合征的作用机制。方法:选取SPF级雄性SD大鼠54只,随机分为正常组、模型组、阳性对照培菲康0.28 g/kg组、四神丸4.2 g/kg组、二神丸3.23 g/kg组和五味子散0.97 g/kg组。以复合因素制备脾肾阳虚型IBS-D大鼠模型,给药治疗14天后检测大鼠血清中相关炎症因子IL-10、TNF-α、IL-6和IL-1β,GAS和MTL,5-HT和CRF的含量,同时观察结肠组织病理变化,并运用Western Blot法检测肠黏膜屏障标志性蛋白Occludin、Claudin1表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中的IL-10、GAS和MTL的浓度和肠细胞中Occludin、Claudin1的表达均显著降低,TNF-α、IL-6、IL-1β、5-HT和CRF的含量显著升高。结肠组织未见病理学变化。培菲康0.28 g/kg组、四神丸4.2 g/kg组、二神丸3.23 g/kg组和五味子散0.97 g/kg组药后均能有效减小IBS-D大鼠腹泻指数及降低肠道高敏感性且以四神丸全方组效果优于其拆方组。结论:四神丸可能通过保护肠道黏膜屏障、抑制炎症反应、改善胃肠道运动、消化系统的分泌功能紊乱和肠道内在敏感性来达到治疗腹泻型肠易激综合征的作用,且二神丸和五味子散有协同作用。     

参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎模型大鼠血清IL-1β、Il-4及Caspase-8基因蛋白表达的影响

目的研究参苓白术散对脾虚湿困型溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠血清IL-1β、IL-4含量及结肠组织内Caspases-8基因及蛋白表达水平的影响。方法 60只SPF级Wistar大鼠按随机数字表法分为空白组与造模组,造模组采用复合因素法建立脾虚湿困型UC大鼠模型(造模时间3周),造模成功后将造模大鼠按随机数字表法分为模型组、参苓白术散高、中、低剂量组和阳性对照组。各组均按设定实验方法给药,连续3周;用ELISA法检测其血清内IL-1β、IL-4的表达;q PCR法检测结肠组织Caspase-8 mRNA表达变化,WB法检测Caspase-8蛋白表达变化。结果与正常组比较,模型组大鼠的一般生存状况较差,血清IL-1β含量明显升高(P0.05)、IL-4的含量明显降低(P0.05),组间差异有统计学意义,模型组大鼠Caspase-8基因表达及蛋白含量明显高于空白组(P0.01),组间差异有统计学意义;与模型组比较,参苓白术散治疗组IL-1β含量明显下降、IL-4含量明显上升,Caspase-8蛋白含量和基因表达水平明显降低,组间差异有统计学意义(P0.01)。结论参苓白术散具有改善脾虚湿困型UC大鼠一般生存状况,调节UC大鼠血清IL-1β、IL-4含量及下调Caspase-8基因和蛋白表达的作用。     

基于肠道屏障功能研究甘草泻心汤治疗溃疡性结肠炎的作用机制

目的研究甘草泻心汤治疗溃疡性结肠炎模型大鼠的疗效及其对肠道屏障功能的影响。方法 60只SD大鼠随机分为6组:空白组,造模组,美沙拉嗪组,低、中、高剂量甘草泻心汤组。以TNBS/乙醇法造模后分别以生理盐水、美沙拉嗪及甘草泻心汤各剂量灌胃。观察大鼠排便情况及体重变化,14天后检测血清二胺氧化酶、D-乳酸、细菌内毒素含量,分析结肠组织Claudin-1蛋白及mRNA的表达。结果造模后出现体重下降及粪便污染肛周皮毛现象;与空白组比较,血清D-乳酸及细菌内毒素含量均明显增加(P 0. 01);结肠组织Claudin-1蛋白和mRNA的表达均明显降低(P 0. 01)。与造模组比较,美沙拉嗪组及甘草泻心汤中剂量组粪便污染肛周皮毛时间明显缩短(P 0. 01)、体重明显增加(P 0. 01);血清D-乳酸及细菌内毒素含量均明显降低(P 0. 01);结肠组织Claudin-1蛋白和mRNA表达均明显增高(P 0. 01)。结论甘草泻心汤能改善溃疡性结肠炎模型大鼠的症状,尤以中剂量明显。其作用机制可能与促进肠道屏障功能修复有关。     

基质金属蛋白酶3、8、13在脾肾阳虚型溃疡性结肠炎大鼠的特异性表达及中药干预研究

目的:探讨脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(Ulcerative Colitis,UC)大鼠中基质金属蛋白酶(Matrix Metalloproteinase,MMP)3、MMP8、MMP13的特异性。方法:96只Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、理中汤合四神丸复方颗粒高剂量组、中剂量组、低剂量组、柳氮磺胺吡啶(SASP)组,治疗组给予相应药物灌胃治疗。利用高通量测序技术筛选出差异表达的MMP3、MMP8、MMP13,进一步用实时荧光定量PCR(RT-q PCR)法和蛋白质印迹法(Western blot)法验证其表达。结果:与空白组相比较,模型组结肠组织中MMP3、MMP8、MMP13基因与蛋白表达均上调(P 0.01);与模型组相比较,各治疗组结肠组织MMP3、MMP8、MMP13基因与蛋白表达均下调(P 0.01)。结论:具有温补脾肾作用的理中汤合四神丸复方颗粒能显著下调脾肾阳虚型UC大鼠结肠黏膜中过度表达的MMP3、MMP8、MMP13基因和蛋白,抑制炎症反应及黏膜的破坏,亦可作为诊断UC的特异性标志物及治疗UC的疗效评估指标。     

基于5-羟色胺信号通路探讨艾灸治疗腹泻型肠易激综合征的机制

目的:观察艾灸对腹泻型肠易激综合征(IBS-D)模型大鼠内脏敏感性、稀便率、结肠组织中5-羟色胺(5-HT)信号通路相关分子表达的影响,探讨艾灸治疗IBS-D的机制。方法:健康雄性SD大鼠随机分为空白组、模型组和艾灸组,每组10只。采用慢性束缚联合番泻叶灌胃法建立IBS-D大鼠模型。艾灸组艾灸大鼠"天枢""上巨虚",每天1次,每次30 min,共干预7 d。干预结束后,观察各组大鼠稀便率和直肠扩张所引起腹部回缩反射的最小容量阈值,酶联免疫吸附法检测结肠中5-HT含量,荧光定量PCR法检测结肠组织中色氨酸羟化酶1(TPH1)、5-HT转运体(SERT)和5-羟色胺受体3(5-HT3R)的mRNA表达量,Western blot法检测结肠组织中TPH1、SERT和5-HT3R的蛋白表达水平。结果:与空白组比较,模型组腹部回缩反射的最小容量阈值明显下降(P0.01),稀便率、结肠中5-HT含量及TPH1、5-HT3R的蛋白和mRNA表达量明显升高(P0.01),SERT的蛋白和mRNA表达量明显降低(P0.01)。与模型组比较,艾灸组腹部回缩反射的最小容量阈值明显升高(P0.01),稀便率、结肠中5-HT含量及结肠组织中TPH1、5-HT3R的蛋白和mRNA表达量均明显降低(P0.01),SERT的蛋白和mRNA表达量明显升高(P0.01)。结论:艾灸"天枢""上巨虚"可能是通过对IBS-D大鼠结肠组织中5-HT信号通路的多靶点协同作用来治疗IBS-D。     

四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠结肠组织PI3K/Akt/mTOR信号通路的影响

目的 探讨四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎（UC）模型大鼠结肠组织磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B/雷帕霉素靶蛋白（PI3K/Akt/mTOR）信号通路相关基因mRNA和蛋白以及血清中细胞因子白细胞介素-1β（IL-1β）,白细胞介素-10（IL-10）表达水平的影响。方法 将120只SPF级Wistar大鼠在SPF级实验室适应性喂养7 d后分为空白组和造模组,造模组大鼠采用二硝基苯磺酸盐（DNBS）/乙醇溶液灌肠+皮下注射氢化可的松+番泻叶灌胃法建立脾肾阳虚型UC大鼠模型。将成功建立模型的大鼠随机分为5组,分别为模型组,美沙拉嗪（0.36 g·kg^-1）组,四神丸高、中、低剂量（3.2,1.6,0.8 g·kg^-1）组,灌胃体积均为10 mL·kg^-1,模型组和空白组灌服等体积蒸馏水,1次/d,连续21 d。每日观察大鼠一般情况,并记录小鼠体质量、粪便性状及隐血情况进行疾病活动指数（DAI）评分。取大鼠结肠组织,观察大体形态及结肠损伤情况,进行结肠黏膜损伤指数（CMDI）评分。采用苏木素-伊红（HE）染色观察各组大鼠结肠组织病理改变,实时荧光定量聚合酶链式反应（Real-time PCR）检测结肠组织PI3K,Akt,mTOR mRNA的表达水平,酶联免疫吸附测定（ELISA）检测血清IL-1β,IL-10的含量,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测结肠组织PI3K,磷酸化（p-）PI3K,Akt,p-Akt,mTOR,p-mTOR蛋白的表达。结果 与空白组比较,模型组大鼠一般生存状况相对较差,DAI评分,CMDI评分显著升高（P<0.01）;大鼠病理切片见肠黏膜部分消失,腺体消失,有大量的炎性细胞浸润,聚集于黏膜层和基层;PI3K,Akt,mTOR mRNA表达水平显著升高（P<0.01）;IL-1β含量显著升高,IL-10含量显著降低（P<0.01）;p-PI3K,p-Akt,p-mTOR蛋白表达水平显著升高（P<0.01）。与模型组比较,四神丸高、中剂量组及美沙拉嗪组大鼠DAI评分明显下降（P<0.05）;四神丸高、中、低剂量组及美沙拉嗪组大鼠CMDI评分显著降低（P<0.01）;大鼠病理切片显示各给药组炎性细胞减少,黏膜层结构不同程度的恢复正常,美沙拉嗪组和四神丸中剂量组效果最好,黏膜结构接近空白组;四神丸高、中剂量组及美沙拉嗪组大鼠PI3K,Akt,mTOR mRNA及四神丸低剂量组Akt mRNA表达水平明显降低（P<0.05,P<0.01）,四神丸低剂量组PI3K,mTOR mRNA的表达水平虽有降低,但差异无统计学意义;四神丸高、中剂量组及美沙拉嗪组IL-1β含量明显降低,IL-10含量明显升高（P<0.05,P<0.01）,四神丸低剂量组IL-1β含量降低,IL-10含量升高,但差异无统计学意义;四神丸高、中、低剂量组及美沙拉嗪组p-PI3K,p-Akt,p-mTOR蛋白表达水平均有不同程度下降（P<0.05,P<0.01）。结论 四神丸具有改善脾肾阳虚型UC模型大鼠的一般情况和肠黏膜损伤的作用,其机制可能与抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路有关。     

香砂六君子汤对萎缩性胃炎大鼠IL-6、IL-17及ERK1/2基因蛋白表达的影响

目的:观察香砂六君子汤对脾胃虚弱型慢性萎缩性胃炎(chronic atrophic gastritis,CAG)大鼠血清白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)、白细胞介素17(interleukin-17,IL-17)及胃组织细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases,ERK1/2)基因和蛋白表达的影响。方法:按随机数字表法将受试大鼠分为空白组和造模组,通过综合法成功复制CAG模型大鼠后,把造模成功大鼠随机分为5组,即:模型组、阳性对照组和香砂六君子汤高、中、低剂量组。香砂六君子汤高、中、低剂量组分别灌胃24、12、6 g/(kg·d)剂量香砂六君子汤,模型组和空白组灌胃10 mL/kg蒸馏水,阳性对照组灌胃0.30 g/(kg·d)维酶素,连续造模120天后,采用ELISA法检测大鼠血清IL-6、IL-17含量;采取实时荧光定量PCR检测胃窦黏膜组织IL-6、IL-17基因表达水平;Western Blot技术检测ERK1/2蛋白及其磷酸化表达。结果:与空白组比较,模型组大鼠一般生存状况较差,且大鼠血清IL-6含量及胃窦黏膜组织IL-6 mRNA表达升高(P0.05);血清IL-17含量及胃窦黏膜组织IL-17 mRNA表达升高(P0.01),胃黏膜组织ERK1/2蛋白表达降低(P0.01),p-ERK1/2蛋白表达升高(P0.05);与模型组比较,香砂六君子汤各剂量组大鼠一般生存状况改善,大鼠血清IL-6、IL-17含量及胃窦黏膜组织IL-6 mRNA及IL-17 mRNA表达降低(P0.05),ERK1/2蛋白表达升高(P0.05);p-ERK1/2蛋白表达降低(P0.05);与阳性对照组比较,香砂六君子汤高、中剂量组大鼠血清IL-6、IL-17含量及胃窦黏膜组织IL-6 mRNA及IL-17 mRNA表达降低(P0.05),ERK1/2蛋白表达升高(P0.05);p-ERK1/2蛋白表达降低(P0.05)。结论:香砂六君子汤通过下调IL-6、IL-17表达,激活ERK1/2,抑制p-ERK1/2水平,对脾胃虚弱型CAG胃窦黏膜起保护作用。