通痹灵对类风湿关节炎滑膜细胞血管内皮生长因子mRNA的影响

目的 观察通痹灵对体外培养的类风湿关节炎(RA)滑膜细胞血管内皮生长因子(VEGF)mRNA表达的影响,探讨其可能的作用机制.方法 行关节腔镜手术取RA患者膝关节滑膜组织消化分离滑膜细胞进行分组培养.空白对照组:含生理盐水+10%胎牛血清的DMEM培养;通痹灵低剂量组:50 mg/L通痹灵+10%胎牛血清的DMEM培养;通痹灵高剂量组:200 mg/L通痹灵+10%胎牛血清的DMEM培养.提取总RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测各组VEGF mRNA的表达.结果 通痹灵高、低剂量组VEGF mRNA表达较对照组明显降低(P<0.05).结论 通痹灵可以下调RA患者滑膜细胞VEGF mRNA表达水平,从而可以通过抑制VEGF表达减轻滑膜血管翳增殖.     

人大肠癌与肠隐窝结构相关性的研究

目的:从人大肠实体瘤不同远近距离部位取癌旁组织进行体外培养,探讨人大肠组织体外培养条件,以及不同条件下,培养不同时间与肠隐窝结构的相关性。方法:分别从大肠癌恶性肿瘤患者距瘤体旁边(约2cm),手术切除的近端最远处(≥10cm),以及两者的中间位取得手术标本,运用重复贴壁法进行贴壁培养。结果:运用倒置显微镜观测,用无血清进行培养的组织块存活成活率为73.3%,含10%的胎牛血清培养液进行培养的组织块存活率81.7%,含20%的胎牛血清培养液进行培养的组织块存活率86.7%。HE染色观察,无血清培养的标本14天内,可看到隐窝完整结构,含10%和20%的胎牛血清培养的标本7天内,可看到隐窝完整结构。结论:人大肠组织块的存活时间与血清浓度成正相关,而隐窝完整结构的保持时间与血清浓度呈负相关。     

丹参注射液诱导大鼠骨髓间充质干细胞分化为成软骨细胞的研究

目的:探讨复方丹参注射液体外诱导大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)分化为成软骨细胞的作用。方法:大鼠MSC分离、培养、扩增、融合时传代,选用第3~5代细胞,分为3组,西药组加入高糖DMEM培养液(含地塞米松10-7mol/L、10%胎牛血清、TGF-β1 10μg/L、VitC 50mg/L),中药组加入高糖DMEM培养液(含0.5%的复方丹参注射液、10%胎牛血清),另设一空白组;倒置显微镜下逐日观察各组原代及传代细胞的生长情况及形态特征,诱导7d后,免疫组化法测定各组Ⅱ型胶原阳性率。结果:药物诱导处理后,各组均有部分细胞开始变为宽阔、平坦的多边形及多伪足伸展形细胞:Ⅱ型胶原的阳性率西药组和中药组比较无明显差异,二者均明显高于空白组(P<0.01)。结论:复方丹参注射液可体外诱导大鼠MSC分化为成软骨细胞。     

红花黄色素对大鼠血管平滑肌细胞的影响

目的:观察红花黄色素对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)生长增殖、细胞周期和核因子(NF-KB)活性的影响。方法:胎牛血清刺激体外培养的大鼠VSMC使其快速增殖生长,加入不同浓度的红花黄色素作用一定时间后,通过MTT法测定红花黄色素对血管平滑肌细胞生长的抑制率、流式细胞技术测定细胞周期和核因子活性的影响。结果:红花黄色素能明显抑制胎牛血清刺激的血管平滑肌细胞的增殖(IC为0.38mg/ml),与对照组相比具有显著差异(P<0.01)。结论:红花黄色素能显著抑制血管平滑肌细胞的增殖生长。     

胎牛血清和大鼠血清对体外软骨组织构建的影响

目的观察胎牛血清和大鼠血清对体外构建大鼠软骨组织的效应,为组织工程软骨筛选出合适的培养方法。方法取大鼠原代软骨细胞,离心后,培养箱中放置48 h,细胞团块会自发形成软骨小结。分为胎牛血清组和大鼠血清组。每隔一天换一次液,连续培养2周。取出软骨组织,称量重量,固定于4%多聚甲醛,经过脱水、石蜡包埋、切片后,经HE(苏木素-伊红)染色,甲苯胺蓝和藏红-固绿染色及细胞免疫荧光检测Ⅱ型胶原(Col2a1)、I型胶原(Col1a1)的表达。结果胎牛血清组的软骨组织重量比大鼠血清组的软骨组织明显增加,差异具有统计学意义(P0.05)。HE染色结果表明:大鼠血清组的组织形态呈纤维样结构,而胎牛血清组组织形态呈典型的软骨结构。胎牛血清组的组织甲苯胺蓝和藏红染色明显,而大鼠血清组的组织甲苯胺蓝淡染,固绿深染,提示软骨组织退变或非软骨组织。进一步免疫荧光检测软骨标志基因Ⅱ型胶原和Ⅰ型胶原,胎牛血清组Ⅱ型胶原高表达,而大鼠血清组低表达,Ⅰ型胶原在两组的表达和Ⅱ型的表达呈相反的结果,即在大鼠血清组高表达,在胎牛血清组低表达。结论胎牛血清可促进体外软骨组织的形成,而大鼠血清抑制了软骨组织形成。胎牛血清适合体外构建大鼠软骨组织。     

兔角膜成纤维细胞的原代培养及鉴定

目的:探究兔角膜成纤维细胞的原代培养及鉴定方法。方法:选用试验大白兔采集兔角膜成纤维细胞并进行原代培养,应用波形蛋白抗体、角蛋白抗体对体外培养兔角膜成纤维细胞第2代细胞做波形蛋白鉴定。结果:原代培养1~3 d后可传第1代,1周左右汇合,细胞呈梭形;培养波形蛋白抗体染色阳性、角蛋白抗体染色阴性,鉴定结果显示兔角膜成纤维细胞培养成功。结论:兔角膜成纤维细胞原代培养可行性强、成功率高,可获得状态良好的连续传代扩增细胞,有效支持体外实验研究。     

龙血竭有效部位对胎鼠皮肤成纤维细胞生长的作用

目的:探讨龙血竭不同有效部位对体外培养的胎鼠皮肤成纤维细胞生长及分泌的影响。方法:孕龄12.5~14.5d昆明小鼠胚胎,无菌条件下将躯干部皮肤制成匀浆,接种于25cm2塑料培养瓶,体积分数10%FBS的高糖DMEM培养基培养传代,P3代细胞以8×106个/L接种于96孔板,细胞饥饿24h后进行实验。采用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、乙醇等极性递增溶剂依次萃取龙血竭中的各种有效部位,均选用0.125g/L、0.25g/L、0.5g/L、1g/L、2g/L、4g/L五个浓度梯度作用于96孔板中的细胞(DMSO助溶),24h后MTT法检测不同条件下细胞的生长曲线,免疫组化检测细胞分泌Ln、Ⅰ型胶原的变化。10%FBS的高糖DMEM培养条件为空白对照,1%DMSO的高糖DMEM培养条件为实验对照。结果:龙血竭乙酸乙酯有效部位在低浓度对胎鼠成纤维细胞的生长有轻度抑制作用,随浓度增加促生长作用增强,1g/L龙血竭乙酸乙酯有效部位对胎鼠皮肤成纤维细胞的促生长作用最佳,并促进Ln、Ⅰ型胶原的分泌。龙血竭其它有效部位对胎鼠成纤维细胞均无刺激生长的作用。结论:龙血竭乙酸乙酯有效部位能促进胎鼠皮肤成纤维细胞的生长和分泌。     

培养基不同血清比例对人胃癌SGC-7901细胞生长的影响

目的:探讨细胞培养基中不同血清比例对人胃癌细胞SGC-7901生长状态的影响,为减少培养该细胞时血清的用量。方法:用分别含有3%、6%和9%小牛血清的1640培养液分别培养SGC-7901细胞12h、24h和48h,以无血清培养基作为空白对照;倒置显微镜观察细胞的生长状况,通过基于酶标仪的MTT方法检测细胞在不同比例血清中的生长与增殖的差异。结果:SGC-7901细胞在含3%和6%小牛血清的细胞培养基中生长状态与常用的含9%小牛血清的培养基中的生长情况相比,未见显著性的差异(P>0.05);也不呈时间依赖性,但与空白血清对照组相比差异有统计学意义(P<0.05)。结论:在体外培养RPMI-1640细胞时,可将培养基中小牛血清的比例降至3%～6%,从而降低在培养该细胞过程中的的实验成本,减少不必要的血清浪费。     

麦门冬汤对体外气管炎症模型分泌亢进的作用

运用反映气管炎症时分泌亢进的体外模型,即通过制作炎症发生时重要的多形核白细胞(PMN)与为粘液性分泌细胞的气管上皮细胞,或为浆液性分泌细胞的肺泡Ⅱ型的细胞共存形成的混合培养系,探讨了麦门冬汤对粘液分泌及浆液分泌的作用。材料与方法:分离、培养大鼠肺泡Ⅱ型上皮细胞,用胰蛋白酶分散细胞,以含10％胎牛血清的DMEM培养液培养18小时。培养时,以H     

强肌健力方含药血清对脾虚大鼠胸腺细胞PCNA、Fas蛋白表达的影响

目的:研究强肌健力方含药血清对脾虚大鼠胸腺细胞增殖细胞核抗原(PCNA)和Fas蛋白表达的影响,探讨强肌健力方对免疫功能的作用机制。方法:用强肌健力方制备含药血清,体外分离并培养胸腺细胞,应用免疫组化方法观察不同浓度强肌健力方含药血清(QJJL低血清组、QJJL中血清组、QJJL高血清组及胎牛血清组和正常血清组)对体外培养的脾虚大鼠胸腺细胞PCNA和Fas蛋白表达的变化。实验数据采用SPSS 16.0统计软件处理,所有数据以x珚±s表示,组间比较采用方差分析,进一步两两比较,采用SNK-q检验,以P<0.05为有统计学意义。结果:QJJL中含药血清组胸腺细胞PCNA蛋白表达增多,表达细胞阳性面积、阳性面积率、累积光密度均明显高于胎牛血清组和正常血清组(P均<0.01);QJJL中含药血清组与QJJL低、高含药血清组比较,细胞PCNA蛋白表达均显著增多(P均<0.01)。QJJL中含药血清组胸腺细胞Fas蛋白表达减少,表达细胞阳性面积、阳性面积率、累积光密度均显著低于胎牛血清和正常血清组(P<0.01);QJJL中含药血清组与QJJL低、高含药血清组比较,胸腺细胞Fas蛋白表达均显著减少(P均<0.01)。结论:强肌健力方含药血清能够干预脾虚大鼠胸腺细胞增殖,抑制细胞凋亡,具有增强免疫调节的作用。强肌健力方20%含药血清可能为临床用药的最佳血药浓度。     

高糖条件下牛视网膜毛细血管周细胞增殖与凋亡的研究

目的观察高糖对牛视网膜毛细血管周细胞(pericyte,PC)增殖和凋亡的影响。方法建立牛视网膜毛细血管周细胞体外培养模型,将传至第三代的周细胞用常规培养液制作细胞悬液、计数并接种于96孔培养板(或培养瓶)中,待细胞贴壁后,分组加入含不同葡萄糖浓度(5.5、10、20、30、40mmol/L)的DMEM培养液,分别培养2～8天后收集细胞。用MTT法、流式细胞仪(FCM)检测,研究高糖对周细胞的影响。结果①高糖10mmol/L培养4、6、8天组和高糖20、30L、40(mmol/L)培养2、4、6、8天组周细胞增殖均有明显抑制作用,其抑制率以40mmol/L、8天组最高(P<0.01)。②高糖10、20、30、40mmol/L培养2～8天均能促进周细胞的凋亡,其凋亡细胞数以40mmol/L、8天组最多(P<0.01)。结论①高糖对周细胞的增殖有明显抑制作用,高糖以剂量依赖性方式使周细胞减少,随着葡萄糖浓度升高和时间延长,周细胞形态学改变更明显,高糖对周细胞增殖的抑制率也增大。②高糖能促进周细胞凋亡,其凋亡百分率随糖浓度的增高和培养时间的延长而增加。     

X射线诱导人滋养细胞周期及凋亡改变的研究

目的:观察X射线对人滋养细胞JEG-3肿瘤细胞株的生物学特性的影响及作用。方法:体外培养人滋养细胞肿瘤细胞系(JEG-3细胞),采用不同剂量的X射线(2Gy、6Gy、8Gy)照射JEG-3细胞,MTT法测定照后不同时间(12、24、36h)的细胞增殖能力;流式细胞术检测6Gy照后不同时间(12、24、36h)的细胞凋亡的变化;western-blot检测P53、Bcl-2蛋白的表达量的变化。结果:6GyX射线照后36h细胞增殖活性下降;8Gy照后对细胞产生了明显的毒性,照后12、24、36h时细胞增殖均明显下降(P0.05)。6Gy照后36h时凋亡率显著增加(P0.05)。6Gy照后36h,凋亡相关蛋白P53的蛋白表达量显著增加、Bcl-2的蛋白表达量显著降低(P0.05)。结论:6GyX射线照射可抑制人滋养细胞的增殖,提高细胞凋亡率;同时诱导P53蛋白表达增加和Bcl-2表达降低。     

益气养阴诱导SMMC-7721肝癌细胞分化作用与意义

目的：探讨中医常用扶正代表药物及其配伍诱导肝癌细胞分化的作用与意义,为临床应用提供基础。方法：选取临床肝癌治疗常用的益气药黄芪、白术,温阳药附子、肉桂,补肾药虫草菌丝、仙灵脾,养阴药麦冬、北沙参,分别煎成汤液,观察灌胃给药后大鼠含药血清对SMMC-7721人肝癌细胞增殖、细胞形态、凋亡,AFP与A1b分泌量,细胞内cAMP含量以及p53、P21^ras基因蛋白表达的影响。结果：养阴药可显著抑制细胞增殖,余三组均无作用;养阴药分别与其他三组药配伍后均可抑制细胞增殖,但只有益气养阴的作用显著强于养阴药;在降低细胞核浆比与AFP,提高Alb、细胞内cAMP含量与p53蛋白、抑制p21^ras蛋白表迭等与其抑制增殖的结果基本一致;以提高细胞内cAMP含量的作用最突出,与对照组相比,养阴药提高44．5％,益气药下降24．3％,而益气养阴组较养阴药提高60．3％,较维甲酸提高20．8％。结论：养阴药北沙参、麦门冬可显著抑制肝癌细胞增殖、诱导细胞分化;益气药黄芪、白术对养阴药这一作用有显著放大效应,而提高细胞内cAMP含量是其主要作用环节。     

姜黄素对Raji细胞体外抗癌作用的实验研究

目的研究姜黄素对Raji细胞体外抗癌作用及其机制,对比研究其对RaIi细胞和人单个核细胞的细胞毒性。方法用MTT法检测姜黄素对Raji细胞及人单个核细胞增殖的影响,Annexin—V／PI双标流式术、缺口末端标记法检测姜黄素对Raji细胞及人单个核细胞凋亡的影响,PI单标流式细胞术测定姜黄素对Raji细胞DNA含量分布的影响。结果(1)姜黄素对Raji细胞具有明显的增殖抑制作用。(2)姜黄素可以时间和剂量依赖性方式诱导Raji细胞凋亡。(3)姜黄素组Raji细胞周期发生变化,细胞周期被阻滞于G0／G1和G2／M期,S期比例减少。(4)姜黄素对人单个核细胞无明显抑制增殖和诱导凋亡作用。结论姜黄素能够调控Raji细胞的细胞周期并诱导其凋亡,从而抑制Raji细胞增殖;姜黄素对人单个核细胞无明显细胞毒作用,而选择性作用于肿瘤细胞。     

青蒿琥酯对人结肠癌细胞HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响

目的:研究青蒿琥酯对人结肠癌HCT-8细胞凋亡和细胞周期的影响.方法:实验分为10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组,阴性对照组和空白对照组.采用透射电镜和流式细胞仪检测青蒿琥酯对HCT-8细胞的凋亡诱导效果;采用流式细胞仪分析青蒿琥酯对HCT-8细胞周期的影响;采用Western blot印迹法检测青蒿琥酯对细胞凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2表达的影响.结果:经青蒿琥酯处理后,电镜下可见HCT-8细胞膜皱缩、染色质凝聚、核碎裂、凋亡小体形成.10,20,30 μmol·L-1青蒿琥酯处理组凋亡率分别为17.1％±3.8％,29.5％±5.1％,41.4％±5.8％,显著高于空白对照组5.1％±1.4％.P＜0.05.在20 μmol· L-1青蒿琥酯处理组,HCT-8细胞G0/G1期所占比例随着药物作用时间延长而增加,S期与G2/M期细胞所占比例则下降.10,20,30 μmol·L -1青蒿琥酯处理组Bax蛋白表达水平分别为0.20±0.03,0.40±0.05和0.50±0.08显著高于空白对照组(0.06 ±0.02),P＜0.05;Bcl-2蛋白表达水平未见明显变化,Bcl-2/Bax呈下降趋势.结论:青蒿琥酯可以抑制人结肠癌细胞HCT-8增殖,诱导细胞凋亡,其诱导凋亡作用机制可能与其阻滞结肠癌细胞周期和上调促癌基因Bax表达有关.     

角膜上皮细胞体外培养的研究进展

作者从角膜上皮细胞的一般体外培养方法、培养基的选择、载体的选择和鉴别方法等方面对角膜上皮细胞培养体系进行了综述。     

益髓解毒方对骨髓增生异常综合征骨髓细胞治疗反应性的体外研究

目的 :探讨益髓解毒方治疗骨髓增生异常综合征 -难治性贫血 ( MDS-RA)的作用机理。方法 :通过体外培养 ,观察 MDS-RA患者骨髓单个核细胞经益髓解毒方不同剂量作用后 ,细胞增殖、凋亡的变化。结果 :MDS-RA骨髓单个核细胞在培养的第 4天细胞凋亡明显增加 ,高凋亡发生在细胞分裂的 S期。益髓解毒方大剂量组对细胞凋亡有直接的抑制作用 ,经其处理过的骨髓单个核细胞体外培养 CFU -GM集落数增加。结论 :益髓解毒方有明显促进造血祖细胞增殖、抑制过度凋亡的作用。     

大黄素对HL-60细胞增殖和凋亡的影响

目的:探讨大黄素对人白血病细胞HL-60增殖及凋亡的影响。方法:应用MTT法检测大黄素对HL-60细胞增殖的影响;应用流式细胞术、DNA琼脂糖凝胶电泳观察和检测细胞凋亡;蛋白印迹法(Western-Blot)检测Bcl-2蛋白表达水平的变化。结果:在5～20mg/L浓度范围内,大黄素对HL-60细胞增殖的抑制作用呈时间剂量依赖性20mg/L作用72h后,抑制率分别达到(19.8±2.7)%,(58.8±4.4)%和(73.8±5.7)%;流式细胞术检测发现:大黄素5、10和20mg/L作用24h后,细胞凋亡率分别为(15.5±3.4)%、(56.0±3.4)%和(71.1±5.0)%,与对照组(1.01±0.06)%有显著性差异(P<0.05);DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的梯形条带。大黄素作用24h后,Bcl-2蛋白的表达水平随药物波度增加呈逐渐下降趋势。结论:大黄素能够抑制HL-60细胞增殖,并诱导其凋亡。Bcl-2基因可能参与了大黄素抑制HL-60细胞增殖和诱导凋亡的过程。     

蝎毒及其提取物免疫调节作用的研究进展

蝎毒及其提取物具有抗肿瘤作用近年来得到广泛证实,蝎毒提取物的蛋白成分对肿瘤增殖及转移过程中免疫功能调节具有重要意义。蝎毒及其提取物可活化或提高巨噬细胞、NK细胞、淋巴细胞及树突状细胞功能,并能与放化疗联合产生良好的协同抗肿瘤效应。文章就蝎毒及其提取物对免疫系统的影响及可能的作用机制进行系统阐述。     

天花粉蛋白对结肠癌SW-620细胞株增殖、黏附和迁移的实验研究

目的 研究天花粉蛋白对结肠癌SW-.620细胞株增殖、黏附和迁移的影响.方法 采用MTT比色法检测天花粉蛋白对SW-620细胞的增殖影响;Hochest33258观察天花粉蛋白诱导SW-620细胞凋亡;流式细胞术检测天花粉蛋白对细胞周期和细胞凋亡的影响;细胞黏附和划痕实验检测天花粉蛋白作用后细胞黏附和迁移的改变.结果 1.天花粉蛋白对SW-620细胞的生长具有明显的抑制作用,并呈时间和质量浓度依赖性;2.天花粉蛋白可将SW-620细胞阻滞于S期,并能诱导其凋亡;3.天花粉蛋白具有改变SW-620细胞与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的黏附作用,并使其迁移能力下降.结论 天花粉蛋白能抑制SW620细胞的增殖、诱导其凋亡,并能改变其黏附和迁移能力.