甘草酸多克隆抗体的制备及ELISA方法建立

目的 制备甘草酸多克隆抗体及建立甘草酸酶联免疫吸附测定(ELISA)方法.方法 通过碳化二亚胺法活化甘草酸与载体蛋白BSA联结制备免疫抗原,并免疫Balb/c小鼠,获得了甘草酸多克隆抗体并建立了甘草酸ELISA检测方法.用所建立的甘草酸ELISA检测方法对4个甘草样品进行了检测并用HPLC法加以验证.结果 抗体效价＞3.2×106,与甘草次酸的交叉反应率为24.2％.ELISA检测范围为3～ 120 ng/ml,IC5o为20 ng/ml.添加实验的回收率为103.5％～108％.结论 ELISA方法测定的数据与HPLC方法测定的数据有很好的相关性(R2 =0.9901).     

我国新型疫苗的开发现状(下)

6.破伤风疫苗:华兰生物有限公司吸附型破伤风疫苗获国家SFDA的临床试验批件。吸附型破伤风疫苗是继流感、流脑之后华兰生物有限公司第三个进入临床试验的疫苗。华兰生物有限公司拿到SFDA的临床批件后,将做临床方案,而后选择临床观察试验点,     

基于体内外关联的六神曲酶活力效价检测方法研究

目的:建立基于酶活力检测的六神曲生物检定方法,完善六神曲质量控制体系。方法:选择Folin法、pNPP法分别作为消食药六神曲胃蛋白酶和脂肪酶酶活力生物效价测定方法,以消化酶片为阳性药,药物剂量间距为1∶0.6,根据简化概率单位法计算35个批次六神曲的生物效价和可信限度,对精密度、重复性、中间精密度和可靠性进行考察,优化并确定检测条件;采用营养性半固体糊粘度测定方法验证不同酶活力六神曲降低粘度的活力差异;对比研究小鼠胃肠推进与酶活力的相关性差异,评价酶活力效价与体内活力的相关性。结果:建立了基于酶活力检测的六神曲生物检定方法,方法学考察均符合要求,测定了35个批次六神曲样品胃蛋白酶活力效价范围为151.549 U/mg～337.840 U/mg,平均效价为230.622 U/mg,RSD为22.61%;脂肪酶的活力效价范围为31.944 U/mg～616.165 U/mg,平均效价为278.936 U/mg,RSD值为63.67%。营养糊粘度随着六神曲酶活力效价的升高而降低;与正常对照组比较,除S7组外,六神曲各给药组小鼠胃残留率降低,小肠推进率显著提高(P<0.01);小鼠胃残留...     

毛冬青对小鼠逆转录病毒感染模型脾大症治疗机制的研究

目的:建立小鼠FLV(friend leukemia virus)感染模型,以抗逆转录病毒药物齐多夫定(AZT)作为对照药,初步探讨中药毛冬青对该模型脾大症的治疗作用及其机制.方法:将小鼠随机分为正常对照组、毛冬青高剂量组、毛冬青中剂量组、毛冬青低剂量组、齐多夫定(AZT)组和模型对照组,每组10只,除正常对照组外均腹腔注射0.4ml×10-1FLV病毒原液攻毒,攻毒当日开始灌胃口服给药.实验小鼠于第21d时摘眼球取血处死,计算其脾指数,检测其血清CD4T、CD8T、IL-1、IL-2、IL-6、INF-γ及病毒滴度.结果:毛冬青高剂量组小鼠脾重量、脾指数以及IL-1、IL-6均显著低于模型对照组,CD4T、CD4T/CD8T以及血清细胞因子IL-2、INF-γ均显著高于模型对照组.毛冬青高剂量组小鼠与模型对照组相比其血清病毒载量亦显著降低.结论:毛冬青具有治疗FLV所致小鼠脾大症的作用,其机制可能在于其具有一定的抗逆转录病毒及调节机体免疫状态的作用.     

病毒外源因子检测方法的探讨

目的　对病毒类制品的外源因子检测方法进行验证和探讨。方法　采用动物实验法观察动物病、死等感染情况 ;采用细胞培养法通过观察细胞病变及血吸附试验来判定外源因子感染情况。结果　动物实验法和细胞培养法均能从不同的侧面反映出毒种或者疫苗的外源因子污染情况。结论　动物实验法和细胞培养法可用于病毒类制品的毒种选育和疫苗生产中的外源因子检测 ,但在反映是何种外源因子污染上仍有不足。     

祛毒胶囊对狼疮样小鼠血清IL-10和TNF-α水平的影响

目的研究祛毒胶囊对狼疮样小鼠的治疗作用,并探讨其免疫作用机理.方法小鼠腹腔注射LPS 2.5mg/kg诱导狼疮样小鼠模型,灌胃给予祛毒胶囊水溶液,连续治疗15日后,摘眼球取血,用ELISA法检测血清中TNF-α和IL-10水平,HE染色观察小鼠肝肾病理损伤情况.结果祛毒胶囊不仅能降低狼疮样小鼠血清中TNF-α和IL-10的水平,并且能改善狼疮样小鼠肝肾病理损伤.结论祛毒胶囊对狼疮样小鼠有一定的治疗作用.     

人参皂苷Rg1人工抗原的合成及免疫原性鉴定

目的 合成人参皂苷Rg1的人工免疫原和包被原,为后续制备人参皂苷Rg1的单克隆抗体及建立相应的免疫分析方法奠定基础.方法 采用NaIO4氧化法分别合成人参皂苷Rg1免疫抗原(Rg1-BSA)和包被抗原(Rg1-PLL);紫外光谱和薄层色谱法鉴定人工抗原偶联是否成功;用间接ELISA方法检测免疫小鼠血清中抗体效价,用间接竞争ELISA检测抗体特异性.结果 经紫外光谱和薄层色谱法检测,人参皂苷Rg1与BSA/PLL偶联成功;免疫小鼠后Rg1-BSA可以使小鼠体内产生抗Rg1抗体;利用合成的偶联物成功建立间接ELISA和间接竞争ELISA方法,测得小鼠血清抗体效价在1∶80 000以上,并且所得抗体能特异性结合人参皂苷Rg1.结论 成功合成了人参皂苷Rg1人工免疫原和包被原,可用于下一步的人参皂苷Rg1单克隆抗体制备及建立相应免疫分析方法.     

钙调素免疫原的制备及检测

目的　研究钙调素免疫原的制备。方法　以碳化二亚胺法将钙调素—卵清蛋白偶联物作为免疫原 ,采用常规免疫方法免疫BALB/C小鼠 ,酶联免疫吸附法 (ELISA)检测抗体效价。结果　用钙调素—卵清蛋白偶联物腹腔注射的BALB/C小鼠经 2次体内免疫后测血清中的抗体效价均为阳性。结论　将钙调素和卵清蛋白进行偶联来作为抗原是成功的。     

藏药外敷治疗小儿注射吸附白百破后局部硬结临床观察

白百破疫苗作为我国免费提供接种的疫苗之一,对百日咳、白喉、破伤风疾病的预防有着极其重要的作用.吸附百白破是百日咳菌苗、精制白喉类毒素、精制破伤风类毒素用氢氧化铝吸附制成的混合制剂.因氢氧化铝具有吸附作用,部分受种者会出现注射局部不易吸收,刺激结缔组织增生,形成硬结,局部肿胀,疼痛,重者可形成溃疡,给小儿造成很大痛苦,给家长带来很多困扰.笔者在基层多年工作中采用藏药亚巴恰啦外敷治疗注射吸附百白破后局部硬结,均收到较好效果.     

基于生物效价检测的薏苡仁质量控制研究

目的:建立薏苡仁生物效价检测方法。方法:以肝癌2215细胞为生物模型,应用MTT法建立薏苡仁抑制肝癌2215细胞生物效价检测方法,以系统的方法学考察所建立方法的科学性。结果:在15.62～250.00mg.mL-1范围内,薏苡仁药材剂量的对数与细胞抑制率呈良好的线性关系(r=0.99,P<0.01),方法学考察符合生物效价检测的要求。结论:基于MTT法的薏苡仁抑制肝癌2215细胞生物活性检测方法可以用于薏苡仁药材的质量评价。     

Immunoadjuvant potential of Asparagus racemosus aqueous extract in experimental system

The immunoadjuvant potential of Asparagus racemosus (Willd.) Family (Liliaceae) aqueous root extract was evaluated in experimental animals immunized with diphtheria, tetanus, pertussis (DTP) vaccine. Immunostimulation was evaluated using serological and hematological parameters. Oral administration of test material at 100 mg/kg per day dose for 15 days resulted significant increase (P = 0.0052) in antibody titers to Bordtella pertussis as compared to untreated (control) animals. Immunized animals (treated and untreated) were challenged with B. pertussis 18323 strain and the animals were observed for 14 days. Results indicate that the treated animals did show significant increase in antibody titers as compared to untreated animals after challenge (P = 0.002). Immunoprotection against intra-cerebral challenge of live B. pertussis cells was evaluated based on degree of sickness, paralysis and subsequent death. Reduced mortality accompanied with overall improved health status was observed in treated animals after intra-cerebral challenge of B. pertussis indicating development of protective immune response. Present study indicates applications of test material as potential immunoadjuvant that also offers direct therapeutic benefits resulting in less morbidity and mortality.     

中药药性量化研究专家量表评估法的建立

中药药性是中药药物与疗效有关性质和性能的统称,是历代中医医家长期临床经验的总结,但长期以来只有定性描述而没有定量依据。遵循"源自临床,回归临床"的原则,通过建立专家量表评估法进行中药药性量化研究。根据心理学"专家—新手"的研究范式设计了专家组和学生组,进行了数学模型构建、量表设计调查、信度效度分析等研究。通过对专家组和学生组的中药药性量化数据分析,发现两组量表的数据间有较高一致性,且与2010年版《中国药典》记载的中药药性顺序也有较高一致性,为进一步的中药药性量化研究奠定了基础。     

ICP-MS同时测定全血中铅、镉、砷含量的方法学比较研究

 目的应用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)技术,建立快速、准确地同时测定全血中铅(Pb)、镉(Cd)、砷(As)含量的方法。方法对标准曲线法和标准加入曲线法(一种由标准加入法转化的方法)进行方法学比较研究,并通过方法学比较结果确定测定方法。结果标准曲线法和标准加入曲线法测定时,3种元素的线性相关系数(r)、检出限(LOD)、重复性都令人满意;但标准曲线法测定时,3种元素的加样回收率92.00%～135.0%,国家标准物质(GBW09139e和GBW09140e)的测定值和标准值相差较大;而标准加入曲线法测定时,3种元素的加样回收率93.33%～102.0%,国家标准物质的测定值也几乎都在标准值范围内。结论标准加入曲线法比标准曲线法具有更好的加样回收率和准确度,是一种快速、准确的全血中有害元素测定方法。     

金七叶合剂解热镇痛作用研究

目的 :研究金七叶合剂的解热、镇痛作用。方法 :采用百白破三联菌苗所致家兔发热模型观察药物的解热作用 ;采用醋酸扭体法、热板法及电刺激法小鼠疼痛模型研究药物的镇痛作用。结果 :金七叶合剂能明显降低实验性发热动物体温 ,在三种疼痛模型上均表现出明显的镇痛作用。结论 :金七叶合剂具有解热和镇痛作用     

心脏停跳液中主要成分含量测定方法的研究

 目的研究心脏停跳液中主要成分含量测定的方法。方法以容量分析方法中的四苯硼钠法、乙二胺四乙酸二钠法和亚硝酸钠法分别测定停跳液中氯化钾、氯化钙、氯化镁和盐酸普鲁卡因的含量。结果本方法的平均回收率为：氯化钾100.3%，RSD为0.26%；氯化钙99.91%，RSD为0.51%；氯化镁99.83%，RSD为0.52%；盐酸普鲁卡因100.9%，RSD为0.54%。结论研究表明，本方法测定结果准确可靠，重现性好，为心脏停跳液的质量控制提供了实际可行的方法。     

三种不同免疫检验方法检测HIV抗体的价值比较

目的:对比3种不同免疫检验方法检测HIV抗体结果的可靠性。方法:选取本院住院及门诊患者136例,其中HIV初筛阴性68例,HIV初筛阳性68例,用CLIA法、ELISA法及胶体金法检测HIV抗体,对其中一种方法检测出HIV抗体阳性的标本用其它两种方法同时复查,并送检HIV确证实验室用WB法(金标准)进行确证试验。结果:136例患者中,初筛阳性患者68例,以免疫印迹法检测作为金标准,确证阳性患者32例,其中ELISA初筛出36例,灵敏度100%,特异度96.2%,误诊率3.8%,漏诊率0,可用度0.94,可靠度0.96,kappa值为0.922,与WB法比较具有诊断一致性(P>0.05);胶体金法初筛出36例,胶体金法灵敏度100%,特异度96.2%,误诊率3.8%,漏诊率0,可用度0.94,可靠度0.96,kappa值为0.922,与WB法比较具有诊断一致性(P>0.05);CLIA初筛出64例,CLIA灵敏度100%,特异度69.2%,误诊率30.8%,漏诊率0,可用度0.58,可靠度0.69,kappa值为0.514,与WB法比较不具有诊断一致性(P<0.05)。以CLIA法血清HIV抗体S/CO≥1作为HIV初筛阳性的临界判断,对64例CLIA初筛阳性的患者分别用ELISA、胶体法及WB法进行复查,发现S/CO为1~10组,WB法、ELISA阳性符合率为0,胶体金法阳性符合率为13.3%;S/CO为11~50组,WB法、ELISA及胶体金法阳性符合率均为66.7%,S/CO>50组,WB法、ELISA及胶体金法阳性符合率均为100%;以WB法为诊断基准,三组随着S/CO越大,真阳性率越高,三组比较具有统计学意义(P<0.05),ELISA、胶体金法复查初筛阳性的患者随着S/CO值越大,其阳性符合率越高,三组比较均具有统计学意义(P<0.05)。结论:三种免疫检测方法检测HIV抗体各有优势,医院可结合自身情况选择检测方法,对初筛阳性的标本可采取另一种方法复检,相互结合,及时对患者做出诊断,采取措施保护职业暴露人员。     

基于专家问卷的艾滋病皮肤瘙痒性病变中医诊疗规程研究

目的建立艾滋病皮肤瘙痒性病变中医诊疗规程草案。方法通过文献调研和专家论证,建立艾滋病皮肤瘙痒性病变中医诊疗规程草案。采用两轮问卷调查中医或中西医结合艾滋病领域专家对诊断、治疗、调护等关键问题的接受程度及建议,并修订诊疗规程。结果第1轮完整问卷回收率为96％,专家对病史及体检、3个证型的辨证标准、血虚风燥的辨证用药和调护等条目的认可程度较高,对概述、辅助检查、血热生风和风淫湿胜的辨证用药等条目的变异系数（cv）在0．1603～0．2473之间,认识差异较大。根据回收意见,对规程进行修改,并开展第2轮问卷调查。第2轮完整问卷回收率为100％,专家对病史及体检、诊断标准、血虚风燥、风淫湿胜的辨证标准和血虚风燥的辨证用药等条目的CV为0,认可程度高,一致性好。其他条目的CV为0．0638～0．1439,所以差异程度比第1轮小,专家意见的一致性有较大提高。两轮调查中单个条目对总体评价结果所做出的贡献相差不大。通过两轮调查得到了该规程的修订版本。结论两轮问卷调查的专家积极性较好,集中程度和协调程度均较好。通过两轮问卷调查,对该规程的诊断、治疗、调护等关键问题基本达成了较好的共识。     

基于酶速率法测定血浆同型半胱氨酸研究

目的：通过建立简便的酶速率法，对血浆同型半胱氨酸进行直接检测。方法：使用AU2700全自动生化分析仪，采用两点酶速率法，主波长341nm，副波长406nm，温度37℃，两点线性校准。结果：本法线性范围1．0～51．0μmol／L；日内CV为2．0％～3．1％，日间CV为4．1％～5．8％；低、中、高浓度的回收率分别为102．6％，99．4％，95．9％，平均为99．3％；酶速率法与Abbott Axsym免疫分析仪检测法比较，Y=1．018X-0．865，r^2=0．965。结论：酶速率法简便、快速、敏感、可靠，适用于临床实验室常规和自动化分析，值得推广应用。     

百日咳疫苗不同穴位接种的免疫应答

目的 观察百日咳疫苗穴位注射的免疫应答。方法 对小白鼠后海穴，中脘穴，腹腔注射百日咳疫苗观察其免疫力。结果 中脘穴保护率93.75%，后海穴保护率68.75%，腹腔注射保护率56.25%。结论 穴位免疫优于常规腹腔免疫，中脘穴，后海穴均有增强免疫力的作用。     

计算机模式识别法对类风湿性关节炎中医证候判断与常规临床判断的比较

根据１６３例类风湿性关节炎患者头发１４种元素的检测结果，采用计算机模式识别法中的动态聚类法在多维空间进行分类可得出五种类型，再用其识别法中的马氏距离法将其降到一维平面进行回判，然后将回判的结果与常规临床证候诊断所得出的肝肾两虚、寒热错杂、气阴两虚、湿热阻络及痰湿阻络证型的分类结果用观察一致性进行检测，其结果Ｋ（ｋａｐｐａ）＝０．７７，＞０．６。表明两种方法一致性相当可靠，并得出计算机模式识别法对中医证候的判断的敏感度为９６．６７％，特异度为９５．１５％。提示该法有可能对类风湿性关节炎中医证候作出较为客观的判断。