基于Keap1/Nrf2/HO-1信号通路探讨二十五味珊瑚丸对东莨菪碱致小鼠学习记忆障碍的作用研究北大核心CSCD

该研究基于Keap1/Nrf2/HO-1信号通路研究藏族药二十五味珊瑚丸(Ershiwuwei Shanhu Pills,ESP)改善东莨菪碱(scopolamine,scop)致小鼠学习记忆障碍的作用机制。将ICR小鼠随机分为空白组、模型组、二十五味珊瑚丸低(200 mg·kg^(-1))、中(400 mg·kg^(-1))、高(800 mg·kg^(-1))剂量组和盐酸多奈哌齐组,采用腹腔注射东莨菪碱的方法建立学习记忆障碍模型。通过Morris水迷宫行为学实验检测小鼠学习和记忆能力,Nissl染色检测小鼠海马和皮质神经元损伤情况,免疫荧光检测小鼠海马和皮质中神经元特异核蛋白(NeuN)表达,采用生化试剂盒检测小鼠海马中乙酰胆碱(Ach)含量和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性,血清中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢酶(CAT)和总抗氧化能力(T-AOC)含量,Western blot法检测海马中细胞质Kelch样环氧氯丙烷相关蛋白1(Keap1)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素氧合酶1(HO-1)的蛋白含量。结果显示,与模型组相比,二十五味珊瑚丸给药组小鼠在Morris水迷宫行为学实验中潜伏期显著减少;Nissl染色结果显示,神经元数量显著增加;免疫荧光检测NeuN结果显示,NeuN表达显著提高;AchE活力和MDA水平显著降低,Ach含量和SOD、CAT、T-AOC水平显著提高;Western blot法检测结果显示,模型组小鼠Keap1表达显著提高,二十五味珊瑚丸给药组表达差异无统计学意义,与模型组小鼠相比,二十五味珊瑚丸给药组Nrf2和HO-1表达显著提高。结果表明,二十五味珊瑚丸对东莨菪碱导致的小鼠学习记忆障碍有保护作用,其作用机制可能是通过调节Keap1/Nrf2/HO-1信号通路发挥抗氧化作用。     

地黄益智方对APP/PS1双转基因小鼠海马神经元凋亡和Nrf2通路蛋白的影响

目的观察地黄益智方对APP/PS1转基因小鼠海马神经元凋亡及Nrf2/ARE通路蛋白表达的影响。方法以APP/PS1双转基因小鼠为阿尔茨海默病模型动物,给予盐酸多奈哌齐（西药组）和地黄益智方干预12周,TUNEL染色检测细胞凋亡,试剂盒检测Caspase-3活性,ELISA检测血清核因子E₂相关因子2（Nrf2）,血红素加氧酶1（HO-1）和醌氧化还原酶1（NQO1）。结果 TUNEL染色发现模型组细胞核皱缩,神经元凋亡多于正常组（P<0.001）;西药组及地黄益智方各剂量组凋亡神经元均少于模型组（P<0.01）。模型组Caspase-3活性高于正常组（P<0.001）,西药组及地黄益智方各剂量组Caspase-3活性较模型组降低（P<0.05）。模型组Nrf2、HO-1和NQO1蛋白表达均低于正常组,西药组及地黄益智方各剂量组Nrf2、HO-1和NQO1水平升高（P<0.05）。结论地黄益智方可以抑制APP/PS1双转基因阿尔茨海默病小鼠海马神经元凋亡,其机制可能与调控Nrf2/ARE信号通路,上调HO-1和NQO1,抑制Caspa...     

麋角丸改善Aβ1-42海马区注射小鼠学习与记忆能力的作用机制研究＊

目的 评价麋角丸对Aβ_1-42海马区注射小鼠学习与记忆能力的改善作用与作用机制研究。方法 采用海马区注射β淀粉样多肽1-42（Aβ_1-42）构建拟阿尔茨海默症（AD）小鼠模型，给以麋角丸提取物。通过Morris水迷宫实验检测小鼠的学习与记忆能力，尼氏染色法检测海马DG区神经元损伤程度，酶联免疫吸附法检测小鼠海马组织中炎症因子表达，试剂盒检测氧化应激因子表达，蛋白质印迹法检测小鼠海马区中氧化应激与凋亡相关蛋白表达。结果 麋角丸显著缩短模型小鼠上台潜伏期和上台前路程，增加穿越站台次数。同时，麋角丸给药显著增加海马DG区尼氏体数量，并下调模型小鼠海马组织中炎症因子的表达，提升SOD活力，降低LDH活力和MDA表达，提高Nrf2、HO-1蛋白表达与Bcl-2/Bax比值，下调Caspase-3、Caspase-9凋亡通路蛋白表达。结论 麋角丸具有改善Aβ_1-42海马区注射小鼠学习与记忆能力的效用，其作用途径与抑制中枢氧化应激与炎性损伤导致的神经元损伤有关。Nrf2/HO-1通路是其抗海马组织氧化损伤调控信号通路。     

异氟烷对发育期大脑的神经毒性及细胞周期的影响

目的探讨异氟烷对发育期大脑的神经元毒性和细胞周期的影响及其相关作用机制。方法将32只7日龄C57BL/6J小鼠随机分为4组:对照组自主吸入空气,异氟烷2h组吸入1.3%异氟烷2 h,异氟烷4 h组吸入1.3%异氟烷4 h,异氟烷6 h组吸入1.3%异氟烷6 h。实验结束后6 h,取对照组和异氟烷6 h组小鼠脑组织,免疫组织化学方法检测半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)表达情况,FJB方法检测神经元变性情况。另取4组小鼠新鲜海马组织提取蛋白,利用Western blot免疫印迹方法检测其细胞周期蛋白CyclinB1的表达情况。结果异氟烷6 h组海马区Caspase-3阳性细胞数及FJB阳性细胞数均明显高于对照组(P均<0.05)。异氟烷4 h组、6 h组CyclinB1表达量均明显高于对照组(P均<0.05)。结论异氟烷可通过影响细胞周期蛋白CyclinB1表达进而引起发育期大脑海马区神经元的凋亡,并且具有一定的时间依赖性。     

天麻粉预防痴呆小鼠模型发病及其对抗氧化作用的影响

目的:研究长期灌胃天麻粉是否可以改善APP/PS1双转基因阿尔茨海默病(AD)模型小鼠学习记忆能力以及延缓AD进程,这些作用是否与调控Kelch样环氧氯丙胺相关蛋白1(Keap1)-核转录因子E2相关因子2(Nrf2)/血红素加氧酶-1(HO-1)抗氧化应激通路有关,进一步探讨天麻粉的神经保护作用机制以及对AD预防和治疗的作用。方法:APP/PS1双转基因小鼠模型,将实验小鼠分为5组,正常组,正常给药组,模型组,天麻粉预防组,天麻粉治疗组。正常给药组,天麻粉预防组在小鼠8周龄时每日灌胃同等剂量的天麻粉(1.5 g·kg^-1);正常组、模型组同时期给予等量的生理盐水,直至24周龄时行Morris水迷宫检测小鼠学习和记忆能力,天麻粉治疗组待小鼠22周龄时,连续2周每天灌胃同等剂量天麻粉(1.5 g·kg^-1),灌胃至24周龄时行Morris水迷宫检测小鼠穿越平台次数、逃避潜伏期及平台停留时间;提取小鼠海马组织RNA,实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测Nrf2,HO-1,Keap1的mRNA水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测小鼠海马组织中Nrf2,HO-1,Keap1蛋白的表达水平。结果:与正常组比较,水迷宫检测结果显示,模型组小鼠的学习记忆能力显著降低(P<0.01);与模型组比较,天麻粉预防组、天麻粉治疗组小鼠学习记忆能力显著提高(P<0.01);与正常组比较,模型组小鼠海马组织中Nrf2,HO-1的mRNA及蛋白水平均有不同程度的降低(P<0.05,P<0.01),与模型组比较,天麻粉预防组小鼠海马组织中Nrf2,HO-1的mRNA及蛋白水平均有不同程度的增高(P<0.05,P<0.01),天麻粉治疗组Nrf2,HO-1 mRNA水平显著增高(P<0.01),Nrf2,HO-1蛋白表达水平变化差异无统计学意义,各组间Keap1的mRNA及蛋白水平变化无统计学差异。结论:Morris水迷宫及其他结果显示天麻粉能够改善APP/PS1小鼠的学习和记忆能力,且其可能通过调控Keap1-Nrf2/HO-1通路,增强下游抗氧化基因的表达发挥抗氧化功能,进而改善APP/PS1小鼠的学习记忆能力。     

PGG通过激活Nrf2抗氧化通路保护AGEs诱导的系膜细胞损伤

目的:研究五没食子酰葡萄糖(1,2,3,4,6-penta-O-galloy-β-D-glucose,PGG)对晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)诱导小鼠肾小球系膜细胞损伤的保护作用及其可能机制。方法:通过AGEs处理小鼠系膜细胞建立系膜细胞损伤模型,将实验分为正常对照组、模型组及不同浓度PGG(5、10、20μM)组;采取DCFH法检测细胞内ROS含量;试剂盒法检测细胞培养上清中SOD活性和MDA含量;Western blot检测全细胞Nrf2、HO-1蛋白表达及胞核、胞质中Nrf2蛋白表达。结果:与模型组相比,PGG显著降低细胞中ROS水平,增加SOD活性,减少MDA含量,增加细胞Nrf2和HO-1蛋白表达,增加胞核Nrf2蛋白表达。结论:PGG对AGEs诱导系膜细胞的保护作用是通过激活Nrf2/HO-1抗氧化信号通路。     

清开灵对缺氧体外血脑屏障紧密连接蛋白ZO-1表达的影响

目的观察缺氧对体外血脑屏障（blood brain barrier,BBB）紧密连接蛋白ZO-1表达的影响以及清开灵的干预作用。方法通过体外培养Balb/c小鼠脑微血管内皮细胞系形成BBB,采用缺氧缺糖24 h建立BBB缺血损伤模型,分别以荧光实时定量和Western blot的方法测定BBB紧密连接蛋白ZO-1的基因转录和蛋白表达水平,同时观察不同剂量清开灵对ZO-1表达的影响。结果与正常组相比,缺氧缺糖24 h可使BBB表达ZO-1明显减少（P〈0.01）。清开灵能够显著增加缺血后ZO-1的基因转录和蛋白表达水平,与模型组差异显著（P〈0.05或P〈0.01）。结论清开灵可通过改善脑缺血对BBB主要组成蛋白的表达,发挥其对缺血性脑中风的脑保护作用。     

对羟基苯甲醛对血脑屏障的保护作用及机制研究

脑缺血过程中由氧化应激导致血脑屏障(BBB)的破坏是引起继发性脑损伤的重要病理反应,该研究目的是探讨天麻酚性成分对羟基苯甲醛(p-hydroxybenzaldehyde,p-HBA)对BBB的保护作用及相关机制。BBB主要由血管内皮细胞和星形胶质细胞组成,故该实验以小鼠脑微细血管内皮细胞株(bEnd.3)和星形胶质细胞(astrocyte,Ast)作为BBB模型进行研究。用H_2O_2诱导bEnd.3和Ast氧化应激的方法复制BBB损伤模型。采用不同浓度H_2O_2(0.125,0.25,0.5,0.75 mmol·L~(-1))诱导bEnd.3和Ast损伤4 h;再用0.5 mmol·L~(-1)H_2O_2诱导bEnd.3及Ast损伤1,2,4,6 h,检测乳酸脱氢酶(LDH)漏出率以筛选H_2O_2诱导细胞氧化损伤的最佳条件。不同浓度p-HBA(12.5,25,50 mg·L~(-1))干预后,检测bEnd.3和Ast细胞LDH漏出率;采用Western blot法检测正常bEnd.3和Ast以及H_2O_2诱导损伤后Ast细胞中Nrf2,HO-1和NQO1蛋白表达量的变化;采用免疫荧光法和Western blot法检测p-HBA对bEnd.3中紧密连接蛋白claudin-5和occludin表达的影响。结果显示,0.5 mmol·L~(-1)H_2O_2诱导bEnd.3和Ast损伤4 h为最佳条件。不同浓度p-HBA均可降低H_2O_2诱导bEnd.3和Ast损伤后细胞LDH的漏出率;可增加bEnd.3中claudin-5,occludin,Nrf2,HO-1及NQO1蛋白的表达量;可增加Ast及H_2O_2诱导损伤后Ast中Nrf2,HO-1和NQO1蛋白表达量。结果提示,p-HBA可保护氧化应激诱导的BBB损伤,其机制与增加bEnd.3紧密连接蛋白claudin-5,occludin的表达及激活bEnd.3和Ast细胞中抗氧化应激Nrf2/ARE通路、增强细胞内源性抗氧化能力有关。     

川芎嗪干预大鼠局灶性脑缺血模型神经元细胞凋亡的作用机制研究

目的:研究川芎嗪抑制大鼠局灶性脑缺血损伤神经元凋亡作用的机制。方法:采用改良线栓法制作大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血模型,尼氏染色方法观察海马CA1区存活神经元的变化,免疫组化染色观察Bcl-2、p53蛋白表达。结果:尼氏染色结果显示,模型大鼠海马CA1区存活神经元灰度值明显减少,川芎嗪灌胃给药能够增加大鼠海马区存活神经元的数量。模型大鼠海马区Bcl-2表达减少,p53表达增高,川芎嗪灌胃给药后Bcl-2表达增强,p53表达减弱。结论:川芎嗪能够减少模型大鼠海马区神经元死亡数量,其作用机制可能与上调细胞凋亡抑制因子Bcl-2的表达,下调细胞凋亡促进因子p53的表达有关。     

慈姑多糖调节Nrf2/HO-1改善多种重金属所致肝损伤的体内外实验研究北大核心CSCD

从体内外2个方面探究慈姑多糖是否通过激活核转录因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid-2-related factor 2,Nrf2)/血红素加氧酶1(heme oxygenase-1,HO-1)信号通路对多种重金属联合诱导的肝损伤发挥保护作用。首先基于北京市售大米6种重金属膳食摄入比例,构建多种重金属混合染毒液所致小鼠及HepG2细胞肝损伤体内外模型。40只雄性昆明小鼠分为5组:对照组、模型组、谷胱甘肽阳性对照组以及慈姑多糖(Sagittaria sagittifolia polysaccharides)低、高剂量组,每组8只。灌胃干预30 d后,HE染色观察小鼠肝脏损伤情况;体外实验应用MTT法检测不同质量浓度慈姑多糖(0.25、0.5、1、2 mg·mL^(-1))在不同时间点下,对HepG2细胞存活率的影响;利用微板法检测48 h细胞培养液中谷丙转氨酶(alaninetransaminase, ALT)、谷草转氨酶(aspartate aminotransferase, AST)的含量;流式细胞术检测细胞中活性氧(reactive oxygen species, ROS)含量变化;RT-PCR法检测细胞中Nrf2、HO-1 mRNA表达;Western blot法检测细胞中Nrf2、HO-1蛋白表达情况。HE染色结果显示,与模型组比较,慈姑多糖给药组肝脏中炎细胞浸润显著减轻,脂肪浸润情况明显改善,其中高剂量组损伤改善更为明显。在体外MTT实验中,与模型组相比,4个浓度慈姑多糖给药组其细胞存活率增加、ALT和AST含量下降、ROS含量减少,差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,慈姑多糖组Nrf2、HO-1 mRNA及蛋白表达下调,差异具有统计学意义(P<0.05)。慈姑多糖能显著改善多种重金属所致小鼠肝组织炎症浸润,并纠正肝脏脂肪变性情况,可能与调节Nrf2/HO-1信号通路、降低ROS缓解氧化损伤有关。     

胃炎Ⅰ号对CAG大鼠胃黏膜MMP-1与TIMP-1酶活性的影响

目的：研究胃炎Ⅰ号对CAG大鼠胃黏膜基质金属蛋白酶-1（MMP-1）和基质金属蛋白酶抑制因子-1（TIMP-1）酶活性的影响,探讨胃炎Ⅰ号对CAG大鼠胃黏膜损伤的疗效作用机制。方法：采用胃炎I号煎剂高中低剂量浓度及维酶素治疗慢性萎缩性胃炎大鼠模型,明胶酶谱法检测MMP-1酶活性,反向明胶酶谱法测TIMP-1酶活性。结果：模型大鼠胃黏膜组织MMP-1酶活性明显升高（P〈0.01）;经中剂量胃炎I号治疗后,病变大鼠胃黏膜MMP-1酶活性水平下降（P〈0.01）,基本接近正常水平（P〉0.01）。模型大鼠胃黏膜TIMP-1酶活性低于空白对照组（P〈0.01）。经高、中剂量胃炎I号和西药对照治疗后大鼠胃黏膜TIMP-1酶活性升高（P〈0.01）,中剂量胃炎I号治疗后TIMP-1酶活性基本接近空白对照组水平（P〉0.05）,疗效最佳。结论：在慢性萎缩性胃炎阶段,MMP-1酶活性升高,TIMP-1酶活性降低。降低MMP-1酶活性,提高TIMP-1酶活性,可能是胃炎I号治疗慢性萎缩性胃炎的作用机制之一。     

静宁颗粒对H2O2诱导的原代皮层神经元氧化应激的保护作用研究

目的:探讨静宁颗粒对小鼠原代皮层神经元氧化损伤的保护作用。方法:实验分为正常组、模型组和各用药组。采用过氧化氢(H₂O₂)刺激造成原代皮层神经元氧化损伤模型,各用药组采用0.2、0.4、0.8 mg/ml的静宁颗粒进行干预。采用MTT法检测活性抑制率,采用试剂盒检测活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)活力; Western blot检测kelch样ECH关联蛋白1(Keap1)、红系衍生的核转录相关因子2(Nrf2)、促凋亡蛋白(Bax)、B淋巴细胞瘤-2基因(Bcl-2)及含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Caspase 3)等蛋白的表达。结果:静宁颗粒干预后较模型组相比ROS、MDA降低,GSH、SOD升高; 与模型组比较,Keap1、p53、Bax及Caspase 3蛋白表达下调,Nrf2、NQO1、HO-1及Bcl-2蛋白表达升高。结论:静宁颗粒可通过Keap1/Nrf2氧化应激通路和Caspase依赖的线粒体通路对H₂O₂所致小鼠原代皮层神经元氧化应激损伤发挥保护作用。     

清热解毒法对小鼠Lewis肺癌瘤组织MMP-9及TIMP-1表达的影响

目的：观察清热解毒中药对小鼠Lewis肺癌瘤组织金属蛋白酶基因MMP-9及其抑制基因TIMP-1表达的影响。方法：将荷Lewis瘤肺癌小鼠随机分为5组,分别给予清热药、养阴药、补肾药、健脾药,对照组予生理盐水灌胃,连续20天,第22天处死小鼠,检测不同治法的抑瘤率,对小鼠的移植瘤体积、重量和肺部转移灶数目的影响,并采用RT-PCR法检测MMP-9、TIMP-1值。结果：各给药组与对照组相比,在抑瘤率、移植瘤体积、肿瘤重量方面无明显差别;各给药组转移灶数目低于对照组,且有统计学差异;清热组具有下调MMP-9表达及上调TIMP-1表达的作用,与对照组相比有显著性差异。结论：清热解毒法能降低肺癌组织MMP-9表达,上调TIMP-1表达,从而抑制小鼠Lewis肺癌的转移;各组药物均能不同程度地抑制荷瘤小鼠肺转移灶数目,但其作用机理有待进一步研究。     

醒脑静对七氟烷麻醉小鼠海马中突触结合蛋白-Ⅰ表达的影响与学习记忆相关性

目的:探讨醒脑静注射液(Xingnaojing,XNJ)预处理对七氟烷(sevoflurane)麻醉小鼠海马中突触结合蛋白-Ⅰ表达的影响及与学习记忆的相关性。方法:60只成年雄性C57BL/6小鼠经Morris水迷宫训练4d后,随机分为对照组、模型组、1ml/kg、5ml/kg和10ml/kg醒脑静组。采用3%七氟烷持续吸入6h建立七氟烷麻醉小鼠模型,给药组于麻醉前2h分别给予醒脑静1ml/kg、5ml/kg和10ml/kg腹腔注射,模型组于相同时间点给予生理盐水10ml/kg腹腔注射。麻醉结束12h后,应用Morris水迷宫测试小鼠的学习记忆能力,应用Realtime PCR分析突触结合蛋白-Ⅰ(synaptotagmin-Ⅰ,Syt-Ⅰ)mRNA的表达,应用免疫荧光法分析Syt-Ⅰ蛋白的表达情况,应用脑片LTP检测分析小鼠海马中的突触可塑性变化。结果:醒脑静预处理(10ml/kg)可明显改善小鼠的空间学习记忆能力,减少逃避潜伏期、增加穿越平台次数,提示醒脑静对七氟烷诱导的小鼠认知功能损伤有明显的改善作用。进一步的机制研究表明醒脑静预处理(10ml/kg)可增强小鼠海马组织中Syt-Ⅰ的蛋白和mRNA表达水平;同时,能明显提高兴奋性突触后电位(excitatory postsynaptic potential,EPSP)斜率相对值(%)。结论:醒脑静能够有效提高七氟烷麻醉后小鼠海马中Syt-Ⅰ的表达水平,调节突触可塑性,改善其学习记忆功能,且作用呈一定的剂量依赖性。     

基于PI3K-AKT-Nrf2/BDNF通路研究逍遥散抗抑郁作用的机制

目的:建立嗅球摘除(Olfactory Bulbectomy,OB)抑郁大鼠模型,从PI3K-AKT-Nrf2/BDNF角度探讨逍遥散抗抑郁作用机制。方法:手术摘除嗅球方法建立OB大鼠抑郁模型,将模型大鼠分为模型对照组、逍遥散15、30 g原生药/kg和盐酸氟西汀0.01 g/kg组,并设假手术组,各组大鼠连续灌胃相应药物或蒸馏水30天。进行大鼠旷场试验和糖水偏好率测定,腹主动脉取血分离血清,取大鼠皮质、海马部位备用。采用分光光度计法检测血清GSH、SOD及皮质MDA活力或含量,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测OB大鼠皮质和海马部位Nrf2、Keap1、GPX3、HO-1、NQO1、OGG1 mRNA的表达水平,采用蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Nrf2、HO-1、SOD1、PI3K、AKT、p-AKT、TrkB、BDNF蛋白表达水平。结果:与假手术组比较,模型对照组大鼠血清GSH、SOD水平显著降低,且皮质MDA含量明显升高;皮质、海马部位Nrf2、Keap1、GPX3、HO-1 mRNA表达水平及SOD-1、HO-1、TrkB、BDNF蛋白表达水平显著下调,皮质部位PI3K蛋白表达和p-AKT/AKT比值显著降低。与模型对照组比较,15、30 g/kg逍遥散给药30 d能提高大鼠糖水偏好率,对抗自主活动异常,显著提高血清GSH、SOD水平,并降低皮质MDA含量;能显著上调皮质、海马部位Nrf2、HO-1、皮质Keap1、NQO1及海马GPX3 mRNA的表达水平,显著上调皮质、海马部位SOD1、HO-1、TrkB、BDNF蛋白表达水平及p-AKT/AKT比值,对皮质、海马部位OGG1mRNA及皮质Nrf2、海马PI3K的蛋白表达水平有上调趋势。结论:逍遥散对OB模型大鼠的行为学异常及氧化应激表现有对抗作用,其激活OB大鼠PI3K-AKT-Nrf2信号通路从而改善氧化应激状态、上调BDNF水平可能是其抗抑郁作用机制之一。     

石甘散对戊四氮致痫大鼠氧化应激反应及Nrf2、HO-1因子影响的研究

目的观察石甘散及其主要药物甘松、石菖蒲对戊四氮致痫大鼠氧化应激反应的影响,并根据核因子E2相关因子2(Nrf2)和血红素加氧酶1(HO-1)因子的变化研究石甘散可能的抗氧化作用机制。方法除空白组外,将点燃成功的戊四氮致痫大鼠随机分为模型组、西药组(丙戊酸钠灌胃治疗)、甘松组、石菖蒲组和石甘散组。所有大鼠经14 d干预后处死,取大鼠脑部海马组织,考马斯亮蓝法测定海马组织超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)蛋白含量,Western bloting法测定海马组织Nrf2和HO-1蛋白含量,RT-PCR法测定海马组织Nrf2 m RNA表达、HO-1 m RNA表达。结果 1)癫痫模型点燃成功后,大鼠海马组织SOD、GSH-Px含量明显降低,MDA含量明显升高(P0.01)。丙戊酸钠、甘松、石菖蒲、石甘散均可以增加致痫大鼠SOD、GSH-Px含量、降低MDA含量,丙戊酸钠、石甘散作用效果强于甘松、石菖蒲单独应用(P0.05或P0.01),且两组间差异无统计学意义(P0.05);2)癫痫模型点燃后,大鼠海马组织Nrf2、HO-1蛋白含量均升高(P0.05或P0.01)。丙戊酸钠、甘松、石菖蒲、石甘散均能进一步增加Nrf2、HO-1蛋白含量,西药组、石甘散组Nrf2、HO-1蛋白的增加明显高于甘松、石菖蒲单独应用(P0.05或P0.01),且两组间效果差异无统计学意义(P0.05);3)癫痫模型点燃后,大鼠海马组织Nrf2 m RNA表达、HO-1 m RNA含量升高,丙戊酸钠、甘松、石菖蒲、石甘散均可以进一步使Nrf2 m RNA表达、HO-1 m RNA表达增加(P0.05或P0.01),且各治疗组间提高m RNA表达效果差异无统计学意义(P0.05)。结论石甘散及其配方组成甘松、石菖蒲均具有抗戊四氮致痫大鼠氧化应激损伤、清除自由基的作用,其作用效果可能与激活Nrf2/HO-1信号通路中Nrf2因子并促进下游HO-1因子表达相关,甘松、石菖蒲的合成方石甘散作用效果最显著。     

中药复方对戊四氮致痫大鼠海马PKCα表达的干预作用

目的：观察戊四氮（PTZ）致痫大鼠海马神经元PKCα表达以及中药复方AAP的影响。方法：健康成年雄性Wistar大鼠,随机分为6组（n=24）：正常组（Normal）;②模型组（PTZ）;③中药大剂量组（AAPl）、④中药中剂量组（AAPm）、⑤中药小剂量组（AAPs）、⑥西药丙戊酸钠组（VPA）。复制戊四氮致痫大鼠模型,于致痫后12h、2天、5天、7天相应时间点取材,制备脑标本;免疫组化技术检测海马神经元PKCα表达。结果：正常组海马内PKCα阳性细胞表达较少;与正常组相比,模型组大鼠海马PKCα阳性细胞表达增加（P〈0.05）,差异显著;与模型组比较,中药AAPl、AAPm、AAPs各组PKCα阳性表达减少;7天,与模型组及VPA组相比,中药AAPl、AAPm、AAPs各组PKCα阳性表达降低,P〈0.05,差异显著。与PTZ组相比,VPA组海马CA3区PKCα阳性表达无显著差异（P〉0.05）。结论：PKCα在PTZ致痫大鼠海马中表达增强,可能在癫痫发作中起作用;中药复方AAP可降低致痫大鼠海马PKCα表达,有一定脑保护作用。     

温肾醒脑方对血管性痴呆大鼠认知功能的影响及机制研究

目的:研究温肾醒脑方对血管性痴呆(Vascular dementia,VD)大鼠认知功能的改善作用及对Nrf2、Keap1相关信号通路的影响。方法:70只雄性SD大鼠随机分成正常组、假手术组、模型组、脑复康组(0.15 g/kg)、温肾醒脑方给药组(高剂量组5 g/kg、中剂量组2.5 g/kg、低剂量组1.25 g/kg),每组10只动物。采用双侧颈总动脉永久性结扎法建立VD模型。给予温肾醒脑方灌胃治疗后,Morris水迷宫测试治疗后VD大鼠认知功能的改善情况。检测脑组织中SOD、MDA、GSH-Px、NOS,HE染色观察脑海马组织的病理变化情况,RT-PCR大鼠脑组织NQO1、HO-1的mRNA水平和Western Blot检测Keap1、Nrf2、NQO1、HO-1蛋白水平的表达情况以及EMSA检测Nrf2与ARE结合力。结果:与正常组比较,VD模型组大鼠逃避潜伏期明显较长,游泳总距离明显缩短,穿越站台总数明显减少(P0.01);大脑组织中MDA含量显著增加,SOD、GSH-Px和NOS的含量明显减少(P0.01);大脑组织结构明显受损伤,细胞形态改变,细胞核固缩,核仁不清晰;同时大脑组织中细胞核Nrf2蛋白表达降低、细胞质中Keap1蛋白表达增加,NQO1、HO-1 mRNA和蛋白表达降低(P0.01)。与VD模型组比较,脑复康和温肾醒脑方组大鼠的认知行为得到很大的提高,脑组织MDA、SOD、GSH-Px、NOS含量和脑组织病理结构得到很好的改善,Nrf2、Keap1、NQO1、HO-1在mRNA水平或蛋白水平上有一定程度改变,特别是温肾醒脑方组大鼠的改善非常显著。结论:温肾醒脑方可以改善VD大鼠的认知行为,其机制可能与Nrf2-Keap1-NQO1/HO-1抗氧化应激信号通路相关。     

丹蒌片对SAMP8小鼠认知功能和脑微血管连接蛋白表达的影响

目的 观察丹蒌片对SAMP8小鼠认知功能、紧密连接蛋白表达的影响。方法 取5月龄雄性SAMP8小鼠36只，随机分为模型组、丹蒌片组(1.35 g·kg^-1)和多奈哌齐组(0.747 mg·kg^-1)，另以SAMR1小鼠设为正常对照组，每组均为12只。灌胃给药2个月后，进行Morris水迷宫实验和Y迷宫实验，检测小鼠空间探索能力；透射电镜观察小鼠海马区脑微血管的超微结构；蛋白免疫印迹法(Western Blot)检测海马区紧密连接蛋白(Claudin-5、Occludin、ZO-1)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达。结果 与正常对照组相比，模型组的平均逃避潜伏期延长(P<0.01)；穿越平台次数和目标象限停留时间均显著减少(P<0.01)；进臂总次数和自发交替准确率明显降低(P<0.01,P<0.001)；紧密连接间隙增宽，内皮细胞超微结构受损；紧密连接蛋白(Claudin-5、Occludin、ZO-1)的表达下降(P<0.05),MMP-9表达量增加(P<0.01)。与模型组相比，丹蒌片组及...     

萝卜硫素通过Nrf2/ARE通路对人结肠上皮细胞氧化应激损伤的调控作用

目的:探讨萝卜硫素对H_2O_2诱导的氧化应激损伤人结肠上皮细胞的保护作用。方法:体外原代培养人结肠上皮细胞,并将细胞分为空白对照组、H_2O_2诱导组、H_2O_2+低剂量萝卜硫素组、H_2O_2+中剂量萝卜硫素组及H_2O_2+高剂量萝卜硫素组,用H_2O_2诱导细胞氧化应激损伤模型,CCK8法检测萝卜硫素对细胞存活率的影响,同时检测细胞匀浆中的氧化应激产物,免疫印迹法检测核转录因子(Nrf2)、谷氨酸-半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)、醌氧化还原酶1(NQO1)及血红素加氧酶1(HO-1)蛋白表达水平。结果:H_2O_2能诱导人结肠上皮细胞氧化应激损伤;与H_2O_2诱导组相比,不同剂量萝卜硫素可增加细胞存活率、降低氧化应激产物丙二醛(MDA)及一氧化氮(NO)的释放并增强超氧化物歧化酶(SOD)酶活性,差异均有统计学意义(P0.05);萝卜硫素可增强Nrf2转位,诱导GCLC、NQO1及HO-1蛋白的表达,与H_2O_2诱导组相比差异有统计学意义(P0.05)。结论:萝卜硫素可降低人结肠上皮细胞的氧化应激损伤,其作用机制可能与活化Nrf2/ARE信号通路有关。