三黄煎剂抑制Aurora激酶A增强表柔比星对乳腺癌MCF-7细胞药效的研究

目的：探讨三黄煎剂对表柔比星作用于MCF-7细胞药效的影响及相关机制。方法：采用CCK-8法检测三黄煎剂对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响。RT-PCR法、Western Blot法检测三黄煎剂对MCF-7细胞Aurora A、p53 的mRNA及蛋白表达水平的影响。siRNA沉默MCF-7细胞中Aurora A,并用CCK-8法检测三黄煎剂对MCF-7细胞增殖抑制的影响。CCK-8法、AnnexinV-FITC/PI法检测三黄煎剂联合表柔比星对MCF-7细胞增殖抑制率、凋亡率的影响。Western Blot法检测三黄煎剂联合表柔比星对MCF-7细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果：三黄煎剂对MCF-7细胞增殖抑制率呈浓度梯度依赖增长（P<0.05）,给药48 h疗效优于24 h（P<0.05）,与给药72 h无统计学差异（P>0.05）。三黄煎剂能够调节MCF-7细胞Aurora A、p53蛋白及mRNA的表达。siRNA沉默Aurora A将三黄煎剂对MCF-7 细胞的增殖抑制率下调了50.0%（49.2% 到24.8%）。三黄煎剂与表柔比星联用能够增加表柔比星对MCF-7细胞的增殖抑制率及凋亡率,调节凋亡相关蛋白c-PARP、c-Caspase 3、Bcl-2、Bax及Aurora A的表达水平。 结论：三黄煎剂能够增加MCF-7 细胞对化疗药物表柔比星的敏感性,可能与三黄煎剂对Aurora 激酶A 的 抑制有关。     

三黄煎剂抑制Aurora激酶A增强乳腺癌MCF-7细胞对他莫昔芬治疗敏感性的研究

目的探讨三黄煎剂对他莫昔芬作用于MCF-7细胞药效的影响及相关机制。方法采用CCK-8法检测三黄煎剂对乳腺癌细胞MCF-7增殖的影响,q-PCR法、Western Blot法检测三黄煎剂对MCF-7细胞Aurora A、p53的mRNA及蛋白表达水平的影响。siRNA沉默MCF-7细胞中Aurora A,并用CCK-8法检测对三黄煎剂作用于MCF-7细胞增殖抑制的影响。CCK-8法、Annexin V-FITC/PI法检测三黄煎剂联合他莫昔芬对MCF-7细胞增殖抑制率、凋亡率的影响。Western Blot法检测三黄煎剂联合他莫昔芬对MCF-7细胞凋亡相关蛋白表达的影响。结果三黄煎剂对MCF-7细胞增殖抑制率呈浓度梯度依赖增长(P0.05),给药48 h疗效好于24h(P0.05),与给药72h无统计学差异(P0.05)。三黄煎剂能够调节MCF-7细胞Aurora A、p53蛋白及mRNA的表达。siRNA沉默Aurora A将三黄煎剂对MCF-7细胞增殖抑制率下调了50.0%(49.2%~24.8%)。三黄煎剂与他莫昔芬联用能够增加他莫昔芬对MCF-7细胞的增殖抑制率及凋亡率,调节凋亡相关蛋白c-PARP,c-Caspase 3,Bcl-2/Bax水平。结论三黄煎剂能够抑制MCF-7细胞增殖并增加MCF-7细胞对内分泌治疗药物他莫昔芬的敏感性,这可能与三黄煎剂对Aurora激酶A的抑制有关。     

三黄煎剂通过下调Aurora激酶A抑制乳腺癌血管新生＊

目的 探索三黄煎剂抑制乳腺癌血管新生之功效，并探讨其内在机制。方法 siRNA沉默乳腺癌细胞中Aurora激酶A，qRT-PCR、Western Blot实验分别检测三黄煎剂及Aurora激酶A敲减对乳腺癌细胞Aurora激酶A的mRNA、蛋白表达的影响。人脐静脉血管内皮细胞（Human Umbilical Vein Endothelial Cells， HUVECs）迁移、管腔形成实验分别检测三黄煎剂及Aurora激酶A敲减对乳腺癌细胞条件培养基诱导下的HUVECs的迁移、管腔形成的影响。鸡胚尿囊膜（Chorioallantoic Membrane， CAM）模型检测三黄煎剂和/或Aurora激酶A敲减对乳腺癌血管新生的抑制效果。Western Blot实验检测三黄煎剂及Aurora激酶A敲减对细胞外调节蛋白激酶（Extracellular Regulated Protein Kinases，ERK）信号通路表达的影响。结果 三黄煎剂能够显著抑制Aurora激酶A的mRNA、蛋白的表达，且效果与Aurora激酶A敲减近似。三黄煎剂能够抑制乳腺癌细胞条件培养基诱导下的HUVECs的迁移、管腔形成，且与Aurora基因敲减作用相似。三黄煎剂能够抑制CAM上乳腺癌血管新生，联合运用三黄煎剂和Aurora激酶A敲减并不显著增加抑制效果。三黄煎剂能够调节ERK信号通路表达，且与Aurora激酶A敲减效果类似。结论 三黄煎剂可能是通过靶向性调节Aurora激酶A，下调ERK信号通路，从而抑制乳腺癌血管新生。     

华蟾素对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖迁移凋亡的影响

目的:研究华蟾素对MDA-MB-231细胞增殖、迁移和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制。方法:体外培养三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231,用倒置显微镜观察不同浓度华蟾素对MDA-MB-231细胞形态的影响;CCK-8实验检测华蟾素对MDA-MB-231细胞增殖的抑制作用;划痕实验检测华蟾素对MDA-MB-231细胞迁移能力的抑制作用;FITC/PI双染流式细胞术检测不同浓度华蟾素对MDA-MB-231细胞凋亡率的影响;Western Blot检测凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2、Cleaved capsase-3、Cleaved caspase-9和PTHrP的表达。结果:CCK-8结果显示华蟾素可以时间、浓度依赖性地抑制MDA-MB-231细胞增殖;划痕实验结果表明华蟾素可抑制MDA-MB-231细胞迁移;流式细胞术结果表明华蟾素可浓度依赖性地诱导MDA-MB-231细胞凋亡;Western Blot结果表明,华蟾素可上调MDA-MB-231细胞中促凋亡蛋白Bax、Cleaved capsase-3、Cleaved caspase-9,下调抑凋亡蛋白Bcl-2。此外,华蟾素还可抑制MDAMB-231细胞中PTHrP的表达。结论:华蟾素通过线粒体途径诱导MDA-MB-231细胞凋亡可能是其抗三阴性乳腺癌的机制;华蟾素通过下调乳腺癌MDA-MB-231细胞中PTHrP进而抑制溶骨性骨转移的发生,有待于后续的动物实验来进行验证。     

探讨沉默LncRNA-H19联合小剂量冬凌草甲素对APL细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨沉默LncRNA-H19联合小剂量冬凌草甲素对急性早幼粒细胞白血病(acute promyelocytic leukemia,APL)NB4细胞增殖和凋亡的影响。方法:体外常规培养NB4细胞,通过转染LncRNA-H19siRNA沉默LncRNA-H19表达,将细胞分为对照组、LncRNA-H19 siRNA组、冬凌草甲素组和联合干预组。采用RT-PCR法检测细胞中LncRNA-H19表达,CCK-8法检测细胞增殖抑制率、流式细胞仪检测细胞凋亡率、Western Blot法检测细胞中目的蛋白表达水平。结果 :LncRNA-H19 siRNA组和联合干预组细胞中LncRNA-H19表达量显著低于对照组(P0.05),细胞增殖抑制率和凋亡率显著高于对照组(P0.05),细胞中β-catenin、Cyclin D1、C-myc、PI3K和AKT蛋白表达量明显低于对照组(P0.05);冬凌草甲素组细胞增殖抑制率和凋亡率明显高于对照组(P0.05),细胞中PI3K蛋白表达量明显低于对照组(P0.05);联合干预组干预效果明显优于LncRNA-H19 siRNA组或冬凌草甲素组(P0.05)。结论:沉默LncRNA-H19联合小剂量冬凌草甲素能显著抑制APL进展,可能与其抑制Wnt/β-catenin和PI3K/AKT信号通路及其下游因子有关。     

柴胡皂苷D对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、周期及周期相关调控因子表达的影响

目的观察柴胡皂苷D(Saikasaponin D,SSD)对乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、周期及周期相关因子细胞周期蛋白A1(cyclin A1)、细胞周期蛋白A2(cyclin A2)、细胞周期蛋白B1(cyclin B1)、细胞周期蛋白B2(cyclin B2)表达的影响,探讨SSD抑制乳腺癌细胞增殖的可能作用机制。方法采用CCK-8法检测不同浓度SSD对MDA-MB-231细胞12、24、48 h的生长抑制作用,流式细胞术检测不同浓度的SSD对MDA-MB-231细胞周期的影响,分别用Western Blot、RT-PCR法检测周期相关因子cyclin A1、cyclin A2、cyclin B1、cyclin B2蛋白及mRNA的表达。结果 SSD对MDA-MB-231细胞的增殖抑制率随着SSD的浓度增加而升高,呈剂量依赖性,同一SSD浓度时,抑制率随着时间的延长而升高,呈时间依赖性;与空白组比较,低浓度SSD(6.25μmol/L)及高浓度SSD(12.50μmol/L)G_1期细胞数减少(P0.05),G_2期细胞数增加(P0.05),低、高浓度SSD组cyclin A1、cyclin A2、cyclin B1、cyclin B2蛋白及mRNA相对表达量降低(P0.05,P0.01)。结论 SSD可抑制MDA-MB-231细胞生长,将MDA-MB-231细胞阻滞在G_2期,且其阻滞细胞周期的机制可能与其降低细胞周期相关因子cyclin A1、cyclin A2、cyclin B1、cyclin B2蛋白及mRNA的表达相关。     

复方苦参注射液联合表柔比星对膀胱癌细胞凋亡的影响

目的:探究复方苦参注射液、表柔比星及两药联合应用对人膀胱癌T24细胞增殖、凋亡的影响及其机制。方法:将膀胱癌T24细胞分为空白对照组、复方苦参注射液60μl/ml组、表柔比星4.6μmol/L组及联合给药(复方苦参注射液60μl/ml+表柔比星4.6μmol/L)组。CCK-8法观察膀胱癌T24细胞增殖,流式细胞术检测膀胱癌T24细胞凋亡,蛋白免疫印迹实验检测膀胱癌T24细胞凋亡关键蛋白的表达情况。结果:与空白对照组相比,复方苦参注射液60μl/ml和表柔比星4.6μmol/L能显著抑制膀胱癌T24细胞增殖(P<0.01),且联合用药能起到协同增效作用(P<0.01)。复方苦参注射液60μl/ml和表柔比星4.6μmol/L能显著诱导膀胱癌细胞凋亡(P<0.01),两药联合使用促进凋亡作用更加明显(P<0.01)。复方苦参注射液60μl/ml和表柔比星4.6μmol/L能下调膀胱癌细胞凋亡相关蛋白pro-Caspase 3和Bcl-2的表达(P<0.05),上调Cleaved PARP、Bax和Cleaved-Caspase 3蛋白的表达(P<0.05),降低Bcl-2/Bax比值(P<0.05),联合用药作用更加明显(P<0.05)。结论:复方苦参注射液与表柔比星能够抑制膀胱癌细胞增殖,促进膀胱癌细胞凋亡,两药联合应用起到协同增效作用。     

三黄煎剂降低ROS促进乳腺癌他莫昔芬耐药细胞凋亡的实验研究

目的探讨三黄煎剂对MCF-7他莫昔芬耐药(MCF-7/TAMR)细胞ROS水平和凋亡的影响。方法建立MCF-7/TAMR细胞系,采用CCK-8法检测他莫昔芬对乳腺癌细胞MCF-7、MCF-7/TAMR增殖的影响,并检测耐药指数;同时检测三黄煎剂对MCF-7/TAMR增殖的影响。免疫荧光法评价MCF-7、MCF-7/TAMR及各给药组的ROS的水平;流式细胞仪检测各实验组细胞凋亡情况;Western Blot法检测三黄煎剂对MCF-7/TAMR细胞凋亡相关蛋白表达对的影响。结果成功构建了MCF-7/TAMR细胞株,不仅在形态上发生了改变,而且对他莫昔芬的抵抗能力得到了增强,其RI指数为(3.61±0.35)(P0.05),三黄煎剂对MCF-7/TAMR细胞株有明显的抑制作用,IC50值为(4.28±0.06)mg/m L,能够降低耐药细胞株的ROS水平,同时能够下调MCF-7/TAMR细胞的Bcl-2活性,上调Ba X/Bak,促使MCF-7/TAMR细胞产生凋亡。结论三黄煎剂通过降低乳腺癌MCF-7TAMR细胞内的ROS水平,抑制乳腺癌MCF-7TAMR细胞增殖并促进乳腺癌MCF-7TAMR细胞凋亡。     

茯苓酸通过激活多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶诱导人乳腺癌细胞MDA-MB-231凋亡

目的观察茯苓酸对人乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖及凋亡的影响,并初步探讨作用机制。方法乳腺癌MDA-MB-231细胞与不同浓度(1、2、5μmol/L)的茯苓酸共孵育,采用CCK-8细胞增殖与活性检测试剂盒检测细胞存活率;流式细胞术Annexin V/PI双染色检测细胞凋亡;Western blotting法检测多聚腺苷二磷酸核糖聚合酶(PARP)及与细胞凋亡相关蛋白的表达。结果茯苓酸能够剂量和时间依赖性地抑制MDA-MB-231细胞的增殖,并可诱导MDA-MB-231细胞凋亡。浓度为1、2、5μmol/L的茯苓酸作用MDA-MB-231细胞48 h后,细胞凋亡率显著增加至25.6%、59.4%、87.2%,明显高于对照组凋亡率(5.4%);经过1、2、5μmol/L茯苓酸分别处理48 h后,实验组MDA-MB-231细胞中凋亡蛋白标志物PARP裂解量升高,且呈剂量依赖性。结论茯苓酸能抑制MDA-MB-231细胞的增殖并诱导其凋亡,其作用机制与激活PARP有关。     

siRNA沉默E2F3基因对人神经胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的;研究siRNA沉默E2F3基因对人神经胶质瘤细胞增殖和凋亡作用。方法：化学合成法合成针对人E2F3基因siRNA片段,脂质体转染法转染U251细胞,Western Blot及RT—PCR检测E2F3表达,MTT法检测U251细胞生长活性,流式细胞术检测U251细胞周期和凋亡率。结果：针对E2F3基因的siRNA片段转染U251细胞后,E2F3的mRNA及蛋白表达降低,细胞增殖被抑制,G1期细胞比例增高,S期细胞比例降低,细胞凋亡率增加。结论：siRNA沉默E2F3基因对U251细胞具有抑制增殖和促进凋亡作用。