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1.
基因工程法生产L-5-甲基四氢叶酸的研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的在E.coli BL21(DE3)中表达5,10-亚甲基四氢叶酸还原酶(MTHFR),并检测MTHFR的表达情况及L-5-甲基四氢叶酸的增加量。方法采用PCR法获得MTHFR基因(metF)全长DNA,分别在其5'端和3'端加上BamHⅠ和SacⅠ酶切位点。经BamHⅠ和SacⅠ双酶切后,连接到经同样双酶切的表达载体pET-28a(+)中,经限制性酶切、菌落PCR和测序验证正确后,转化至E.coli BL21(DE3),经IPTG诱导重组蛋白表达,SDS-PAGE检测MTHFR表达量,HPLC检测L-5-甲基四氢叶酸量。结果经酶切与测序鉴定证实原核重组载体pET28a-MTHFR构建成功,表达产物相对分子质量约为33 000,与MTHFR大小相符,工程菌的L-5-甲基四氢叶酸的产量显著增加。结论通过将MTHFR的基因导入L-5-甲基四氢叶酸产生菌能够提高L-5-甲基四氢叶酸产量。  相似文献   
2.
双酶偶联体系越来越受到人们重视,广泛应用于医药、食品等领域,是实现高效生物合成的重要方法。本文利用乳酸氧化酶(Lactate Oxidase,LOD)和丙酮酸脱羧酶(Pyruvatedecarboxylase,PDC)偶联构建双酶体系,催化乳酸钠和苯甲醛合成L-苯基乙酰基甲醇(L-Phenylacetylcarbinol,L-PAC),后者是合成L-麻黄素的重要中间体。转化反应的最佳温度为34℃,pH 6.8,转化时间6 h,苯甲醛用量160 mmol/L,乳酸钠用量330 mmol/L,葡萄糖用量3 g/100 mL,L-PAC产量达到8.79 g/L。在L-PAC的制备过程中,以廉价的乳酸钠代替丙酮酸大大降低了生产成本,缩短了反应时间,简化了操作步骤,有利于工业生产。双酶偶联体系为生物合成L-PAC提供了一个新的思路和新方法。  相似文献   
3.
纤维素类肠溶包衣材料的应用   总被引:5,自引:0,他引:5  
卞筱泓  黄文龙 《药学进展》2001,25(3):155-159
纤维素类聚合物是非常重要的药用辅料.本文介绍了近年来纤维素类肠溶包衣材料的研究概况,包括其结构、理化性质、合成策略以及在包衣中的简单和特殊应用,并介绍了一种新的包衣方法--干法包衣.  相似文献   
4.
利用酿酒酵母作为生物催化剂合成L-苯基乙酰基甲醇(L-Phenylacetylcarbiol,L-PAC)的过程中,通过加入有机溶剂(辛醇)形成两相体系,可改善底物和产物的溶解度,以减少对细胞内丙酮酸脱羧酶(PDC)的强烈抑制和钝化作用,从而促进L-PAC产量的提高。实验结果表明,两相体系合成L-PAC的最佳条件为活化60 min,苯甲醛的起始浓度940 mmol/L,丙酮酸钠的起始浓度460 mmol/L,葡萄糖的含量8%,水醇两相体积比为3∶1,且加入一定量的甘油时,L-PAC产量可达在醇相中24.1 g/L和水相中3.7 g/L,比单一水相体系高出1.8倍。  相似文献   
5.
牛膝总皂苷对大鼠离体胸主动脉环舒张作用的机制研究   总被引:1,自引:0,他引:1  
目的研究牛膝总皂苷(ABS)对大鼠离体胸主动脉血管环舒张作用及其作用机制。方法采用累积加药法,通过观察ABS对去甲肾上腺素(NE)和KCl预收缩的血管环张力的影响,并观察几种抑制剂对其作用的影响。结果 ABS对NE预收缩的内皮完整和去内皮血管环均有舒张作用,L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME)、亚甲蓝(MB)、吲哚美辛(INDO)能显著减弱ABS诱导的血管环舒张作用;钾离子通道阻滞剂对ABS的舒血管效应有明显抑制作用(P<0.05);ABS对KCl预收缩的血管环有良好的舒张作用。结论 ABS的舒血管作用与NO介导途径有关,同时与钾离子通道的开放及血管平滑肌细胞上受体依赖性钙通道和电压依赖性钙通道有关。  相似文献   
6.
通过酿酒酵母和干酪乳杆菌共培养,在单因素实验的基础上,考察Plackett-Burman实验、正交实验,优化酵母菌和乳杆菌共培养的条件,以提高酵母菌产谷胱甘肽的产量。首先进行酵母菌和乳杆菌共培养的单因素实验,挑选出乳糖浓度、发酵培养基初始pH值、共培养温度、转速、乳杆菌接种量、接种时间、发酵时间,这7个对谷胱甘肽产量有影响的因素。利用分析软件Minitab16,对这7个因素进行Plackett-Burman实验,筛选出3个影响较为显著的因素。利用分析软件SPSS 19,再对这3个因素进行正交实验,得出最佳发酵条件。在最佳发酵条件下,谷胱甘肽产量比优化前提高了35.14%;相同条件下,比单菌培养提高了33.35%。得到最佳发酵条件为:乳糖浓度40 g/L,发酵培养基初始pH值为6.4,共培养温度为36℃,转速为200 r/min,乳杆菌接种量为8%,乳杆菌接种时间为8 h,发酵时间为24 h。酵母菌乳杆菌共培养产谷胱甘肽的方法具有可行性,并且利用Plackett-Burman设计和正交设计可有效优化发酵条件。  相似文献   
7.
目的:研究黄芩素(BAI)对去甲肾上腺素(NE,1×10-6mol· L-1)和氯化钾(KCl,6×10-2 mol·L-1)预收缩健康成年雄性大鼠胸主动脉环的舒张作用,并探讨其作用机制.方法:应用离体血管环技术观察BAI对大鼠胸主动脉环张力的作用,记录NE预收缩的离体大鼠胸主动脉环张力变化.采用一氧化氮合酶(eNOS)抑制剂L-硝基精氨酸甲酯(L-NAME,1×10-4mol·L-1)、环氧合酶抑制剂吲哚美辛(INDO,1×10-5mol· L-1)和鸟苷酸环化酶抑制剂亚甲蓝(MB,1×10-5mol· L-1)和不同的钾通道阻滞剂预孵后观察BAI对血管环张力改变的影响,并观察对NE诱发的内钙释放和CaCl2引起的外钙内流的影响.结果:BAI对NE或KCl预收缩的内皮完整和去内皮大鼠离体胸主动脉环均产生明显的舒张作用,与溶剂组相比差异有统计学意义.预先用L-NAME,MB,KV通道阻断剂四氨基吡啶(4-AP,1×10-4mol· L-1),KC.通道阻断剂四乙胺(TEA,1×10-3mol· L-1),Kir通道阻断剂氯化钡(BaCl2,1×10-4mol·L-1)孵育后,BAI对预收缩的血管张力的改变与无阻断药时比较,差异均无统计学意义;预先用KATP通道阻断剂格列苯脲(Gli,1×10-5mol·L-1)和INDO孵育后,BAI的舒张血管作用减弱,与无阻断药比较差异有统计学意义(P<0.05);且BAI对NE外钙内流引起的收缩有明显的抑制作用.结论:黄芩素可明显降低由NE诱发的血管环张力的升高,且其作用具有浓度依赖性,此作用有内皮依赖性和非内皮依赖性的特点.内皮依赖性收缩可能与前列环素(PGI2)途径有关,非内皮依赖机制与KATP通道和钙离子通道有关.  相似文献   
8.
目的利用基因工程菌合成谷胱甘肽。方法克隆γ-谷氨酰转肽酶,构建重组质粒pET30a-GGT,乳糖诱导融合蛋白的表达,利用pET30a-GGT/E.coliBL21和pET32a-GSH-II/E.coliBL21分两步法合成γ-谷氨酰半胱氨酸与谷胱甘肽。结果工程菌的最佳乳糖诱导条件为:浓度3mmoL.L-1、时间6h、温度28℃。工程菌经最佳条件诱导后,γ-谷氨酰转肽酶的酶活大约是出发菌株E.coliDH5α的21倍,酶活力得到明显提高,谷胱甘肽的产量达到0.524g.L-1。结论成功地为今后利用基因工程菌催化合成谷胱甘肽寻找到一种新的方法 。  相似文献   
9.
卞筱泓  黄文龙 《药学进展》2001,25(3):155-157
纤维素类聚合物是非常重要的药用辅料。本文介绍了近年来纤维素类肠溶包衣材料的研究概况,包括其结构、理化性质、合成策略以及在包衣中的简单和特殊应用,并介绍了一种新的包衣方法-干法包衣。  相似文献   
10.
考察了自动诱导培养基代替异丙基-β-D-巯基半乳糖苷(IPTG)培养基诱导四氢叶酸还原酶在重组大肠杆菌BL21(DE3)中表达的可行性,对自动诱导培养基自诱导时的乳糖浓度和葡萄糖添加量进行优化,并与IPTG诱导培养基进行比较,确定了自动诱导培养基配方:葡萄糖1.8 mmol/L、乳糖3 mmol/L、胰蛋白胨10 g/L、酵母膏5g/L、NaCl 10 g/L。HPLC结果显示,自诱导与IPTG诱导条件下的L-5-甲基四氢叶酸产量接近。  相似文献   
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