祛风宣痹方抑制气道上皮细胞凋亡的研究

目的：探究祛风宣痹方对气道上皮细胞氧化损伤的保护作用。方法：体内研究采用OVA诱导哮喘小鼠模型，体外研究采用不同浓度的H₂O₂及祛风宣痹方干预人气道上皮细胞系16HBE 48 h。DCFH-DA活性氧探针检测细胞中活性氧(ROS)的生成水平；MTT(噻唑蓝)法检测细胞活力；Western blot法检测凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax的表达水平；Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞凋亡水平。结果：ROS结果显示，H₂O₂作用后细胞内ROS生成明显增加，祛风宣痹方提取物可降低ROS水平。MTT结果显示，H₂O₂作用后对气道上皮细胞的抑制率随浓度增加而增大(P<0.01),祛风宣痹方水提取物和祛风宣痹方醇提取物均可减少H₂O₂诱导的气道上皮细胞损伤(P<0.01)。Western blot结果提示，H₂O₂刺激后气道上皮细胞Bcl-2蛋白表达水平显著降...     

异鼠李素对H2O2诱导的肠上皮细胞氧化应激损伤的保护作用

目的:评价异鼠李素对H₂O₂诱导的大鼠肠上皮细胞IEC-6氧化应激损伤的保护作用及机制。方法:MTT实验筛选异鼠李素对IEC-6细胞的安全作用浓度用于评价抗H₂O₂诱导的氧化应激损伤功效。设正常对照组、H₂O₂组、N-乙酰半脱氨酸(NAC)组(10μmol/L)、异鼠李素低剂量组(20μmol/L)、异鼠李素中剂量组(40μmol/L)及异鼠李素高剂量组(100μmol/L)。正常对照组常规培养，H₂O₂组用500μmol/L H₂O₂处理，NAC及异鼠李素组分别用10μmol/L NAC,20、40、100μmol/L异鼠李素预处理细胞相应时间后，用500μmol/L H₂O₂继续培养。流式细胞术检测细胞凋亡及ROS水平，试剂盒检测细胞中MDA含量及SOD活性，Western blot检测细胞中Nrf2/HO-1、PI3K/...     

芍药甘草复合精油对过氧化氢诱导鼠嗜铬细胞瘤细胞氧化损伤的保护作用研究

目的：探讨芍药甘草复合精油(SGO)对过氧化氢(H₂O₂)诱导鼠嗜铬细胞瘤(PC12)细胞氧化损伤的保护机制。方法：采用200μmol/L的H₂O₂处理PC12细胞建立氧化应激损伤模型。将PC12细胞分为对照组、模型组(200μmol/L H₂O₂)、SGO低浓度组(1μmol/L SGO+200μmol/L H₂O₂)、SGO高浓度组(10μmol/L SGO+200μmol/L H₂O₂)。细胞处理结束后,采用CCK-8法检测细胞存活率;试剂盒检测细胞超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)含量;流式细胞术检测细胞凋亡率;免疫印迹法检测细胞中剪切化半胱氨酸天冬氨酸蛋白激酶-3 (C-Caspase3)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)、Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达。结果：与对照组比较,模型组的细胞存活率、GSH-...     

人参皂苷Rg1对心肌细胞氧化应激损伤的抑制作用

目的 通过构建H₂O₂诱导的H9c2细胞氧化应激模型,观察人参皂苷Rg₁对氧化应激的抑制作用,并探讨mi R-499c是否参与人参皂苷Rg₁抑制氧化应激的作用机制。方法 采用600μmol/L的H₂O₂诱导H9c2细胞氧化应激模型,给予人参皂苷Rg₁预处理24 h,检测乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)、活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平和线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential,MMP)变化;采用Western blotting检测凋亡相关蛋白表达。采用Lipofiter 3.0将miR-499c转染至H9c2细胞再制备H₂O₂诱导的氧化应激模型,给予人参皂苷Rg     

枸杞多糖保护人脐带间充质干细胞对抗氧化损伤研究

目的：探讨枸杞多糖(LBP)对人脐带间充质干细胞(HUC-MSCs)的抗氧化损伤保护作用。方法：采用200μmol/L H₂O₂刺激HUC-MSCs 6 h建立氧化损伤模型。细胞随机分为正常对照组(NC)、H₂O₂处理的模型组(M)、VC处理的阳性药对照组(PC)、枸杞多糖低剂量组(LBP-L)、枸杞多糖中剂量组(LBP-M)和枸杞多糖高剂量组(LBP-H)。用细胞计数试剂盒(CCK-8)检测细胞活力,荧光分光光度计检测细胞内活性氧(ROS)水平。RT-PCR技术分析细胞凋亡相关基因Bax、Caspase-3和Caspase-9表达水平。结果：经200μmol/L H₂O₂刺激HUC-MSCs 6 h后,细胞体积缩小,呈明显的凋亡样变,表明HUC-MSCs氧化损伤模型建立成功;CCK-8实验结果显示,与NC组比较,M组的细胞存活率明显降低(P <0.01);与M组相比,LBP处理组细胞存活率逐渐升高(P <0.05)。ROS实验结果表明,与NC...     

神经复元方对原代大鼠海马神经元BDNF/TrKB信号通路影响的研究

目的:研究神经复元方含药血清对原代大鼠海马神经元BDNF/TrkB信号通路及突触可塑性的影响,探讨治疗PSD的部分分子机制。方法:采用原代大鼠海马神经元氧化应激损伤模型,引入BDNF/TrkB通路抑制剂(K252a),分为正常对照组、H₂O₂培养组、含药血清+H₂O₂培养组、含药血清+K252a+H₂O₂组、K252a+H₂O₂组,用定量RT-PCR、免疫印迹法检测BDNF/TrkB信号通路相关蛋白(基因)表达水平,观察海马神经元突触的超微结构。结果:H₂O₂加入含药血清组突触密度增大,突触后致密物厚度增厚。SYNA、GAP-43和SYN1 mRNA水平和蛋白表达水平在含药血清+H₂O₂培养组比H₂O₂组明显提高(P<0.01)。突触相关蛋白在含药血清+K252a+H₂O₂组显著低于对照组和含药血清+H₂O₂培养组(P<0.01)。结论:神经复元方能修复海马神经元氧化应激损伤模型的突触可塑性,可能是通过介导BDNF/TrKB信号通路调节SYNI、SYNA基因,促进相关蛋白表达。     

归脾汤对心肌缺血大鼠ERK1/2和p38 MAPK表达的影响

目的：探究归脾汤对心肌缺血大鼠的治疗作用及机制。方法：50只SD大鼠随机分为正常组、模型组、归脾汤低、高剂量组(7.52、15.04 g·kg^-1)、曲美他嗪组(0.002 g·kg^-1)。通过灌胃维生素D₃、高脂饮食和注射异丙肾上腺素的方法建立心肌缺血大鼠模型，药物治疗15 d后，心电图分析其心肌损伤程度；全自动生化分析仪检测血清中总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的变化；苏木素-伊红(HE)和马松(Masson)染色观察心肌组织病理改变；原位末端标记(TUNEL)染色检测心肌细胞凋亡；蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠心脏中细胞外信号调节激酶1/2(ERK1/2)、磷酸化ERK1/2(p-ERK1/2)、p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)、Bcl-2、剪切胱天蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)蛋白表达。结果：与正...     

黄芩苷对幽门螺杆菌诱导人胃黏膜上皮GES-1细胞损伤的保护作用及机制

目的:探讨黄芩苷(baicalin)对幽门螺杆菌(Helicobacter pylori,Hp)诱导人胃黏膜上皮GES-1细胞(human gastric epithelial GES-1 cells)损伤的保护作用及机制研究。方法:采用Hp感染GES-1细胞,加入baicalin(15,30,60 mg·L~(-1))和p38分裂原激活蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,p38 MAPK)抑制剂SB203580 20μmol·L~(-1)共培养。噻唑蓝(MTT)比色法测细胞增殖、流式细胞术测细胞凋亡、酶联免疫吸附法(ELISA)测细胞白细胞介素-1β(interleukin-1β,IL-1β)及IL-8水平、比色法测细胞乳酸脱氢酶(lactic dehydrogenase,LDH)活性、蛋白免疫印迹法(Western blot)测细胞B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2,p-p38 MAPK及total-p38 MAPK(T-p38 MAPK)蛋白表达。结果:与空白组比较,Hp可抑制GES-1细胞增殖,促进GES-1细胞凋亡,诱导GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8并增加LDH活性,增加GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并降低Bcl-2蛋白表达(P0.01);与Hp感染组比较,中、高浓度baicalin组可促进GES-1细胞增殖,减少GES-1细胞凋亡,减少GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8水平并降低LDH活性,降低GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.01);与高浓度baicalin组比较,SB203580可进一步促进GES-1细胞增殖,减少GES-1细胞凋亡,减少GES-1细胞分泌IL-1β及IL-8水平并降低LDH活性,降低GES-1细胞内p-p38 MAPK,Bax蛋白表达并增加Bcl-2蛋白表达(P0.05,P0.01)。结论:baicalin可通过抗炎、促增殖并抗凋亡减轻Hp诱导的GES-1细胞损伤,其机制可能与抑制p38 MAPK通路有关。     

H2O2对北苍术次生代谢影响及机制分析

目的：探讨外源H₂O₂对北苍术次生代谢的影响及其机制。方法：采用5.0、1.0、0.2、0.04 mmol·L^-1 H₂O₂溶液和清水处理北苍术鲜根,比较北苍术内活性氧含量、抗氧化酶活性、次生代谢产物关键酶活性及次生代谢产物含量之间的关系。结果：在外源H₂O₂的作用下,北苍术鲜根中活性氧和丙二醛(MDA)的含量在第4天有显著升高,并在第6～8天恢复至正常水平。超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)和过氧化物酶(POD)活性均呈现先上升后下降的趋势,SOD、CAT和POD的活性分别在第4、4～6、2～4天达到高峰。北苍术次生代谢产物关键酶羟甲基戊二酸单酰辅酶A还原酶(HMGR)、乙酰辅酶A羧化酶(ACC)活性均有显著提升,且在不同浓度H₂O₂处理中,0.2 mmol·L^-1 H₂O₂处理组次生代谢产物合成关键酶活性提高幅...     

基于蛋白质组学分析参芎葡萄糖注射液拮抗H2O2诱导H9c2细胞氧化损伤的作用机制

目的:利用串联质谱标记(TMT)定量蛋白质组学技术探究参芎葡萄糖注射液(SGI)拮抗过氧化氢(H₂O₂)诱导H9c2细胞氧化损伤的作用机制。方法:体外培养H9c2细胞,H₂O₂诱导H9c2细胞建立氧化损伤模型,利用细胞增殖与毒性检测法(MTS)检测细胞存活率,高效液相色谱法(HPLC)进行肽段分级,超高效液相色谱-质谱联用技术检测H9c2细胞的蛋白表达,使用MaxQuant(v1.5.2.8)进行数据检索,高分辨质谱定量分析筛选差异表达蛋白,通过基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)数据库对差异表达蛋白进行生物信息学分析,蛋白免疫印迹法(Western blot)检测细胞内脂质结合蛋白2(Plin2)和原肌球蛋白1(Tpm1)的蛋白表达水平进行验证。结果:通过谱图解析鉴定有48608个特异性肽段,5903个可定量蛋白。与模型组比较,SGI组有82个差异表达的蛋白,其中有22个蛋白上调,60个蛋白下调。GO分析结果显示,差异表达蛋白主要参与程序性细胞死亡调节、细胞增殖调控、心血管系统发育和细胞迁移等生物进程。KEGG分析结果表明,这些蛋白与过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR),黏着斑和磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/Akt),Ras相关蛋白1(Rap1)等通路有关。Western blot结果显示,与模型组比较,SGI能显著增加Plin2蛋白表达水平,显著降低Tpm1蛋白表达水平(P<0.01),与蛋白质组学结果一致。结论:提示SGI可能通过调控PPAR,黏着斑,PI3K/Akt和Rap1等通路抑制细胞凋亡,从而拮抗H₂O₂诱导细胞氧化损伤,但需要后续实验进一步验证研究。     

虎杖苷对骨髓瘤细胞的生长、凋亡及ROS/p38 MAPK信号通路作用

目的：研究虎杖苷对骨髓瘤细胞生长、凋亡及ROS/p38 MAPK信号通路的作用。方法：体外培养人多发性骨髓瘤(MM)细胞系U266细胞,通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)法检测0、20、40、80、160、200 mg·L^-1质量浓度虎杖苷对U266细胞生长的影响,计算其半抑制浓度(IC₅₀)。取处于对数生长期的U266细胞,随机分为空白组、虎杖苷低质量浓度(80 mg·L^-1)组、虎杖苷高质量浓度(160 mg·L^-1)组、硼替佐米(75 nmol·L^-1)组,经药物分组处理后,通过CCK-8法测定各组细胞活力;通过流式细胞实验测定各组细胞凋亡率;通过酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定各组细胞炎性因子肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)及活性氧(ROS)水平;通过蛋白免疫印迹法检测各组细胞凋亡相关因子胱天蛋白酶-9(Caspase-9)、B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)及p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、磷酸化(p)-p38...     

基于SIRT1/FoxO1通路探究小檗碱抑制卵巢颗粒细胞凋亡与自噬的调节机制

目的：通过观察小檗碱(BBR)对卵巢颗粒细胞衰老的影响,探究其保护作用及调节机制。方法：应用H₂O₂诱导建立人卵巢颗粒样肿瘤(KGN)细胞衰老模型;设置空白组、模型组、BBR高剂量(1μmol·L^-1)组和BBR低剂量(0.5μmol·L^-1)组,模型组与BBR组加入浓度为10μmol·L^-1 H₂O₂,孵育40 min。通过细胞增殖与活性检测(CCK-8)分析检测BBR对KGN细胞增殖的影响;通过β-半乳糖苷酶染色检测BBR对KGN细胞衰老状态的影响;应用流式细胞术检测BBR对KGN细胞凋亡和ROS含量的影响;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测BBR对KGN细胞抗凋亡蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)/促凋亡蛋白Bcl-2相关X蛋白(Bax)比值、胱天蛋白酶-3(Caspase-3)、叉头框转录因子O1(FoxO1)及过氧化氢酶(CAT)mRNA表达的影响;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测BB...     

白藜芦醇介导AMPK/mTOR信号通路调控线粒体自噬缓解小鼠精原细胞氧化应激损伤和凋亡

目的 观察白藜芦醇(resveratrol, RES)是否通过腺苷酸活化蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(amp-activatedproteinkinase/mammalian target of rapamycin, AMPK/mTOR)信号通路调控线粒体自噬缓解小鼠精原细胞(Gc-1 spg)氧化应激损伤。方法 设置空白对照组(Control)、过氧化氢组(H₂O₂)、H₂O₂+RES组、H₂O₂+RES+AMPK抑制剂(Compound C,CC)组,各组给予相应处理后。CCK-8检测细胞活力,试剂盒检测过氧化物歧化酶(superoxide dismutase, SOD)、丙二醛(malondialdehyde, MDA)、谷胱甘肽过氧化物(glutathione peroxidase, GSH-PX)、乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase, LDH)和三磷酸腺苷(adenosine triphosphate, ATP)SOD、M...     

小檗碱抑制p38 MAPK通路降低visfatin诱导HUVEC损伤的研究

目的研究小檗碱(Ber)对内脏脂肪素(visfatin)诱导人脐静脉内皮细胞(HUVEC)损伤的保护作用及与p38丝裂原活化蛋白激酶(p38 MAPK)通路的关系。方法以visfatin不同质量浓度(0,50,100,200μg·L-1)及以100μg·L-1质量浓度的不同时间(0,6,12,24,48 h)作用HUVEC,MTT法检测细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡;ELISA法检测白细胞介素-6(IL-6)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)含量;Western blot法检测HUVEC中p-p38 MAPK、Bax、Bcl-2蛋白表达;并以50μmol·L-1 Ber及20μmol·L-1 SB203580(P38分裂原激活蛋白激酶通路抑制剂)检测Ber的干预作用。结果与对照组比较,100μg·L-1 visfatin可显著抑制HUVEC增殖,诱导HUVEC分泌IL-6及TNF-α,上调HUVEC内p-p38 MAPK、Bax蛋白表达及降低Bcl-2蛋白表达以促进细胞凋亡(P0.01);与visfatin组比较,Ber可显著减轻visfatin对HUVEC增殖的抑制、下调HUVEC内p-p38 MAPK、Bax蛋白表达及上调Bcl-2蛋白表达以抑制HUVEC凋亡、减少visfatin诱导HUVEC分泌IL-6及TNF-α(P0.01)。结论 Ber可减轻visfatin诱导的HUVEC损伤,其机制与抑制p38 MAPK通路有关。     

葱白提取物对H2O2处理脑微血管内皮细胞活性、凋亡及氧化应激的影响

目的:探讨葱白提取物对过氧化氢（H₂O₂）处理脑微血管内皮细胞活性、凋亡、氧化应激的影响及其可能作用机制。方法:体外培养大鼠RBMEC,H₂O₂处理大鼠脑微血管内皮细胞（RBMEC）建立细胞损伤模型,加入不同剂量的葱白提取物处理细胞,分别将pc DNA、pc DNA-CAI2转染至RBMEC,加入葱白提取物与H₂O₂共同处理细胞;采用甲基噻唑基四唑（MTT）法、流式细胞术分别检测细胞活性及凋亡率;采用实时荧光定量聚合酶链反应（q RT-PCR）法检测长链非编码RNA CAI2 （Lnc RNA CAI2）的表达量;采用2,4-二硝基苯肼显色法检测乳酸脱氢酶（LDH）的活性;采用黄嘌呤氧化酶法检测超氧化物歧化酶（SOD）的活性;蛋白免疫印迹（Western blot）法检测Cleaved-caspase3、Bax、Pro-caspase3、Bcl-2蛋白表达量。结果:与Con组比较,H₂O₂处理后可明显降低细胞活性...     

黄芪甲苷对肾小球系膜细胞氧化应激损伤的保护作用及其机制

目的:研究黄芪甲苷(astragalosideⅣ,ASⅣ)对H2O2诱导肾小球系膜细胞(human mesangial cells,HMC)氧化应激损伤的保护作用,并进一步探讨其分子机制.方法:将培养的肾小球系膜细胞随机分为5组:正常对照组、H2O2模型组、AS Ⅳ(12.5,100 nmol·L-1)组、阳性药(Tempol,1×105nmol·L-1)组.采用MTT法观察细胞活力;Hoechst 33258染色检测细胞凋亡;DHE染色检测胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)的产生;流式细胞术检测细胞周期变化情况;Western blot方法测定细胞周期蛋白Cyclin D1,Cyclin A及磷酸化p38,T-p38的表达.结果:1×105,2×105,3×105,4×105nmol·L-1H2O2均能诱导肾小球系膜细胞发牛氧化应激损伤:细胞存活率明显降低,细胞活力与H2O2浓度及其作用的时间呈正相关下降趋势.100 nmol·L-1黄芪甲苷能够显著减轻H2O2(3×l05nmol·L-1)诱导的肾小球系膜细胞氧化应激损伤:提高细胞存活率及细胞活力,抑制细胞凋亡,降低胞内ROS产量;恢复细胞周期蛋白Cyclin D1表达及各细胞周期的百分比,恢复细胞的正常增殖;降低磷酸化p38的表达.结论:黄芪甲苷对H2O2诱导肾小球系膜细胞氧化应激损伤有一定的保护作用.其机制可能与抑制p38/MAPK信号通路,影响细胞周期蛋白Cyclin D1的表达及降低H2O2诱导的细胞内ROS氧化应激损伤有关.     

油菜素内酯提高三七抗镉胁迫能力的生理生化机制研究

该研究以两年生三七为试验材料,通过盆栽试验研究了油菜素内酯(BR)对镉胁迫下三七生理生化的影响。结果表明,10 mg·kg^-1镉处理抑制三七的根系活力,显著提高三七叶和根部H₂O₂及丙二醛(MDA)的含量,造成三七的氧化损伤,并降低超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)活性;镉胁迫降低了三七叶绿素含量,提升叶片初始荧光(F_o),降低最大荧光(F_m)、最大光化学效率(F_v/F_m)和光合性能指数(PIABS),损伤了三七的光合作用系统;镉处理提高了三七叶和根部可溶性糖含量,抑制了可溶性蛋白的合成,降低了鲜干重,抑制了三七的生长。外源喷施0.1 mg·L^-1油菜素内酯降低了镉胁迫下三七叶和根部的H₂O₂和MDA含量,缓解了镉对三七的氧化损伤,提高了三七的抗氧化酶活性与根系活力,增加了三七叶绿素含量,降低了三七叶片的F_o,提高了三七F_m<...     

异甘草酸镁对紫杉醇所致肝损伤的保护机制

目的:初步探讨异甘草酸镁对紫杉醇所导致的肝损伤的保护作用和机制。方法:以正常人肝细胞LO2作为研究对象,分为空白组和不同质量浓度(2.5,5,10,20 mg·L-1)异甘草酸镁组,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测不同质量浓度紫杉醇对LO2细胞的损伤作用以及不同质量浓度异甘草酸镁对LO2细胞活力的影响,再检测异甘草酸镁干预紫杉醇损伤LO2细胞的作用,利用酶联免疫吸附测定(ELISA)试剂盒测定天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT)等指标检测LO2肝细胞损伤程度,用流式细胞术检测异甘草酸镁对LO2细胞周期,细胞凋亡的影响,并提取相关蛋白采用蛋白免疫印迹(Western blot)法进行凋亡相关蛋白的检测。结果:与溶剂组比较,1 mg·L-1紫杉醇具有明显的抑制LO2细胞增殖的作用(P0.01);异甘草酸镁5,10,20 mg·L-1均具有一定的促进LO2细胞增殖的作用(P0.05,P0.01),但对细胞形态无明显影响;异甘草酸镁5,10,20 mg·L-1均具有降低紫杉醇对LO2细胞损伤的作用(P0.05,P0.01);异甘草酸镁5,10,20 mg·L-1均具有降低紫杉醇所诱导的LO2细胞凋亡相关蛋白表达(P0.05,P0.01)和G2/M期阻滞的作用。结论:异甘草酸镁可以有效地逆转紫杉醇对体外培养的肝细胞LO2所造成的损伤作用,其机制可能是干预细胞周期,并对紫杉醇所诱导的肝细胞凋亡具有抑制作用。     

内脏脂肪素诱导血管内皮细胞损伤的MAPK信号通路及丹参酮ⅡA磺酸钠的干预作用

目的:研究内脏脂肪素(visfatin)参与血管内皮细胞损伤的机制及丹参酮ⅡA磺酸钠保护作用的机制。方法:培养人脐静脉血管内皮细胞(HUVEC,1×105/mL),用visfatin(250μg·L-1)刺激HUVEC 4 h,以丹参酮ⅡA(30,60,120 mg·L-1))干预24 h,酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞上清液中高敏C反应蛋白(hs-CRP)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、金属基质蛋白-9(MMP-9)水平,用Western blotting方法观察丝裂原激活蛋白激酶(MAPKs)信号转导通路中p38丝裂原激活蛋白激酶(p38MAPK)、细胞外信号调节激酶(ERK)、c-Jun氨基末端激酶(JNK)的活化情况。分别用p38 MAPK,ERK,JNK特异性抑制剂进行预处理细胞,再给予visfatin(250μg·L-1)刺激4 h,检测细胞上清液中hs-CRP,TNF-α,MMP-9水平。结果:与正常组比较,模型组细胞活力显著降低,细胞上清炎症因子hs-CRP,TNF-α,MMP-9显著增高,细胞内p38 MAPK,ERK,JNK磷酸化蛋白表达显著增高。与模型组比较,丹参酮ⅡA呈剂量依赖性地降低visfatin导致的hs-CRP,TNF-α,MMP-9高表达,并能抑制p38MAPK,ERK1/2磷酸化活化,但对JNK无显著抑制作用。用p38 MAPK,JNK,ERK1/2特异性抑制剂预刺激,可阻止visfatin诱导的hs-CRP,TNF-α,MMP-9细胞因子大量表达。结论:visfatin可能通过激活MAPK磷酸化信号通路,诱导炎症细胞因子高表达,促使血管内皮细胞炎症反应,丹参酮ⅡA通过抑制MAPK信号通路p38,JNK的激活,抑制visfatin诱导的炎症因子高表达,从而减少血管内皮细胞损伤。     

化浊解毒补肾方含药血清对肝星状细胞内雌激素受体转录激活的影响

目的 探讨化浊解毒补肾方延缓肝纤维化可能的作用机制。方法 SD大鼠随机分为化浊解毒补肾方含药血清组和空白血清组，无菌条件下收集腹主动脉血液制备血清。肝星状细胞(HSC-T6)分组为空白组、模型组(0.1mmol·L^-1H₂O₂干预诱导2h)、空白血清组+模型组、化浊解毒补肾方含药血清+模型组(含药血清浓度分别为2.5%、5%、10%、15%和20%)、E2(雌二醇)+模型组、ICI(ER拮抗剂)+空白血清组+模型组、ICI+化浊解毒补肾方含药血清+模型组、E2+ICI+模型组。MTT法测HSC-T6细胞增殖、流式细胞仪测细胞凋亡、免疫荧光染色法测细胞内α-SMA(α-肌动蛋白)荧光强度、Western blot法分析测细胞上清液Ⅰ型胶原蛋白、ER(雌激素受体)和α-SMA蛋白表达、qRT-PCR法分析细胞中ER-α、ER-β mRNA水平。结果 10%化浊解毒补肾方含药血清抑制H₂O₂诱导的HSC-T6细胞增殖和凋亡效果最佳(P<0.0001)。与空白组相比，模型组细胞α...