银杏酸的分离制备及HPLC分析

目的：利用银杏外种皮分离制备银杏酸，并测定银杏酸含量。方法：采用石油醚超声萃取和硅胶柱层析法从银杏外种皮中分离制备银杏酸；用高效液相色谱法测定银杏酸含量。色谱柱为HiQsilC18柱，流动相为甲醇3％HAc溶液(90：10，V／V)，流速1ml／min，检测波长为310nm，柱温40℃。结果：银杏酸在l.144—5．720μg范围内线性关系良好(r=0．9978)，平均回收率97．50％，RSD为1．70％。结论：可从银杏外种皮中分离制备银杏酸；银杏酸含量测定方法准确、可靠，可用于样品中银杏酸含量的分析。     

银杏叶无机元素分析

银杏为银杏科银杏属银杏 Ginkgo biloba L.的果实 ,味甘、苦涩、性平、有小毒。能敛肺、定喘、止遗尿、白带。据研究报道 [1 ] ,白果含白果酸、氢化白果酸、氢化白果亚酸、白果酚、白果二酚、白果醇、银杏毒和钙、磷、铁等化合物。为了进一步探索银杏的化学成分 ,最近我们对银杏作了无机元素的分析研究 ,现报道如下 :表 1　银杏中无机元素的分析结果 μg/ g样品产地 Ca Cu Mn Zn Mg Fe Na1江苏泰兴 1 0 7.95.40 2 .90 4 .2 2 2 0 3.898.2 5 33.02江苏连云港 96.6 9.0 6 4.0 2 7.42 1 98.0 1 2 2 .0 2 0 .03江苏徐州 2 2 9.89.92 4 .0 2 …     

HPLC同时测定脉平片中白果内酯、银杏内酯A和银杏内酯B、银杏内酯C的含量

目的:建立脉平片中白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C的含量测定方法。方法:采用HPLC对制剂中银杏叶提取物的主要成分白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯C进行定量分析。CAPCELL PAK C18色谱柱(4.6mm×250mm 5μm);流动相四氢呋喃-乙腈-水(12∶10∶78),蒸发光散射检测器,柱温30℃,流速1.0mL·min-1。结果:银杏内酯C在1.11~6.66μg,白果内酯在2.232~13.392μg,银杏内酯A在1.912~11.472μg,银杏内酯B在1.502~9.004μg均呈良好的线性关系,平均回收率分别为96.36%,97.18%,97.71%,96.57%;RSD分别为1.0%,1.4%,2.1%,1.4%。结论:方法准确可靠,专属性强,结果稳定,重复性好,可有效控制制剂质量。     

不同产地的白果清炒后银杏内酯A、C的含量对比研究

目的探讨5种不同产地的白果清炒后银杏内酯A、银杏内酯C的含量变化。方法通过HPLC-UV法对比不同产地的白果炮制前后银杏内酯A、银杏内酯C的含量改变。结果山东省临沂市、江苏省徐州市、广西壮族自治区、安徽省亳州市、徐州市新沂市的白果清炒后银杏内酯A的含量差分别为20.1、24.4、29.5、27.5、26.9μg/g,银杏内酯C的含量差分别为10.1、14.4、20.7、19.7、14.4μg/g。结论除了安徽省亳州市白果的银杏内酯A含量较高外,其余产地的银杏内酯A、银杏内酯C的含量差别不大,炮制后损失的含量相当,证明清炒法对白果成分影响稳定。     

银杏花粉中核苷、氨基酸及无机元素的成分分析

目的 对银杏花粉中核苷类、氨基酸类及无机元素进行分析评价,为银杏花粉资源的综合利用提供科学依据。方法 采用UPLC-TQ/MS技术测定银杏花粉中核苷类和游离氨基酸类成分,采用ICP-AES测定银杏花粉中的无机元素的量。结果 测定了银杏花粉中甲硫氨酸、天冬氨酸等24种游离氨基酸,总量高达62.316 mg/g,游离的必需氨基酸苏氨酸、赖氨酸等共6.23 mg/g,其中天冬氨酸量高达17.11 mg/g,也检测到含有少量牛磺酸0.24 mg/g。核苷类成分分析表明,银杏花粉中含有16种核苷,其中以尿苷量最高为251.99μg/g,其他普遍较低。元素分析结果表明,银杏花粉中K的量最高26.301 mg/g,其次Ca、Fe、Mg量依次为7.076、2.545、5.361 mg/g。As、Cd等重金属元素未检测到。结论 基于核苷、氨基酸和矿物质元素的分析结果,银杏花粉可开发为氨基酸补充剂,为银杏花粉资源的开发利用提供科学依据。     

银杏叶滴丸中3种萜内酯类化合物的HPLC-ELSD检测北大核心CSCD

目的：建立HPLC-ELSD法同时检测银杏叶滴丸中银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯K的含量。方法：Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm,5μm）柱;流动相：正丙醇∶四氢呋喃∶水=1∶30∶69;流速：1.0 m L/min;柱温：30℃,蒸发光检测器的漂移管温度60℃,载气流量25 L/min。结果：5个批号银杏叶滴丸的银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯K的含量分别为14.6～15.7 mg/g、7.9～9.1 mg/g和4.2～6.7 mg/g。结论：该实验建立的HPLCELSD方法同时检测为银杏叶滴丸的质量控制提供了参考。     

Beclin1基因慢病毒载体的鉴定包装及其在银杏酮酯保护衰老海马神经元中的作用

目的:探讨自噬相关基因Beclin1在银杏酮酯保护衰老海马神经元中的作用。方法:使用酶切和DNA测序方法对已构建好的p LVX-shRNA2-Beclin1慢病毒载体进行鉴定,并与辅助包装质粒载体共同转入293T细胞得到病毒颗粒。将病毒颗粒转染原代大鼠海马神经元。培养原代大鼠海马神经元并随机分为6组:正常组、模型组、银杏酮酯组、银杏酮酯干扰组、阳性对照银杏叶提取物组和银杏叶提取物干扰组。正常组用正常培养基培养,模型组用H2O2(200μM)诱导18小时建立衰老样细胞模型;银杏酮酯和银杏叶提取物组分别用200μg/ml的药物预处理6小时后再加入H2O2诱导18小时;其余两组在银杏酮酯和银杏叶提取物组基础上分别加入慢病毒载体颗粒。通过荧光定量PCR和免疫印迹方法检测Beclin 1、LC3-Ⅱ和SyntheinⅠ表达。结果:酶切和DNA测序结果表明重组慢病毒载体p LVX-shRNA2-Beclin1的插入序列正确。用293T细胞包装的重组慢病毒能够感染原代大鼠海马神经元。体外荧光定量PCR结果显示:慢病毒颗粒转染衰老海马神经元后,200μg/ml银杏酮酯和银杏叶提取物干扰组Beclin1 mRNA水平降低。免疫印迹结果显示:与模型组相比,200μg/ml银杏酮酯和银杏叶提取物组Beclin1、LC3-Ⅱ和Synpain I蛋白表达均增加;慢病毒颗粒转染后,200μg/ml银杏酮酯和银杏叶提取物干扰组神经元Beclin1、LC3-Ⅱ和Synpain I蛋白表达明显降低。结论:Beclin1与银杏酮酯(200μg/ml)保护衰老海马神经元有关。     

治疗感冒有佳肴

银杏粥原料:绿豆50g,银杏10枚,白糖20g。制作:将银杏炒黄,去掉外皮及薄膜与果芯,绿豆淘洗干净备用。锅内加水适量,下绿豆、银杏煮稠时,撒入白糖即可食用。     

高效液相色谱法测定复方银杏注射液中银杏总黄酮醇苷含量

目的建立复方银杏注射液中银杏总黄酮醇苷的含量测定方法。方法高效液相色谱法,Zorbax-Extend-C18柱(5μm,4.6 mm×150 mm);甲醇-0.4%磷酸溶液(45∶55)为流动相,流速为1.0 ml.min-1,柱温30℃,检测波长360nm。结果槲皮素浓度在2.07~69.00μg.ml-1,山柰素浓度在1.91~63.60μg.ml-1,异鼠李素浓度在0.73~24.20μg.ml-1范围内呈良好线性关系。结论该方法分析时间短、专属性好、稳定,可以作为复方银杏注射液质量控制方法。     

银杏酮酯软胶囊中萜类内酯的含量测定

目的建立银杏酮酯软胶囊中的萜类内酯含量测定方法。方法采用高效液相色谱法蒸发光散射检测器检测;用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(150×4.6mm,5μm);流动相:正丙醇-四氢呋喃-水(1:15:84);柱温为25℃;ELSD检测参数:漂移管温度:115℃;载气:N2;流速:3.5 L/min。结果分别以白果内酯峰面积对数(lgA1)、银杏内酯A峰面积的对数(lgA2)、银杏内酯B面积的对数(lgA3)和银杏内酯C面积对数(lgA4)与进样量m(μg)对数(lgm)作一次线性回归,得线性方程分别为:lgA1=1.004 4lgm+5.241 2(r=0.999 9)、lgA2=0.985 1lgm+5.306 3(r=0.999 8)、lgA3=0.996 8lgm+4.874 1(r=0.999 9)、lgA4=1.0154gm+5.042(r=0.999 6),表明白果内酯在3.246μg~21.64μg范围内、银杏内酯A在2.864μg~17.184μg范围内、银杏内酯B在2.163μg~14.42μg范围内、银杏内酯C在1.311 0μg~8.740 0μg范围内进样量的对数与峰面积的对数呈良好线性关系。结论该法较国家标准中采用的示差检测器检测具有灵敏度高,稳定性好,选择性强等特点,可以用作银杏酮酯软胶囊中的萜类内酯含量测定方法。     

银杏内酯缓释片药代动力学研究

目的:研究银杏内酯缓释片与普通片在犬体内的药动学特征及生物利用度.方法:采用LC-MS测定比格犬体内的血药浓度,DAS 2.0药代动力学软件估算银杏内酯缓释片及普通片在体内的药代动力学参数.结果:银杏内酯缓释片和普通片银杏内酯A的Cmax分别为443.51,1 039.30μg·L-1;tmax分别为2.92,1.08 h;AUC0-12 h分别为1 808.21,2 041.37 h·μg-1.L-1;MRT分别为5.18,3.18 h;相对生物利用度为88.58%.银杏内酯缓释片和普通片银杏内酯B的Cmax分别为407.13,547.38μg·L-1;tmax分别为2.92,1.08 h,AUC0-12 h分别为1 987.31,1748.04 h·μg-1·L-1;MRT分别为6.05,4.98h;相对生物利用度为113.69%.结论:银杏内酯缓释片具有明显的缓释特征,与参比制剂生物等效.     

银杏叶滴丸中3种萜内酯类化合物的HPLC-ELSD检测

目的:建立HPLC-ELSD法同时检测银杏叶滴丸中银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯K的含量。方法:Phenomenex C_(18)(250 mm×4.6 mm,5μm)柱;流动相:正丙醇∶四氢呋喃∶水=1∶30∶69;流速:1.0 m L/min;柱温:30℃,蒸发光检测器的漂移管温度60℃,载气流量25 L/min。结果:5个批号银杏叶滴丸的银杏内酯A、银杏内酯B和银杏内酯K的含量分别为14.6~15.7 mg/g、7.9~9.1 mg/g和4.2~6.7 mg/g。结论:该实验建立的HPLCELSD方法同时检测为银杏叶滴丸的质量控制提供了参考。     

银杏达莫注射液联合脑复康片治疗血管性痴呆60例临床观察

目的观察银杏达莫注射液联合脑复康片对血管性痴呆患者的临床疗效。方法将60名患者随机分为两组。治疗组30例，应用银杏达莫30mL加入生理盐水静脉输注（15d为1个疗程，应用3个疗程），同时服用脑复康片0．2g，每次0．4g，tid。对照组30例，服用脑复康片，每次0．4g，tid。两组疗程均为两个月。治疗前后进行简易精神状态量表（MMSE）、长谷川痴呆量表（HDs）及SF-36健康状况调查问卷评定评分。结果治疗组MMSE、HDS和SF-36评分显著提高（P〈0．01），与对照组对比具有显著性差异（P〈0．05）。结论用银杏达莫注射液联合脑复康片治疗血管性痴呆临床疗效较好。     

UPLC-MS/MS测定银杏叶提取物中5种微量银杏酸

目的:建立UPLC-MS/MS同时测定银杏叶提取物中5种微量银杏酸的方法。方法:以UPLC BEH C18(2.1 mm×100 mm,1.7μm)为色谱柱,甲醇-0.1%甲酸水溶液为流动相,流速0.4 m L·min-1,柱温30℃;质谱仪以多反应离子监测(MRM)方式进行相关离子检测。结果:测定的氢化白果酸、白果新酸、白果酸、十七烷一烯银杏酸以及十七烷二烯银杏酸在5.0 min内分离良好,在测定的质量浓度范围内(0.20~200.00μg·L-1)线性关系良好(r0.992 3);加样回收率(n=6)RSD均5%(98.86%~103.30%)。不同厂家银杏叶提取物中的银杏酸含量差异较大(7.58~23.08μg·g-1),最高含量高达百万分之二十以上,仅有8家提取物低于百万分之十,市面不同厂家生产的银杏叶提取物普遍银杏酸含量偏高。在所测定的各批次样品中白果酸、十七烷一烯银杏酸以及中白果新酸平均含量较高,十七烷二烯银杏酸和氢化白果酸平均含量较低。根据8家合格银杏叶提取物厂家的测定结果,建议所测定的5种银杏酸即:氢化白果酸、白果新酸、白果酸、十七烷一烯银杏酸以及十七烷二烯银杏酸的质控范围分别控制在2.94~3.59,0.97~1.18,2.35~2.88,2.94~3.59,0.59~0.73μg·g-1。结论:该方法可用于银杏酸类成分的快速定量分析。     

康脉灵胶囊质量标准研究

目的:建立康脉灵胶囊(银杏叶提取物,天麻,川芎)的质量标准.方法:采用HPLC法对制剂中主要成分银杏黄醇苷进行定量分析.色谱柱:Watersμ bondapak C18(3.9 mm×300 mm,5μm),流动相:甲醇-0.4%磷酸溶液(50:50);测波长为360 nm.对处方中其他成分天麻、川芎、银杏萜内酯以及银杏酸进行薄层色谱检测.结果:槲皮素、山奈素、鼠李素分别在0.150μg～1.50μg,0.142μg～1.42μg和0.096μg～0.μg范围内呈线性.平均回收率均为98.9%RSD分别为0.98%,1.15%和1.57%(n=5).薄层图谱斑点清晰,阴性对照无干扰,银杏酸限量低于5 g·kg-1.结论方法准确可靠,专属性强,结果稳定,重现性好,可有效控制制剂质量.     

银杏内酯滴丸质量控制方法探讨

目的:对银杏内酯滴丸的含量测定方法进行研究,同时对滴丸中主成分的提取条件进行筛选。方法:采用HPLC,C18柱,ELSD检测器,流动相为正丙醇-四氢呋喃-水(1∶25∶74),对分析方法进行了验证。结果:银杏内酯A进样量在2.45～12.25μg.mL-1范围内线性关系良好,银杏内酯B进样量在5.09～25.45μg.mL-1范围内线性关系良好,加样回收率分别为:99.06%和98.99%,样品溶液8h内稳定。结论:所建立的样品提取方法可行,分析方法专属性强、灵敏度高,测定结果准确、可靠,适用于银杏内酯滴丸的质量控制。     

HPLC-ELSD法测定桂红胶囊中银杏萜内酯的含量

目的:探讨蒸发光散射检测器高效液相色谱法(HPLC-ELSD)测定桂红胶囊中银杏萜内酯含量的可行性。方法:色谱柱为Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5μm),流动相为甲醇-水(35∶65),流速1 m L/min,蒸发光散射检测器(ELSD)漂移管温度为105℃,载气流速3 L/min,柱温30℃。结果:白果内酯、银杏内酯A、银杏内酯B、银杏内酯C分别在2.04~20.40μg、2.08~20.80μg、1.36~13.60μg、1.22~12.20μg范围内呈线性关系,平均回收率分别为99.92%,98.10%,97.75%,99.31%,RSD值分别为2.25%,2.24%,1.17%,1.45%,回收率符合要求。结论:该方法准确可靠,专属性强,结果稳定,重现性好,可用于测定桂红胶囊中银杏萜内酯含量。     

银杏叶提取物中酚酸的含量测定及去除方法考察

目的:建立银杏叶提取物中银杏酚酸含量测定方法,并考察其去除方法.方法:运用HPLC测定银杏酚酸的含量;以槲皮素为对照品,HPLC测定总黄酮醇苷含量,考察银杏酚酸的去除方法.结果:用吸附剂及离子交换树脂合用法去除银杏酚酸效果较好,银杏叶提取物处理后银杏酚酸含量为2.77 μg·g-1.结论:该研究得到的银杏叶提取物中酚酸含量符合国际标准要求,且其去除方法不影响银杏总黄酮含量.     

银杏达莫注射液中黄酮类和萜类内酯7种成分的定量测定

目的建立银杏达莫注射液定量测定方法。方法黄酮类成分(槲皮素、山柰素和异鼠李素)采用Agela C18柱(150mm×4.6 mm,5μm),乙腈-0.4%磷酸水溶液为流动相,梯度洗脱,体积流量1.0 m L/min,检测波长360 nm,柱温35℃。内酯类成分(银杏内酯A、B、C及白果内酯)采用Agela C18柱(150 mm×4.6 mm,5μm),甲醇-四氢呋喃水溶液(10∶75)为流动相,梯度洗脱,体积流量0.8 m L/min,用蒸发光散射检测器检测,柱温30℃。结果分别取10个批次的银杏达莫注射液,测定7个主要成分的量,槲皮素12.4μg/m L、山柰素20.8μg/m L、异鼠李素5.5μg/m L、银杏内酯A 7.2μg/m L、银杏内酯B 2.6μg/m L、银杏内酯C 4.7μg/m L、白果内酯102.0μg/m L。结论建立的方法稳定性、重复性、精密度等方面考察均符合要求,可作为银杏达莫注射液质量控制方法。     

银杏酸的荧光特征和光热稳定性研究

目的 研究银杏酸的荧光特征,探讨光、热对银杏酸稳定性的影响.方法 通过荧光扫描研究溶剂、pH值对银杏酸荧光特性的影响,建立检测银杏酸的荧光分光光度法.结果 银杏酸在pH 4.0甲醇溶液中荧光强度较强,激发波长279 nm,发射波长404 nm时,银杏酸在0.221～20.31 μg/ml浓度范围内与荧光强度呈现良好的线性关系,相关系数为R=0.997 5;检测限0.023 5 μg/ml.结论 银杏酸溶液对光不稳定,随光照时间延长浓度降低;银杏酸溶液在5℃时稳定,25℃时稳定性有所下降,并随温度升高或加热时间延长降解率增大.该方法可用于测定光照、加热对银杏酸的影响.