黄芩汤预防伊立替康所致迟发性腹泻的研究

目的:探讨中药复方黄芩汤对伊立替康(CPT-11)所致小鼠迟发型腹泻的预防作用.方法:健康雄性ICR小鼠40只随机分为5组,腹泻组ip伊立替康连续5d制备迟发性腹泻模型,正常组等量生理盐水代替,黄芩汤低(5 g·kg-1)、中(10 g·kg-1)、高(20 g·kg-1)剂量组ip伊立替康前1d分别按剂量ig给药,连续用药8d,观察迟发性腹泻发生情况及体重变化;实验第9天将小鼠处死,取血、结肠、盲肠、空肠、回肠组织.光镜下根据Chiu肠黏膜损伤评分方法对肠组织进行分级;Griess法检测肠组织匀浆液一氧化氮(NO)含量;免疫组化法测定增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平;瑞士-吉姆萨染色法测定中性粒细胞数.结果:小鼠腹腔注射CPT-11后,出现明显的迟发性腹泻.黄芩汤中、高剂量组小鼠腹泻发生率较腹泻组显著降低(P＜0.05);体重下降率较腹泻模型组降低;肠黏膜损伤程度比腹泻模型组显著降低,盲肠及结肠的中、高剂量组损伤较腹泻组显著且降低(P＜0.05),与剂量呈一定的量效关系;结肠的NO表达含量明显增加且PCNA表达减少(P＜0.05);还可增加血中性粒细胞数量(P＜0.01).结论:黄芩汤通过改善肠黏膜损伤程度、增加肠组织NO含量和减少PCNA表达,从而对CPT-11所致迟发性腹泻具有预防作用,还可缓解中性粒细胞减少症.     

生姜泻心汤治疗伊立替康导致的结直肠癌小鼠迟发性腹泻

目的观察生姜泻心汤(生姜、干姜、黄连等)对伊立替康(CPT-11)导致的迟发性腹泻结直肠癌小鼠的治疗效果,探讨其可能的作用机制。方法采用氧化偶氮甲烷/葡聚糖硫酸钠(AOM/DSS)诱导的雌性结直肠癌小鼠模型,随机分为正常组、模型组、生姜泻心汤组。生姜泻心汤组灌胃生姜泻心汤,正常组和模型组均灌胃生理盐水,检测腹泻指数、直肠病理形态,测定β-葡萄糖醛酸苷酶活性、白介素-15(IL-15)含有量和尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶1A1(UGT1A1)表达。结果生姜泻心汤组腹泻指数显著低于模型组,这可能与显著抑制β-葡萄糖醛酸苷酶的活性,提高血清IL-15的含有量和UGT1A1的表达有关。结论生姜泻心汤对AOM/DSS诱导结直肠癌小鼠由伊立替康导致的迟发性腹泻有一定的治疗作用。     

结肠康对恶唑酮诱导小鼠溃疡性结肠炎炎性反应的抑制作用

目的:观察结肠康对恶唑酮(Oxazolone,OXZ)诱导小鼠溃疡性结肠炎(Ulcerative colitis,UC)炎症反应的抑制作用。方法:小鼠颈背部3%恶唑酮致敏2天,第6天用1.5%恶唑酮灌肠,灌肠当日开始灌胃不同剂量结肠康。灌胃3天后,断头处死小鼠,酶联免疫吸附法(ELISA)测定结肠组织匀浆液中炎性因子IL-4、TNF-α、IL-1β和IL-10浓度。柳氮磺胺吡啶作为阳性对照药。结果:与空白对照组相比模型组IL-4浓度降低64.64%,TNF-α、IL-1β和IL-10浓度增加121.03%、73.04%和213.13%。结肠康6.4、12.8和25.6g/kg组能显著增高IL-4的浓度,降低TNF-α、IL-1β和IL-10浓度,实验结果提示结肠康0.32g/ml、0.64 g/ml和1.28g/ml呈剂量依赖性改善结肠炎症反应细胞因子浓度,结肠康1.28 g/ml剂量组治疗效果最好与阳性对照药SASP无显著差别。结论:结肠康能抑制OXZ诱导小鼠溃疡性结肠炎炎症反应,对UC具有一定得治疗作用。     

四神丸对IBS-D大鼠肠道屏障影响的实验研究

目的:通过研究四神丸及其拆方二神丸和五味子散对腹泻型肠易激综合征(Diarrhea-predominant irritable bowel syndrome,IBS-D)大鼠相关细胞因子的含量和肠黏膜屏障标志性蛋白表达情况的影响,探讨其治疗腹泻型肠易激综合征的作用机制。方法:选取SPF级雄性SD大鼠54只,随机分为正常组、模型组、阳性对照培菲康0.28 g/kg组、四神丸4.2 g/kg组、二神丸3.23 g/kg组和五味子散0.97 g/kg组。以复合因素制备脾肾阳虚型IBS-D大鼠模型,给药治疗14天后检测大鼠血清中相关炎症因子IL-10、TNF-α、IL-6和IL-1β,GAS和MTL,5-HT和CRF的含量,同时观察结肠组织病理变化,并运用Western Blot法检测肠黏膜屏障标志性蛋白Occludin、Claudin1表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠血清中的IL-10、GAS和MTL的浓度和肠细胞中Occludin、Claudin1的表达均显著降低,TNF-α、IL-6、IL-1β、5-HT和CRF的含量显著升高。结肠组织未见病理学变化。培菲康0.28 g/kg组、四神丸4.2 g/kg组、二神丸3.23 g/kg组和五味子散0.97 g/kg组药后均能有效减小IBS-D大鼠腹泻指数及降低肠道高敏感性且以四神丸全方组效果优于其拆方组。结论:四神丸可能通过保护肠道黏膜屏障、抑制炎症反应、改善胃肠道运动、消化系统的分泌功能紊乱和肠道内在敏感性来达到治疗腹泻型肠易激综合征的作用,且二神丸和五味子散有协同作用。     

参苓白术散对溃疡性结肠炎小鼠肠道调节性T细胞免疫调节作用

目的探讨参苓白术散对溃疡性结肠炎小鼠肠道调节性T细胞免疫调节作用及机制。方法 2,4,6-三硝基苯磺酸钠(Tfipitrobenzene sulfonic acid,TNBS)制造溃疡性结肠炎小鼠模型。实验设正常对照组、TNBS模型组、高剂量参苓白术散组、中剂量参苓白术散组、低剂量参苓白术散组及地塞米松组。造模后给予参苓白术散或地塞米松治疗10 d。实验结束处死小鼠,比较各组结肠长度、ELISA法测定肠组织肿瘤坏死因子-α(Tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白介素1β(Interleukin-1β,IL-1β)和白介素10(Interleukin-10,IL-10)水平、流式细胞仪测定肠系膜淋巴结淋巴细胞CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T比值。结果与模型组比较,高剂量参苓白术散组有效预防了TNBS结肠炎小鼠结肠长度缩短;与模型组比较,高剂量参苓白术散组明显降低肠黏膜TNF-α、IL-1β水平、显著升高肠系膜淋巴结淋巴细CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞比例、增加肠道黏膜IL-10分泌水平。结论参苓白术散通过提高肠道CD4+CD25+Foxp3+调节性T细胞数量发挥肠道黏膜免疫功能。     

白藜芦醇对溃疡性结肠炎小鼠肠黏膜细胞因子表达的影响

目的探讨白藜芦醇(Resveratro)l对溃疡性结肠炎(UC)治疗的可能机制。方法采用葡聚糖硫酸钠(Dextran sulfate Sodium,DSS)制作UC小鼠模型,小鼠随机分4成组:正常对照(NC)组、模型(MD)组、低剂量(RLD)、高剂量(RHD)白藜芦醇治疗组。造模7d同时给予干预治疗,停用造模药物并后续治疗7d。记录分析疾病活动指数(DAI),14d后处死小鼠,取结肠行HE染色;利用实时荧光定量RT-PCR法检测IL-10、TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA的表达,ELISA法测小鼠肠黏膜IL-10、TNF-α、IL-6和IL-1β蛋白水平。结果低、高剂量白藜芦醇治疗组小鼠第5～14天DAI明显低于模型组(P0.05);模型组IL-10表达明显低于正常组(P0.05),其TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA和蛋白表达则高于正常组(P0.05);低、高剂量白藜芦醇治疗组结肠IL-10mR-NA表达和蛋白水平明显高于模型组(P0.05),其TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA和蛋白水平则低于模型组(P0.05);高剂量白藜芦醇治疗组IL-10mRNA表达和蛋白水平明显高于低剂量组(P0.05),其TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA和蛋白水平则低于低剂量组(P0.05)。结论白藜芦醇可以提高抗炎细胞因子IL-10的水平并降低致炎细胞因子TNF-α、IL-6和IL-1β的水平,通过抗炎和降低肠道过度的免疫反应,对UC发挥治疗作用。     

四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎模型大鼠Th1/Th2免疫平衡的影响

目的:观察四神丸对脾肾阳虚型溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型大鼠Th1/Th2免疫平衡的影响。方法:将90只大鼠随机分为空白组、模型组、对照组、四神丸高剂量组、四神丸中剂量组和四神丸低剂量组,每组各15只。除空白组外,其余各组制备脾肾阳虚证溃疡性结肠炎大鼠模型。造模成功后,空白组则以等体积生理盐水灌胃,对照组以柳氮磺胺嘧啶水溶液0. 5 g·kg-1灌胃,四神丸低剂量组以四神丸药液13 g·kg-1灌胃,四神丸中剂量组以四神丸药液26g·kg-1灌胃,四神丸高剂量组以四神丸药液52 g·kg-1灌胃,模型组灌服等体积生理盐水,共21 d。采用酶联免疫法检测大鼠血清白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)和白细胞介素-4(interleukin-4,IL-4)水平,并计算IL-1β/IL-4;取胸腺组织称质量并计算大鼠胸腺指数; HE染色观察大鼠结肠损伤情况,用免疫组织化学法检测结肠黏膜IL-13的表达。结果:与空白组比较,模型组胸腺指数明显较低,差异具有统计学意义(P 0. 05);与模型组比较,四神丸中剂量组、四神丸高剂量组胸腺指数高于对照组,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与空白组比较,模型组和对照组大鼠血清IL-1β含量、IL-1β/IL-4比值显著增高,IL-4含量均降低,差异具有统计学意义(P 0. 05)。与模型组比较,四神丸中剂量组、四神丸高剂量组大鼠IL-1β含量、IL-1β/IL-4比值显著降低,其中以四神丸中剂量组降低明显; IL-4含量显著升高,其中以四神丸中剂量组升高明显,差异有统计学意义(P 0. 05)。与空白组比较,模型组大鼠血清IL-13含量降低,差异具有统计学意义(P 0. 05);与模型组比较,四神丸中剂量组、四神丸高剂量组大鼠结肠组织IL-13蛋白表达增高,其中以四神丸高剂量组表达升高显著,差异具有统计学意义(P 0. 05)。结论:四神丸可提高UC大鼠机体免疫功能,抑制炎症反应,其作用机制可能与调节Th1/Th2免疫平衡有关。     

四神丸化裁治疗溃疡性结肠炎的对比性实验研究

目的 探讨四神丸化裁前后治疗实验性溃疡性结肠炎的效果及作用机制异同.方法 50只小鼠分成5组:即正常组、模型组、四神丸组、加味四神丸组和阳性对照组,采用传统的DSS法复制小鼠溃疡性结肠炎模型,给药10 d后,观察其病理组织学变化,并采用流式细胞术检测其结肠上皮细胞凋亡率,用ELISA测定其外周血PAF及其结肠组织匀浆TNF-α,IL-10,TGF-β表达水平.结果 各治疗组结肠指数、结肠损伤评分、病理组织学评分及细胞凋亡率较模型组明显下降(P＜0.01或P＜0.05).同时四神丸明显升高TGF-β表达水平(P＜0.05),而对TNF-α,IL-10,PAF表达水平作用不明显.而加味四神丸则可显著降低TNF-α及PAF表达、升高TGF-β水平较明显(P＜0.01或P＜0.05),同时,两治疗组之间比较,可见加味四神丸降低TNF-α,PAF表达,升高IL-10水平明显优于四神丸组.结论 四神丸和加味四神丸二者均可有效缓解实验性溃疡性结肠炎的炎症损伤,其作用机制的差异性可能在于加味四神丸可以通过抑制血小板活化因子,调节结肠局部促/抗炎因子之间的平衡来实现,而四神丸可能是通过升高TGF-β表达水平,促进上皮损伤后修复,溃疡愈合.     

四神丸对溃疡性结肠炎模型大鼠Toll样受体2、白细胞介素-1β和白细胞介素-4的影响

目的观察四神丸对溃疡性结肠炎(UC)模型大鼠结肠组织Toll样受体2(TLR2)基因表达及血清白细胞介素(IL)-1β、IL-4含量的影响,探讨其治疗UC的作用机制。方法采用复合方法制作脾肾阳虚型UC大鼠模型。实验大鼠分为空白组、模型组、阳性药组、四神丸组,阳性药组予柳氮磺吡啶肠溶片水溶液0.5 g/kg灌胃,四神丸组予四神丸26 g/kg灌胃,每日1次,共21 d。肉眼观察结肠组织损伤情况,并检测大鼠结肠组织TLR2基因表达及血清IL-1β、IL-4的含量。结果与空白组比较,模型组大鼠结肠黏膜肉眼观察有显著炎症、充血、溃疡形成(P0.01),模型组大鼠结肠组织TLR2基因表达与血清IL-1β含量升高(P0.05),IL-4含量降低(P0.01);与模型组比较,四神丸组大鼠结肠组织TLR2基因表达和血清IL-1β含量均降低(P0.05,P0.01),IL-4含量升高(P0.05)。结论四神丸治疗UC机制可能与调节肠道免疫细胞因子、抑制TLR2信号避免其过度激活有关。     

清热化湿调枢方对溃疡性结肠炎小鼠肠道黏膜的影响北大核心CSCD

目的观察清热化湿调枢方对溃疡性结肠炎(UC)模型小鼠肠道黏膜的影响并分析其机制。方法选用36只SPF级小鼠,除正常组6只外,其余小鼠予2.5%葡聚糖硫酸钠(DSS)水溶液自由饮用7天以制备UC模型。将制备成功的小鼠按随机对照原则平均分为模型组,美沙拉嗪组和清热化湿调枢方高、中、低剂量组,每组6只。正常组和模型组予0.5 mL纯水灌胃;美沙拉嗪对照组给予0.5 mL剂量为0.52 g/(kg·d)美沙拉嗪混悬液灌胃;清热化湿调枢方低、中、高剂量组分别给予0.5 mL剂量为0.845、1.69、3.38 g/(kg·d)清热化湿调枢方混悬液灌胃。各组均连续干预10天后,观察各组小鼠疾病活动指数(DAI)评分、结肠长度,ELISA法检测结肠组织细胞因子TNF-α、IL-10、C-反应蛋白(CRP)以及肠黏膜分泌型免疫球蛋白A(slgA)水平,异硫氰酸荧光素-葡聚糖(FITC-D)法检测小肠黏膜通透性,并取小鼠结肠组织HE染色以观察病理形态改变。结果与正常组比较,模型组小鼠体重减轻,IL-10和slgA含量降低,结肠长度减短(P<0.05),DAI评分、TNF-α和CRP水平、血清FITC-D含量升高(P<0.05),结肠黏膜上皮显著缺损、隐窝结构紊乱、腺体变形且数量减少、大量炎性细胞浸润。与模型组比较,美沙拉嗪组和清热化湿调枢方高剂量组DAI评分差值升高(P<0.05),美沙拉嗪组和清热化湿调枢方高、中剂量组小鼠体重差值、IL-10和slgA含量、结肠长度增加(P<0.05),TNF-α和CRP水平、血清FITC-D含量降低(P<0.05),美沙拉嗪组和清热化湿调枢方高剂量组小鼠结肠黏膜均显著改善,黏膜上皮稍欠光滑,隐窝和腺体结构大致完整,极少炎性细胞浸润。结论清热化湿调枢方对DSS诱导的UC小鼠肠道黏膜损伤及腹泻、便血等症状有一定改善作用,其效应机制可能与改善肠道通透性有关。