基于药效学试验的黄连解毒汤大孔树脂精制工艺筛选

目的:研究比较黄连解毒汤水提取液体系经大孔树脂精制后的药理活性及化学组成变化,探讨中药复方树脂精制工艺的优选原则,为中药复方的精制分离提供实验依据。方法:选用目前市售的10种不同极性的聚苯乙烯型大孔树脂对黄连解毒汤全方水提取液体系进行精制,采用鼠性肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC-12细胞活性跟踪筛选,MTT法测定全方水提取物及各大孔树脂精制物对低糖DMEM和氯化钴诱导的PC-12细胞缺糖缺氧损伤的影响。以RP-HPLC确定全方水提取物及各大孔树脂精制物中6种指标性成分———小檗碱、巴马汀、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素、栀子苷的含量。结果:经过X-5型大孔树脂精制后的黄连解毒汤水提取物能更好的保留原有复方各成分的比例,且药效作用与黄连解毒汤原方水提取液保持一致。结论:该研究为黄连解毒汤的临床用药剂型改进和实现工业化生产奠定了实验基础。     

黄连解毒汤全方和不同极性部位的活性筛选

目的:研究比较黄连解毒汤全方水提液体系、水提液体系经有机溶剂梯度萃取后不同极性部位中指标性成分的变化,通过药效学筛选,探讨黄连解毒汤改善脑缺血、益智作用的有效部位及其化学组成,为该方的精制分离提供实验依据。方法:黄连解毒汤全方经水煎煮得水提液(部位Ⅰ),水提液浓缩后以石油醚、乙酸乙酯和水饱和正丁醇梯度萃取,得到石油醚萃取物(部位Ⅱ)、乙酸乙酯萃取物(部位Ⅲ)、水饱和正丁醇萃取物(部位Ⅳ)、残留水层上清液(部位Ⅴ)、残留水层沉淀(部位Ⅵ),以栀子苷、黄芩苷、巴马汀、小檗碱、黄芩素和汉黄芩素6种成分为对照,应用RP-HPLC确定各萃取物中6种指标性成分的含量;选用鼠源肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC-12细胞活性跟踪筛选,MTT法测定黄连解毒汤及各萃取部位对低糖DMEM和氯化钴诱导的PC-12细胞缺糖缺氧损伤的影响。结果:部位Ⅴ中各指标性成分含量较高,且6种指标性成分的比例与部位Ⅰ相似;部位Ⅰ,Ⅴ对PC-12细胞的缺糖缺氧损伤保护作用明显。结论:部位Ⅴ为黄连解毒汤改善脑缺血、益智作用的有效部位。     

黄连解毒汤水溶液体系化学成分与树脂吸附-筛分原理关联的初步研究

目的:探讨中药复方水溶液体系下黄连解毒汤中主要药效成分与树脂吸附和筛分原理之间的内在关联,为黄连解毒汤的剂型改进奠定实验基础.方法:选择目前市售的11种不同类型大孔树脂进行静态吸附和解析实验.RP-HPLC比较各组水溶液体系精制前后生物碱、黄酮、环烯醚萜苷三大类药效中指标性成分含量的动态变化.结果:不同类型大孔树脂对黄连解毒汤中三大类药效成分的吸附率、解析率差异均较大.极性较小、平均孔径较大的X-5,AB-8型树脂对生物碱类的吸附率、解析率均较高;表面积和平均孔径较大的X-5,ADS-17,ADS-7,NKA-9,D151型树脂对黄酮类成分的富集作用较好;平均孔径较大的X-5,S-8,NKA-Ⅱ型树脂和极性较大的ADS-7,D151型树脂对环烯醚萜苷类成分的富集作用较好高.结论:在中药复方水溶液体系下,采用树脂组合的方式,可以优化目标产物的分离工艺.     

SVM算法用于黄连解毒汤3种指标性成分配伍浓度与药效作用相关性的研究

目的 将支持向量机算法用于中药复方物质基础研究,探讨建立能反映黄连解毒汤中指标性成分质量浓度与药效作用相关性的数学模型.方法 根据数学组合原理,将黄连解毒汤君(黄连)、臣(黄芩)、佐(黄柏)、使(栀子)4味药组合为11组,每组分别采用膜分离、大孔吸附树脂进行分离,得到22个部位.选用鼠性肾上腺髓质嗜铬细胞瘤PC-12细胞活性跟踪筛选,MTT法测定黄连解毒汤及各分离部位对过氧化氢(H2O2)、氯化钾(KCl)、连二亚硫酸钠(Na2S2O4)诱导的PC-12细胞损伤的影响.应用支持向量机(Support Vector Machine)算法考察标识黄连解毒汤的3种指标性成分小檗碱(以盐酸小檗碱计)、黄芩苷、栀子苷量与保护率之间的相关性,寻找3种成分浓度的优化配比关系.结果 小檗碱-黄芩苷-栀子苷的浓度比为1∶13∶12时,样品对过氧化氧致细胞损伤的保护率最高;小檗碱-黄芩苷-栀子苷的浓度比为13∶1∶3时,样品对连二亚硫酸钠造模的保护率最高;而对于氯化钾造成的损伤,未能得出最优浓度.结论 不同造模机制下得到的黄连解毒汤中指标性成分的最佳浓度比不同,该汤剂中指标成分适宜的浓度范围及比例需要进一步药理实验研究确定.     

大孔吸附树脂对黄连解毒汤的精制作用研究

目的:研究大孔吸附树脂对黄连解毒汤的精制作用。方法:采用薄层扫描及分光光度法,测定经过树脂前后提取液中小檗碱、栀子苷、总生物碱含量的变化,优选树脂种类、吸附及解析条件。结果:YWD-09D大孔吸附树脂适合黄连解毒汤的精制。树脂的吸附容量为1∶1.3;上柱液浓度为0.4 mg/ml,pH值为4,流速为2 ml/min,树脂径高比为1∶20;洗脱剂为4倍柱体积的90%乙醇。结论:YWD-09D大孔吸附树脂及其优选出的条件适合黄连解毒汤的精制。     

大孔树脂纯化川芪眼用凝胶水提液工艺研究

目的研究大孔吸附树脂富集川芪眼用凝胶水提液中有效成分的工艺条件及参数。方法以黄芪甲苷和阿魏酸为指标成分,采用高效液相色谱法进行含量测定,优选大孔树脂纯化的最佳工艺。结果 D101大孔吸附树脂对待测成分的纯化效果较好,最佳精制工艺条件为:上样浓度为0.3 g原药材/m L,上样量为6倍上样液,洗脱液为6倍树脂量的70%乙醇溶液,动态洗脱流速为6 BV/h。结论 D101大孔吸附树脂纯化川芪眼用凝胶水提液的最佳工艺稳定、可行。     

不同纯化方法对黄连解毒汤中盐酸小檗碱含量的影响

目的:比较了3种纯化方法对黄连解毒汤中盐酸小檗碱含量的影响,以优选出黄连解毒汤的水提取液的最佳纯化方法。方法:对黄连解毒汤的水提取液分别用醇沉、大孔树脂吸附和吸附澄清剂澄清3种方法纯化,并用HPLC法测定了所得提取物中盐酸小檗碱的含量,以此为指标对3种纯化方法进行了比较研究。结果:大孔树脂吸附法出膏率最低,醇沉法次之,吸附澄清法最高;盐酸小檗碱含量以大孔树脂吸附法最高,醇沉法次之,吸附澄清法最低。结论:大孔树脂吸附法为黄连解毒汤水提取液的最佳纯化方法。     

不同相对截留分子量聚醚砜超滤膜精制黄连解毒汤效果的研究

目的 以黄连解毒汤(黄连、黄柏、黄芩和栀子)为研究对象,探讨采用不同相对截留分子量聚醚砜超滤膜处理后高分子物质和指标性成分变化规律以及药理作用差异,为优选黄连解毒汤超滤工艺研究提供依据.方法 逐级用pes-5w、pes-3w、pes-2w、pes-6k的超滤膜处理黄连解毒汤离心液,测定不同膜处理后渗透液和离心液中高分子物质(果胶和蛋白质)和药用指标性成分(栀子苷、黄芩苷、巴马汀和小檗碱)的质量分数及其对嗜铬细胞瘤(PC-12细胞)缺血缺氧的保护和改善作用.结果 随着膜相对截留分子量的降低.各级渗透液的高分子物质的质量分数不同程度地降低;指标性成分的质量分数除黄芩苷逐级降低外,其他都呈升高趋势;pes-3w的综合指标性成分质量分数最高;药理实验证明pes-5w渗透液对PC-12细胞缺氧缺血有很好的改善作用.结论 pes-Sw超滤膜既能有效去除非药用成分或药用性较差的物质,又能保留有效成分,适合于黄连解毒汤的精制.     

黄连解毒汤化学成分及其神经细胞保护作用研究

目的 研究黄连解毒汤的化学成分,并探索该复方及其代表性成分的神经细胞保护作用.方法 运用大孔树脂、硅胶、C18反相硅胶、Sephadex LH-20制备液相等色谱技术对黄连解毒汤进行化学成分的分离;应用UV、MS、NMR等技术对所得化合物的结构进行鉴定;并运用体外神经细胞保护的药理模型,对黄连解毒汤和其中京尼平苷、小檗碱、黄芩苷进行了神经保护作用的筛选.结果 从黄连解毒汤中分离鉴定了19个化合物,分别为小檗碱(1),巴马亭(2),黄芩苷(3),黄芩素(4),汉黄芩素(5),千层纸素A(6),京尼平苷(7),鸡屎藤次苷甲酯(8),京尼平-1-O-β-D龙胆双糖苷(9),6'-O-对香豆酰京尼平龙胆双糖苷(10),黄柏内酯(11),蔗糖(12),D-甘露醇(13),粘毛黄芩素Ⅲ(14),栀子苷(15),羟异栀子苷(16),Jasminosides B(17),藏红花酸(18),5-羟基吡啶-2-甲酸甲酯(19);研究了黄连解毒汤和其中主成分京尼平苷、小檗碱、黄芩苷对PC12细胞和原代神经元细胞的损伤保护作用.结论 化合物15 ～ 19为首次从该复方中分离得到,5-羟基吡啶-2-甲酸甲酯在组成该复方的四种单味药中均未见报道;神经细胞保护实验结果表明黄连解毒汤和其中京尼平苷、小檗碱、黄芩苷单体均具有神经细胞保护作用趋势,但没有统计学显著性.     

大孔吸附树脂对黄连解毒汤的吸附动学研究

黄连解毒汤出自唐·<外台秘要>,由黄连、黄芩、黄柏和栀子组成,是清热解毒的代表方,用于各种实热火毒,三焦热盛之症.前期研究发现,提取黄连解毒汤时,以黄连、黄柏、栀子合煎,黄芩单煎的提取方式能保留较多的有效成分[1].证实大孔树脂精制法明显优于醇沉法及吸附澄清法,并对大孔树脂的类型及其吸附条件进行了考查(另文报道).本文进行了YWD-09D大孔吸附树脂对黄连解毒汤的吸附动力学研究.     

黄连解毒汤高效液相色谱指纹图谱研究及指标成分的含量测定

目的:建立黄连解毒汤高效液相色谱指纹图谱及指标成分含量测定的方法,用于黄连解毒汤提取液的质量控制.方法:应用高效液相色谱法-DAD检测器,C18色谱柱系统,采用梯度洗脱方法,建立了黄连解毒汤高效液相色谱指纹图谱.并对指标成分的含量测定方法进行了方法学考察.结果:建立了含有18个色谱峰高效液相色谱图,分离度>1.0,测得...     

大孔吸附树脂分离杭白菊中总黄酮的工艺优选

目的:优选分离杭白菊中总黄酮的最佳树脂型号及工艺条件.方法:以总黄酮为指标;紫外分光光度法测定总黄酮含量,考察HPD100,DM130,D101,AB-8等不同型号大孔树脂对杭白菊中总黄酮的吸附和解吸性能,筛选最佳大孔树脂型号,并优选其分离工艺条件.结果:AB-8型大孔树脂吸附容量和解吸率均最大,分别为44.9 mg·g-1,87.9％.当供试液总黄酮质量浓度在12.6 g·L-1时,于30℃下吸附1h,用95％乙醇进行解吸,可较好地对杭白菊中总黄酮进行吸附分离.结论:AB-8型大孔树脂适用于杭白菊中总黄酮的吸附分离.     

大孔树脂分离纯化酸枣仁总黄酮的工艺优选

目的: 优选大孔树脂分离纯化酸枣仁醇提物中总黄酮的工艺。 方法: 通过静态和动态吸附-洗脱试验比较6种不同型号大孔树脂对酸枣仁总黄酮的吸附和解吸性能,筛选最佳大孔树脂型号;以总黄酮质量浓度为指标,采用单因素试验考察药液质量浓度、吸附速率、上样体积、洗脱剂浓度、洗脱速率等因素对纯化工艺的影响。 结果: 大孔树脂分离纯化酸枣仁总黄酮的最佳工艺条件为选择SP-207型大孔树脂,上样液质量浓度0.5 g·mL^-1,吸附速率1 BV·h^-1,上样量5 BV,加70%乙醇4.5 BV以4 BV·h^-1的速率洗脱;酸枣仁总黄酮纯度达65.47%。 结论: 该优选工艺稳定可行,适用于酸枣仁总黄酮的分离纯化。     

大孔树脂对鬼针草总黄酮的吸附分离特性研究

目的:研究7种不同类型大孔吸附树脂对鬼针草总黄酮的吸附及解吸特性,筛选出适合分离纯化鬼针草总黄酮的大孔吸附树脂。方法:以鬼针草总黄酮含量为指标,采用静态吸附法、动态吸附法比较不同树脂对总黄酮的吸附量、解吸率及吸附动力学的影响。结果:在静态吸附和动态吸附试验中均以HPD l00比较适合于鬼针草总黄酮的分离纯化。结论:大孔吸附树脂HPD l00对鬼针草总黄酮具有良好的吸附分离性能,吸附快、解吸容易,性能优于其他树脂。     

黄连解毒汤对脑梗死合并胃损伤大鼠干细胞因子/酪氨酸激酶受体信号通路的影响

目的:探讨黄连解毒汤对脑梗死合并胃损伤大鼠干细胞因子/酪氨酸激酶受体(SCF/C-kit)信号通路的影响。方法:将80只健康10周龄雄性Wistar大鼠随机分为模型组、黄连解毒汤组、奥美拉唑组、假手术组、正常组,以上各组再分设4 d组、7 d组,共10组。采用线栓法建立大脑中动脉梗死模型。黄连解毒汤组给予黄连解毒汤(27 mg/ml)混悬液,奥美拉唑组给予奥美拉唑(15 mg/ml)悬浊液,其余组给予1 ml 0.9%氯化钠溶液灌胃,4 d组连续灌胃4 d,7 d组连续灌胃7 d。采用HE染色法观察大鼠胃组织病理形态学变化,并进行病理损伤评分; 采用实时荧光定量检测大鼠胃组织SCF、C-kit mRNA表达水平; 采用Western blot检测大鼠胃组织中SCF、C-kit蛋白表达水平。结果:与正常组、假手术组比较,模型组、黄连解毒汤组、奥美拉唑组大鼠胃黏膜病理评分均明显升高(4、7 d组均P<0.01),胃组织SCF、C-kit mRNA和蛋白表达水平均明显降低(P<0.01); 正常组、假手术组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组比较,黄连解毒汤组、奥美拉唑组大鼠胃黏膜病理评分均显著降低(4、7 d组均P<0.01),胃组织SCF、C-kit mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.01)。与奥美拉唑组比较,黄连解毒汤组大鼠胃黏膜病理评分均明显降低(P<0.05),胃组织SCF、C-kit mRNA和蛋白表达水平均明显升高(P<0.05)。结论:黄连解毒汤对脑梗死合并胃损伤大鼠的胃黏膜具有一定的保护作用,其机制可能与黄连解毒汤升高大鼠胃组织SCF、C-kit mRNA及蛋白的表达水平有关。     

以痈论治溃疡性直肠炎

目标:观察黄连解毒汤,痛泻要方加减治疗溃疡性结肠炎的疗效。方法:30例分为活动期、恢复期两类,分别以黄连解毒汤,痛泻要方为基础,辨证加减治疗。结果:治愈28例,有效2例,无效0例。结论:黄连解毒汤,痛泻要方加减治疗溃疡性结肠炎疗效肯定。     

黄连解毒汤抗铜绿假单胞菌生物被膜 及与阿奇霉素协同抗菌作用

目的:研究黄连解毒汤抗铜绿假单胞菌牛物被膜及与阿奇霉素协同抗菌作用.方法:微量倍比稀释法测定黄连解毒汤对铜绿假单胞菌的最小抑菌浓度(MIC),棋盘稀释法测定黄连解毒汤和阿奇霉素协同抗菌作用,MTT法测定黄连解毒汤对铜绿假单胞菌生物被膜的最小抑膜浓度(SMIC),显微镜下观察药物对生物膜形态的影响.结果:黄连解毒汤对铜绿假单胞菌的MIC 100 g·L-1,阿奇霉素200 mg·L-1,两药联合后MIC分别为25 g·L-1和25 mg·L-1抑菌分级指数(FIC)0.1875,提示两药协同作用明显.黄连解毒汤对铜绿假单胞菌生物被膜的SMIC5.1,3d均为15.6 g·L-1,7 d31.25 g·L-1;SMIC801,3,7d均为250 g·L-1,形态观察提示黄连解毒汤SMIC80浓度对铜绿假单胞菌生物被膜的抑制作用明显.结论:黄连解毒汤具有抗铜绿假单胞菌生物被膜作用,与阿奇霉素有协同抗菌作用.     

神香草总黄酮的大孔树脂纯化工艺优选

目的:优选神香草总黄酮的大孔树脂纯化工艺。方法:以总黄酮吸附率和洗脱率为指标,通过静态吸附-洗脱试验比较11种大孔树脂对神香草总黄酮的吸附和洗脱性能,筛选最佳大孔树脂型号。采用单因素试验考察上样液质量浓度、上样流速、树脂径高比、洗脱剂浓度及用量、洗脱流速等因素对大孔树脂纯化工艺的影响。结果:选用AB-8型大孔树脂,其最佳纯化工艺参数为上样液质量浓度2.56 g·L-1,上样流速4 BV·h-1,树脂径高比1∶5,加水5 BV以流速5 BV·h-1除杂,洗脱液弃去,加70%乙醇9 BV以流速4 BV·h-1洗脱,收集洗脱液。神香草总黄酮纯度达65.6%。结论:采用AB-8型大孔树脂纯化神香草总黄酮的工艺稳定可行,为该药用部位的开发提供参考。     

5种大孔树脂对舒胸片6种成分的吸附-脱吸附性能研究

目的:研究舒胸片6种成分在5种大孔树脂上的吸附-脱吸附性能。方法:分别以相对比吸附量(RA)、洗脱率为指标,考察舒胸片提取液中人参皂苷Rb1等6种成分在HPD-100等5种大孔树脂上的静态吸附和脱吸附性能。并在此基础上比较了综合吸附-脱吸附性能。结果:6种有效成分在5种树脂上的综合吸附-脱吸附性能以人参皂苷Rb1最好,羟基红花黄色素A最差;5种树脂对6种有效成分的综合吸附-脱吸附性能以HPD-100和LSA-30两种树脂相对为佳。结论:实验结果为合理确定舒胸片混合提取液的大孔树脂分离纯化工艺条件提供了实验依据。