灵芝固态发酵三七渣产漆酶工艺优化

目的 优化灵芝固态发酵三七渣产漆酶工艺。方法 在单因素试验基础上,以发酵时间、发酵温度、接种量为影响因素,漆酶活性为评价指标,Box-Behnken响应面法优化发酵工艺。结果 最佳条件为发酵时间14 d,发酵温度28.09℃,接种量26.65%,漆酶活性为3.612 U/g。结论 该方法稳定可靠,可为灵芝固态发酵三七渣产漆酶后期开发和应用提供依据。     

桑黄多糖的发酵培养基的初步研究

目的研究适合桑黄多糖发酵的液体培养基。方法以桑黄为材料,主要对该真菌多糖发酵的液体培养基进行了研究,以菌丝生物量和多糖产量为指标,筛选适宜桑黄液体培养的配方。结果确定了桑黄多糖的发酵培养基配方:碳源为玉米粉40 g/L、氮源为20 g/L黄豆粉、KH2PO41g/L、MgSO40.5g/L,同时还确定了最佳发酵终点为132 h。结论该试验筛出了液体培养基配方,适合桑黄多糖发酵。     

黄姜中薯蓣皂苷元提取工艺的优化

目的优化黄姜中薯蓣皂苷元的提取工艺。方法先优化自然预发酵的温度(45、52、62℃)和时间(12、24、36 h)。再以纤维素酶、木聚糖酶、果胶酶酶量为影响因素,薯蓣皂苷元得率为评价指标,正交试验优化提取工艺。结果最佳自然预发酵条件为45℃发酵24 h,52℃发酵12 h,62℃发酵36 h;最佳提取条件为纤维素酶酶量50 U/g,木聚糖酶酶量100 U/g,果胶酶酶量120 U/g,薯蓣皂苷元得率0.845%,比恒温自然发酵下提高了69%。结论该方法稳定可行,可用于提取黄姜中薯蓣皂苷元。     

桑黄液体发酵生产多糖工艺研究

目的 考察不同培养条件对桑黄菌液体发酵生产多糖的影响.方法 通过正交试验设计,对不同培养基种类、起始pH值、发酵温度和摇床转速进行优化,在此工艺基础上,采用5L发酵罐进行发酵放大试验.结果 采用添加0.3 9/L维生素B1和0.3 g/L维生素B2的PD培养基,起始pH值5,发酵温度28℃,摇床转速180 r/min条件下,桑黄菌摇瓶发酵液中胞内多糖和胞外多糖分别为5.80、2.37 g/L;5 L发酵罐发酵液中桑黄胞内多糖和胞外多糖分别为5.85、2.30 g/L.结论 桑黄液体发酵可获得桑黄多糖,本实验结果为桑黄液体发酵工业化生产提供参考.     

不同培养条件对桑黄菌丝体生长的影响

目的为了探究不同培养条件对桑黄菌丝体生长的影响,在短期内培养出质优、含多糖量高的菌丝体。方法通过观察、对比接种于不同的氮源、碳源培养基中桑黄菌丝体的生长曲线、生长形态、生物量、生理生化等指标,筛选出最适的桑黄菌丝体生长培养基。结果桑黄生长的最佳液体、固体培养基均为黄豆+玉米的综合培养基:黄豆50 g/L,玉米粒50 g/L,葡萄糖30 g/L,KH_2PO_4 3 g/L,MgSO_4 0.75g/L,维生素B_1 1 mg/L。结论最佳单因子结合对桑黄的生物量、多糖积累有协同效应,组合后的发酵体系中生物量达到32 g/L,多糖量达到5.661 mg/ml。     

竹黄无性株的液态发酵工艺研究

从野生竹黄子实体分离获得能产生竹红菌素的无性株,经液态发酵培养及摇瓶正交试验获得最佳培养基配方和培养条件:蔗糖20 g/L,酵母膏8 g/L,玉米浆2 g/L,pH 6.0,摇瓶装量50/250 ml(V/V),接种量10%(V/V),培养温度28℃,摇床转速130 r/min,培养周期96 h,每升发酵液可获得色价为52的竹红菌素8 g.本试验结果可为工业化生产竹红菌素提供参考.     

山楂、泽泻、决明子与红曲霉混合发酵制备调血脂中药工艺研究

目的 以药食两用调血脂中药山楂Crataqgi Fructus、泽泻Alismatis Rhizoma和决明子Cassiae Semen等为培养基组分,以实验室筛选的产洛伐他汀(Lovastatin)的红曲霉Monascus purpureus为菌种,对制备既含有传统中药降脂成分又含有他汀类降脂药物的天然降脂中药的固态发酵工艺进行探索与研究。方法通过单因素试验和正交试验优化固态发酵工艺,用TLC和HPLC分析方法对发酵产物有效成分进行定性和定量分析。结果实验获得的混合发酵制备调血脂中药优化工艺条件为500 mL三角瓶装量100 g固态培养基,接种培养48 h的液态种子10 mL,30℃恒温培养2 d后,打散培养基,第3天加入培养基干基质24%的无菌水,5 d后温度降至25℃继续培养至18 d,洛伐他汀产量可达5.127 mg/g,较优化前提高124.8%。TLC和HPLC分析结果显示:与大米红曲比较,获得中药红曲发酵产物含有更多有效成分,洛伐他汀产量提高42.27%,但γ-氨基丁酸产量下降17.89%;与未发酵基质比较,中药发酵产物中中药的有效成分熊果酸、2,3-乙酰泽泻醇-B、大黄酚和大黄素甲醚分别提高了232.7%、173.7%、767.6%和888.4%。结论山楂、泽泻和决明子经红曲霉菌固态发酵后,除能显著提高调血脂有效成分的量外,还能提高中药有效成分的量,获得的调血脂中药发酵工艺具有一定的实际应用价值。     

党参丛生芽诱导及不定根培养体系研究

目的:建立及优化党参丛生芽及不定根培养体系。方法:以山西壶关党参组培苗为实验材料,以MS为基础培养基,研究6-BA对党参丛生芽及NAA对党参不定根诱导的影响,探索党参丛生芽及不定根生长的最佳条件。结果:在固体MS培养基中6-BA浓度为0.3 mg/L时丛生芽诱导率最高,为90%,但丛生芽矮化现象严重;6-BA浓度为0.5 mg/L时,诱导率虽较低仅为62.5%,但丛生芽粗壮,生长良好;液体1/2 MS培养基中NAA浓度为0.5mg/L时,不定根生物量显著增加;采用液体培养基进行不定根继代培养,培养周期为24 d,较固体培养基的培养周期(49 d)缩短了1/2。结论:建立了党参丛生芽及不定根快繁体系,为党参的良种繁育及生物活性物质合成、分子调控机理研究奠定基础。     

甘草对液体发酵中槐耳菌丝体生长及多糖影响初探

[目的]以槐耳菌丝体生物量及多糖为主要指标,探究槐耳-甘草液体共发酵中最佳甘草的添加量和发酵时长。[方法]采用液体发酵技术,在液体发酵培养基中加入甘草提取液,共发酵获得槐耳-甘草共发酵产物,苯酚-硫酸法及DNS法结合测定多糖含量。[结果]槐耳-甘草液体共发酵实验中,添加甘草8 g/L、发酵终点设为192 h时,槐耳生物量和胞内多糖产量达到最大值。[结论]运用槐耳-甘草液体共发酵可以提高槐耳生物量及多糖的含量,为深入研究槐耳-甘草液体共发酵机制提供了理论依据。     

灵芝三萜纳米混悬凝胶剂的制备及其体外透皮研究

目的 研制灵芝三萜纳米混悬凝胶剂(GT-NS-gel),并进行体外透皮研究。方法 采用高压均质法制备灵芝三萜纳米混悬剂(GT-NS),然后进一步制成凝胶剂。以24 h体外累积释放率和24 h后皮肤中的滞留量为指标,通过效应面法优化GT-NS-gel的处方;比较优化后的GT-NS-gel和灵芝三萜凝胶剂(GT-gel)的体外经皮渗透量及滞留量。结果 以最优处方:5 mg/g卡波姆940、30 mg/g GT、47.2 mg/g卵磷脂制得的GT-NS-gel在24 h时的体外累积释放率为(56.28±2.16)%,24 h皮肤滞留量为(472.89±8.74)μg/cm2,理论预测值与实测值接近,模型具有良好的预测性;GT-NS-gel 24 h药物累积渗透量和皮肤滞留量分别为(50.73±4.97)和(475.89±10.74)μg/cm2,明显高于GT-gel的(14.79±3.45)和(101.32±7.02)μg/cm2(P<0.05)。结论 将灵芝三萜制成纳米混悬凝胶剂,能够增加药物的皮肤滞留量,提高药物在皮肤局部的生物利用度。     

银杏细胞固定化培养及其影响因素考察

目的　利用银杏细胞固定化培养法生产银杏内酯。方法　以聚胺酯泡沫为固定化材料 ,考察各种因素对固定化银杏细胞培养的影响。结果　用高密度、小孔径聚胺酯材料 P2 9,将其切成 0 .5 cm× 0 .5 cm× 0 .5 cm的小块 ,每瓶加 0 .72 g载体 ,加 6 5 m L 液体培养基 (MS 2 ,4 - D8.0 mg/L KT0 .0 4 mg/L NAA0 .4 mg/L) ,接种鲜重2 0 0 g/L,可得到高达 71%的固定化比例 ,载体上细胞密度达到干重 2 2 mg/cm3。结论　以聚胺酯泡沫为固定化材料进行银杏细胞固定化培养具有方法简便、成本低廉、细胞固定化比例高等优点 ,具有潜在的应用价值     

灵芝醇溶酸性组分的制备工艺与检测方法研究

目的 :研究灵芝子实体中醇溶酸性组分 (ethanol solubleandacidiccomponents ,ESAC)制备工艺 ,并建立一种定量测定EASC含量的方法。方法 :灵芝精粉用无水乙醇浸泡 ,碱提酸化和氯仿萃取得ESAC组分 ;利用ESAC与浓硫酸的特征性颜色反应进行定量测定。结果 :1 0 g级ESAC较优的制备工艺为 :灵芝精粉与无水乙醇的投料比 1 (g)∶1 5(mL) ,浸提时间 24h ,饱和NaHCO₃溶液和氯仿萃取量分别为 1300mL ,分 3次萃取。ESAC定量测定条件为 :样品量 1g ,溶剂 15mL ,浸泡 0.5h ,50%H₂SO4 乙醇溶液 ,100℃水浴加热 3min ,测定 490nm处光吸收值。结论 :本文提供的ESAC制备的工艺路线 ,具有设计合理、操作简便的特点 ,建立的ESAC含量的测定方法可以用于灵芝相关产品的质量鉴定。     

獐牙菜的组织培养

目的 针对獐牙菜野生资源受到严重破坏的情况,系统地探讨了通过组织培养为手段进行人工繁殖的方法.方法 将种子接种于诱导培养基上,待其长成小苗后分别取其不带芽茎段、叶和带芽茎段作为外植体,在MS培养基上添加不同的激素配比,改变培养方式.结果 在所有的实验方案中,不带芽茎段是理想的外植体材料.较适宜的初代培养基为MS+BA 0.5 mg/L+蔗糖3.0%,增殖培养基为MS+BA 0.5 mg/L+IBA 0.1 mg/L+蔗糖3.0%,而根的诱导则是在1/2MS+NAA 0.5 mg/L+1.5%蔗糖的培养基上进行.结论 采用组织培养方式可进行獐牙菜的快速繁殖,为确保这一珍稀药用植物资源的保护和可持续利用提供有效途径.     

乌头离体培养和快速繁殖

目的建立乌头的快繁体系。方法利用组织培养的方法,设置18种、9种和12种不同激素处理组合的培养基分别诱导乌头不同外植体愈伤组织、诱导愈伤组织丛生芽的分化、诱导再生苗的生根。结果适合乌头茎尖和茎段愈伤组织诱导的培养基为:MS NAA0.2mg/L 6-BA2.0mg/L PVP(或AC)3.0g/L;适合叶片愈伤组织诱导的培养基为:MS NAA0.2mg/L 6-BA4.0mg/L PVP(或AC)3.0g/L;适合愈伤组织增殖与丛生芽诱导的培养基为:MS NAA0.2mg/L 6-BA2.5mg/L LH200mg/L PVP3.0g/L和MS NAA0.1mg/L 6-BA2.0mg/L LH200mg/L PVP3.0g/L。适合诱导生根的培养基为:MS IBA1mg/L AC3.0g/L。结论以乌头茎尖、叶片、茎段及带或不带腋芽的茎段作为外植体进行离体培养,可以实现乌头种苗的工厂化快速繁殖。     

灵芝和紫芝对照提取物在灵芝样品指纹图谱分析的应用

目的使用赤芝对照提取物(CZERS)、紫芝对照提取物(ZZERS)对所收集18批次灵芝药材进行高效薄层色谱(HPTLC)以及高效液相色谱(HPLC)指纹图谱分析。方法使用HPTLC指纹图谱方法,高效娃胶预制板,以氯仿-乙腈-甲醇-甲酸=13:2:0.5:0.53次展开和环己烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸=15:5:0.5:0.52次展开的方法分别分析灵芝三萜酸类和甾醇类成分。使用HPLC指纹图谱方法,Kromasil 100-5 C18柱(4.6mm×250 mm,5μm);流动相:A-乙腈,B-0.02%嶙酸;梯度洗脱程序:0~40min,29%→33%A,40-70 min,33%→65%A,70-105 min,65%→100%A;105-120 min,100%A;检测波长244 nm(DAD检测器);流速1.OmL·min^-1;进样量10μL;柱温25℃。结果使用对照提取物(ERS)和指纹图谱分析方法,可以区分赤芝,无柄灵芝和紫芝。不同种类和生长方式的灵芝成分存在差异。结论灵芝品种繁多,分野生和人工培养,而人工培养的培养基又有不同,导致不同灵芝个体间成分存在差异。使用特定品种的ERS和指纹图谱分析方法更加适合灵芝多成分整体质量控制的需求。     

铁皮石斛原球茎液体悬浮培养的研究

目的研究铁皮石斛Dendrobiumcandidum原球茎液体悬浮培养的可行性以及接种量和培养液体积对原球茎生长的影响。方法利用完全随机实验设计和正交试验设计研究不同基本培养基、接种量和培养液体积对原球茎生长的影响。结果无论鲜重还是干重,铁皮石斛原球茎在液体培养基上均极显著好于固体培养基(P<0.001)。不同基本培养基对铁皮石斛原球茎生长影响的研究表明,培养天数为30d时,对于鲜重67-V极显著好于B5(P<0.01),B5极显著好于1/2MS(P<0.01),1/2MS显著好于MS(P<0.05);对于干重67-V与B5没有显著性差异(P>0.05),B5极显著好于1/2MS(P<0.01),1/2MS极显著好于MS(P<0.01)。接种量和培养液体积对原球茎生长影响的研究表明,接种量影响最大,体积其次,互作最小,若不考虑互作,对于鲜重和干重,最佳处理为接种量6.194g/瓶 培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶;对于干重,若考虑互作,接种量为6.194g/瓶时,应选培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶,接种量为3.102g/瓶时,应选培养液体积150mL/瓶或100mL/瓶,接种量为1.693g/瓶时,应选150mL/瓶或50mL/瓶。结论液体悬浮培养对铁皮石斛原球茎的生长有利,获得了最佳基本培养基、接种量和培养液体积的最佳搭配方案,表明通过液体悬浮培养生产铁皮石斛原球茎具有较好的开发应用前景。     

水半夏组培快繁体系的建立

目的建立水半夏的组培快繁体系,为快速、大量生产水半夏种苗提供基础。方法利用不同植物激素配比的培养基,以水半夏块茎为外植体进行试验。结果愈伤培养基MS+NAA 0.2 mg/L+KT 1.0 mg/L+蔗糖3%+琼脂6 g/L可成功诱导水半夏愈伤组织;丛生芽培养基MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 2.0 mg/L+蔗糖3%+琼脂6 g/L诱导不定芽效果较好,增殖倍数高;生根培养基1/2 MS+NAA 0.2 mg/L+IBA 0.4 mg/L+KT 0.2 mg/L+蔗糖3%+琼脂6 g/L+AC 0.3 g/L,有利于水半夏不定根的快速形成,12～14周即可获得再生水半夏植株。培养基MS+NAA 0.2 mg/L+6-BA 1.5 mg/L+蔗糖3%+琼脂6 g/L为诱导水半夏分化一次性成苗的最佳激素配比,5～6周可形成试管苗,10周后可用于炼苗。结论建立的水半夏组培快繁体系为水半夏优良品种的快速繁殖奠定基础,且可应用于工厂化生产水半夏种苗。     

Medicinal and edible lignicolous fungi as natural sources of antioxidative and antibacterial agents

The antioxidant activity of organic extracts of eight fungal species, Ganoderma lucidum, Ganoderma applanatum, Meripilus giganteus, Laetiporus sulphureus, Flammulina velutipes, Coriolus versicolor, Pleurotus ostreatus and Panus tigrinus, was evaluated for free radical (DPPH^· and OH^·) scavenging capacity and an effect on lipid peroxidation, and the antibacterial activity was tested by the agar well diffusion method. The highest DPPH^· scavenging activity was found in the methanol extract of G. applanatum (12.5 μg/mL, 82.80%) and the chloroform extract of G. lucidum (510.2 μg/mL, 69.12%). The same extracts also showed the highest LP inhibition (91.83%, 85.09%) at 500 μg/mL, while the methanol extracts of G. applanatum and L. sulphureus showed the highest scavenging effect on OH^· radicals (68.47%, 57.06%, respectively) at 400 μg/mL. A strong antibacterial activity against Gram‐positive bacteria was also manifested. The antioxidative potencies correlated generally with the total phenol content (0.19–9.98 mg/g). The HPLC determination showed that the majority of analysed species contained gallic and protocatechic acids. Consequently, these fungi are shown to be potential sources of antioxidative and antibacterial agents. Copyright © 2010 John Wiley & Sons, Ltd.     

3种灵芝子实体腺苷TLC鉴定及HPLC含量测定

目的建立灵芝属药材赤芝、紫芝和树舌子实体中腺苷的HPLC含量测定及TLC鉴别的方法。方法采用硅胶GF254薄层板,以正丁醇-乙腈-0.1 mol.L-1醋酸铵-浓氨水(6:1:2:1)为展开剂,紫外光灯(254 nm)检视进行腺苷TLC鉴别;采用ZORBAX SB-C1(84.6×250 mm)色谱柱,以甲醇-0.01mo.lL-1磷酸二氢钾(10:90)为流动相,流速1.0 mL.min-1,检测波长:254 nm,柱温26℃为条件进行腺苷HPLC含量测定;结果 TLC法均可从赤芝、紫芝、树舌子实体中鉴别出腺苷;应用HPLC方法测定腺苷在3.125⁵0μg内线性关系良好(r=0.999 3),重复性良好(RSD=1.2%),平均加样回收率为103.9%,精密度良好(RSD=1.1%),24 h内测定结果稳定(RSD=1.1%),测得赤芝、紫芝和树舌的腺苷含量分别为38.7μg/g、35.3μg/g和75.2μg/g。结论采用TLC法和HPLC法鉴定灵芝药材中腺苷,简便易行,重复性好,可作为灵芝属药材(子实体)质量控制另一指标。