冬连三七组分改善糖尿病动脉粥样硬化兔心肌病理的机理研究

目的:在既往研究冬连三七组分(Composition of Ophiopogon polysaccharide,Notoginseng total saponins and Rhizoma Coptidis alkaloids,CONR)能改善糖尿病动脉粥样硬化(diabetic atherosclerosis,DA)兔蛋白非酶糖基化基础上,探讨CONR减轻RAS系统激活,提高Na~+-K~+-ATPase活性从而保护DA兔心肌组织的机制。方法:予雄性纯种新西兰大白兔高脂饮食并静脉推注四氧嘧啶且行腹主动脉内膜球囊损伤术诱导DA模型,正常组每日给予生理盐水20 m L灌胃作为对照,实验组分别每日给予辛伐他汀3 mg/kg,CONR 450 mg/kg、150 mg/kg、50 mg/kg;灌胃10周。测定各组大兔心脏重量、左心室重量、心体比、左心室/体重指数、心肌血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)、Na~+-K~+-ATPase含量及血管紧张素转化酶(ACE)受体在心肌组织的表达,HE染色法观察大兔心肌病理。结果:与模型组比较,CONR大中剂量组可显著降低DA大兔心脏重量、左心室重量、心体比、左心室/体重指数、心肌组织AngⅡ含量(P0.05),升高心肌Na~+-K~+-ATPase含量(P0.01),并抑制心肌ACE受体表达(P0.01);明显改善了DA兔心肌细胞水肿、炎性细胞浸润、心肌间质纤维排列紊乱增生等病理改变。结论:冬连三七组分可能通过抑制蛋白非酶糖基化,减轻RAS系统激活,提高Na~+-K~+-ATPase活性从而改善DA兔的心肌损伤。     

中药复方对链球菌性肺炎小鼠炎症p38MAPK信号转导通路的影响

目的:观察中药复方对链球菌性肺炎小鼠炎症p38MAPK信号转导通路的影响。方法:将48只BALB/c小鼠随机分为4组:正常组、模型组、中药组、SB203580组,每组12只。模型组、中药组、SB203580组采用麻醉并破损鼻黏膜滴注一定量肺炎链球菌法建立链球菌性肺炎模型;中药组在造模后以中药复方7.5 g·kg~(-1)·d~(-1)灌胃治疗,2次·d~(-1),SB203580组造模后以SB203580 1mg·kg~(-1)·d~(-1)腹腔注射,1次·d~(-1),共7 d。造模第7天解剖取肺组织,检测各组小鼠肺组织p38MAPK基因及p-p38MAPK蛋白表达水平和TNF-α、IL-6含量变化。结果:中药组小鼠肺组织中p38MAPK基因及p-p38MAPK蛋白表达水平和TNF-α、IL-6含量较正常组高(P0.05),无统计学意义;较模型组低(P0.05),有统计学意义。结论:中药复方能有效抑制链球菌性肺炎小鼠炎症p38MAPK信号通路的活化,控制炎症进程。     

阿魏酸钠对MCAO大鼠缺血／再灌注损伤p38MAPK信号通路的影响

目的探讨阿魏酸钠（SF）在抗大鼠脑缺血／再灌注损伤过程中对p38MAPK信号通路的影响。方法采用线栓法阻塞大鼠大脑中动脉（MCA0）建立大鼠局灶性脑缺血／再灌注损伤模型，大鼠于MCAO前1h股静脉注射不同剂量SF100mg／kg、50mg／kg、20mg／kg及p38MAPK抑制剂SB203580，观察各组脑缺血再灌注损伤后大鼠神经学评分，TUNEL法检测神经细胞的凋亡及Western—blot检测p38MAPK、p—p38MAPK蛋白表达。结果假手术组无神经学改变，SF100mg／kg、50mg／kg及p38MAPK抑制剂SB203580组神经学评分明显低于缺血再灌注组（P〈0．05），各用药组间无明显差异。SF100mg／kg、50mg／kg、20mg／kg及p38MAPK抑制剂SB203580TUNEL阳性细胞率（％）均较缺血再灌注组明显下降。假手术组未见p—p38MAPK表达，缺血再灌注组p—p38MAPK显著增高，SF100mg／kg、50mg／kg、20rag／kg对脑组织总p38MAPK表达影响不明显（P〉0．05），主要下调p—p38MAPK表达。结论阿魏酸钠对大鼠缺血再灌注损伤的保护作用机制可能与抑制p38MAPK信号传导通路有关。     

大蒜素对PM2.5诱导血管平滑肌细胞增殖的抑制作用及机制研究

目的探讨PM2.5对小鼠血管平滑肌细胞(VSMCs)增殖的影响及大蒜素(Allicin)的抑制作用及可能机制。方法采集大气PM2.5并分别以0(空白对照组)、20、100、200、400 mg/L(PM2.5 20、100、200、400 mg/L组)作用小鼠VSMCs 24 h,检测VSMCs增殖情况,一氧化氮(NO)、内皮素-1(ET-1)、血管细胞黏附分子-1(VCAM-1)含量和VSMCs中磷酸化p38有丝分裂原活化蛋白激酶(p-p38MAPK)及增殖细胞核抗原(PCNA)蛋白表达;VSMCs分别加入Allicin 5、20、40 mg/L(Allicin 5、20、40 mg/L组)、p38 MAPK通路阻滞剂SB203580 20μmol/L(SB203580 20μmol/L组)和Allicin40 mg/L与SB203580 20μmol/L(Allicin+SB203580组),检测Allicin的干预作用及机制。结果与空白对照组比较,PM2.5 100、200、400 mg/L组均诱导VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量升高,NO分泌减少(P0.05,P0.01),细胞内p-p38 MAPK及PCNA蛋白表达增加(P0.05),尤其200 mg/L组效果显著(P0.05,P0.01);与PM2.5 200 mg/L组比较,Allicin 20、40 mg/L组、SB203580 20μmol/L组、Allicin+SB203580组可抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量减少,NO分泌增加(P0.01),VSMCs中p-p38 MAPK及PCNA蛋白表达降低(P0.05,P0.01);与Allicin 20 mg/L组比较,Allicin+SB203580组可进一步抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖,VSMCs分泌ET-1及VCAM-1含量减少,NO分泌增加(P0.01,P0.05),VSMCs中p-p38MAPK及PCNA蛋白表达降低(P0.01)。结论 Allicin可能通过抑制p38 MAPK信号通路,抑制PM2.5诱导的VSMCs增殖。     

血府逐瘀汤调控p38MAPK信号通路改善高血压性脑出血大鼠神经功能研究

目的:探讨血府逐瘀汤对高血压性脑出血大鼠神经功能的改善作用及对其p38MAPK信号通路的调控机制。方法:取8只WKY大鼠和48只SHR大鼠,前者记为假手术1组,从后者中随机取8只记为假手术2组,剩余40只均在收缩压≥21.3 kPa时以胶原酶+肝素尾状核注射法制备模型,而假手术2组注射生理盐水其余均同法操作。将模型制备成功的大鼠随机分为模型组、阳性药组、血府逐瘀汤低、中、高剂量组。阳性药组给予安宫牛黄丸25 mg/kg灌胃,血府逐瘀汤低、中、高剂量组分别给予血府逐瘀汤5、10、20 mg/kg灌胃,模型组、假手术1和2组分别给予等量生理盐水灌胃,均干预1周。对比干预前后各组大鼠血肿体积、行为学、神经功能变化,观察出血脑组织病理改变,检测各组出血脑组织p38MAPK蛋白表达,计算p-p38MAPK/p38MAPK。结果:与假手术1组比较,假手术2组向左扭转比率、Berderson、Rosenberg评分、脑组织病理改变、p38MAPK、pp38MAPK/p38MAPK均无明显变化。与模型组比较,阳性药组、血府逐瘀汤低、中、高剂量组血肿体积、向左扭转比率、Berderson评分、Rosenberg评分均下降,脑组织病理均减轻,p-p38MAPK/p38MAPK均升高。与阳性药组比较,血府逐瘀汤低剂量组血肿体积、向左扭转比率、Berderson评分、Rosenberg评分均升高,脑组织病理加重,p-p38MAPK/p38MAPK下降;血府逐瘀汤中剂量组和高剂量组血肿体积、向左扭转比率、Berderson评分、Rosenberg评分均下降,脑组织病理均减轻,p-p38MAPK/p38MAPK均升高。结论:血府逐瘀汤中、高剂量能减少高血压性脑出血大鼠的血肿体积,改善行为学和神经功能,减轻病理损伤,推测与上调p38MAPK蛋白的磷酸化水平有关。     

基于p38 MAPK信号通路探讨苍膝通痹胶囊对KOA大鼠关节软骨的保护作用

目的:观察苍膝通痹胶囊治疗膝骨关节炎(KOA)模型大鼠的疗效及相关作用机制。方法:将60只4周龄SPF级健康雄性SD大鼠,随机分为空白组,模型组,二甲基亚砜(DMSO)组,苍膝通痹胶囊组,SB203580组以及苍膝通痹胶囊联合SB203580组,每组10只。除正常组外,其余各组采用改良Hulth法建立KOA模型,造模成功后,苍膝通痹胶囊组每日给予0.25 g·kg~(-1)苍膝通痹胶囊溶液灌胃,SB203580组每日给予0.015 g·kg~(-1)的SB203580溶液灌胃,苍膝通痹胶囊联合SB203580组组每日给予含0.015 g·kg~(-1)SB203580及0.25 g·kg~(-1)苍膝通痹胶囊的混合溶液灌胃,DMSO组给予1%DMSO溶液灌胃,模型组和空白组给予生理盐水灌胃,用药干预4周后处死、取材。苏木素-伊红(HE)染色观察软骨组织形态学改变,酶联免疫吸附测定(ELISA)检测外周血上清液中白细胞介素-1β(IL-1β),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达水平,实时荧光定量PCR(Real-tine PCR)及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测软骨组织中p38 MAPK信号通路中相关因子p38,p-p38,基质金属蛋白酶-13(MMP-13),Ⅱ型胶原蛋白(CollagenⅡ)mRNA及蛋白的表达水平,免疫组化法检测p-p38的定位表达。结果:与正常组比较,模型组关节软骨中p38,p-p38,MMP-13表达水平显著上调(P0.01),CollagenⅡ表达水平显著下调(P0.01),血清IL-1β,TNF-α表达水平显著上调(P0.01);与模型组比较,苍膝通痹胶囊组,SB203580组以及苍膝通痹胶囊联合SB203580组关节软骨中p38,p-p38,MMP-13表达水平显著下调(P0.01),CollagenⅡ表达水平显著上调(P0.01),血清IL-1β,TNF-α表达水平显著下调(P0.01)。结论:苍膝通痹胶囊可有效保护KOA大鼠软骨组织,其机制可能与靶向阻断p38 MAPK信号通路有关。     

电针经p38 MAPK信号通路对坐骨神经损伤大鼠脊髓中AQP1和AQP4表达的影响＊

目的 探讨电针（electroacupuncture，EA）治疗对坐骨神经损伤大鼠脊髓中水通道蛋白AQP1和AQP4表达的影响，并揭示其可能作用机制。方法 将60只SD大鼠随机分成假手术组（Sham组）、模型组（Model组）、电针组（EA组）、抑制剂组（SB203580组）和电针 + 抑制剂组（EA + SB203580组），每组12只。采用钳夹法复制坐骨神经损伤大鼠模型，并给予电针和p38抑制剂SB203580干预14天。分别于干预前及干预后第7天和14天检测坐骨神经功能指数（SFI）；HE染色观察损伤处远端坐骨神经组织病理学变化；BL-410电生理系统检测大鼠神经传导速度（NCV）；qRT-PCR检测脊髓AQP1和AQP4 mRNA表达水平；Western blot检测脊髓AQP1、AQP4、p-p38MAPK和p38MAPK蛋白表达水平。结果 与Sham组比较，Model组大鼠坐骨神经组织结构不完整，出现明显炎症浸润和病理损伤，EA组和SB203580组大鼠坐骨神经组织相较于Model组坐骨神经组织炎症浸润和病理损伤得到明显缓解，EA + SB203580组与SB203580组的差异不大。与Sham比较，Model组大鼠脊髓中AQP1和AQP4 mRNA和蛋白表达水平以及p-p38MAPK/p38MAPK蛋白比值均显著增加，而SFI值和NCV显著降低（P < 0.01）；与Model组比较，EA组和SB203580组大鼠脊髓中AQP1 和AQP4 mRNA和蛋白表达水平、p-p38MAPK/p38MAPK蛋白比值均显著降低，而SFI值和NCV显著升高（P < 0.01）；与SB203580组比较，EA + SB203580组检测指标无显著性变化（P > 0.05）。结论 电针刺激可抑制脊髓中AQP1和AQP4表达，改善大鼠坐骨神经损伤，其可能与抑制p38MAPK信号通路活化有关。     

电针“内关”对心肌肥厚模型大鼠p38丝裂原激活蛋白激酶信号通路的影响

目的:探讨电针“内关”穴治疗心肌肥厚的作用机制.方法:SD大鼠40只用随机数字表法分为正常组、模型组、模型+p38抑制剂组、模型十电针组,每组10只.采用皮下注射盐酸异丙肾上腺素3 mg/(kg·d)建立心肌肥厚大鼠模型,模型+p38抑制剂组在造模基础上每日皮下注射0.3 mg/kg p38丝裂原激活蛋白激酶(p38 MAPK)特异性抑制剂SB 203580;模型十电针组电针“内关”穴,采用连续波,频率2 Hz,强度1 mA,通电20 min,1次/d,共14 d.其他两组不予治疗干预.放射免疫法技术检测心肌组织肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白细胞介素-1β(IL-1β)含量,免疫印迹法检测p38MAPK、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)含量.观察电针“内关”穴对TNF-α和IL-1β、p38 MAPK、p-p38 MAPK的影响.结果:与正常组大鼠比较,模型组大鼠TNF-α和IL-1β、p38 MAPK、p-p38 MAPK均显著升高(均P＜0.01);经抑制剂和电针处理后,模型+p38抑制剂组和模型十电针组大鼠TNF-α、IL-1β、p38 MAPK、p-p38 MAPK均明显降低,与模型组比较差异有统计学意义(均P＜0.05),与正常组比较差异亦有统计学意义(P＜0.05,P＜0.01);模型+p38抑制剂组和模型十电针组之间比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论:电针“内关”可以明显抑制心肌肥厚p38 MAPK的磷酸化,这种保护作用可能通过抑制TNF-α、IL-1β等炎性因子的表达实现对p38 MAPK信号通路调节.     

中药配伍组分改善糖尿病血管病变大兔氧化应激损伤的机理研究

目的观测中药配伍组分(40%麦冬多糖、30%黄连生物碱、30%三七总皂苷)对糖尿病血管病变(diabetic angiopathies,DA)模型大兔氧化应激损伤的影响。方法采用四氧嘧啶静脉推注配合腹主动脉内膜球囊损伤术诱导大兔的DA模型,予中药配伍组分高、中、低剂量组及辛伐他汀组干预。结果中药配伍组分对空腹血糖(fasting blood glucose,FBG)、晚期糖基化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)明显降低作用,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05),而辛伐他汀组无明显降低FBG、AGEs的作用(P0.05);此外中药配伍组分及辛伐他汀组对DA模型大兔的一氧化氮(nitrogen oxide,NO)、一氧化氮合酶(nitric oxide synthase,NOS)、丙二醛(malondialdehyde,MAD)均有降低作用,对超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)有升高作用,与模型组比较差异有统计学意义(P0.05)。结论中药配伍组分对FBG、AGEs、NO、NOS、MDA有抑制作用,可增加SOD、GSH-Px活性,有效地干预DA模型大兔的蛋白非酶糖基化的进程,减轻氧化应激反应造成的损伤。     

健脾解毒汤对脾虚湿盛证银屑病样大鼠皮肤屏障功能调控机制研究

目的 探讨细胞外信号调节激酶/p38丝裂原活化蛋白激酶(ERK/p38MAPK)信号通路在健脾解毒汤调控脾虚湿盛证银屑病大鼠皮肤组织水通道蛋白(AQP3)表达中的作用。方法按照随机数字表法，将144只SPF级雄性SD大鼠分为空白组、模型组、甲氨蝶呤组、健脾解毒汤低剂量组、健脾解毒汤中剂量组、健脾解毒汤高剂量组、健脾解毒汤低剂量+ERK抑制剂组、健脾解毒汤中剂量+ERK抑制剂组、健脾解毒汤高剂量+ERK抑制剂组、健脾解毒汤低剂量+MAPK抑制剂组、健脾解毒汤中剂量+MAPK抑制剂组、健脾解毒汤高剂量+MAPK抑制剂组，每组12只。除空白组外，其余组大鼠采用咪喹莫特外涂和大黄配方颗粒剂灌胃方法构建脾虚湿盛证银屑病样皮损复合模型。造模成功后，甲氨蝶呤组给予甲氨碟呤片0.97 mg/kg灌胃，健脾解毒汤低、中、高剂量组分别给予2.32 g/kg、4.64 g/kg、9.26 g/kg健脾解毒汤灌胃，健脾解毒汤低、中、高剂量+ERK抑制剂各组均给予ERK抑制剂U0126腹腔注射和相应剂量的健脾解毒汤灌胃，健脾解毒汤低、中、高剂量+MAPK抑制剂各组均给予MAPK抑制剂SB203580腹腔注射和相...     

祛痰活血颗粒对NAFLD模型大鼠脂肪组织AQP7，p38MAPK表达的影响

目的:探讨祛痰活血颗粒治疗非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)大鼠的作用,并探讨其相关的作用机制。方法:40只SD大鼠随机分成正常组(6只),模型组(34只);除正常组外,采用高脂饮食诱导的方法诱导NAFLD大鼠模型,确认造模成功后,将剩余模型组(30只)随机分为5组,每组6只,分别为模型组,祛痰活血颗粒高、中、低剂量组(10,5,2.5 g·kg~(-1)),SB203580组(3 mg·kg~(-1)),分别予以灌胃祛痰活血颗粒及腹腔注射p38MAPK抑制剂SB203580,连续干预4周。苏木素-伊红(HE)及油红O染色观察肝脏病理变化;试剂盒测定血清甘油三酯(TG),总胆固醇(TC),天门冬氨酸氨基转移酶(AST),丙氨酸氨基转移酶(ALT),肝脏TG;实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测脂肪组织水通道蛋白7(AQP7)及p38分裂原激活的蛋白激酶(p38MAPK)mRNA表达,酶联免疫吸附测定(ELISA)法检测肝脏游离脂肪酸(FFA),脂肪组织AQP7和磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)的表达。结果:与正常组比较,模型组大鼠肝脏脂肪变性明显,血清TG,TC,AST,ALT和肝脏TG,FFA明显升高,脂肪组织中AQP7 mRNA及AQP7含量表达降低,p38MAPK mRNA及p-p38MAPK含量升高(P0.05);与模型组比较,祛痰活血颗粒和SB203580可减轻NAFLD大鼠肝脏脂肪变性程度;明显降低NAFLD大鼠的血清TG,TC,AST,ALT,肝脏TG,FFA(P0.05);各中药组和SB203580组大鼠脂肪组织AQP7 mRNA和AQP7含量表达明显升高,p38MAPK mRNA和pp38MAPK含量明显降低(P0.05)。结论:祛痰活血颗粒能减轻或者逆转肝脏的脂肪变性,其机制可能与抑制脂肪组织p38MAPK活化、上调AQP7表达,增加甘油入血代谢,减少进入肝脏的FFA,从而降低肝脏TG蓄积有关。     

通心络超微粉对兔动脉粥样硬化早期外膜微血管新生的影响

目的 探讨通心络超微粉对兔动脉粥样硬化早期外膜微血管新生的影响及可能作用机制。方法 采用颈动脉套管术联合高脂饮食喂养建立兔动脉粥样硬化早期颈动脉损伤的模型。将造模成功的90只新西兰白兔随机分为空白组、模型组、阿托伐他汀组和通心络高、中、低剂量组,每组15只。通心络高、中、低剂量组分别给予通心络超微粉0.60、0.30、0.15 g/(kg·d),阿托伐他汀组给予阿托伐他汀溶液2.50 mg/(kg·d),空白组与模型组按3 ml/(kg·d)给予0.5%羧甲基纤维素钠溶液。各组连续灌胃4周。各组取兔术侧颈动脉标本,观察血管病理特征,检测颈动脉外膜微血管密度(MVD)、血清超氧化物歧化酶(SOD)活力、丙二醛(MDA)含量、血管外膜组织中超氧阴离子(O-·2)、颈动脉组织p38MAPK及pp38MAPK蛋白的表达水平。结果 HE染色显示通心络高、中剂量组和阿托伐他汀组术侧颈动脉损伤均较模型组有不同程度减轻。与模型组比较,通心络高、中剂量组和阿托伐他汀组血清SOD活力升高,MDA含量、颈动脉外膜MVD、O-·2、p-p38MAPK蛋白表达水平降低(P<0.05或P<0.01)。结论 通心络超微粉具有抑制兔动脉粥样硬化早期外膜微血管新生作用,其机制可能与提高血管系统和外膜组织的抗氧化能力、抑制p38MAPK通路激活有关。     

益肾达络饮对实验性自身免疫性脑脊髓炎p38MAPK信号转导通路的影响

目的:研究p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)信号转导通路在实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)发病中的作用,观察中药复方益肾达络饮干预EAE的疗效,探讨益肾达络饮治疗EAE的作用机制。方法:采用免疫蛋白质印迹法、免疫组化法测定EAE小鼠CNS中p38、p-p38蛋白表达的变化。结果:益肾达络饮能降低EAE的复发率(P<0.05),改善EAE模型小鼠神经功能评分(P<0.05)。与模型组相比,抑制剂SB203580组、激素组、中药组、中药加激素组p-p38表达水平明显降低(P<0.05)。结论:p38MAPK介导的炎性级联反应是EAE小鼠CNS炎性浸润,轴索损伤的重要原因;益肾达络饮能降低EAE的复发率,有效改善EAE小鼠神经功能损伤;中药益肾达络饮干预EAE的作用机制与对p38MAPK信号通路的调节密切相关。     

p38丝裂原活化蛋白激酶在大鼠肾小管上皮细胞转分化中的作用及大黄素的干预研究

目的探讨p38丝裂原活化蛋白激酶(p38MAPK)在IL-1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化中的作用及大黄素的干预效应。方法将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞株(NRK52E)分为对照组、IL-1β诱导组、IL-1β+SB 203580组和IL-1β+大黄素组。培养48 h后用倒置相差显微镜观察细胞形态,细胞免疫化学染色检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、角蛋白(CK)、p38MAPK及磷酸化-p38MAPK(p-p38MAPK)的表达情况。结果IL-1β可诱导部分NRK52E由卵圆形转变为梭形,同时CK表达减弱,α-SMA、p38MAPK及p-p38MAPK的表达增强。SB 203580阻断p38MAPK通路后可显著抑制IL-1β诱导的细胞形态改变,同时上调CK表达,下调α-SMA及p-p38MAPK的表达。大黄素对IL-1β诱导的细胞形态改变及α-SMA、p38MAPK及p-p38MAPK的表达也有明显抑制作用,其抑制作用与SB 203580的阻断作用相比无显著性差异。结论p38MAPK参与介导IL-1β诱导大鼠肾小管上皮细胞-肌成纤维细胞转分化过程,大黄素可通过干扰p38MAPK信号通路抑制大鼠肾小管上皮细胞转分化。     

知葛通脉汤对糖尿病周围神经病变大鼠背根神经节MAPK / ERK通路的影响

目的:研究知葛通脉汤对糖尿病周围神经病变背根神经节丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)/细胞外调节蛋白激酶(ERK)通路的影响。方法:选取无特定病原体级SD雄性大鼠50只为研究对象,随机选取10只作为对照组,其余40只为研究组,随机分为四组:知葛通脉汤低、中、高剂量组:分别按照每日2.5g/kg、7.5g/kg、15g/kg体重标准灌胃知葛通脉汤,模型组灌胃给予等量生理盐水,连续给药6周,观察记录大鼠背根神经节中磷酸化p38MAPK(p-p38MAPK)、p38MAPK、ERK、磷酸化ERK(p-ERK)活性和表达水平以及p38MAPK、ERKmRNA水平。结果:模型组p-p38MAPK、p-ERK活性和蛋白表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);知葛通脉汤低、中、高剂量组p-p38MAPK、p-ERK活性和蛋白表达水平明显低于模型组(P0.05);知葛通脉汤高剂量组p-p38MAPK、p-ERK活性和蛋白表达水平明显低于低剂量组(P0.05),各组之间p38MAPK、ERK活性和蛋白表达水平无明显差异(P0.05);模型组p38MAPK、ERKmRNA表达水平明显高于对照组,差异有统计学意义(P0.05);知葛通脉汤低、中、高剂量组p38MAPK、ERKmRNA表达水平明显低于模型组(P0.05);知葛通脉汤高剂量组p38MAPK、ERKmRNA表达水平明显低于低剂量组(P0.05)。结论:知葛通脉汤可降低p-p38MAPK、p-ERK活性和蛋白表达水平,有效抑制背根神经节MAPK/ERK通路。     

糖络宁浸膏对糖尿病大鼠周围神经氧化应激及下游MAPKs信号转导通路的影响

目的探讨糖络宁浸膏治疗糖尿病周围神经病变的可能作用机制。方法采用一次性腹腔内注射大剂量链脲佐菌素(60 mg/kg)诱导糖尿病大鼠模型。将造模成功大鼠随机分为模型组、中药组、西药组,每组23只,另设健康大鼠15只为正常组。中药组予糖络宁浸膏按生药20 g/(kg·d)灌胃,西药组予α-硫辛酸20 mg/(kg·d)灌胃,正常组和模型组大鼠予等体积蒸馏水灌胃,连续12周。观察各组大鼠血清和坐骨神经中丙二醛(MDA)含量、超氧化物歧化酶(SOD)活性,大鼠背神经根节(DRG)p38 MAPK、pp38 MAPK、p46JNK、p-p46JNK、ERK1/2、p-ERK1/2蛋白表达。结果与正常组比较,模型组大鼠血清、坐骨神经SOD活性显著降低,而MDA含量均显著增多(P0.01);与模型组比较,中药组和西药组大鼠血清、坐骨神经SOD活性均显著增强,MDA含量均显著减少(P0.01)。各组大鼠DRG的p38 MAPK、p46JNK、ERK1/2总蛋白表达量相近,组间比较差异均无统计学意义(P0.05);与正常组比较,模型组大鼠DRG的p-p38 MAPK、p-p46JNK、p-ERK1/2活性蛋白表达均明显增高(P0.05),而中药组、西药组大鼠DRG的p-p38 MAPK、p-p46JNK、p-ERK1/2活性蛋白表达均较模型组明显减弱(P0.05)。结论糖络宁浸膏具有显著降低糖尿病大鼠血清、坐骨神经MDA含量,提高血清、坐骨神经SOD活性的作用,有效抑制糖尿病大鼠DRG的p-p38 MAPK、p-p46JNK、p-ERK1/2活性蛋白表达,从而抑制氧化应激反应,对MAPK信号转导通路具有负性调控作用。     

黄芪多糖对大鼠心肌缺血再灌注损伤心肌p38信号通路的影响

目的 研究黄芪多糖(APS)对大鼠缺血再灌注损伤心肌的作用.方法 将70只Wistar大鼠随机分为假手术组、缺血再灌注模型组、APS低剂量组、APS高剂量组、p38MAPK阻断剂(SB203580)组、APS低剂量+SB203580组、APS高剂量+SB203580组,每组10只.采用结扎左冠状动脉前降支复制缺血再灌注损伤模型.各组大鼠尾声静脉注射相应药物,每日1次,连续给药30天.氯化硝基四氮唑蓝染色后,测量心肌梗死面积及梗死重量.结果 与模型组比较,除APS低剂量组外,其他各给药组均可显著减少缺血再灌注心肌的梗死面积和重量(P＜0.05或P＜0.01),并且APS高剂量联合SB203580组治疗效果明显优于各单药治疗组(P＜0.05).结论 APS能够明显改善大鼠心肌缺血再灌注损伤,APS高剂量与p38MAPK阻断剂联合应用对抑制再灌注损伤具有协同作用,其机制可能与其部分抑制p38MAPK信号通路,阻断其介导的炎症反应对心肌的损伤有关.     

藤茶总黄酮通过调控TGF-β1/p38MAPK通路对肝纤维化大鼠的作用及机制研究

目的 探讨藤茶总黄酮(TF)通过调控转化生长因子β1/p38-促分裂原活化蛋白激酶(TGF-β1/p38MAPK)通路对肝纤维化大鼠的作用及机制.方法 65只Wistar大鼠,随机分为5组,对照组(灌胃生理盐水)、模型组(灌胃生理盐水)、藤茶总黄酮低剂量组(灌胃75 mg/kg)、藤茶总黄酮高剂量组(灌胃300 mg/kg)、激动剂组(灌胃300 mg/kg藤茶总黄酮加腹腔注射2 mg/kg anisomycin),每组13只,除对照组外,余组采用皮下注射25％CCl4建立肺纤维化模型,给予相应药物干预5周.检测5组血清ALT、AST、肝组织ColI、ColⅢ水平,HE染色观察肝组织病理改变,实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测肝组织中TGF-β1、p38MAPK、α 平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)mRNA相对表达量,Western blot法检测肝组织中TGF-β1、p38MAPK、p-p38MAPK、α-SMA、MMP-9蛋白相对表达量.结果 与模型组比较,藤茶总黄酮低剂量组、藤茶总黄酮高剂量组及激动剂组血清ALT、AST及肝组织ColI、ColⅢ水平均降低,其中藤茶总黄酮高剂量组ALT、AST、ColI低于藤茶总黄酮低剂量组和激动剂组(P<0.05).HE染色结果显示模型组肝组织结缔严重,肝脏明显纤维化,藤茶总黄酮低剂量组、藤茶总黄酮高剂量组、激动剂组肝纤维化程度明显减轻,其中藤茶总黄酮高剂量组肝脏恢复程度最佳.与模型组比较,藤茶总黄酮低剂量组、藤茶总黄酮高剂量组及激动机组TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白相对表达量均降低,p-p38MAPK蛋白相对表达量降低,MMP-9 mRNA和蛋白相对表达量均升高(P<0.05),其中藤茶总黄酮高剂量组TGF-β1、α-SMA mRNA和蛋白相对表达量及p-p38MAPK蛋白相对表达量均低于藤茶总黄酮低剂量组及激动剂组,MMP-9 mRNA和蛋白相对表达量均高于藤茶总黄酮低剂量组及激动剂组(P<0.05).结论 藤茶总黄酮可显著抑制大鼠肝纤维化,其调控机制可能与TGF-β1/p38MAPK信号通路有关.     

黄芩苷通过p38 MAPK/NLRP3通路对脂多糖诱导大鼠急性肺损伤的影响

目的:观察黄芩苷对脂多糖(LPS)诱导急性肺损伤模型大鼠的疗效及相关作用机制。方法:采用将80只健康雄性SD大鼠随机分为正常组,模型组,黄芩苷低、中、高剂量组,地塞米松组(DEX),SB203580组和黄芩苷+SB203580组(BA+SB203580),每组10只。黄芩苷低、中、高剂量组分别腹腔注射不同剂量(10,50,100 mg·kg^-1)的BA溶液;DEX组腹腔注射5 mg·kg^-1的DEX溶液;SB203580组腹腔注射0.5 mg·kg^-1的SB203580溶液;黄芩苷+SB203580组腹腔注射100 mg·kg^-1的BA溶液和0.5 mg·kg^-1的SB203580溶液;正常组和模型组均注射等体积的生理盐水,每天给药1次,连续7 d,末次给药1 h后,除正常组,其余大鼠均给予气管滴注5 mg·kg^-1LPS构建急性肺损伤模型,正常组大鼠气管滴注等体积的生理盐水溶液,12 h后结束实验,取材。苏木素-伊红(HE)染色观察肺组织病理学改变,进行支气管肺泡灌洗液(BALF)中细胞总数和中性粒细胞计数;测定肺组织湿/干重比、血清中超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的水平;免疫荧光法检测肺组织中活性氧(ROS)的含量,酶联免疫吸附测定法(ELISA)测定BALF中细胞因子白细胞介素-1β(IL-1β),白细胞介素-18(IL-18),白细胞介素-6(IL-6),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量;免疫组化(IHC)检测p-p38丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的表达的定位表达及蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中p-p38 MAPK,硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP),NOD样受体蛋白3(NLRP3),半胱氨酸天冬氨酸蛋白水解酶-1(Caspase-1)蛋白表达情况。结果:与正常组比较,模型组大鼠肺组织出现炎性病理变化,肺湿/干质量,BALF中细胞总数及中性粒细胞数目增高(P<0.01),SOD活性下降(P<0.01),ROS和MDA含量升高(P<0.01),细胞因子IL-1β,IL-18,IL-6,TNF-α和p-p38 MAPK,NLRP3,Caspase-1的表达量均上调(P<0.01)。与模型组比较,黄芩苷组,SB203580组和黄芩苷+SB203580组可有效减轻LPS所致肺组织病理变化,降低肺湿/干质量,BALF中细胞总数及中性粒细胞数目(P<0.05,P<0.01),升高SOD活性(P<0.05,P<0.01),并降低ROS和MDA水平(P<0.05,P<0.01),细胞因子IL-1β,IL-18,IL-6,TNF-α和p-p38 MAPK,NLRP3,Caspase-1的表达量均明显下降(P<0.05,P<0.01)。结论:黄芩苷可有效保护LPS所致急性肺损伤,其作用机制可能与抑制p38 MAPK/NLRP3信号通路减轻炎症反应有关。     

冬连胶囊对STZ诱导糖尿病肾病大鼠p38MAPK、CREB1及TGFβ1蛋白表达的影响

目的:探讨冬连胶囊对链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病肾病大鼠肾脏保护作用及TGF-β1/p38MAPK信号通路影响。方法:雄性SD大鼠60只,随机分为正常组10只,模型组50只。模型组大鼠腹腔注射链脲佐菌素(STZ)(45 mg/kg),造模成功的大鼠按体质量随机分为模型组、科素亚组、冬连胶囊低、中、高剂量组。分别于灌胃后第1、3、8周收集24 h尿液检测24 h尿蛋白定量。灌胃第8周,处死大鼠取肾组织,western-blotting法观察转化生长因子β1(TGF-β1)、p38MAPK、CREB1蛋白表达。结果:与模型组比较,各治疗组肾脏组织中TGF-β1、p-p38MAPK、p-CREB1,蛋白表达明显减少(P0.01);冬连胶囊各治疗组可不同程度降低模型大鼠的24 h尿蛋白量,减轻模型大鼠的肾比重,对糖尿病肾病模型大鼠具有肾脏保护作用。结论:冬连胶囊可能通过调控糖尿病肾病肾组织TGF-β1/p38MAPK/CREB1信号表达,减轻肾脏细胞纤维化、减缓肾小球细胞硬化,进而降低24h尿蛋白定量,减轻肾脏损害,对糖尿病肾病起到一定的保护及延缓病程进展的作用。