利用ISSR标记分析鱼腥草种质资源的遗传多样性

利用ISSR标记对70份鱼腥草种质资源遗传多样性进行检测。结果发现,所有引物扩增产物均具多态性,22个ISSR引物共得到352条扩增DNA片段,平均每个引物可获得16条DNA片段。其中,92.3%的片段具多态性。每个多态性引物能扩增出4～58条DNA片段,平均可扩增出14.8条多态性片段,峨眉蕺菜与蕺菜中染色体数目为36的细胞型间相似程度最高,其平均遗传相似系数GS值达0.618。蕺菜中,除染色体数目为54的细胞型外,其余细胞型的类间GS值几乎均是与染色体数目为36的细胞型间最小。栽培蕺菜类群遗传多样性略高于野生类群。聚类分析表明,利用ISSR技术可将全部供试材料区分开,所有材料共划分为8类。根据ISSR遗传相似系数划分的类群主要同染色体数目有关,也与地理分布有一定关系。据此认为,鱼腥草种质资源在分子水平上确实存在较大遗传差异,ISSR标记可作为构建鱼腥草DNA指纹图谱的有效工具之一。鱼腥草药材道地性与环境因素有关,但更大程度上由其遗传因素所决定。本文中还讨论了蕺菜属植物的起源演化。     

利用SRAP和ISSR标记分析穿龙薯蓣遗传多样性

目的:对30个野生居群的穿龙薯蓣进行遗传多样性与亲缘关系分析。方法:采用ISSR、SRAP分子标记法。结果:ISSR标记平均每条引物扩增条带数为16.1个DNA片段,SRAP标记平均每条引物扩增条带数为29.5个DNA片段,多态性条带百分率均为100%。SRAP标记多态性比率高于ISSR标记;按照种质间相似系数得出聚类图,表明基于SRAP分子标记的野生穿龙薯蓣居群间的遗传相似性与其实际生长的地理位置(距离)间有一定关系。结论:利用SRAP和ISSR标记方法可以确定穿龙薯蓣的遗传多样性。     

半夏种质资源的随机扩增多态性DNA技术分析

目的分析半夏种质资源在分子水平上的遗传多样性。方法应用随机扩增多态性DNA技术(RAPD)对21份半夏种质资源进行检测。结果29个引物共得到162条扩增DNA片段,其中123条(75.9%)的片段具多态性,揭示了半夏居群间较丰富的遗传多样性。利用UPGMA法进行聚类分析表明,所有材料可划分为3类,根据RAPD遗传相似系数划分的类群同地理分布有一定关系。结论半夏种质资源在分子水平上确实存在较大遗传差异。RAPD标记可作为构建半夏DNA指纹图谱的有效工具。     

不同产地石斛属种质资源的ISSR遗传多样性分析

目的 对24份不同产地石斛属样品的遗传多样性和亲缘关系进行分析.方法 采用ISSR分子标记技术和非加权平均距离法(UPGMA)对24份石斛属样品进行遗传多样性和聚类分析.结果 从100条ISSR引物中共筛选出6条多态性稳定、清晰的引物,24份石斛样品共扩增出847个DNA片段,平均每个引物扩增出141个DNA片段,其多态性为100％.结论 24份不同产地石斛样品被划分为6个类群,遗传多样性非常丰富.     

牻牛儿苗种质资源遗传多样性的ISSR研究

目的:研究牻牛儿苗亲缘关系和遗传多样性.方法:23个样品进行简单序列重复区间(ISSR)分析,利用NTSYS软件计算材料间遗传相似系数,并用UPGMA方法聚类,构建亲缘关系系统图.结果:从100条ISSR引物中筛选出14条多态性明显、反应稳定的引物,在23份供试材料DNA中共扩增出185条谱带,其中多态性条带142条,占76.8％.材料间ISSR标记遗传相似性系数(GS)在0.458 ～0.916.聚类分析结果显示,所有供试材料均可区分开,并聚为6组.结论:分子标记研究结果与牻牛儿苗的地理位置、形态性状存在显著的相关性,较好地揭示了牻牛儿苗种源间的遗传关系,可为牻牛儿苗资源划分和良种选育提供科学依据.     

利用SRAP和ISSR标记分析川党参的 遗传多样性

目的:川党参Codonopsis tangshen的遗传多样性研究.方法:对18个不同来源地的川党参种质进行SRAP(sequence-related amplified polymorphism),ISSR (inter simple sequence repeat)分析.利用TREECONW软件分析遗传相似系数,UPGMA方法构建亲缘关系系统图.结果:29条SRAP引物组合共得到329条扩增条带,其中有266条呈现多态性,占80.85%,平均遗传相似系数为0.712 1.21条ISSR引物共得到223条扩增条带,其中有166条呈现多态性,占74.44%,平均遗传相似系数为0.778 1.2种标记均表明川党参具有较高的遗传多样性.聚类结果显示川党参种质亲缘关系与地理分布相关性不显著.2种标记系统得到了相似但并不完全相同的聚类图,2种标记方法间存在显著相关性(r=0.802,P＜0.01).结论:川党参种质的遗传多样性水平较高.SRAP与ISSR标记均适用于川党参种质的遗传多样性分析.     

川芎简单序列重复间区多态性和扩增片段长度多态性分子标记技术多态性比较研究

目的 寻找川芎的高效分子标记.方法 以四川崇州、都江堰、新都3个产地的川芎为材料,应用100 条简单序列重复间区多态性(ISSR)引物、64对扩增片段长度多态性(AFLP)引物对30个川芎个体进行多态性筛选.结果 筛选到简单序列重复间区多态性特异性引物共10 条,扩增片段长度多态性特异性引物共6对;分别扩增出106和256条条带,多态条带百分率分别为22.64%和 22.27%.平均标记指数AFLP 的检测效率(1.78)明显高于ISSR(0.42).两种标记基于遗传相似值聚类分析结果存在着一定的差异,但用Mantel测试对两种方法检测的遗传一致度进行相关性分析表明,它们之间存在着显著的相关性( r=0.6975,p=0.014).结论 川芎具有较低的遗传多样性,AFLP更有效于ISSR.     

石斛属植物遗传多样性的简单重复间系列分析

目的 研究我国石斛属植物间的亲缘关系.方法 从55个ISSR引物中筛选出14个多态性好的引物对石斛属(Dendrobium)植物基因组DNA进行简单重复间序列(ISSR)分析.利用POPGENE32软件计算ISSR扩增产物的Nei's基因多样性指数(H)和Shannon信息指数(I),标记系统的有效等位基因数(effective number of alleles, NE).应用NTSYS(3.0)软件计算Nei's遗传距离和遗传相似系数.按照非加权平均距离法(UPGMA)构建聚类关系图.结果 14条引物共扩增出123条带,多态性带112条,约占总数的91.06%,平均每个引物扩增的DNA带数为8.79条.Nei's基因多样性指数(H)为0.351 9,Shannon信息指数(I)为0.528 2,有效等位基因数(NE)为1.594 5,种间的相似系数介于0.090 9～0.695 7,平均为0.377 9.结论 我国石斛品种的遗传基础比较丰富,ISSR分子标记构建的亲缘关系树状图与经典分类系统基本一致.     

湖南产牡丹遗传多样性的ISSR分析

目的深入了解和掌握湖南产牡丹Paeonia suffruticosa的亲缘关系及遗传多样性。方法利用ISSR分子标记生物技术从100条ISSR引物中筛选出条带清晰、多态性好的引物7条,对源自湖南省内牡丹种质资源及部分实生后代共47份样品DNA进行扩增实验。结果共扩增获得77条带型完整清晰的谱带,其中多态性带为67条,多态位点比率为87.01%,表明湖南产牡丹种质资源多态性较高,具有较高的遗传多样性。经计算机软件计算结果分析,平均有效等位基因数为1.395 4,平均Nei’s基因多样性指数为0.248 0,平均Shannon’s信息指数为0.385 9;各品种间的Jaccard相似系数介于0.532 5~0.961 0,平均为0.751 5。UPGMA作图法将47份材料划分为2个类群3个亚类,很好地将不同来源的品种区分开来。结论从分子水平上揭示了湖南产牡丹品种间亲缘关系及较高的遗传多样性,为耐湿热牡丹的新品种选育工作提供了理论依据。     

不同产地独蒜兰种质资源的遗传多样性分析

目的对我国不同产区的23份独蒜兰的遗传多样性进行分析,为后续资源利用奠定基础。方法利用ISSR分子标记技术和类平均法(UPGMA)对23份独蒜兰资源进行PCR扩增和数据分析。结果从100条ISSR引物中筛选出12条多态性较好的引物,在23份独蒜兰资源中扩增出86条DNA片段,其中多态性片段80条,多态位点百分率(PPB)为93.0%。23份独蒜兰资源被划分为2个类群,同一地区来源的大部分资源聚在同一类群或亚类群,也存在不同地区来源的资源间遗传关系较近的情况。结论 ISSR标记可为独蒜兰种质资源鉴定、遗传关系分析及品种培育提供一定依据。     

滴水珠原生质体的分离纯化与植株再生

以滴水珠的幼嫩叶片为材料,对影响原生质体分离纯化、培养及植株再生的因素进行了研究。结果表明:适合滴水珠叶片的酶解体系为13%CPW(细胞原生质体洗液)+1.0%纤维素酶+0.1%果胶酶,p H 6.0,适宜酶解温度为25~28℃,酶解时间为4 h;滴水珠叶肉原生质体纯化以上浮法蔗糖梯度离心效果最佳,以25%的蔗糖做梯度材料,500 r·min-1离心10 min;用于培养滴水珠原生质体的培养基为MS+0.5 mg·L-16-BA+0.25 mg·L-1NAA 13%甘露醇,培养3 d有细胞分裂启动迹象,30 d左右形成愈伤组织,转移至MS+0.5 mg·L-16-BA+0.25 mg·L-1NAA固体培养基上增殖培养,并继代数次,5~6个月后愈伤组织可分化出芽并再生植株。     

川产鱼腥草种质资源的同工酶分析

川产鱼腥草种质资源的过氧化物酶和酯酶同工酶分析结果发现,存在较丰富的同工酶变异类型,共有6种过氧化物酶和10种酯酶酶谱类型,每种过氧化物酶谱类型具4～6条酶带,酯酶酶谱类型具5～8条酶带。栽培和野生居群酶谱类型一致,而峨眉蕺菜和蕺菜种间亲缘关系较近,难以根据同工酶谱加以区分。试验结果还表明,四川鱼腥草种质资源过氧化酶酶带数在纬度偏北地区相对较多,偏南地区相对较少,酯酶酶谱在此范围内无地理分布差异。     

鱼腥草的化学成分

目的：研究鱼腥草Houttuynia cordata全草部位的化学成分。方法：运用多种层析手段对鱼腥草的石油醚部位进行分离纯化，通过波谱解析和理化鉴别进行结构鉴定。结果：分离得到9个化合物，分别为齐墩果酸（1），熊果酸（2），sterculin A（3），stigmast-4-ene-3β,6β-diol（4），stigmast-4-en-6β-ol-3-one（5），stigmasterol（6），3，5-didecanoyl-4-nonyl-1，4-dihydropyridine（7），十七烷酸（8），二十三烷酸（9）。结论：化合物1-5和8，9均为首次从三白草科植物中分得的成分，化合物1～3是首次从该植物中分离得到三萜类化合物。     

鲜鱼腥草酚类化学成分的研究

目的：研究三白草科Saururaceae蕺菜属植物蕺菜Houttuynia cordata的酚类化学成分。方法：利用Diaion HP-20,Sephadex LH-20,ODS和硅胶柱色谱进行分离纯化,根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定结构。结果：分离得到5个化合物,分别鉴定为：绿原酸甲酯 (1),4-羟基-4［3′-(β-D-葡萄糖)亚丁基］-3,5,5-三甲基-2-环己稀-1-醇(2),2-(3,4二羟基)-苯乙基-β-D-葡萄糖苷(3),对 羟基苯乙醇-β-D-葡萄糖苷(4),4-β-D-葡萄糖-3-羟基苯甲酸(5)。结论：该5个化合物均为首次从该属及本植物中分离得到。     

鱼腥草注射液辅佐治疗小儿支气管肺炎87例

将支气管肺炎患儿167例随机分为治疗组87例,对照组80例,在采用西医常规治疗的同时治疗组加用中药鱼腥草注射液静脉滴注,疗程7天,结果：治疗后两组症状与体征的改变差异具有显著性意义,鱼腥草注射液可使主要临床症状与体症改善的时间缩短,平均住院天数降低。     

鲜鱼腥草的黄酮类化合物研究

目的：研究三白草科Saururaceae蕺菜属植物蕺菜Houttuynia cordata的黄酮类化学成分。方法：利用Diaion HP-20,Sephadex LH-20,ODS和硅胶柱色谱进行分离纯化,根据化合物的理化性质和光谱数据鉴定结构。结果：分离得到5个化合物,分别鉴定为槲皮素-3-O-β-D-半乳糖-7-O-β-D-葡萄糖苷(1),山柰酚-3-O-β-D-［α-L-吡喃鼠李糖(1→6)］吡喃葡萄糖苷(2),槲皮苷(3),金丝桃苷(4),槲皮素-3-O-α-D-鼠李糖-7-O-β-D-葡萄糖苷(5)。结论：化合物1,2,5为首次从该属及本植物中分离得到。     

鱼腥草贮藏过程中挥发油抑菌效果变化的研究

目的:研究鱼腥草地上部分和地下部分在贮藏过程中挥发油抑菌效果的变化。方法:采用二倍稀释法测定鱼腥草挥发油抑菌活性和最低抑菌浓度(MIC)。结果:鱼腥草鲜样挥发油的抑菌效果最强,对金黄色葡萄球菌、八叠球菌的MIC均为1/2×10-3ml/ml,在贮藏过程中随着时间的延长MIC逐渐增大。结论:鱼腥草挥发油抑菌活性随着贮藏时间的延长而呈下降趋势。     

正交实验优选鱼腥草总黄酮提取工艺研究

目的优选鱼腥草总黄酮的最佳提取工艺条件。方法以芦丁、出膏率为评价指标,采用正交实验法对鱼腥草总黄酮的提取工艺进行优选。结果最佳提取工艺条件为用12倍量碱性(5%NaOH)稀乙醇(60%)液提取3次,80 m in/次。结论优选出的工艺科学合理。     

鱼腥草注射液定量指纹图谱的建立

目的建立鱼腥草注射液的定量指纹图谱分析方法,用于鱼腥草注射液的质量评价。方法采用气相色谱程序升温的方法进行色谱分离,使用"2009版中药色谱指纹图谱相似度评价系统"进行数据处理,对不同批次的鱼腥草注射液指纹图谱的相似度进行比较分析,并对指标物质进行含量测定。结果不同批次鱼腥草注射液相似度较好,但特征峰的含量差别较明显。结论采用GC方法控制注射液的指纹图谱,方法重现性好,用于鱼腥草注射液的质量评价切实可行。不同批次鱼腥草注射液化学组成相似,其相对比例较稳定。     

鱼腥草超微粉挥发油气相指纹图谱的研究

目的:建立不同产地鱼腥草超微粉体中挥发油成分的指纹图谱分析方法,为有效控制鱼腥草超微粉质量提供依据。方法:采用GC(气相色谱,gas chromatography)法测定了12个不同产地的鱼腥草超微粉样品;色谱条件:SPDTM-1 Capillary Column(30m×0.32mm×0.25μm),程序升温,FID(氢火焰离子化检测器,flameionization detector)检测器。结果:建立了鱼腥草超微粉挥发油的指纹图谱共有模式,并对不同产地的样品进行了相似度比较。结论:本研究建立的鱼腥草超微粉挥发油指纹图谱分析方法,可用于鉴别不同产地的鱼腥草药材,并评价其质量。