益糖康对2型糖尿病模型大鼠糖脂代谢和肠道菌群的影响

目的探讨益糖康治疗2型糖尿病的可能作用机制。方法采用高脂饲料喂养结合一次性腹腔注射链脲佐菌素45 mg/kg制备2型糖尿病大鼠模型。将造模成功的32只SD大鼠随机分为模型组、益糖康组、二甲双胍组、益生菌组,每组8只,另设普通饲料喂养的SD大鼠8只为空白组。益糖康组给予益糖康生药56 g/(kg·d)灌胃,二甲双胍组给予盐酸二甲双胍片150 mg/(kg·d)灌胃,益生菌组给予益生菌冲剂150 mg/(kg·d)灌胃,空白组、模型组给予0.1 ml/10 g生理盐水灌胃,各组均每日1次。灌胃4周后,HE染色观察各组大鼠肠组织病理形态,测定血糖、胰岛素(INS)、糖化血红蛋白(HbAlc)、总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)水平;采用16S rRNA技术测定各组大鼠肠内容物的肠道菌群结构,进行α多样性指数分析、物种组成分析、LEfSe多级物种差异判别分析、COG功能注释,并对差异肠道菌群与血糖、血脂指标的相关性进行分析。结果病理结果显示,模型组、益生菌组均可见大量的肠绒毛顶端上皮细胞脱落;二甲双胍组偶见炎性细胞灶性浸润;益糖康组脱落的肠绒毛顶端上皮细胞较模型组明显减少。与空白组比较,模型组大鼠血糖、INS、HbAlc、TC、TG、LDL-C水平及coverage指数升高,HDL-C水平、shannon指数、chao指数降低,肠道菌群中放线菌门和变形菌门丰度升高,拟杆菌门丰度降低(P<0.05或P<0.01)。与模型组比较,二甲双胍组和益糖康组血糖、INS、HbAlc、TG、LDL-C水平降低,HDL-C水平、shannon指数升高,益生菌组血糖、coverage指数降低;二甲双胍组变形菌门丰度降低、疣微菌门丰度升高,益糖康组拟杆菌门、疣微菌门升高而变形菌门降低,益生菌组拟杆菌门、疣微菌门升高而放线菌门、其他菌门降低(P<0.05或P<0.01)。与二甲双胍组比较,益糖康组各指标差异均无统计学意义(P>0.05)。与益糖康组比较,益生菌组血糖、INS、HbAlc、TG、LDL-C水平均升高,HDL-C水平、shannon指数降低,拟杆菌门、变形菌门丰度升高而放线菌门、其他菌门丰度降低(P<0.05或P<0.01)。差异判别分析显示,空白组有53个差异菌群(属),模型组有8个差异菌群(属),二甲双胍组有13个差异菌群(属),益糖康组有11个差异菌群(属),益生菌组有5个差异菌群(属)。COG功能分类研究表明,差异菌群显著影响碳水化合物转运和代谢,氨基酸转运和代谢,转录,复制、重组和修复,翻译、核糖体结构和生物发生等通路。相关性分析显示,变形菌门与INS和TC水平呈显著正相关(P<0.05或P<0.01)。结论益糖康可调节2型糖尿病大鼠糖脂代谢,效果与二甲双胍相当而优于益生菌,其机制可能与改善肠道菌群的组成和结构有关。     

中药益糖康干预并有糖调节受损的代谢综合征临床研究

目的:观察中药益糖康干预并有并有糖调节受损的代谢综合征的临床疗效。方法:通过对患者空腹血糖(fasting plasma glucose,FPG)、餐后2h血糖(2 hours plasma glucose;postprandial blood glucose;2hPG,PBG)、糖化血红蛋白(HbAlc)、体重(body weight,BW)、总胆固醇(total cholesterol,TC)、甘油三酯(triglyceride,TG)、高密度脂蛋白(high density lipoprotein,HDL-C)、低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL-C)等主要指标进行分析。结果:①中药益糖康组FPG降低,与西药组(二甲双胍)相比,具有显著差异(P0.05)。②中药益糖康组HbAlc、2hPG降低,与西药组(二甲双胍)相比,无显著差异(P0.05)。③1年后中药益糖康组患者HbAlc较基线下降(P0.005)。④1年后中药益糖康组患者的血脂谱与基线相比:TG下降16%(P0.005),TC下降10%(P0.005),LDL-C下降8%(P0.0001),而HDL-C升高24%(P0.0001)。⑤患者FPG每下降0.8mmol/L,BW平均下降0.9kg,与西药组(二甲双胍)相比,具有显著差异(P0.005)。结论:中药益糖康可降糖、减轻体重,改善血脂谱,具有潜在的心血管收益。     

脂糖舒抗糖尿病作用机制初探

目的:探讨脂糖舒抗糖尿病的作用机制。方法:分别对健康大鼠和糖尿病模型大鼠灌胃脂糖舒28天,同时以二甲双胍和格列齐特作对照,测定血浆中葡萄糖(Glu)胰岛素(Ins)和胰高血糖素(Gla)含量。结果:①糖尿病大鼠的Glu和Gla含量显著高于正常大鼠,Ins含量显著低于正常大鼠(P<0.001);②二甲双胍、格列齐特和大小剂量的脂糖舒均能显著降低糖尿病大鼠的Glu含量(较模型组P<0.001),大剂量脂糖舒降糖效力与实验剂量的二甲双胍和格列齐特相当(P<0.05)。且强于小剂量脂糖舒(P<0.05),呈量效关系;③格列齐特明显升高糖尿病大鼠血浆Ins含量和降低Gla含量(较模型组P<0.001),而脂糖舒大小剂量组与二甲双胍组升高Ins和降低Gla效力相当(P<0.05),却显著弱于格列齐特(P<0.05～0.01),脂糖舒二组间降Clu作用差异显著(P<0.05);④各实验剂量药物组对正常大鼠上述指标无显著性差异(P<0.05)。结论:本实验结果提示,脂糖舒的抗糖尿病作用机制似二甲双胍。     

温通活血乳膏对糖尿病周围神经病变大鼠背根神经节中p-AKT蛋白表达的影响

目的观察温通活血乳膏外用对糖尿病周围神经病变大鼠神经传导速度的影响及可能作用机制。方法 53只Wistar大鼠随机选取10只作为空白组,其余大鼠采用高糖高脂饲料喂养联合一次性腹腔注射小剂量链脲佐菌素建立糖尿病周围神经病变大鼠模型,造模成功后分为模型组[后肢涂抹空白乳膏(0.8 g/只)和蒸馏水1 ml/100 g灌胃]、二甲双胍组[涂抹空白乳膏和二甲双胍片0.18 g/(kg·d)灌胃]、辣椒碱+二甲双胍组[涂抹复方辣椒碱乳膏0.2 g/只和二甲双胍片灌胃]、温通活血乳膏+二甲双胍组[涂抹温通活血乳膏0.8g/只和二甲双胍片灌胃]。每天1次,连续4周。检测各组大鼠坐骨神经(包括运动神经和感觉神经)传导速度,HE染色观察背根神经节病理结构,检测大鼠背根神经节中蛋白激酶B(AKT)及磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)的蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组大鼠运动神经传导速度减慢,潜伏期缩短;感觉神经潜伏期延长,传导速度减慢(P<0.05或P<0.01);光镜下背根神经节中神经元胞体萎缩、胞质内尼氏体溶解、部分胞核溶解、消失;背根神经节中p-AKT蛋白表达降低(P<0.05)。温通活血乳膏+二甲双胍组较模型组坐骨神经传导速度加快,背根神经节结构改善,背根神经节中p-AKT蛋白表达显著增加(P<0.05或P<0.01)。温通活血乳膏+二甲双胍组坐骨神经传导速度较二甲双胍组及辣椒碱+二甲双胍组加快(P<0.05或P<0.01)。各组大鼠背根神经节中AKT蛋白表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论温通活血乳膏可能通过上调背根神经节中p-AKT蛋白的表达水平,从而提高糖尿病周围神经病变的神经传导速度。     

益气除湿活血汤对肥胖大鼠糖、脂代谢的影响

目的:研究中药益气除湿活血汤对肥胖大鼠糖、脂代谢的影响及其分子机制。方法:40只SD大鼠随机分为对照组、肥胖组、肥胖+益气汤组和肥胖+二甲双胍组,每组各10只。以高脂、高糖饲料喂养大鼠12周制备肥胖大鼠模型,对照组大鼠给予基础饲料喂养。肥胖+益气汤组、肥胖+二甲双胍组和肥胖组动物分别给予8周益气除湿活血汤、二甲双胍、生理盐水灌胃处理。测定动物体质量并计算Lee′s指数,取血测定空腹血糖(FBG)及血胆固醇和三酰甘油浓度、胰岛素抵抗指数(IRI)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和脂联素水平。结果:与对照组大鼠相比较,肥胖组大鼠体质量、Lee′s指数、FBG、总胆固醇、三酰甘油和IRI均显著升高(P<0.05,P<0.01),血清脂联素明显降低(P<0.01),TNF-α明显升高(P<0.01)。与肥胖组大鼠相比较,肥胖+二甲双胍组大鼠体质量、Lee′s指数、FBG和IRI明显降低(P<0.05,P<0.01),脂联素水平明显升高(P<0.05);肥胖+益气汤组大鼠体质量、Lee′s指数、FBG、IRI、总胆固醇和三酰甘油明显降低(P<0.05)外,血清TNF-α明显降低,脂联素明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论:益气除湿活血汤可改善肥胖大鼠糖、脂代谢紊乱和胰岛素抵抗,此作用可能通过升高血脂联素、降低TNF-α所实现。     

糖平胶囊对糖尿病大鼠模型作用机制的研究

目的:探讨糖平胶囊防治糖尿病(DM)大鼠的作用机制。方法:将120只Wistar大鼠随机分为正常对照组20只,余100只应用四氧嘧啶腹腔注射制作DM大鼠模型,模型成功后再分为模型组、二甲双胍组、糖平胶囊小剂量组、中剂量组、大剂量组。结果:糖平胶囊治疗组血清GLU、CHO、TG、LDL均有不同程度改善,糖平胶囊中剂量组SOD水平升高更明显,C肽水平增高有明显差异,P<0.05。糖平胶囊对大鼠胰岛素的影响与模型组、二甲双胍组比较有显著差异,P<0.05。结论:糖平胶囊可修复胰岛细胞功能、促进胰岛素分泌、降低大鼠血糖水平,且能改善脂代谢、提高SOD水平,从而对DM具有良好的防治作用。     

电针刺激胰俞穴、三阴交穴对胰岛素抵抗型多囊卵巢综合征大鼠性激素、ISI及HOMA-IR的影响

目的:观察电针刺激胰俞穴、三阴交穴对胰岛素抵抗型多囊卵巢综合征模型大鼠的性激素、胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)及胰岛素敏感指数(ISI)的影响。方法:以硫酸普拉睾酮钠配合高脂高卡饮食诱导胰岛素抵抗型多囊卵巢综合征模型,50只模型大鼠分为模型组、电针治疗组、达英-35+二甲双胍治疗组、电针+达英-35+二甲双胍治疗组。电针治疗组、电针+达英-35+二甲双胍治疗组采用电针刺激胰俞穴、三阴交穴,达英-35+二甲双胍治疗组、电针+达英-35+二甲双胍治疗组采用达英-35及二甲双胍干预。检测大鼠性激素包括:睾酮(T)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)及胰岛素样生长因子-1(IGF-1),空腹血糖(FBG)、餐后2h血糖(P2h BG)、血浆胰岛素(FINS),计算并对比分析胰岛素敏感指数(ISI)及胰岛素抵抗指数(HOMA-IR)。结果:与正常对照组比较,模型组血清T、LH、LH/FSH明显升高,差异有显著性意义(P<0.05),提示模型复制成功。与模型组比较,电针治疗组、达英-35+二甲双胍治疗组及电针+达英-35+二甲双胍治疗组T、LH、LH/FSH值降低,差异有显著性意义(P<0.05)。与正常对照组比较,模型组、电针治疗组、达英-35+二甲双胍治疗组、电针+达英-35+二甲双胍治疗组IGF-1表达均有不同程度增强,差异有显著性意义(P<0.05);与模型组比较,电针治疗组、达英-35+二甲双胍治疗组、电针+达英-35+二甲双胍治疗组IGF-1表达均有所减弱,差异有显著性意义(P<0.05),电针+达英-35+二甲双胍治疗组改善最显著。与正常对照组比较,模型组、电针治疗组、达英-35+二甲双胍治疗组、电针+达英-35+二甲双胍治疗组FBG、P2h BG、FINS、ISI、HOMA-IR水平高于正常对照组(P<0.05);与模型组比较,电针治疗组、达英-35+二甲双胍治疗组、电针+达英-35+二甲双胍治疗组的FBG、P2h BG、ISI、HOMA-IR水平均显著改善(P<0.05),电针+达英-35+二甲双胍治疗组改善最显著。结论:电针刺激胰俞穴、三阴交穴,配合达英-35及二甲双胍可有效提高胰岛素敏感性,降低血清胰岛素抵抗,抑制T及LH,改善排卵功能,是治疗胰岛素抵抗型多囊卵巢综合征的有效途径。     

复方益糖康对糖尿病大鼠Nav1.7蛋白及 mRNA表达的影响

目的:探讨中药复方益糖康对链脲佐菌素(STZ)致糖尿病模型大鼠背根神经节(DRG)中电压门控性钠离子通道亚型1.7( Nav1.7)蛋白及mRNA表达的影响.方法:将健康雄性Wistar大鼠40只,体重200～250 g,随机分为空白对照组、模型组和益糖康组,其中,模型组和益糖康组采用STZ 55 mg· kg -1 ip复制糖尿病大鼠模型,然后分别给予安慰剂和益糖康(4g.kg-)5 mL·d-1 ig.每周测血糖1次,随时剔除血糖低于16.7 mmol∶L-1的大鼠.6周后,采集大鼠背根神经节(DRG)标本,用免疫组化和RT-PCR方法分别检测其钠离子通道Nav1.7蛋白和mRNA表达水平.结果:动物给药6周后处死前血糖:空白对照组(6.73±0.9) mmol·L-1,模型组(20.12±1.3) mmol· L-1,益糖康组( 19.34±1.2)mmol·L-1,模型组与空白对照组比较有显著差异(P＜0.01),益糖康组与模型组比较无显著差异.Nav1.7蛋白表达的灰度值:空白对照组149.41±5.71,模型组104.53 ±9.02,益精康组132.57±6.13,模型组与空白对照组比较其表达水平显著上调(P＜0.01),益糖康组与模型组比较其表达水平显著降低(P＜0.01).Nav1.7 mRNA表达的积分吸光度比值:空f对照组0.114±0.018,模型组0.215±0.043,益糖康组0.128±0.025,模型组与空白对照组比较其表达水平显著上调(P＜0.01),益糖康组与模型组比较其表达水平显著降低(P＜0.01).结论:中药复方益糖康可能对Nav1.7通道有阻断作用,是其改善糖尿病痛性神经病症状的机制之一.     

艾塞那肽对单纯性肥胖合并糖调节受损模型大鼠脂肪因子及体质量的影响

目的观察艾塞那肽对单纯性肥胖合并糖调节受损模型大鼠脂肪因子和体质量的影响。方法取60只Wistar大鼠,随机选择10只作为空白组,其余50只大鼠通过喂养高脂饲料与注射链脲佐菌素方法制备单纯性肥胖合并糖调节受损模型,将造模成功大鼠随机分为艾塞那肽组、二甲双胍组与模型组。空白组、模型组给予生理盐水6 m L/kg灌胃;二甲双胍组给予二甲双胍混悬液250 mg/(kg·d)灌胃;艾赛那肽组皮下注射艾赛那肽10μg/kg,2次/d。实验周期6周,比较4组大鼠体质量、Lee’s指数、腹部脂肪湿质量、肝脏形态学病理表现及血清瘦素(Leptin)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)水平变化。结果干预6周后,二甲双胍组和艾赛那肽组体质量、Lee’s指数及腹部脂肪湿质量均明显低于模型组(P均0.05),且艾赛那肽组体质量明显低于二甲双胍组(P0.05),艾赛那肽组Lee’s指数明显低于干预前(P0.05)。干预6周后,二甲双胍组和艾赛那肽组肝组织病理改变明显轻于模型组;二甲双胍组和艾赛那肽组血清Leptin、TNF-α水平均明显低于模型组(P均0.05),且艾赛那肽组血清TNF-α水平明显低于二甲双胍组(P0.05),二甲双胍组和艾赛那肽组IL-6水平与模型组比较差异均无统计学意义(P均0.05)。结论艾塞那肽可有效减慢单纯性肥胖合并糖调节受损大鼠体质量增长速度,降低大鼠Lee’s指数及血清Leptin、TNF-α水平,并可能通过减轻Leptin抵抗及下调TNF-α水平以减轻中心性肥胖及肥胖慢性炎症状态。     

糖平方改善糖尿病大鼠胰岛素抵抗的作用机制研究

目的:探讨糖平方对糖尿病大鼠胰岛素抵抗改善的作用机制。方法:应用高脂喂养大鼠制作胰岛素抵抗的动物模型,观察糖平方和西药二甲双胍片对大鼠空腹血糖(FBG)、空腹血清胰岛素(FINS)、血清肿瘤坏死因子(TNF-α)、血清游离脂肪酸(FFA)的影响。结果:模型组大鼠较正常对照组大鼠FBG、FINS、TNF-α、FFA均明显增高,胰岛素敏感指数(ISI)亦明显增高(P<0. 05)。二甲双胍组和糖平方组的各项指标均较造模组明显下降(P<0. 05),但两者之间无明显差异。结论:糖平方可明显改善实验大鼠的胰岛素抵抗,其效果与二甲双胍相似,其作用机制部分可能是通过抑制机体FFA和TNF-α水平而发挥作用。     

泽泻醇B抑制C3a介导的人肾小管上皮细胞间充质转分化的实验研究

目的 探讨泽泻醇B能否抑制C3a介导的肾小管上皮细胞间充质转分化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)。方法 将体外培养的人肾小管上皮细胞(HK-2)分别用5 ng/mL转化生长因子β(transforming growth factor-β,TGF-β)、0.1 μmol C3a和0.1 μmol C3a加10 μmol泽泻醇B进行干预。分别采用RT-PCR、Western blot和细胞免疫荧光法检测HK-2细胞C3、α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和上皮钙黏蛋白（E-cadherin） mRNA及蛋白表达。结果 经C3a刺激后,HK-2细胞C3 mRNA和蛋白表达明显增加(P<0.01),α-SMA mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.01),E-cadherin mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.01)。与经外源性C3a干预组比较,经泽泻醇B干预后,HK-2细胞α-SMA mRNA及蛋白表达明显减少(P<0.01),E-cadherin mRNA及蛋白表达明显增加(P<0.05)。结论 外源性C3a能诱导肾小管上皮细胞发生EMT,泽泻醇B可抑制C3a诱导的EMT。     

白杨素调控NF-κB/Twist 1信号通路抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转分化的机制研究

研究白杨素(ChR)是否通过影响核转录因子κB(NF-κB)/Twist 1信号通路,进而抑制Ⅱ型肺泡上皮细胞间质转分化(EMT)而产生抗肺纤维化作用。动物实验设对照组、博莱霉素组(BLC)、BLC+ChR(50 mg·kg^-1)和BLC+ChR(100 mg·kg^-1)剂量组,每组动物15只。气管注射BLC(7500 U·kg^-1)诱导肺纤维化大鼠模型,造模后连续灌胃给药28 d。细胞实验设对照组、转化生长因子-β1(TGF-β1)(5 ng·mL^-1)组、TGF-β1+ChR(1,10,100μmol·L^-1)组,Ⅱ型肺泡上皮细胞先用TGF-β1处理24 h,再用TGF-β1和(或)不同剂量ChR处理48 h。肺组织病理变化和胶原沉积情况分别采用HE染色、Masson染色和免疫组化法进行观察。肺组织和细胞内Ⅰ型胶原(collagenⅠ)、E钙粘蛋白(E-cadherin)、紧密连接蛋白-1(ZO-1)、波形蛋白(vimentin)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、核转录因子κB抑制因子α(IκBα)、NF-κB p65、磷酸化NF-κB p65(p-p65)和Twist 1 mRNA及蛋白表达分别采用qPCR和(或)Western blot法检测。动物实验结果显示,与BLC组相比,ChR给药28 d后,大鼠肺纤维化程度明显减轻;肺组织collagenⅠ表达明显下降(P<0.05或P<0.01);肺组织肺泡上皮细胞EMT程度明显受到抑制[ZO-1和E-cadherin的表达明显升高,α-SMA和vimentin的表达明显降低(P<0.05或P<0.01)];肺组织细胞浆内IκBα和p65磷酸化水平、胞核内NF-κB p65和Twist 1的表达水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。细胞实验结果表明,不同剂量ChR能够明显减轻TGF-β1诱导的collagenⅠ的表达(P<0.05或P<0.01),显著抑制细胞EMT[E-cadherin和ZO-1的表达明显升高,vimentin和α-SMA的表达明显降低(P<0.05或P<0.01)],同时能够明显抑制TGF-β1诱导的细胞浆内IκBα和p65磷酸化水平并降低细胞核内NF-κB p65和Twist 1的表达(P<0.05或P<0.01)。综上结果推测ChR能够逆转肺泡Ⅱ型上皮细胞EMT、缓解肺纤维化,其机制可能与其降低细胞内IκBα磷酸化水平、抑制NF-κB p65的磷酸化和其核转移,进而下调Twist 1的表达有关。     

人参皂苷Rg1对TGF-β_1诱导的肾小管上皮细胞红细胞生成素受体表达的影响

目的探讨人参皂苷Rg1对大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)上皮-间充质细胞转化(EMT)的作用及其与该细胞血红细胞生成素受体(EPOR)表达变化的关系。方法将体外培养的正常大鼠肾小管上皮细胞(NRK52E)分为空白对照组、5μg/L TGF-β1刺激组,人参皂苷Rg1与TGF-β1共同干预组(5μg/L TGF-β1的基础上分别加入10,20,40 mg/L的人参皂苷Rg1)。每组细胞干预72 h后,在倒置显微镜下观察各组细胞形态的改变,并通过CCK8法检测人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞转分化的影响。酶联免疫吸附试验法(ELISA)测定细胞培养上清液中胶原Ⅰ(Col-Ⅰ)和纤维粘连蛋白(FN)的含量。实时荧光定量PCR方法检测EPOR mRNA转录水平,免疫细胞化学法检测各组表达EPOR细胞的阳性率。结果 TGF-β1诱导NRK52E细胞形态变化,从原有典型的铺路石样上皮细胞形态转变为长梭形类似成纤维细胞形态,并抑制细胞增殖(P<0.05),增加细胞表达Col-Ⅰ和FN,抑制EPOR mRNA及其蛋白的表达(P<0.05);人参皂苷Rg1以剂量和时间依赖的方式抑制TGF-β1诱导的NRK52E细胞形态的改变,减少Col-Ⅰ和FN的表达,上调EPOR mRNA及其蛋白的表达(P<0.05)。结论人参皂苷Rg1对TGF-β1诱导的肾小管上皮细胞EMT具有一定的抑制作用;该作用可能与人参皂苷Rg1上调肾小管上皮细胞EPOR的表达有关。     

复肾颗粒对肾间质纤维化大鼠肾脏TRAF6表达的影响

目的:观察复肾颗粒对单侧输尿管结扎致肾间质纤维化模型大鼠的肾脏保护作用,探讨其机制。方法:将60只雄性Wi st ar大鼠行单侧输尿管结扎术,分为模型组、假手术组、贝那普利组[10 mg/(kg·d)]、复肾颗粒1组[7.5 g/(kg·d)]、复肾颗粒2组[15 g/(kg·d)]、复肾颗粒3组[30 g/(kg·d)]。各组于灌胃给药及灌胃生理盐水14天后处死大鼠,收集大鼠血清进行血肌酐(Scr)、尿素氯(BUN)检测;取结扎侧肾脏,进行HE和Masson染色,观察肾小管间质纤维化程度,RT-PCR和West er n bl ot法检测肾组织TRAF6和α-SMA的表达。结果:与假手术组相比,模型组大鼠血清中Scr和BUN含量均增加(P0.01),肾小管损伤程度较重(P0.05),肾组织TRAF6和α-SMA表达明显增多(P0.05);与模型组比较,不同剂量复肾颗粒作用后大鼠血清中Scr和BUN含量均下降(P0.05),肾小管损伤程度有所缓解(P0.05),肾组织内TRAF6和α-SMA表达降低(P0.05),随着药物剂量的增加,各指标程度加重。结论:复肾颗粒可明显减轻肾间质炎症细胞浸润及间质纤维化,延缓肾功能损害,复肾颗粒对单侧输尿管结扎大鼠肾小管间质纤维化有保护作用,其机制可能与抑制TRAF6和α-SMA表达有关。     

解毒通络方对心肌成纤维细胞Vimentin和α-SMA表达影响

目的:探讨解毒通络方对大鼠心肌成纤维细胞增殖和转分化的影响。方法:以MTT法检测各组培养细胞增殖活力,碱裂解法测定各组培养液羟脯氨酸含量;RT-q PCR法检测培养细胞及Ⅰ型胶原(ColⅠ)mRNA表达;Western Blot和RT-qPCR检测Vimentin、α-SMA蛋白及mRNA表达。结果:模型组心肌成纤维细胞增殖活力、羟脯氨酸含量及ColⅠmRNA表达量均显著高于空白对照组,经解毒通络方及卡托普利处理后则显著降低(P<0.01)。模型组心肌成纤维细胞Vimentin、α-SMA蛋白及mRNA表达水平显著上调,解毒通络方及卡托普利处理后则显著降低(P<0.05,P<0.01)。结论:解毒通络方可抑制心肌成纤维细胞增殖活力及胶原等细胞外基质(ECM)合成和分泌,可能与其抑制Vimentin和α-SMA的转录和翻译有关。     

中药复方益糖康对db/db小鼠认知障碍的改善及铁死亡的作用＊

目的 探讨中药复方益糖康对db/db小鼠认知缺陷的改善以及可能的机制。方法 选取24只db/db小鼠和8只db/m小鼠，随机分为四组：正常对照组（db/m组）、模型组（db/db组）、益糖康组（YTK组）以及西药（选用利拉鲁肽Liraglutide）对照组（LIRA组）。首先对小鼠空腹血糖（FBG）、血清胰岛素水平（FINS）和胰岛素抵抗指数（HOMA-RI）进行观察；通过Morris水迷宫任务和旷场实验对小鼠进行行为学检测；采用Nissl染色观察海马神经元Nissl小体数量，western blot检测突触后致密物质95（PSD 95）、突触素（SYN）以及脑源性神经营养因子（BDNF）蛋白观察海马的突触可塑性；通过透射电镜观察线粒体超微形态，免疫双标共染Cox1/Cox4观察线粒体功能变化，同时免疫荧光和western blot检测海马GPX 4、SLC7A11及Nrf 2蛋白的表达观察铁死亡。结果 与db/m组相比，db/db组小鼠FBG、FINS和HOMA-RI明显升高；水迷宫和旷场实验等行为学功能显著下降，Nissl小体形态及数量异常，同时PSD 95、SYN及BDNF蛋白表达量明显降低；海马神经元线粒体结构异常，Cox1、GPX 4、SLC7A11及Nrf 2表达明显下降，Cox4表达上升。与db/db组相比，LIRA组及YTK组FBG、FINS和HOMA-RI明显下降；两组水迷宫均有明显改善，YTK组旷场实验改善更为明显，同时两组小鼠Nissl小体及PSD 95、SYN和BDNF蛋白表达均有回升；两组小鼠海马神经元线粒体结构均有改善，Cox1、GPX 4、SLC7A11及表达明显上升，Cox4表达下降，YTK组Nrf 2表达升高，但LIRA组Nrf 2表达无统计学意义。结论 中药复方益糖康可以改善神经和突触可塑性损伤，保护认知功能，其机制可能是通过上调Nrf 2提高SLC7A11和GPX 4表达，改善线粒体结构和功能，抑制铁死亡。     

Effect of Tangnaikang on TGF-β1-induced transdifferentiation of human renal tubular epithelial HK-2 cells

Objective

To explore the function of Tangnaikang (TNK) in the prevention and treatment of renal interstitial fibrosis through transdifferentiation of the human renal tubular epithelial cell line HK-2 induced by transforming growth factor-β₁ (TGF-β₁).

Methods

HK-2 cells cultured in dulbecco's modified eagle medium/F12 (1:1) with 10% fetal calf serum were divided into six groups: blank control group, TGF-β₁ group (TGF-β₁ 10 ng/mL), serum control group (TGF-β₁ 10 ng/mL + 10% serum), treatment group 1 (TGF-β₁ 10 ng/mL + 5% TNK serum), treatment group 2 (TGF-β₁ 10 ng/mL + 10% TNK serum), and treatment group 3 (TGF-β₁ 10 ng/mL + 20% TNK serum). Cell proliferation was detected by 4,5-Dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide assay. Expression of α-smooth muscle actin (α-SMA) and E-cadherin were observed by immunohistochemical assay. The contents of collagen I (Col I), collagen III (Col III), and fibronectin (FN) in the culture medium supernatant were detected by ELISA.

Results

E-cadherin was expressed and α-SMA was not expressed in normal HK-2 cells. In HK-2 cells cultured with TGF-β₁ α-SMA expression significantly increased, HK-2 cells significantly proliferated, and secretion of Col I, Col III, and FN significantly increased compared with the blank control group (all P<0.05). In the HK-2 cells cultured with TGF-β₁ and TNK serum, the expression of α-SMA significantly decreased, the expression of E-cadherin significantly increased, and the cell proliferation and the secretion of Col I, Col III and FN were significantly inhibited compared with the TGF-β₁ group (all P<0.05).

Conclusion

TNK can inhibit cell proliferation and reduce secretion of Col I, Col III, and FN. This indicates that TNK can inhibit transdifferentiation of human renal tubular epithelial cells induced by TGF-β₁, with the effect of preventing and treating renal interstitial fibrosis.     

丹参酮ⅡA对高糖诱导肾小管上皮细胞转分化中Wnt/β-catenin信号途径的影响

目的 探究高糖诱导肾小管上皮细胞转分化过程中Wnt/β-catenin信号途径的表达及丹参酮ⅡA对其影响。方法 将人近端肾小管上皮细胞(HK-2),分为正常糖组（NG组）、高糖组（HG组）、高糖+丹参酮ⅡA干预组（HG+T组）。采用免疫细胞化学观察β-catenin表达情况;Western印迹检测β-catenin、上皮细胞标志性蛋白E-钙粘蛋白(E-cadherin)、间充质细胞标志性蛋白α-SMA的表达;RT-PCR检测β-catenin、E-cadherin mRNA表达水平。结果 与NG组比较,HG组β-catenin蛋白及mRNA表达显著增强（P<0.01),E-cadherin表达显著降低（P<0.01),β-catenin蛋白在胞浆与胞核表达增强。终浓度为100 μmol/L的丹参酮ⅡA可显著减少β-catenin的异位表达;在该浓度下,β-catenin在胞核蛋白及mRNA的表达量显著下降, 而E-cadherin蛋白及mRNA的表达水平上升,同时间充质细胞标志性蛋白α-SMA的表达明显下降。结论Wnt / β-catenin信号途径参与了高糖诱导肾小管上皮细胞转分化过程,丹参酮ⅡA可能通过下调Wnt / β-catenin信号途径的活性而抑制转分化过程,进而发挥保护肾脏的作用。     

Ginsenoside Rg1, a major active component isolated from Panax notoginseng, restrains tubular epithelial to myofibroblast transition in vitro

The medicinal herb, Panax notoginseng, has been used for thousands of years in traditional Chinese medicine and possesses anti-fibrosis properties. Epithelial-myofibroblast transition (EMT) plays an important role in renal tubulointerstitial fibrosis. The present study was designed to examine whether ginsenoside Rg1, a major active component isolated from Panax notoginseng, has an ability to block this phenotypic transition in rat renal tubular epithelial cells (NRK-52E) induced by transforming growth factor-β1 (TGF-β1). The morphology of tubular epithelial-myofibroblast transition was observed through light microscope and transmission electron microscopy. α-SMA and E-cadherin are two markers of tubular epithelial-myofibroblast transition, their protein expressions were assessed by immunohistochemistry and western blot analysis. Gene expression of α-SMA as well as the two major extracellular matrix components collagen I and fibronectin was measured by real-time PCR analysis. Enzyme-linked immunosorbent assay was used to quantitatively detect collagen I and fibronectin in the supernatant. Our results revealed that ginsenoside Rg1 obviously blocked morphologic transformation in NRK-52E induced by TGF-β1. Meanwhile, ginsenoside Rg1 inhibited the expression of α-SMA and the loss of E-cadherin, subsequently decreased the levels of collagen I and fibronectin in a dose-dependent manner. In addition, western blot analysis indicated that ginsenoside Rg1 inhibited the expression of P-ERK1/2 in NRK-52E induced by TGF-β1. These results suggest that ginsenoside Rg1 can restrain the process of EMT maybe via suppressing the expression of P-ERK1/2 in vitro.     

间充质干细胞联合灯盏花素基于Galectin-3/Akt/Snail通路对肾脏纤维化的影响研究

目的观察骨髓源性间充质干细胞(MSCs)和灯盏花素是否能协同抗慢性肾脏病肾脏纤维化,并探讨其可能机制。方法将50只雄性SD大鼠随机分为正常组、模型组、灯盏花素组、MSCs组和灯盏花素+MSCs组。除正常组外,其余组大鼠采用尾静脉给予阿霉素联合腺嘌呤灌胃方法建立慢性肾脏病模型。建模结束后,灯盏花素组给予灯盏花素连续灌胃7 d;MSCs组在建模结束后第3天,尾静脉注射MSCs悬液;灯盏花素+MSCs组给予灯盏花素连续灌胃7 d,同时建模结束后第3天尾静脉注射MSCs悬液。干预结束后第3天收集尿、血检测24 h尿蛋白、血肌酐(Cr)和尿素氮(BUN)水平;取肾脏,计算肾脏指数,HE、Masson和Sirius Red染色观察肾脏组织病理变化,免疫组织化学SP法检测肾脏组织中I型胶原A1(ColIA1)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)表达情况,Western blot法检测肾脏组织中p-Akt、Akt、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、Galectin-3和Snail1蛋白表达情况。结果灯盏花素组、MSCs组和灯盏花素+MSCs组24 h尿蛋白、血清Cr和BUN水平、肾脏指数均明显低于模型组(P均<0.05)。HE、Masson和Sirius Red染色显示,模型组有肾小管腔内腺嘌呤结晶沉着,肾间质胶原纤维化明显,肾小球系膜增厚;灯盏花素组、MSCs组和灯盏花素+MSCs组肾组织病理改变明显较模型组轻,其中灯盏花素+MSCs组最轻。灯盏花素组、MSCs组和灯盏花素+MSCs组肾组织中ColIA1、p-Akt/Akt、α-SMA、Galectin-3、Snail1表达量均明显低于模型组(P均<0.05),肾组织中MMP-9表达量明显高于模型组(P均<0.05)。灯盏花素+MSCs组MMP-9表达量明显高于灯盏花素组和MSCs组(P均<0.05),灯盏花素+MSCs组p-Akt/Akt、Snail1表达量明显低于灯盏花素组和MSCs组(P均<0.05),灯盏花素组和灯盏花素+MSCs组Galectin-3表达量明显低于MSCs组(P均<0.05)。结论MSCs和灯盏花素联用较单独应用抗慢性肾脏病肾脏纤维化效果更佳,其机制可能与调节Galectin-3/Akt/Snail信号通路有关。