虎奶菌多糖的分离纯化及成分分析

 目的：虎奶菌碱溶性多糖的分离纯化及成分分析。方法：用0.5 mol·L^-1氢氧化钠溶液从虎奶菌核中提取多糖,利用气相色谱法(GLC)测定多糖组成,凝胶渗透色谱法(GPC)测定相对分子质童,红外光语法(FT-IR)测定糖苷键构型,高腆酸氧化及Smith降解确定糖基间连接方式。结果：虎奶菌多糖由葡萄糖组成,平均相对分子质量为4.3×10⁵。经高碘酸氧化,每摩尔单糖残基消耗0.48 mol·L^-1高碘酸,同时释放0.24 mol·L^-1甲酸,氧化产物经还原,水解后检出葡萄糖和甘油。红外光谱在890 cm^-1处有吸收,而在840 cm^-1处无吸收。结论：虎奶菌碱溶性多糖为(1→3)-β-D-葡聚糖,并含1,6-连续支链。     

穿心莲总内酯的NO抑制活性研究

目的：考察穿心莲总内酯对巨噬细胞释放一氧化氮的抑制作用。方法：以脂多糖（LPS）刺激小鼠巨噬细胞RAW264.7 建立体外炎症模型,采用Griess Reagent法检测细胞培养上清一氧化氮（NO）含量并计算抑制率,通过MTT法评价细胞毒性。结果：穿心莲总内酯在 5-50 μmol·L^-1浓度范围内对LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW264.7释放的NO具有明显的抑制作用,并呈现良好的剂量依赖关系,IC50分别为8.58 μmol·L^-1,11.52 μmol·L^-1,8.94 μmol·L^-1;其主要活性成分穿心莲内酯（5-60 μmol·L^-1）、脱水穿心莲内酯（5-100 μmol·L^-1）、新穿心莲内酯（5-100 μmol·L^-1）对LPS诱导的小鼠巨噬细胞RAW 264.7释放的NO亦表现出抑制作用,并呈现良好的剂量依赖关系,其IC50分别为17.54 μmol·L^-1,49.54 μmol·L^-1,41.80 μmol·L^-1。结论：穿心莲总内酯的NO抑制作用优于三个单体,以上结果可为穿心莲总内酯的制剂开发及临床应用提供一定的理论基础及科学依据。     

沙棘果水溶多糖JS1的分离鉴定

 目的:从已提取过水溶性多糖后的沙棘果残渣中,进一步用稀碱液(0.1mol·L^-1NaOH溶液)提取多糖JS₁,并研究其组成性质。方法:利用DEAE-Sephadex A-25柱层析法纯化沙棘果碱提水溶多糖,并采用玻璃纤维纸电泳,Sepharos CL-4B柱层析比旋度等方法证明组分的均一性,同时用气相色谱、红外光谱等方法对其组成进行研究。结果:分离得到JS₁水溶性多糖,经气相色谱分析得单糖组分为Ara,Xyl,Gal,Glc,摩尔比依次是1∶6∶12∶4?结论:JS₁为中性杂多糖。     

肉苁蓉种子发芽条件研究

目的：明确氟啶酮预处理浓度、时间、发芽温度和盐分对3种肉苁蓉种子发芽的影响。方法：用培养皿法培养种子,统计发芽率。结果：0.1 mg·L^-1氟啶酮预处理的管花肉苁蓉、荒漠肉苁蓉和盐生肉苁蓉种子发芽率最高,预处理时间为24～29 h。适宜温度为20～30 ℃,低于5 ℃或高于35 ℃,种子不能发芽。盐生肉苁蓉种子耐盐性强,NaCl浓度临界值为0.04 mol·L^-1,管花肉苁蓉和荒漠肉苁蓉种子耐盐性较弱,NaCl浓度临界值为0.02 mol·L^-1。结论：3种肉苁蓉种子发芽率测定方法和条件是：用0.1 mg·L^-1氟啶酮预处理24 h后,温度为20～30 ℃,盐分低于0.02 mol·L^-1。     

人体口服乙醇后唾液和全血中乙醛含量的测定

 目的：研究人体单剂量口服乙醇后，乙醇在体内的毒性代谢产物乙醛在唾液和全血中的浓度-时间变化过程。方法：采用高效液相色谱荧光法测定10名健康受试者单剂量口服乙醇0.3 g·kg^-1后4 h内唾液和全血中的乙醛浓度经时过程。结果：乙醛在唾液中的C_max (11.5±2.2) μmol·L^-1,AUC(1402.7±447.4) min·μmol·L^-1；乙醛在全血中的C_max (1.68±0.25) μmol·L^-1，AUC(176.8±41.4) min·μmol·L^-1。结论：服用乙醇后唾液中的乙醛浓度显著高于全血中。     

氟哌啶醇季铵盐衍生物对冠状动脉作用的研究

 目的：研究氟哌啶醇季铵盐衍生物(F₂)对动物冠状动脉的作用。方法：小鼠ip氟哌啶醇(10mg·kg^-1和20mg·kg^-1)造成锥体外系不良反应模型。Ip F₂(10mg·kg^-1,20mg·kg^-1和40mg·kg^-1)，观察行为变化?采用猪冠脉条生物检定，观察10^-6mol·L^-1，10^-5mol·L^-1和10^-4mol·L^-1F₂对KCl(10mmol·L^-1～40mmol·L^-1)致猪冠脉条收缩量效曲线的影响，并观察10^-4mol·L^-1F₂对KCl(20mmol·L^-1)致冠脉条收缩后的阻断作用?采用Langendorf灌流法，观察10^-6mol·L^-1，5×10^-6mol·L^-1和10^-5mol·L^-1F₂对脑垂体后叶素所致离体豚鼠心脏冠脉流量减少的作用。结果：氟哌啶醇可致小鼠肌张力增高，肌震颤、头颈部扭曲和尾过伸等，有量效依赖性。F₂3个浓度组无一出现上述表现。F₂可使KCI致猪冠脉条收缩曲线压低，呈量效依赖性。F₂量效依赖地拮抗脑垂体后叶素致冠脉流量的减少。结论：ipF₂不引起锥体外系不良反应，但有扩冠作用。     

高效液相色谱法测定血清中富马酸奎的平浓度

 目的：建立用高效液相色谱法(HPLC)测定血清中富马酸奎的平浓度的方法。方法：HPLC测定，流动相为甲醇-水-1 mol·L^-1醋酸铵-5 mol·L^-1氨水(400∶100∶5∶1)的混合液体，pH9.7,流速1 mL·min^-1,C₁₈柱，紫外检测波长254 nm，以外标法定量。结果：线性范围10～300 μg·L^-1，最低检测限5 μg·L^-1，平均提取回收率93.10%，日内与日间精密度平均分别为3.41%和4.16%。结论：用HPLC可以较好的对血清中富马酸奎的平进行定性和定量。     

舒普深、哌拉西林钠的胶束电动毛细管色谱分析

 目的 建立精密、快速简便地测定舒普深 (内含头孢哌酮和舒巴坦)及注射用哌拉西林含量的方法。方法 采用胶束电动毛细管色谱法（MECC）,测定运行液采用pH=7.5的0. 02 mol·L^-1磷酸盐缓冲液,其中含十二烷基硫酸钠(SDS)11 g·L^-1, 正丁醇22 mL·L^-1,正庚烷4 mL·L^-1。分离电压18 kV(运行电流85～95 μA)。结果 3种成分在10～20 min内得到完全分离,选择苯巴比妥作内标,各组分浓度在0.1～2 g·L^-1范围内浓度对内标峰面积之比呈良好线性关系。可准确测定3种成分的含量,批内RSD均小于1%(n=8),3种成分的加样回收率均在94.92%～105.3%之间,RSD均小于3.4%(n=8)。结论 用MECC同时测定头孢哌酮、舒巴坦、哌拉西林钠的含量,方便易行,结果准确可靠。     

氧化苦参碱对豚鼠单个心室肌细胞胞浆[Ca2+]i的影响

 目的 观察氧化苦参碱对急性分离的豚鼠单个心室肌细胞内游离钙离子浓度([Ca²⁺]_i)的影响。方法 采用酶解法分离豚鼠单个心肌细胞,用钙敏感的荧光指示剂Fluo-3/AM染色,以荧光强度(FI)来代表[Ca²⁺]_i,应用激光扫描共聚焦显微技术动态监测FI的变化。结果 在静息状态下,10μmol·L^-1氧化苦参碱对[Ca²⁺]_i无明显影响;但10μmol·L^-1氧化苦参碱对60mmol·L^-1KCl介导的外钙内流却有明显抑制作用(P<0.05)。结论 氧化苦参碱对电压依赖性钙通道(VDC)具有明显抑制作用,这可能是其抗心律失常作用机制之一。     

麻花秦艽组织培养及植株再生的研究

目的：研究药用植物麻花秦艽组织培养技术,为工厂化育苗提供科学依据。方法：以麻花秦艽根、茎育出的无菌苗为外植体,采用MS培养基,附加不同的植物激素进行实验。结果：以MS培养基为基本培养基,附加BA 0.5～1.0 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1,适于丛生芽的诱导与增殖；附加IAA 1.0 mg·L^-1+BA 3 mg·L^-1,适于愈伤组织的诱导；附加IAA 1.0 mg·L^-1+BA 2.0～3.0 mg·L^-1适于愈伤组织继代培养,附加BA 2.0 mg·L^-1+NAA 0.5 mg·L^-1适于愈伤组织的分化。结论：通过诱导愈伤组织途径可以达到快速繁殖的目的。     

人参多糖的分级及其免疫活性初探

目的:采用柱分离对人参多糖进行分级,并考察各级分对脾淋巴细胞增殖的刺激作用,找出活性部位.方法:用快流速Q-琼脂糖凝胶( Q-Sepharose FF)色谱将人参多糖进行分级,先用水和0.4 mol·L - 1 NaCl溶液洗脱,将人参多糖分成中性多糖和酸性多糖,再将酸性糖依次用0 ～0.4 mol·L-1NaCl溶液洗脱,得到不同的级分.取小鼠脾脏制备脾淋巴细胞,调整小鼠脾淋巴细胞密度至3.0×106/mL,加样品混合均匀,孵育48 h,考察每个级分不同浓度(25,50,100,200,400 mg·L -1)对脾淋巴细胞增殖的刺激作用.结果:从GP中分级得到GPN和GPA,GPA分级后得到GPA-1,GPA-2,GPA-3和GPA-4.GP,GPA,GPN,GPA-2,GPA-3和GPA-4对脾淋巴细胞增殖都具有促进作用,其最大刺激指数分别为1.073,1.082,1.119,1.101,1.102和1.296.GPA,GPA-2,GPA-3和GPA-4的刺激作用均随着浓度的增加而增强;GPN随着浓度的增加促进作用减弱,在大于100 mg·L-1时呈现抑制作用,且浓度越大抑制作用越强.GPA-1对脾淋巴细胞的增殖具有抑制作用,且浓度越大抑制作用越强.结论:Q-Sepharose FF色谱可将酸性不同的人参多糖逐级分离.人参多糖各级分对脾淋巴细胞增殖有不同程度的促进作用,以GPA-4的刺激作用最强.     

离体培养条件对人参不定根生长及其活性成分合成的影响

目的:对人参不定根的摇瓶培养条件进行系统的优化。方法:利用组织培养技术结合高效液相色谱法和紫外分光光度法,考察了接种量、蔗糖浓度以及无机盐浓度对人参不定根的生长、人参皂苷以及人参多糖合成的影响。结果:每1 L培养基接种的不定根鲜重为20 g时人参不定根的干重增殖倍数达到最大值;随着蔗糖浓度的升高,人参不定根干重增殖倍数呈先升高后降低的趋势,人参多糖含量增长趋势不明显,不同蔗糖浓度时各单体皂苷含量有显著区别,人参总皂苷含量随蔗糖浓度的升高而降低,单位体积培养基中的多糖和皂苷产量均在40 g.L-1蔗糖质量浓度下达到最大值;培养基中的无机盐浓度对不定根的生长以及多糖和皂苷的合成与积累都有较大影响,3/4MS最有利于不定根的生长以及皂苷的合成,而不定根中的多糖含量则随着盐浓度的升高而降低。结论:接种量、蔗糖浓度、无机盐浓度都会显著影响人参不定根的生长以及其活性成分的合成和积累。     

不同相对分子质量猪牙皂多糖的体外抗氧化活性

目的:研究水溶性猪牙皂多糖的抗氧化活性.方法:用水提醇分级沉降法和中空纤维素膜分离法制备不同相对分子质量的猪牙皂多糖.采用体外化学体系,以维生素C(Vit C)为阳性对照,测定猪牙皂多糖对羟自由基(·OH)、超氧自由基(O2-·)和过氧化氢(H2O2)的清除作用.结果:50％醇沉且相对分子质量在5 000～100000的猪牙皂多糖对O2-·的清除活性高于Vit C.30％醇沉且相对分子质量大于10 000的猪牙皂多糖、50％醇沉且相对分子质量5 000～10000的猪牙皂多糖、74％醇沉且相对分子质量大于5 000的猪牙皂多糖以及88％醇沉得到的猪牙皂多糖在0～1.00 g·L-1,随浓度的增加对·OH的清除作用逐渐增强,最大清除作用都可超过90％.不同醇沉不同浓度得到的猪牙皂多糖对H2O2有一定的清除活性,74％醇沉且相对分子质量大于5 000的猪牙皂多糖在0.07 g·L-1时,对H2O2的清除率为20.18％.结论:猪牙皂多糖具有良好的对·OH,O2-·和H2O2清除活性,猪牙皂多糖的抗氧化活性与醇沉浓度及其相对分子质量相关.     

阜康阿魏的核型分析研究

目的:对阜康阿魏染色体的核型进行分析研究。方法:根尖用0.000 2 mol.L^-18-羟基喹啉处理3 h,卡诺固定液固定3 h,1 mol.L^-1盐酸水解5 min,卡宝品红染色2 min,然后制片。结果:阜康阿魏染色体是二倍体,染色体数目为20,染色体核型公式为2n=16m+4sm。第4,10号染色体为近中着丝粒染色体,其余8对为中部着丝粒染色体。结论:核型类型为2A型,这是一种原始类型。     

苦豆子多糖及其衍生物的体外抗氧化活性

目的:对苦豆子多糖及其衍生物的体外抗氧化活性进行了研究.方法:将苦豆子多糖硫酸化、磷酸化修饰后,以维生素C(VC)为对照,分别测定苦豆子多糖(SAP)、硫酸化苦豆子多糖(SAPS)和磷酸化苦豆子多糖(SAPP)3种多糖对二苯代苦味酰自由基(DPPH)、羟自由基(·OH)、超氧自由基(O2-·)的体外抗氧化活性及还原力.结果:SAPS和SAPP表现出不同程度抗氧化活性,并随浓度增加,活性增强,其中SAPS和SAPP清除DPPH能力(IC50分别是4.573,6.542 mg·L-1)与SAP(IC5010.233 mg·L-1)相比,有显著提高;SAPP清除羟自由基(IC504.368 mg·L-1)和SAPS清除超氧自由基(IC502.651 mg·L-1)能力显著提高.结论:硫酸化和磷酸化修饰能提高苦豆子多糖的体外抗氧化活性.     

柱前衍生HPLC分析黄连多糖的单糖组成

目的:建立柱前衍生HPLC测定黄连多糖中的单糖组成,并分析3种黄连多糖的单糖差异。方法:采用水提醇沉法提取黄连多糖,经硫酸水解后,用1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮(PMP)柱前衍生,再利用HPLC法分析单糖的PMP衍生物。结果:黄连多糖主要由甘露糖、鼠李糖、葡萄糖醛酸、半乳糖醛酸、葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖7种单糖组成,其中半乳糖醛酸含量最高,葡萄糖次之。另外,雅连多糖、云连多糖和味连多糖中的7种单糖的平均摩尔比分别为1∶2.34∶0.38∶17.58∶12.40∶6.11∶5.93,1∶2.43∶0.25∶16.76∶15.18∶6.51∶9.78和1∶3.25∶0.40∶22.35∶12.96∶6.66∶10.28。结论:建立的方法简便、准确,重复性好,可用于黄连多糖中单糖的组成分析和含量测定。雅连多糖、云连多糖和味连多糖中的7种单糖含量有差异。     

电刺激诱发兔隐动脉双相血管收缩反应的药理学分析

 目的建立兔离体隐动脉环双相血管收缩反应模型,利用哌唑嗪和α,β-亚甲基ATP(α,β-meATP)对双相收缩成分的特性进行药理学分析。方法兔离体隐动脉血管环张力记录法及电场刺激诱发血管收缩法。结果本实验条件下的电场刺激(电压15V、波宽1 ms、刺激频率2～16 Hz、连续刺激时程32 s)可诱发兔离体隐动脉产生双相收缩反应,且具有频率(2～16 Hz)依赖性。电刺激隐动脉收缩反应的第1相不被α₁受体阻断剂哌唑嗪(0.1～10μmol·L^-1)所阻断,P2X₁受体激动剂α,β-meATP脱敏P2X₁受体后完全抑制该相反应。0.1～10μmol·L^-1哌唑嗪显著抑制8,16 Hz的第2相反应,P2X₁受体脱敏剂α,β-meATP不影响8,16 Hz的第2相反应。联合应用α,β-meATP(3μmol·L^-1)和哌唑嗪(1μmol·L^-1)则完全阻断电刺激诱发的血管收缩反应。哌唑嗪10μmol·L^-1显著抑制去甲肾上腺素(NA,0.01～30μmol·L^-1)诱发的血管收缩反应,而哌唑嗪1μmol·L^-1对α,β- meATP诱发的血管收缩反应无显著性作用。α,β-meATP3μmol·L^-1对NA(0.01～30μmol·L^-1)诱发的血管收缩反应无显著性影响。结论建立电场刺激诱发兔离体隐动脉环双相收缩反应模型,该双相反应的第一相仅与交感神经嘌呤能递质ATP的突触后效应有关,第2相反应由肾上腺素能成分和少量嘌呤能成分组成。     

注射用水飞蓟宾脂质纳米乳中水飞蓟宾含量测定

 目的建立直接紫外分光光度法，测定最新研制的注射用水飞蓟宾脂质纳米乳中水飞蓟宾含量的方法。方法选用1 mol·L^-1的NaOH碱溶液破乳，弃去以氯仿为萃取剂提取的纳米乳油相，水相层由纳米乳中释放出的水飞蓟宾以无水乙醇溶解，HCl中和，于288 nm处直接测定吸光度，计算水飞蓟宾的含量。结果水飞蓟宾在0.297 0～1.784 mg·mL^-1浓度范围内呈线性，r=0.999 9；高、中、低3种浓度的萃取回收率和方法回收率分别为96.08%～98.95%和99.72%～100.5%，n=3；日内和日间RSD分别为0.37%和3.6%,n=5。结论建立的方法准确度高，重现性好，本实验为水飞蓟宾脂质纳米乳新剂型质量标准的制定提供了方法学依据。     

黄芩素对大鼠离体胸主动脉的舒张作用及其机制

目的:研究黄芩素(BAI)对去甲肾上腺素(NE,1×10-6mol· L-1)和氯化钾(KCl,6×10-2 mol·L-1)预收缩健康成年雄性大鼠胸主动脉环的舒张作用,并探讨其作用机制.方法:应用离体血管环技术观察BAI对大鼠胸主动脉环张力的作用,记录NE预收缩的离体大鼠胸主动脉环张力变化.采用一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME,1×10-4mol·L-1)、环氧合酶抑制剂吲哚美辛(INDO,1×10-5mol· L-1)和鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝(MB,1×10-5mol· L-1)和不同的钾通道阻滞剂预孵后观察BAI对血管环张力改变的影响,并观察对NE诱发的内钙释放和CaCl2引起的外钙内流的影响.结果:BAI对NE或KCl预收缩的内皮完整和去内皮大鼠离体胸主动脉环均产生明显的舒张作用,与溶剂组相比差异有统计学意义.预先用L-NAME,MB,KV通道阻断剂四氨基吡啶(4-AP,1×10-4mol· L-1),KC.通道阻断剂四乙胺(TEA,1×10-3mol· L-1),Kir通道阻断剂氯化钡(BaCl2,1×10-4mol·L-1)孵育后,BAI对预收缩的血管张力的改变与无阻断药时比较,差异均无统计学意义;预先用KATP通道阻断剂格列苯脲(Gli,1×10-5mol·L-1)和INDO孵育后,BAI的舒张血管作用减弱,与无阻断药比较差异有统计学意义(P＜0.05);且BAI对NE外钙内流引起的收缩有明显的抑制作用.结论:黄芩素可明显降低由NE诱发的血管环张力的升高,且其作用具有浓度依赖性,此作用有内皮依赖性和非内皮依赖性的特点.内皮依赖性收缩可能与前列环素(PGI2)途径有关,非内皮依赖机制与KATP通道和钙离子通道有关.