一贯煎及骨髓间充质干细胞对肝纤维化大鼠阴虚证表征影响的实验研究

目的观察骨髓间充质干细胞在一贯煎的作用下对肝纤维化大鼠阴虚证的影响并探讨该过程的发生机制。方法将54只SD大鼠随机分为6组,即正常对照组、模型组、阳性对照组、骨髓干细胞组、骨髓干细胞一贯煎组及一贯煎治疗组。除正常对照组外,其他5组建立CCl_4诱导的肝纤维化模型。造模停止第三天,骨髓干细胞组及骨髓干细胞一贯煎组经尾静脉注射骨髓间充质干细胞。一贯煎组及骨髓干细胞一贯煎组给予一贯煎浓缩液灌胃,模型组、正常组灌服生理盐水,阳性组给予秋水仙碱灌胃,每天一次,一共给药4周,给药期间每周测量大鼠体质量、体温、血流速度、饮水量。4周后取材,将pH试纸置于大鼠舌面20秒,测量前后重量变化,判定大鼠舌面干湿度;通过HE染色和马松染色评价肝脏炎症活动度和纤维化程度;通过苦味酸—天狼星红染色评判造模大鼠肝组织细胞胶原面积比;通过荧光示踪评判骨髓间充质干细胞在肝纤维化大鼠肝组织中的表达。结果 (1)一贯煎加骨髓间充质干细胞组的炎症活动度和纤维化程度明显低于模型组,差异有统计学意义(P0.05);(2)肝纤维化大鼠有阴虚证的表征,一贯煎和骨髓间充质干细胞可以改善大鼠阴虚证的症状。(3)中药组、骨髓间充质干细胞组、中药加骨髓间充质干细胞组和阳性组体重增长均明显高于模型组(P0.05);一贯煎加骨髓间充质干细胞组大鼠舌重较骨髓间充质干细胞组较模型组增高(P0.05);模型组舌面温度为较正常组明显增高(P0.05);一贯煎加骨髓间充质干细胞组与模型组相比较明显降低(P0.05);一贯煎加骨髓间充质干细胞组舌血流速度与模型组相比较降低更为明显(P0.05);一贯煎加骨髓间充质干细胞组大鼠饮水量与模型组相比较明显降低(P0.05)。(4)一贯煎组、阳性对照组、骨髓间充质干细胞组和一贯煎加骨髓间充质干细胞组的胶原面积比明显低于模型组(P0.05)。(5)一贯煎加骨髓间充质干细胞组的骨髓间充质干细胞荧光面积与骨髓间充质干细胞组相比较明显增高(P0.05)。结论骨髓间充质干细胞可以改善肝纤维化大鼠的阴虚证表征,而一贯煎通过促进骨髓间充质干细胞向肝组织转移而增强骨髓间充质干细胞对肝纤维化大鼠阴虚证表征的改善作用。     

一贯煎联合骨髓间充质干细胞调控RhoA/ROCK1通路抑制大鼠肝纤维化的实验研究

目的：探究一贯煎联合骨髓间充质干细胞在治疗肝纤维化过程中对RhoA/ROCK1通路的作用。方法：将72只SD大鼠随机分为正常对照组、模型对照组、秋水仙碱组、一贯煎高剂量组、一贯煎中剂量组、一贯煎低剂量组、干细胞组、一贯煎+干细胞组;四氯化碳腹腔注射6周制备肝纤维化动物模型,干预4周后取材。记录大鼠阴虚表征情况;检测血清谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）含量;HE、Masson染色观察病理改变;实时PCR、蛋白质印迹法检测肝组织中RhoA、Rho相关激酶1（ROCK1）、α-SMA和COL-1 mRNA及蛋白表达;IHC检测α-SMA、COL-1阳性面积。结果：与正常对照组比较,模型对照组大鼠具有明显阴虚表征,肝脏出现明显炎症浸润和纤维增生,肝组织RhoA、ROCK1、α-SMA、胶原蛋白-1(COL-1)mRNA与蛋白表达显著升高（P<0.05）,α-SMA、COL-1阳性面积显著增加（P<0.05）;与模型对照组比较,一贯煎高剂量组、一贯煎中剂量组、一贯煎低剂量组、骨髓干细胞、一贯煎+干细胞组大鼠的阴虚表征、肝脏炎症和纤维化程度减轻,RhoA、ROCK1、α-SMA和COL-1 mRNA与蛋白表达显著降低（P<0.05）,α-SMA、COL-1阳性面积显著减少（P<0.05）,其中一贯煎+干细胞组较一贯煎中剂量组、干细胞组效果更优（P<0.05）。结论：一贯煎与骨髓干细胞可通过调控RhoA/ROCK1通路抑制肝星状细胞活化从而发挥抗纤维化的作用,二者协同作用效果优于各自单独作用效果。     

柔肝化纤颗粒联合骨髓干细胞移植对肝纤维化大鼠的影响

目的:探讨柔肝化纤颗粒联合骨髓干细胞移植对肝纤维化的疗效。方法:采用四氯化碳复合因素肝纤维化模型,造模成功后灌服柔肝化纤颗粒,同时于第4周行骨髓间充质干细胞尾静脉途径移植,观察各组大鼠肝脏病理及肝功能指标ALT、AST、ALB、TBIL变化。结果:联合组能明显改善肝功能(P<0.05),降低肝纤维化程度(P<0.05)。结论:联合治疗有抗肝纤维化作用,有效促进肝再生。     

自拟软肝煎抗肝纤维化疗效观察

目的：观察自拟软肝煎对慢性乙型肝炎的抗肝纤维化作用。方法：将108例慢性乙型肝炎、肝纤维化患者，随机分为2组各54例。治疗组采用自拟软肝煎治疗，对照组口服甘草酸二铵肠溶胶囊治疗。2组均以1个月为1个疗程，分别治疗3个疗程后观察临床疗效。结果：2组间有效率比较，有统计学意义（P〈0．05）。治疗组在降低肝纤维化、肝功能、肝脏彩超等项指标方面治疗前后比较，均有统计学差异（P〈0．05或0．01），治疗组均优于对照组。结论：自拟软肝煎具有逆转慢性肝炎肝纤维化作用，治疗慢性乙型肝炎肝纤维化疗效显著。     

一贯煎合丹参对慢性肝纤维化模型大鼠肝组织TGF—β1、α-SMA含量的影响

目的：探讨一贯煎合丹参抗慢性肝纤维化的作用机制。方法：将50只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、一贯煎组、丹参组、一贯煎合丹参组,每组10只。除空白对照组外,其余各组予CCL4行慢性肝损伤肝纤维化模型制备,同时予相应药物灌胃,空白组灌胃蒸馏水。8周后观察各组大鼠肝组织TGF-β1及α-SMA表达情况。结果：与模型组比较,一贯煎组、丹参组、一贯煎合丹参组大鼠肝组织TGF-β1及α-SMA的表达均有提高（P〈0．05）,一贯煎合丹参组提高更显著（P〈0．05）。结论：一贯煎合丹参具有叠加抗肝纤维化作用,其机制可能与抑制肝组织TGF-β1及α-SMA的表达有关。     

针刺穴位与筋膜对骨髓间充质干细胞定向分化的体外机制研究

目的：探讨针刺穴位与筋膜在治疗肝纤维化中的体外机制。方法：大鼠分为正常对照组、肝纤维化模型12周组、肝纤维化模型20周组、针刺穴位组和针刺筋膜组。采用HE染色和Mallory染色,光镜下观察各组大鼠肝脏石蜡切片标本,制备各组血清并检测血清中的血清甘油三酯（TG）、透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PC-Ⅲ）,验证模型是否造模成功,针刺穴位组和针刺筋膜组是否有效,同时制备各组大鼠血清,对大鼠骨髓间充质干细胞进行干预,以肝细胞标志物白蛋白作为检测指标,采用免疫组化、ELISA法和免疫印迹法检测各组血清对大鼠骨髓间充质干细胞分化增殖是否具有影响。结果：HE染色和Mallory染色及血清学指标显示,造模12周后,大鼠肝脏出现了明显的纤维化和肝细胞的脂肪变,模型组血清中TG、HA、LN、PC-Ⅲ浓度明显高于其他各组。造模20周后,大鼠肝脏出现一定程度自愈,但效果明显差于两个治疗组。免疫组化法、ELISA法和免疫印迹法显示正常对照组血清干预的大鼠骨髓间充质干细胞无白蛋白表达,20周模型组、针刺穴位组和针刺筋膜组干预的大鼠骨髓间充质干细胞均有白蛋白表达。结论：正常对照组血清不能诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化;而20周模型组、针刺穴位组和针刺筋膜组大鼠血清可诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化;这提示损伤及治疗均可诱导骨髓间充质干细胞向肝细胞分化。     

"肝心宁"对肝纤维化大鼠病理组织改变影响的实验研究

目的：观察“肝心宁”胶囊对实验大鼠肝纤维化的防治作用。方法：52只SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性对照组、中药低剂量组、中药高剂量组5组。采用改良复合因素法复制大鼠肝纤维化模型。空白组与模型组给予生理盐水10mL／kg灌胃，阳性对照组给予秋水仙碱0．125mg／kg治疗，中药高、低剂量组分别给予肝心宁26、6．5g,／kg治疗。6周后，HE染色后比较各组大鼠肝脏病理组织改变。结果：在肝纤维化程度上各治疗组与模型组比较均有显著性差异（P〈0．05或P〈0.01），而以中药低剂量组最为显著（P〈0．01）；在改善肝脏炎症程度上中药高、低剂量组与模型组比较有显著性差异（P〈0．05或P〈0．01），而阳性对照组与模型组比较无显著性差异（P〉0．05）。结论：“肝心宁”能有效预防实验大鼠肝纤维化形成。用中药防治肝纤维化，通过单纯增加药量来获取疗效的方法是不可取的。     

消癥益肝片治疗慢性乙型肝炎肝纤维化30例临床观察

目的：观察消瘕益肝片治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的疗效。方法：选择慢性乙型肝炎肝纤维化患者60例，随机分为两组，治疗组口服消瘢益肝片，对照组口服大黄廑虫丸治疗，观察治疗后的症状体征、肝功能及血清肝纤维化指标的变化。结果：治疗组症状体征改善明显优于对照组（P〈0．05），ALT、AST均显著下降（P〈0．05或0．01），较对照组为优（P〈0．05）；两组治疗后GLB显著下降（P〈0．05）。治疗组肝纤维化指标HA、C—IV、LN、PⅢP均显著下降（P〈0．05或0．01）；其中HA、LSI、C—IV下降程度治疗组优于对照组（P〈0．05）。结论：消瘢益肝片能改善慢性乙型肝炎肝纤维化患者症状体征，具有减轻肝脏炎症活动性．促进肝功能恢复．减轻肝纤维化程度的作用。     

骨髓间充质干细胞上清液治疗大鼠脑缺血的作用机制

目的观察骨髓间充质干细胞上清液经尾静脉注射治疗大鼠脑缺血的干预效果，探讨骨髓间充质干细胞移植体内作用机制。方法建立大鼠大脑中动脉缺血再灌注模型。16只健康Wistar大鼠分为假手术组、缺血对照组、上清液低浓度组、上清液高浓度组。模型制作24h后各组腹腔注射5-溴脱氧尿核苷（bromodeoxyuridine，BrdU）标记处于增殖状态的神经前体细胞，应用免疫组织化学染色检测缺血后7d脑组织Brdu、Brdu＋NSE、BedU＋GFAP阳性细胞数。结果脑梗死后7d侧脑室室管膜下区、海马齿状回区BrdU、BrdU＋NSE、BrdU4-GFAP阳性细胞数开始增多，上清液高浓度组的上述阳性细瞧放明显多于对照组（P〈0．01）和低浓度组（P〈0．05）。结论骨髓间充质干细胞上清液可以促进脑梗死大鼠损伤原位内源性衬经前体细胞的增殖、分化。     

枳棋子提取物对实验大鼠肝组织中TIMP-1与MMP-13表达的影响

目的：探讨枳棋子提取物对实验大鼠肝组织基质金属蛋白酶-13（MMP-13）与金属蛋白酶组织抑制因子-1（TIMP-1）表达的影响。方法：SD大鼠48只，随机分为2组：正常对照组（16只）与模型组（32只），用四氯化碳制备大鼠肝纤维化模型，共造模6周，6周末各组分别处死大鼠8只，取肝脏进行HE染色；模型组大鼠随机分为3组：自然恢复组、对照组和给药组，于12周末处死各组大鼠，取肝脏，运用半定量逆转录聚合酶链反应（砌：PCR）检测肝组织中MMP-13 mRNA与TIMP-1 mRNA的表达。结果：MMP-13 mRNA的表达在各组之间并无显著性差异，而TIMP-1 mRNA在各组之间有显著性差异，与正常组相比，自然恢复组大鼠肝组织TIMP-1 mRNA显著升高（P〈0．05），而与自然恢复组相比，对照组和给药组大鼠肝组织TIMP-1 mRNA的表达显著降低（P〈0．05），其中给药组TIMP-1 mRNA比对照组显著降低（P〈0．05）。结论：枳棋子提取物逆转肝纤维化的机制可能是减少肝纤维化大鼠肝脏中TIMP-1 mRNA的表达．逐渐恢复肝脏胶原降解系统。从而逆转肝纤维化。     

独一味颗粒抗大鼠肝纤维化的实验研究

目的观察独一味颗粒对实验性肝纤维化大鼠的治疗作用。方法将60只SD大鼠随机分成空白对照、模型、秋水仙碱、独一味颗粒高、中、低剂量6组。以四氯化碳联合高脂饮食等复合因素建立肝纤维化模型，造模同时给予相应药物灌胃治疗，于6周末实验期满，观察各组大鼠肝脏病理改变，及肝功能指标ALT、AST、MAO及肝纤指标PCⅢ、HA的变化。结果独一味颗粒能减轻肝纤维化大鼠肝脏的病理改变，改善肝功能（P〈0．05），降低肝纤维化程度（P〈0．01）。结论独一味颗粒具有较好的抗肝纤维化作用。     

骨髓间充质干细胞向肌成纤维细胞转化及一贯煎的影响

目的:观察体外诱导骨髓间充质干细胞向肌成纤维细胞分化及一贯煎的影响。方法:骨髓间充质干细胞分离、培养和鉴定,取第3代细胞加入转化生长因子(TGF-β1 5μg.L-1)诱导定向分化。骨髓间充质干细胞随机分为正常组、TGF-β1诱导组,TGF-β1诱导加一贯煎组,2周后通过免疫荧光、实时定量PCR法检测骨髓间充质干细胞分化情况及一贯煎的影响。结果:骨髓间充质干细胞鉴定结果显示CD44强阳性表达,CD29弱阳性表达。TGF-β1诱导后,免疫荧光及实时定量PCR均显示TGF-β1诱导组细胞α-SMA阳性表达,一贯煎组细胞α-SMA表达显著降低,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:经体外诱导骨髓间充质干细胞可以向肌成纤维细胞分化,一贯煎可阻止骨髓间充质干细胞向肌成纤维细胞分化。     

一贯煎合丹参治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的临床研究

目的：评价一贯煎合丹参在阿德福韦酯抗病毒基础上治疗慢性乙型肝炎肝纤维化的疗效。方法：将108例慢性乙型肝炎肝纤维化患者在阿德福韦酯抗病毒治疗基础上随机分为三组：一贯煎组、阿德福韦酯组和一贯煎合丹参组,治疗前后分别进行肝功能、肝纤维化血清学指标及HBVDNA阴转率检测。结果：治疗1年后,①三组患者肝功能、肝纤维化指标均有不同程度的好转：②一贯煎合丹参组ALT降低和Alb升高幅度、HBVDNA阴转率、肝纤维化指标的改善与其他两组比较,差异有显著性意义（P〈0．05）。结论：在阿德福韦酯抗病毒基础上一贯煎联合丹参治疗慢性乙肝肝纤维化疗效更好。     

清香散治疗湿热型慢性乙型肝炎肝纤维化临床研究

目的观察清香散治疗湿热型慢性乙型肝炎肝纤维化的临床疗效。方法选择慢性乙型肝炎肝纤维化患者78例，随机分为两组，对照组（38例）采用常规保肝治疗，治疗组（40例）在常规治疗的基础上加服清香散，治疗60d后观察两组综合疗效及治疗前后肝功能、肝纤维化指标的变化。结景治疗组血清ALT、AST、TBil和肝纤维化4项指标水平均低于对照组，ALB水平高于对照组，临床疗效明显优于对照组（P〈0．05，P〈0．01）。结论清香散对逆转慢性乙型肝炎肝纤维化有一定疗效。     

鳖甲煎丸治疗慢性乙型肝炎肝纤维化疗效观察

目的：观察鳖甲煎丸治疗慢性乙型肝炎疗效及对肝纤维化的影响。方法：将118例慢性乙型肝炎患者随机分为治疗组60例和对照组58例,2组均予常规护肝、降酶药物治疗,治疗组加用鳖甲煎丸治疗。疗程均为6月。检测2组治疗前及治疗6月后患者肝功能及肝纤维化指标。结果：总有效率治疗组86．7‰对照组60．3％,2组比较,差异有显著性意义（P〈0．05）。2组治疗后肝功能、肝纤维化各项指标比较,差异有显著性或非常显著性意义（P〈0．05,P〈0．01）。结论：鳖甲煎丸治疗慢性乙型肝炎疗效显著,有良好的抗肝纤维化作用。     

肝康Ⅱ号抗肝纤维化的实验研究

目的探讨肝康Ⅱ号对四氯化碳(CCl_4)诱导的实验性肝纤维化大鼠抗肝纤维的作用。方法用CCl_4诱导大鼠肝实质损伤性纤维化模型。56只SD大鼠被随机分为正常对照组、模型组及治疗组(高、低剂量组)4组,每组14只。除正常对照组外所有大鼠皮下注射40%CCl_4(橄榄油配制,每3日1次,共8周)。正常对照组注射等体积精制的橄榄油。治疗组同时给予肝康Ⅱ号灌胃。每日2次,共8周。实验结束用2%戊巴比妥钠(45mg/kg)腹腔注射麻醉大鼠,收集血清标本并取肝左叶。利用VG染色对肝脏胶原表达及纤维化程度进行评价。血清学检查包括肝功能,层粘连蛋白(LN)、透明质酸(HA)、Ⅲ型前胶原(PCⅢ)及Ⅳ型胶原(Ⅳ-C)(放射免疫法)。结果与模型组比较,治疗组肝功能明显改善(P＜0．05,P＜0．01),肝康Ⅱ号可显著降低肝纤维化大鼠血清LN、HA、PCⅢ及Ⅳ-C水平(P＜0．05,P＜0．01)。肝脏组织病理检查显示高剂量组肝纤维化程度明显下降。结论肝康Ⅱ号对CCl_4诱导的肝纤维化有良好的防治作用。     

阴虚证表征的免疫性肝损伤小鼠特征及一贯煎的干预作用

目的:检测免疫性肝损伤小鼠的阴虚证表征,观察一贯煎对阴虚证表征的影响。方法:将80只雄性BALB/c小鼠随机分为正常对照组、模型组、阳性对照组、一贯煎组,每组20只。除正常对照组外,均建立免疫性肝损伤小鼠模型,在造模同时,一贯煎组小鼠予一贯煎浓缩液灌胃,0.4 m L/20g,1次/d,连续8周。阳性对照组给予联苯双酯灌胃,0.2 g/kg,1次/d,连续8周。正常对照组和模型组按相同方法灌服等量生理盐水。8周后,检测各组小鼠血清ALT、AST等肝功能指标;通过HE染色评价肝脏炎症活动度(G)和纤维化程度(S);检测小鼠体质量、舌面干湿度、舌温、舌和肝脏微循环血流速度、食物和饮水、大小便等阴虚证表征。结果:(1)一贯煎在改善肝功能、减轻炎症、抗肝纤维化方面作用较好(P0.05)。(2)免疫性肝损伤小鼠具有阴虚证的表征,一贯煎能够改善阴虚证的症状(P0.05)。结论:免疫性肝损伤小鼠具有阴虚证的特点;一贯煎能改善肝损伤小鼠的病理及阴虚证的症状。     

二甲基亚硝胺大鼠肝纤维化中医方证研究

目的：探讨二甲基亚硝胺（DMN）大鼠肝纤维化的中医方证。方法：腹腔注射法制备DMN大鼠肝纤维化模型，分别采用5首不同功效的经典方治疗两周，观察各组大鼠肝组织病理学、羟脯氨酸（Hyp）含量及肝功能变化。结果：造模4周后大鼠形成典型小结节性肝硬化，6周后模型组大鼠肝组织损伤较4周时有所缓解。与6周模型组相比，茵陈蒿汤组大鼠肝组织病理变化、Hyp含量及肝功能均显著改善（P〈0．05或P〈0．01）；黄芪汤组大鼠肝组织病理变化、Hyp古量亦显著改善（P〈0．05或P〈0．01）。结论：茵陈蒿汤、黄芪汤能够有效逆转DMN大鼠肝纤维化，成型期DMN肝纤维化大鼠的主要中医方证为湿热、瘀热内蕴兼气虚。     

柴胡疏肝煎剂对肝纤维化大鼠细胞因子的影响

目的：观察柴胡疏肝煎剂对肝纤维化大鼠细胞因子的影响。方法：按照完全随机化原则将61只实验动物随机分为正常对照组，模型对照组，西药治疗组、柴胡疏肝煎剂低及高剂量治疗组共5组，除模型对照组为13只以外其余各组均为每组12只。以40％四氯化碳石蜡油作为腹腔造模剂进行腹腔造模，各治疗组从造模四周后给予柴胡疏肝煎剂和秋水仙碱治疗。病理切片观察大鼠肝纤维化的变化情况；ELISA检测各组大鼠血清TNF—α及IL-6的浓度。结果：与正常对照组相比，模型组大鼠肝纤维化程度明显，差异有统计学意义（P〈0．01），与模型组相比，柴胡疏肝煎剂治疗组及西药治疗组均可以明显改善大鼠肝纤维化的程度，差异有统计学意义（P〈0．05）。与正常对照组相比。模型组大鼠血清中TNF-α及IL-6的浓度明显升高（P〈0．01）。与模型组相比，西药治疗组及柴胡疏肝煎剂治疗组可以明显降低肝纤维化大鼠血清中TNF-α的浓度（P〈0．05，P〈0．01）。与西药治疗组相比。柴胡疏肝煎剂高剂量治疗组大鼠血清中TNF-α的浓度明显降低（P〈0．05）。与模型组相比，西药治疗组及柴胡疏肝煎剂治疗组可以明显降低肝纤维化大鼠血清中IL-6的浓度（P〈0．01）。与西药治疗组相比，柴胡疏肝煎剂高剂量治疗组大鼠血清中IL-6的浓度明显降低（P〈0．05）。结论：此柴胡疏肝煎剂可能主要是通过降低肝纤维化大鼠血清中的IL-6和TNF—α浓度并进一步抑制肝脏的炎症反应，减轻肝脏损伤而起到治疗肝纤维化的作用，为临床中医用药提供实验依据。     

扶正化瘀胶囊治疗肝纤维化临床观察

目的：观察扶正化瘀胶囊抗肝纤维化作用。方法：选择慢性乙型肝炎患者67例,治疗组35例,对照组32例,两组均服用甘草酸二铵胶囊150rag,Tid,疗程6个月,治疗组加服扶正化瘀胶囊1．5g,Tid,分别于治疗前后检测两组肝功能和肝纤维化四项指标,进行比较。结果：疗程结束后两组ALT、AST均有不同程度下降,以治疗组明显;治疗组治疗后透明质酸、层粘蛋白、Ⅲ型前胶原、Ⅳ型胶原显著下降（P〈O．05）,对照组则无显著性差异（p〉0．05）。结论：扶正化瘀胶囊既能减轻纤维化肝脏Ⅳ型胶原增生与沉积,又可通过改善肝脏炎症减轻肝组织的破坏与重构,具有显著的抗肝纤维化作用。